糖皮质激素受体结合域诱饵表达载体的构建及鉴定

1

作者 郝坡 刘北忠 +5 位作者 欧阳峰 王东生 刘畅 钟梁 金丹婷 王翀 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期216-219,共4页

目的构建糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)结合域的诱饵表达载体。方法RT-PCR扩增GR结合域,克隆入pMD18-T,测序正确后,再亚克隆入诱饵载体pGBKT7中,再把构建好的诱饵载体pGBKT7-GR转化到酵母AH109细胞中,并用Western blot分... 目的构建糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)结合域的诱饵表达载体。方法RT-PCR扩增GR结合域,克隆入pMD18-T,测序正确后,再亚克隆入诱饵载体pGBKT7中,再把构建好的诱饵载体pGBKT7-GR转化到酵母AH109细胞中,并用Western blot分析诱饵蛋白的表达情况,同时检测诱饵蛋白的毒性和自激活作用。结果成功扩增了GR结合域,并分别成功克隆到pMD18-T和pGBKT7中,测序结果正确。诱饵载体成功转化到酵母AH109细胞中,无毒性和自激活作用,Western blot分析结果也证实了酵母细胞高表达诱饵蛋白。结论成功构建了GR结合域的酵母诱饵表达载体。 展开更多

关键词 糖皮质激素受体结合域 诱饵载体 诱饵蛋白

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缺失激素结合区的人糖皮质激素受体突变体的研究 被引量：1

2

作者 张方 施毅 +5 位作者 辛晓峰 钱桂生 罗向东 宋勇 赵明 李子玲 《医学研究生学报》 CAS 2007年第5期474-476,489,I0002,共5页

目的:构建缺失激素结合区(LBD)的人糖皮质激素受体突变体表达载体,并研究其表达和功能。方法:运用RT-nested PCR扩增人糖皮质激素受体(GR)基因不含编码LBD的cDNA序列,将PCR产物定向克隆至pEGFP-N2质粒载体,测序筛选编码正确的重组质粒;... 目的:构建缺失激素结合区(LBD)的人糖皮质激素受体突变体表达载体,并研究其表达和功能。方法:运用RT-nested PCR扩增人糖皮质激素受体(GR)基因不含编码LBD的cDNA序列,将PCR产物定向克隆至pEGFP-N2质粒载体,测序筛选编码正确的重组质粒;荧光显微镜观察GR突变体重组质粒转染人巨噬细胞株U937后的表达情况;相对荧光素酶法检测转染后细胞GR转录激活活性。结果:扩增出长1601 bp的cDNA序列,测序证实:克隆片段与Genebank该基因序列同源性为100%;重组质粒表达产物定位于细胞核;转染组细胞GR转录激活活性增强。结论:成功构建缺失LBD的GR突变体表达载体,该突变体具有不依赖激素的GR转录激活活性。 展开更多

关键词 糖皮质激素受体 激素结合区 转录激活活性

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阴虚患者糖皮质激素受体改变及六味地黄丸作用的研究 被引量：6

3

作者 郑敏 杨宏杰 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期1083-1084,共2页

关键词 阴虚证 糖皮质激素受体 中药疗法 放射配体结合法 结合容量

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慢性应激大鼠肝、脑胞液和胞腺细胞糖皮质激素受体的研究 被引量：6

4

作者 陈佩杰 陶心铭 徐仁宝 《体育科学》 CSSCI 北大核心 1991年第1期45-47,51+95,共5页

本文以[~3H]地塞米松(Dex)为配体,用放射配体结合测定法研究了80天游泳应激(1次/天,40～50分/次)后大鼠肝、脑胞液和胸腺细胞糖皮质激素受体(GR)的变化,与对照组比较,游泳组大鼠肝胞液,胸腺细胞的[~3H]Dex特异结合量减少,表现上的平衡... 本文以[~3H]地塞米松(Dex)为配体,用放射配体结合测定法研究了80天游泳应激(1次/天,40～50分/次)后大鼠肝、脑胞液和胸腺细胞糖皮质激素受体(GR)的变化,与对照组比较,游泳组大鼠肝胞液,胸腺细胞的[~3H]Dex特异结合量减少,表现上的平衡解离常数Kd不变,脑胞液GR变化不明显。实验结果提示,慢性应激可导致GR减少。对这些变化的可能的机制和生理意义作了讨论。 展开更多

关键词 胸腺细胞糖皮质激素受体 慢性应激 大鼠肝 特异结合 游泳训练 胞液 地塞米松 运动应激 解离常数 生理意义

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糖皮质激素受体的分子生物学特征及其在内耳的研究进展 被引量：4

5

作者 张秀玲 佘万东 戴艳红 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期87-89,共3页

关键词 自身免疫性内耳病 糖皮质激素受体 分子生物学特征 生物学效应 突发性聋 内耳疾病 梅尼埃病 受体结合

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长期运动应激对人白细胞糖皮质激素受体的影响 被引量：2

6

作者 陈佩杰 陶心铭 徐仁宝 《体育科学》 CSSCI 北大核心 1990年第6期54-55,49+95,共4页

本文以[~3H]地塞米松(Dex)为配体,用放射配体结合测定法研究了成年运动员和老年运动员外周血白细胞糖皮质激素受体(GR)的变化。8名成年运动员和8名老年运动员白细胞[~3H]Dex特异结合量与成年人对照组和老年人对照组比较,前者相差非常显... 本文以[~3H]地塞米松(Dex)为配体,用放射配体结合测定法研究了成年运动员和老年运动员外周血白细胞糖皮质激素受体(GR)的变化。8名成年运动员和8名老年运动员白细胞[~3H]Dex特异结合量与成年人对照组和老年人对照组比较,前者相差非常显著,后者相差显著。为了探讨运动员GR减少是否可逆,同时测定了退役运动员白细胞(GR)。6名退役运动员白细胞[~3H]Dex特异结合量与成年人对照组比较相差不显著。结果表明,长期运动应激可以导致人白细胞GR可逆性减少。 展开更多

关键词 非运动员 糖皮质激素受体 运动应激 特异结合 退役运动员 人白细胞 外周血白细胞 成年人 老年人 慢性应激

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库欣综合征患者外周血白细胞糖皮质激素受体改变及意义

7

作者 姚生华 陈姮 +2 位作者 俞秀华 丘洪 褚燕倩 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期1080-1080,共1页

关键词 库欣综合征 外周血细胞 糖皮质激素受体 放射配体结合法

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Graves甲亢患者外周血白细胞糖皮质激素受体改变的意义

8

作者 周桂莲 张弛 李华珠 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期773-775,共3页

目的:观察Graves甲亢患者外周血白细胞糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor,GR)的改变,探讨其在发病中的作用。方法:61例首诊Graves甲亢,采用放射配体结合法测定白细胞GR水平,并以同期健康体检者20例作为对照,分析GR水平变化的意义... 目的:观察Graves甲亢患者外周血白细胞糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor,GR)的改变,探讨其在发病中的作用。方法:61例首诊Graves甲亢,采用放射配体结合法测定白细胞GR水平,并以同期健康体检者20例作为对照,分析GR水平变化的意义。结果:甲亢组GR比正常对照组明显降低(t=7.389,P=0.0001)。61例甲亢患者随严重程度增加,GR水平逐渐下降(F=7.389,P=0.0001)。GR水平和甲状腺激素FT3、FT4及TSH均呈负相关,相关系数分别为0.741(t=5.643,P=0.013),0.689(t=5.119,P=0.025)和0.755(t=6.391,P=0.009)。61例甲亢患者并发甲亢性突眼者GR水平下降(t=4.274,P=0.0001),而并发甲亢性心脏病(t=0.273,P=0.786)和甲亢性周期麻痹者(t=0.961,P=0.336)GR水平未见有统计学意义的下降。结论:Graves甲亢患者外周血白细胞GR水平下降,并且跟病情严重程度、是否并发甲亢性突眼者有关。 展开更多

关键词 GRAVES病 糖皮质激素受体 放射配体结合法

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免疫抑制剂对白细胞糖皮质激素受体的调节作用

9

作者 沈玉美 刘志民 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期1082-1083,共2页

关键词 免疫抑制剂 白细胞 糖皮质激素受体 结合容量

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人淋巴细胞糖皮质激素受体测定及运动对糖皮质激素受体的效应 被引量：1

10

作者 罗履广 陶心铭 杜凤鸣 《上海体育学院学报》 1986年第1期8-11,共4页

前言许多研究者的研究表明,糖皮质激素(GIucocorticoid,GC)在运动中的变化是非常显著的。体外实验证明GC具有使代谢由贮藏、生长过程转向增加能量消耗,满足功能活动需要等作用;GC的过量或不足,均会导致机体代谢紊乱,运动能力下降直至发... 前言许多研究者的研究表明,糖皮质激素(GIucocorticoid,GC)在运动中的变化是非常显著的。体外实验证明GC具有使代谢由贮藏、生长过程转向增加能量消耗,满足功能活动需要等作用;GC的过量或不足,均会导致机体代谢紊乱,运动能力下降直至发生疾病,可见GC对人体的重要性。已知GC要在机体发生作用还要通过一系列的作用过程,其中GC与其受体的结合是GC作用于靶器官的第一步。因此,要想全面了解GC的作用,研究糖皮质激素受体(GIucocorticoid Receptor,GCR)是非常必要的。 展开更多

关键词 急性运动 糖皮质激素受体 受试者 人淋巴细胞 人体 正常人 人血淋巴细胞 运动实验 特异结合 功能活动

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尿路感染患者外周血白细胞糖皮质激素受体改变及意义 被引量：2

11

作者 陈荣莺 段继才 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期1080-1081,共2页

关键词 尿路感染 外周血白细胞 糖皮质激素受体 放射配体结合法

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人外周血白细胞低亲和力糖皮质激素受体的检测方法

12

作者 田文 刘志民 沈玉美 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期576-576,共1页

目的:研究人白细胞是否存在GRL并建立适合临床应用的检测方法。方法:回收白细胞,调白细胞浓度为(1～3)×107/ml,加入不同浓度[3H]Dex(5～5 000 nmol/L,应用加冷法;一点分析用1 000 nmol/L),共12点。非特异结合测定管再加100倍非标De... 目的:研究人白细胞是否存在GRL并建立适合临床应用的检测方法。方法:回收白细胞,调白细胞浓度为(1～3)×107/ml,加入不同浓度[3H]Dex(5～5 000 nmol/L,应用加冷法;一点分析用1 000 nmol/L),共12点。非特异结合测定管再加100倍非标Dex。37℃孵育60 min。应用多头细胞收集器,通过玻璃纤维滤膜洗涤游离甾体。烘干滤膜,测定其放射强度。应用pseudo—Scatehard分析电脑程序计算出高亲和力GR(GRH)和GRL的最大结合容量(Bmax)及平衡解离常数(Kd)。 展开更多

关键词 外周血 白细胞低亲和力糖皮质激素受体 检测 高结合容量 低亲和力

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冠心病患者外周血白细胞糖皮质激素受体改变及意义

13

作者 张伟 张慧 刘志民 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期1081-1082,共2页

关键词 冠心病 外周血白细胞 糖皮质激素受体 放射配体结合法

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甲状腺机能低下患者单个核白细胞糖皮质激素受体改变及其意义

14

作者 徐佩珩 孙广志 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期562-562,共1页

目的:探讨甲状腺机能低下(甲减)患者外周血单个核白细胞(MNL)糖皮质激素(GC)水平及其受体(GR)的改变及意义。方法:甲减患者24例,其中男10例,年龄(40±8)岁;女14例,年龄(37±8)岁。其中6例为甲状腺术后,12例为桥本甲状腺炎,6例... 目的:探讨甲状腺机能低下(甲减)患者外周血单个核白细胞(MNL)糖皮质激素(GC)水平及其受体(GR)的改变及意义。方法:甲减患者24例,其中男10例,年龄(40±8)岁;女14例,年龄(37±8)岁。其中6例为甲状腺术后,12例为桥本甲状腺炎,6例原因未明。性别、年龄匹配的24名健康志愿者作为对照组。用淋巴细胞分离液分离出MNL,GR测定采用放射配体结合法。 展开更多

关键词 甲状腺机能低下 单个核白细胞 糖皮质激素受体 放射配体结合法

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甲状腺功能亢进症患者甲状腺组织糖皮质激素受体的改变及意义 被引量：1

15

作者 肖平山 刘志国 邵慧梅 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期1081-1081,共1页

关键词 甲状腺功能亢进症 甲状腺组织 糖皮质激素受体 放射配体结合法

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雄激素受体中一个高保守的能抑制DNA结合区与DNA相互作用区段的鉴定

16

作者 刘国珍 王华 王振兴 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期394-398,共5页

目的:研究雄激素受体(AR)的基因调控。方法:通过胶shift实验及基因定点突变技术研究野生型AR及突变型AR与ARE(雄激素受体元件)探针的相互作用、运用蛋白-蛋白pulldown实验及Westernblot等研究AR中的一段抑制性多肽片段(ID)是否直接与DN... 目的:研究雄激素受体(AR)的基因调控。方法:通过胶shift实验及基因定点突变技术研究野生型AR及突变型AR与ARE(雄激素受体元件)探针的相互作用、运用蛋白-蛋白pulldown实验及Westernblot等研究AR中的一段抑制性多肽片段(ID)是否直接与DNA结合区(DBD)相互作用。结果:本研究发现AR的N-端含有一段有抑制功能的片段,它由81个氨基酸组成,位于DBD的上游,该片段能直接与DBD相互作用,抑制DBD与雄激素应答元件的结合。该片段中保守的氨基酸残基的突变(K520E和R538E),在体外实验中能使其抑制能力降低,而在体内实验中则增强AR的反式激活。结论:研究证明ARN-端有一新发现的具有抑制功能的多肽片段,该片段可能在AR反式激活的调控中起着重要的作用。 展开更多

关键词 雄激素受体 DNA结合域 氨基酸

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双向障碍中糖皮质激素对下丘脑-垂体-肾上腺轴活性的负反馈调节 被引量：13

17

作者 郭蕾 包爱民 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期493-500,共8页

双相障碍(bipolar disorder,BD)是心境障碍的一个主要亚型,心境障碍的另外一个重要亚型是重性抑郁障碍(major depressive disorder,MDD),也称单相抑郁。BD具有躁狂和抑郁两大症候群,并呈现周期性循环。和MDD一样,BD也是严重损害人类精... 双相障碍(bipolar disorder,BD)是心境障碍的一个主要亚型,心境障碍的另外一个重要亚型是重性抑郁障碍(major depressive disorder,MDD),也称单相抑郁。BD具有躁狂和抑郁两大症候群,并呈现周期性循环。和MDD一样,BD也是严重损害人类精神健康的重大疾病。体内应激反应系统例如下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamic-pituitary-adrenal,HPA)轴活性紊乱已经大量研究证实是心境障碍的重要发病机制。但是,目前还缺乏系统地针对BD患者HPA轴活性的研究。现有的大部分研究仅仅关注BD患者血浆水平或者唾液皮质醇水平的改变,并且研究结果存在很大差异。但是,地塞米松/促肾上腺皮质激素释放激素(DEX/CRH)抑制试验的结果却比较一致:皮质醇抑制显著减弱,这个结论表明BD患者中HPA轴的负反馈调节功能发生异常。HPA轴的负反馈调节中,糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)和免疫亲和素家族蛋白之一,FK506结合蛋白51(FK 506 binding protein 51,FKBP51)是2个重要的分子。一方面,GR基因单核苷酸多态性被认为与BD发病相关。另一方面,童年期创伤经历导致BD发病风险增加的机制被推测是通过影响HPA轴敏感性实现的,而在这一过程中,GR和FKBP51参与了对HPA轴敏感性的调节。本综述将对近年来针对BD患者HPA轴活性异常的研究及其和GR和FKBP51导致的HPA轴负反馈调节紊乱的研究总结分析,旨在为BD与应激反应相关的发病机制研究提供新的思路。 展开更多

关键词 双相障碍 下丘脑-垂体-肾上腺轴 糖皮质激素受体 FK506结合蛋白51 负反馈调节

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昆虫蜕皮激素受体及其类似物的杀虫机制研究进展 被引量：26

18

作者 刘永杰 徐蓬军 +2 位作者 李艳伟 束怀瑞 黄大卫 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期67-73,共7页

昆虫的蜕皮、变态和繁殖受到蜕皮激素的严格调控。蜕皮激素作用靶标由蜕皮激素受体(ecdysteroidreceptor,EcR)和超气门蛋白(ultraspiracleprotein,USP)组成,蜕皮激素与EcR/USP作用启动蜕皮级联反应过程。昆虫EcR具有种类或类群的特异性... 昆虫的蜕皮、变态和繁殖受到蜕皮激素的严格调控。蜕皮激素作用靶标由蜕皮激素受体(ecdysteroidreceptor,EcR)和超气门蛋白(ultraspiracleprotein,USP)组成,蜕皮激素与EcR/USP作用启动蜕皮级联反应过程。昆虫EcR具有种类或类群的特异性,研究其结构、功能和调控机理在开发环境友好型新药剂和基因调控开关等方面具有重要指导作用。该文介绍了昆虫EcR的结构和功能特点,蜕皮激素及其类似物与EcR/USP的分子作用方式,以及基于EcR/USP的新杀虫剂创制和基因调控开关设计等方面的重要进展。 展开更多

关键词 蜕皮激素受体 超气门蛋白 配体结合域 级联反应 活性筛选 基因开关

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PDT/GR-ΔLBD融合蛋白的表达、纯化及穿膜特性的鉴定 被引量：1

19

作者 张方 施毅 +2 位作者 李子玲 胡波 宋勇 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期27-30,共4页

目的构建穿膜肽(PDT)和缺失结合配体结构域的小鼠糖皮质激素受体(GR-ΔLBD)融合基因表达载体,经原核表达、纯化后,进行穿膜特性的鉴定。方法质粒pEGFP-GR-ΔLBD经双酶切,获得目的基因片段GR-ΔLBD,将该基因片段亚克隆入原核表达载体pGEX... 目的构建穿膜肽(PDT)和缺失结合配体结构域的小鼠糖皮质激素受体(GR-ΔLBD)融合基因表达载体,经原核表达、纯化后,进行穿膜特性的鉴定。方法质粒pEGFP-GR-ΔLBD经双酶切,获得目的基因片段GR-ΔLBD,将该基因片段亚克隆入原核表达载体pGEX-PDT,获得pGEX-PDT/GR-ΔLBD融合基因表达载体。将表达载体转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达、谷胱甘肽-琼脂糖树脂处理、谷胱甘肽洗脱液洗脱后,获得PDT/GR-ΔLBD融合蛋白,SDS-PAGE分析融合蛋白;采用荧光素FITC体外标记PDT/GR-ΔLBD融合蛋白(终浓度分别为0、500、1000nmol/L),与小鼠肺上皮细胞TC-1共培养2h,在荧光显微镜下观察其穿膜特性。结果成功构建了融合基因原核表达载体pPDT/GR-ΔLBD,并能表达蛋白产物,大小约78.6kD,与融合蛋白PDT/GR-ΔLBD的理论计算值(80kD)相符。随着PDT/GR-ΔLBD浓度的增加,进入TC-1上皮细胞的PDT/GR-ΔLBD明显增多,并可在胞核中浓聚。结论 PDT/GR-ΔLBD融合蛋白具有良好的可溶性和穿膜特性,为进一步研究PDT/GR-ΔLBD融合蛋白在抗炎过程中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 受体 糖皮质激素 配体结合结构域 胞间信号肽类和蛋白质类 人工基因融合

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AA肉鸡和如皋黄鸡海马和下丘脑GR和FKBP5的表达及其与应激敏感性的关系

20

作者 刘杰 丛玮 +1 位作者 赵敏蝶 赵茹茜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期4766-4776,共11页

旨在探究肉鸡海马和下丘脑糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)及其负反馈因子FK-506结合蛋白5(FK-506 binding protein,FKBP5)的表达是否与应激敏感性有关。选用35日龄的AA肉鸡和如皋黄鸡,连续10 d皮下注射皮质酮(corticostero... 旨在探究肉鸡海马和下丘脑糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)及其负反馈因子FK-506结合蛋白5(FK-506 binding protein,FKBP5)的表达是否与应激敏感性有关。选用35日龄的AA肉鸡和如皋黄鸡,连续10 d皮下注射皮质酮(corticosterone,CORT),建立慢性应激模型。对应激后AA肉鸡和如皋黄鸡的体重、采食量、行为、血浆生化指标等进行检测,比较应激敏感性的差异。通过qPCR和Western blot检测海马和下丘脑GR和FKBP5的表达,并与血浆CORT水平进行相关分析。结果表明:1)AA肉鸡在CORT处理后体重显著降低,紧张性不动持续时间和血浆CORT水平均显著增加,但如皋黄鸡变化均不显著;AA肉鸡和如皋黄鸡血液异嗜性粒细胞/淋巴细胞比率在CORT处理后均显著上调,但AA肉鸡显著高于如皋黄鸡。2)基础状态下,如皋黄鸡海马和下丘脑GR蛋白表达量显著高于AA肉鸡;CORT处理导致AA肉鸡和如皋黄鸡海马和下丘脑GR蛋白表达显著下调,但应激后如皋黄鸡GR蛋白表达量仍显著高于AA肉鸡。3)CORT诱导AA肉鸡海马和下丘脑FKBP5 mRNA和蛋白表达均显著上调,而如皋黄鸡海马和下丘脑FKBP5的上调只发生在蛋白水平,mRNA的表达量没有变化;应激后AA肉鸡FKBP5的蛋白表达量显著高于如皋黄鸡。4)血浆CORT水平与海马和下丘脑中GR蛋白表达量呈负相关,与FKBP5蛋白表达量呈正相关;海马和下丘脑中GR与FKBP5的蛋白表达量呈负相关。以上结果表明,AA肉鸡和如皋黄鸡应激敏感性的差异与海马和下丘脑GR和FKBP5的表达及其调控有关。 展开更多

关键词 肉鸡 应激 海马 下丘脑 糖皮质激素受体 FK-506结合蛋白5

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