数据驱动的人体正常和癌症组织中糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白(GPI-AP)相关基因表达谱的综合分析 被引量：1

1

作者 孔维泽 柳艺石 +1 位作者 高晓冬 藤田盛久 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期669-683,共15页

人体细胞中含有超过146种GPI锚定蛋白(glycosylphosphatidylinositol-anchored protein,GPI-AP),包括受体、配体、粘附分子和酶等。这些蛋白通过GPI锚定在细胞膜表面的脂筏中,发挥多种重要生物学功能。目前,已经对GPI锚定蛋白的生物合... 人体细胞中含有超过146种GPI锚定蛋白(glycosylphosphatidylinositol-anchored protein,GPI-AP),包括受体、配体、粘附分子和酶等。这些蛋白通过GPI锚定在细胞膜表面的脂筏中,发挥多种重要生物学功能。目前,已经对GPI锚定蛋白的生物合成开展了大量研究,其中GPI-AP的生物合成包括至少20步反应,已鉴定出超过40个GPI-AP合成相关基因,但是仍缺乏对于GPI-AP相关基因在正常组织与癌症组织中表达调控的研究。本研究利用来自于TCGA数据库和GTEx portal的基因表达数据,同时结合使用GlycoMaple糖基化通路分析工具,对正常组织与癌症组织中参与GPI-AP合成和编码GPI-AP的基因的表达情况进行了全面分析。研究发现,与正常组织相比,在早期胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、胰腺癌、睾丸生殖细胞癌、原发性皮肤黑色素瘤和转移性皮肤黑色素瘤中,参与GPI-AP合成的基因表达发生了显著变化,其中PIGY在这6种癌症中表达量均有上升。此外,GPI锚定蛋白编码基因CD14在这6种癌症中的表达量上升。GPI锚定蛋白编码基因GAS1、GPC2、GPC4仅在早期胶质瘤和多形性胶质母细胞瘤中表达量上升,说明部分GPI锚定蛋白如GAS1等可以作为早期胶质瘤和多形性胶质母细胞瘤生物标志物。本研究为GPI-AP相关基因在正常组织与癌症组织中的表达情况提供了新的见解,为GPI-AP作为生物标志物的开发打下了坚实基础。 展开更多

关键词 糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白(GPI-AP) TCGA 癌症 胶质瘤 标志物

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人骨髓基质细胞中糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶DcDNA的克隆 被引量：6

2

作者 顾善兰 唐建华 张晓杰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期172-178,共7页

为探讨人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI PLD)cDNA的结构及功能 ,应用RT PCR从人骨髓基质细胞中克隆了长约 2 6kb的GPI PLDcDNA ,包含完整阅读框架 ,编码 2 3个氨基酸的信号肽及 817个氨基酸的成熟肽 .该cDNA与人胰腺GPI PLDcDNA... 为探讨人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI PLD)cDNA的结构及功能 ,应用RT PCR从人骨髓基质细胞中克隆了长约 2 6kb的GPI PLDcDNA ,包含完整阅读框架 ,编码 2 3个氨基酸的信号肽及 817个氨基酸的成熟肽 .该cDNA与人胰腺GPI PLDcDNA几乎百分之百同源 ,与人肝脏GPI PLDcDNA同源性为 95 %,氨基酸同源性为 94 %,3者对应的结构基因只有 1个 ,位于人类第 6号染色体上 ,基因组序列长约 80kb ,包括 2 5个外显子 .构建克隆的GPI PLDcDNA的真核表达载体 ,通过脂质体转染能表达GPI锚定的胎盘型碱性磷酸酶 (PLAP)而无GPI PLD活性的G9细胞 ,同时设立对照组检测GPI PLDcDNA的功能 .结果显示 ,对照组细胞几乎检测不到GPI PLD活性 ,其表达的PLAP主要位于细胞膜上 ;而转染GPI PLDcDNA的G9细胞能检测到较高水平的GPI PLD活性 ,而且大部分酶活性存在于培养液中 ,其表达的PLAP也主要被释放入培养液 .结果证实 ,从人骨髓基质细胞中克隆的GPI PLDcDNA有生物学功能 ,它能释放细胞膜上GPI锚定蛋白质 . 展开更多

关键词 人骨髓基质细胞 糖基化磷脂酰肌醇 特异性磷脂酶D CDNA克隆

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竞争性RT-PCR法定量检测糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D基因的表达 被引量：4

3

作者 张晓杰 鲁纯平 +2 位作者 唐建华 顾善兰 禹虹 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第4期322-326,共5页

目的 :建立一种定量检测糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI PLD)基因表达水平的竞争性RT PCR方法 ,以研究GPI PLD与白血病等疾病的关系。方法 :首先用PCR定点诱变法构建GPI PLD的竞争性cDNA模板 ,该模板与靶cDNA具有相同的引物结合区 ... 目的 :建立一种定量检测糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI PLD)基因表达水平的竞争性RT PCR方法 ,以研究GPI PLD与白血病等疾病的关系。方法 :首先用PCR定点诱变法构建GPI PLD的竞争性cDNA模板 ,该模板与靶cDNA具有相同的引物结合区 ,但在长度上要比靶cDNA少 2 0个碱基。把该竞争性cD NA模板在体外转录出的竞争性RNA作为RT PCR的内标准 ,与白血病细胞株K5 6 2细胞的总RNA在同一体系内进行逆转录和PCR扩增 ,二者的PCR产物因长度不同可经电泳区分开 ,然后对电泳图像进行光密度扫描 ,根据已知的竞争性RNA模板的量计算出GPI PLDmRNA的量 ,从而得到GPI PLD基因的绝对表达量。结果 :构建和制备了长度为 198bp的GPI PLD竞争性RNA模板 ,该模板与靶模板呈明显的竞争性RT PCR反应 ;测得K5 6 2细胞GPI PLD基因的表达水平为每纳克 (44 0± 2 0 )拷贝。结论 :成功地建立了一种定量检测GPI PLD基因表达水平的竞争性RT PCR方法 ,该方法具有灵敏、准确等优点。 展开更多

关键词 竞争性RT-PCR法 定量检测 糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D基因 表达 白血病

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人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的基因结构初探 被引量：1

4

作者 唐建华 顾善兰 +1 位作者 张晓杰 李文凯 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第2期95-97,共3页

探讨人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D (GPI PLD)的cDNA及其基因组基因的结构。从人骨髓基质细胞克隆出的GPI PLDcDNA中发现 ,它能编码信号肽 ,其编码的酶蛋白成熟肽为 817个氨基酸残基。该GPI PLDcDNA与从人肝组织和胰腺组织克隆到的GP... 探讨人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D (GPI PLD)的cDNA及其基因组基因的结构。从人骨髓基质细胞克隆出的GPI PLDcDNA中发现 ,它能编码信号肽 ,其编码的酶蛋白成熟肽为 817个氨基酸残基。该GPI PLDcDNA与从人肝组织和胰腺组织克隆到的GPI PLDcDNA的碱基序列的同源性分别为 95 %和 99%。人GPI PLD基因组基因定位于 6p2 2 .1～ 2 2 .3区域 ,包含 2 5个外显子 ,其上游调控区具有启动子 (TATA盒与CAAT盒 )、增强子核心序列 (TGGAAG)及同源转换盒Pit 1/GHF 1结合序列 (TATGCATAA)等顺式作用元件。 展开更多

关键词 骨髓 糖基化磷脂酰肌醇 磷脂酶D GPI-PLD CDNA 骨髓基质细胞

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糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的表达在肺癌诊断中的意义

5

作者 石新云 黄明清 +1 位作者 黄洁 金法祥 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第9期1431-1433,共3页

目的:探讨肺癌患者糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)的活性变化,为肺癌患者预后判断提供依据。方法:利用具有糖基化磷脂酰肌醇(GPI)结构的胎盘碱性磷酸酶(PLAP)做底物,通过TX-114分相,定量检测外周血单个核细胞和血浆中GPI-PLD活... 目的:探讨肺癌患者糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)的活性变化,为肺癌患者预后判断提供依据。方法:利用具有糖基化磷脂酰肌醇(GPI)结构的胎盘碱性磷酸酶(PLAP)做底物,通过TX-114分相,定量检测外周血单个核细胞和血浆中GPI-PLD活性,并采用荧光定量PCR检测外周血单个核细胞中GPI-PLDmRNA水平,分析其表达量与肺癌之间的关系。结果:肺癌患者外周血单个核细胞和血浆中GPI-PLD酶活性分别为(24.15±2.33)%和(29.71±1.32)%,明显低于正常人(P<0.001),且肺癌患者单个核细胞GPI-PLD活性仅为其血浆中酶活性水平的81.29%,两者之间差异有显著性(P<0.05);肺癌患者外周血单个核细胞中GPI-PLD mRNA表达平均值为0.44±0.11,明显低于正常人(P<0.001)。结论:GPI-PLD在肺癌患者中的活性及表达明显降低,有可能作为肺癌预后判断的指标之一。 展开更多

关键词 肺肿瘤 糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D 荧光定量PCR

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GPI锚定蛋白检测诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症的临床价值

6

作者 段秀梅 车媛媛 +4 位作者 谭岩 方艳秋 许淑芬 刘磊 孙牧男 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1018-1021,1120,共5页

目的:探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者不同外周血细胞GPI锚定蛋白的表达情况,为PNH的诊断和鉴别诊断提供依据。方法:采用流式细胞术检测32例PNH患者外周血各类细胞膜上CD55、CD59、CD16及CD14的表达百分率。结果:PNH患者外周血... 目的:探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者不同外周血细胞GPI锚定蛋白的表达情况,为PNH的诊断和鉴别诊断提供依据。方法:采用流式细胞术检测32例PNH患者外周血各类细胞膜上CD55、CD59、CD16及CD14的表达百分率。结果:PNH患者外周血红细胞、粒细胞膜上CD55、CD59表达均明显减少,与正常对照组比较差异有显著性(P<0.001),且粒细胞上CD55、CD59表达率低于红细胞(P<0.05);血小板CD55、CD59表达率也较对照组减少(P<0.05);有27例PNH患者的淋巴细胞CD55、CD59表达降低,其缺失率达30%,低于粒细胞和红细胞;CD16在粒细胞上表达量差异很大(34%～83%),与对照组比较差异有显著性(P<0.001);在单核细胞上可见CD14表达缺失的PNH克隆,CD14表达比例明显低于正常对照组(P<0.001)。结论:检测外周各系血细胞CD55和CD59可以使典型PNH的诊断更加可靠,使部分缺乏典型临床表现的PNH明确诊断。检测CD16和CD14对排除PNH具有重要意义。 展开更多

关键词 血红蛋白尿症 阵发性 糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白 CD55 CD59 CD16 CD14

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一种精子表面GPI锚定蛋白初步鉴定方法的建立

7

作者 辛玲 王慧萍 +1 位作者 王小强 于和鸣 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1155-1159,共5页

精子表面糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定蛋白（GPI-Aps）在精子不同阶段都发挥着关键作用．本研究介绍了嗜水气单胞菌毒素（aerolysin）作为生物探针来鉴定精子表面的GPI锚定蛋白．实验依次进行了嗜水气单胞茵培养、毒素提取纯化、多克隆抗... 精子表面糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定蛋白（GPI-Aps）在精子不同阶段都发挥着关键作用．本研究介绍了嗜水气单胞菌毒素（aerolysin）作为生物探针来鉴定精子表面的GPI锚定蛋白．实验依次进行了嗜水气单胞茵培养、毒素提取纯化、多克隆抗体制备以及三明治蛋白印迹验证实验．凝胶蛋白分离实验显示，硫酸铵沉淀加Sephadex G-100层析柱纯化得到了分子质量为45kD高纯度细菌毒素；蛋白印迹实验验证了制备的多克隆抗体的特异性；三明治蛋白印迹结果显示，嗜水气单胞菌毒素能识别出12条精子脂筏提取蛋白条带，其分子质量主要分布在15～130kD之间；Alex488标记的免疫荧光实验显示，嗜水气单胞菌毒素识别的GPI锚定蛋白主要分布在精子头部和尾部．研究结果提示，嗜水气单胞菌毒素能够有效地识别精子表面的GPI锚定蛋白． 展开更多

关键词 糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白(GPI-Aps) 嗜水气单胞菌毒素 精子

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黄病毒E蛋白N-糖基化研究进展 被引量：1

8

作者 潘昱婷 贾仁勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期864-867,共4页

糖基化是蛋白质一种重要的翻译后修饰调控机制。在真核细胞中,糖基化的合成主要包括:N糖基化、O糖基化及糖基磷脂酰肌醇锚3种途径。新生肽链合成时或合成后,糖链与肽链中特定序列(Asn-X-Thr/Ser,其中X为除脯氨酸外的任意氨基酸)的天冬酰... 糖基化是蛋白质一种重要的翻译后修饰调控机制。在真核细胞中,糖基化的合成主要包括:N糖基化、O糖基化及糖基磷脂酰肌醇锚3种途径。新生肽链合成时或合成后,糖链与肽链中特定序列(Asn-X-Thr/Ser,其中X为除脯氨酸外的任意氨基酸)的天冬酰胺(N)相连接,所以将该糖基化类型称为N连接糖链,又称N糖基化[1]。在真核细胞中,N糖基化的合成在内质网和高尔基体中完成,糖蛋白中N连接聚糖在内质网中将预先生成的寡糖转运至新生肽链的天冬酰胺残基中,再将其转移至高尔基体内进一步修饰,并在高尔基体糖苷酶和糖基转移酶的作用下. 展开更多

关键词 N-糖基化 E蛋白 糖基磷脂酰肌醇 翻译后修饰 病毒 新生肽链 真核细胞 天冬酰胺

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磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C基因在乳酸乳球菌中的异源表达

9

作者 汤先泽 刘伟 +3 位作者 皮雄娥 尹业师 王欣 刘新利 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第4期640-646,共7页

根据乳酸乳球菌密码子的偏好性,在不改变编码蛋白的基础上,优化设计并合成枯草芽孢杆菌磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C基因,将其与大肠埃希菌-乳酸乳球菌穿梭质粒p AMJ399连接,构建重组质粒p AMJ399-PIPLC,并电转化至乳酸乳球菌中进行诱导表达... 根据乳酸乳球菌密码子的偏好性,在不改变编码蛋白的基础上,优化设计并合成枯草芽孢杆菌磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C基因,将其与大肠埃希菌-乳酸乳球菌穿梭质粒p AMJ399连接,构建重组质粒p AMJ399-PIPLC,并电转化至乳酸乳球菌中进行诱导表达。SDS-PAGE分析显示:重组蛋白以可溶性蛋白的形式分泌于胞外,分子质量约35 ku,与预期蛋白大小一致。重组蛋白在PI-李斯特氏菌显色平板上显现明显的乳白色晕圈,证明重组蛋白具有酶活性,磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)在重组乳酸乳球菌中成功获得表达。通过优化培养条件,以2%转接量,在含有1%红霉素抗性的GM17液体培养基中,于32℃静止培养24 h,测得培养基上清液中PI-PLC的浓度为1.092μg·m L-1。 展开更多

关键词 磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C 克隆表达 乳酸乳球菌 GPI锚定蛋白

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GPI锚定蛋白前体C-端附着信号的疏水性决定其内质网相关蛋白质降解途径

10

作者 张楠 柳艺石 +1 位作者 藤田盛久 高晓冬 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1351-1358,共8页

目前,已知超过150种糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白(glycosylphosphatidylinositol anchored protein,GPI-anchored protein)在哺乳动物细胞中表达,并参与免疫识别、细胞通讯与信号转导等多种生理过程。当蛋白质无法被GPI修饰时,前体蛋白质通... 目前,已知超过150种糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白(glycosylphosphatidylinositol anchored protein,GPI-anchored protein)在哺乳动物细胞中表达,并参与免疫识别、细胞通讯与信号转导等多种生理过程。当蛋白质无法被GPI修饰时,前体蛋白质通过内质网相关蛋白质降解(endoplasmic reticulum associated degradation,ERAD)途径降解。然而,GPI锚定蛋白ERAD的降解机制尚不清楚。为了探究GPI锚定蛋白前体的ERAD途径的具体机制,本研究敲除人胚胎肾细胞293细胞株(HEK293)的GPI转酰胺酶复合物亚基PIGS基因,进而敲除E3泛素连接酶HRD1和GP78基因,之后随机在PIGS-KO,PIGS-HRD1-KO和PIGS-GP78-KO过表达16种GPI锚定蛋白质(以亲本PIGS-KO细胞株作为对照组),Western印迹结果证明,GPI锚定蛋白前体在细胞株PIGS-HRD1-KO中的蛋白质积累量(I_(PHK))和PIGS-GP78-KO中的蛋白质积累量(I_(PGK))体现出明显的差异性,例如LYPD2的I_(PHK)是I_(PGK)的28倍,NEGR1的I_(PHK)是I_(PGK)的0.12倍,这说明GPI锚定蛋白前体的降解主要依赖于2种ERAD途径:ERAD-L和ERAD-M。且HRD1与GP78的2种E3泛素连接酶被选择性地用于GPI锚定蛋白前体的降解。朊病毒(prion)和CD59嵌合构建体表明,GPI前体蛋白C-端GPI附着信号决定了降解途径(朊病毒I_(PHK)/I_(PGK)由突变前的0.33改变为突变后的23.42。相反的是,突变前CD59的I_(PHK)/I_(PGK)是11.45,突变后变为2.81)。接着,通过对C-端附着信号疏水性的计算,我们发现,这种选择性差异由前体蛋白质C-端GPI附着信号疏水性的不同造成。本研究初步解释了未被GPI锚修饰的GPI锚定蛋白前体在ERAD中的降解机制。 展开更多

关键词 糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白 内质网相关蛋白质降解 蛋白质疏水性

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糖基化在肿瘤免疫中的作用 被引量：6

11

作者 王立萍 陈茜茜 +1 位作者 袁庆民 汪淑晶 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期297-300,共4页

蛋白质的糖基化是糖类在糖基转移酶（Glycosyltransferase,GTs）的催化下以共价键的形式与肽链连接的过程。根据糖肽键的不同,糖基化分为以下四种类型：N-连接糖基化、O-连接糖基化、糖基磷脂酰肌醇（Glycophosphatidylinositol,GPI）... 蛋白质的糖基化是糖类在糖基转移酶（Glycosyltransferase,GTs）的催化下以共价键的形式与肽链连接的过程。根据糖肽键的不同,糖基化分为以下四种类型：N-连接糖基化、O-连接糖基化、糖基磷脂酰肌醇（Glycophosphatidylinositol,GPI）锚定糖基化和C-甘露糖化[1]。 展开更多

关键词 糖基化 肿瘤免疫 糖基磷脂酰肌醇 糖基转移酶 甘露糖化 蛋白质 连接 共价键

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PD98059和LY294002对非酶糖基化终产物诱导人RPE细胞表达VEGF的影响 被引量：1

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作者 杨晓春 许建彪 唐罗生 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2014年第9期817-820,825,共5页

目的观察p44/42 MAPK激酶抑制剂PD98059和PI3K/Akt激酶抑制剂LY294002对非酶糖基化终产物(advanced glycation end-products,AGE)诱导的人视网膜色素上皮细胞株ARPE-19细胞表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VE... 目的观察p44/42 MAPK激酶抑制剂PD98059和PI3K/Akt激酶抑制剂LY294002对非酶糖基化终产物(advanced glycation end-products,AGE)诱导的人视网膜色素上皮细胞株ARPE-19细胞表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响。方法分别用不同浓度AGE和AGE作用不同时间干预ARPE-19细胞,ELISA方法检测ARPE-19细胞外VEGF蛋白表达水平,免疫细胞荧光法检测磷酸化p44/42和Akt的表达;以PD98059和(或)LY294002预处理ARPE-19细胞后再用AGE干预,并测定ARPE-19细胞外VEGF水平、磷酸化p44/42和Akt活性。结果随着AGE浓度或作用时间增加,ARPE-19细胞表达VEGF外增加,AGE浓度为100mg·L-1或作用8h时达高峰,表达水平分别为(304.55±20.51)ng·L-1、(293.54±13.98)ng·L-1,同时p44/42和Akt信号分子激活。使用PD98059或LY294002预处理后,p44/42和Akt低表达,AGE诱导的ARPE-19细胞外VEGF表达也降低,并与PD98059和LY294002呈剂量依赖性,当使用20μmol·L-1 PD98059和30μmol·L-1 LY294002时,VEGF的表达最低,分别为(57.35±5.29)pg·L-1、(81.51±8.10)pg·L-1,但VEGF的表达量仍与AGE浓度和作用时间呈正相关(P<0.01);同时使用PD98059和LY294002预处理,AGE诱导的VEGF表达与AGE的作用时间无关(P>0.05)。结论 p44/42MAPK和PI3K/Akt信号通路是AGE诱导ARPE-19细胞表达VEGF的重要细胞内信号通路,PD98059和LY294002可抑制AGE诱导的人RPE细胞外VEGF表达。 展开更多

关键词 糖基化终产物 丝裂素活化蛋白激酶 磷脂酰肌醇-3激酶 色素上皮 信号通路

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脂蛋白脂酶调控因子研究进展 被引量：7

13

作者 姜延志 邢淑华 +2 位作者 岑王敏 陈建宁 李学伟 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期830-838,共9页

脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase,LPL)是脂质代谢的关键酶,其正常调控对于机体向组织提供脂质营养至关重要。作为LPL重要的调控因子,糖基化磷脂酰肌醇锚定高密度脂蛋白结合蛋白1(Glycosylphosphatidylinositol-anchored high density lip... 脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase,LPL)是脂质代谢的关键酶,其正常调控对于机体向组织提供脂质营养至关重要。作为LPL重要的调控因子,糖基化磷脂酰肌醇锚定高密度脂蛋白结合蛋白1(Glycosylphosphatidylinositol-anchored high density lipoprotein-binding protein 1,GPIHBP1)能与LPL结合起脂解平台的作用,并作为载体参与LPL向毛细血管内皮细胞的转运。另外,近年来也鉴定出其他几个LPL活性调控因子,包括microRNAs、A型重复排序蛋白相关受体(Sortilin-related receptor with A-type repeats,SorLA)和载脂蛋白(Apolipoproteins,apo)。这些LPL调控因子的成功鉴定,有助于人们深入认识机体脂解代谢和乳糜微粒血症发生的内在机制。文章重点综述了LPL的调控因子GPIHBP1的研究进展,同时也对其他几个调控因子的研究进展进行了讨论。 展开更多

关键词 脂蛋白脂酶 糖基化磷脂酰肌醇锚定高密度脂蛋白结合蛋白1 调控因子

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稳定表达GPI-CD80融合蛋白CHO细胞株的构建 被引量：1

14

作者 刘煜 张雪 +1 位作者 刘胜军 林敬明 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期558-559,共2页

目的将糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定型人CD80重组基因的真核细胞表达质粒pRM10/GPI-CD80转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),构建CHO/GPI-CD80稳定表达细胞株。方法将pRM10/GPI-CD80用脂质体法转染CHO细胞,经G418加压筛选出阳性细胞克隆。采用流... 目的将糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定型人CD80重组基因的真核细胞表达质粒pRM10/GPI-CD80转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),构建CHO/GPI-CD80稳定表达细胞株。方法将pRM10/GPI-CD80用脂质体法转染CHO细胞,经G418加压筛选出阳性细胞克隆。采用流式细胞术和免疫荧光染色检测CHO/GPI-CD80稳定表达细胞株表达GPI-CD80蛋白的效率的变化。结果转染GPI-CD80基因的CHO细胞在G418筛选下出现阳性克隆,且经过传代后不同代数的克隆细胞表面表达GPI-CD80的阳性率差异无统计学意义。结论pRM10/GPI-CD80在CHO细胞中成功表达,表达稳定且效率较高。 展开更多

关键词 糖基化磷脂酰肌醇 脂质体 真核表达

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重组人磷脂酶D2在体内能明显抑制慢性哮喘豚鼠血清中GPI-PLD的表达(英文)

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作者 朱玲 余传星 +2 位作者 邹伟斌 何小丽 林俊锦 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期116-121,共6页

通过建立慢性豚鼠哮喘模型,研究重组人磷脂酶D2(rhPLD2)干预慢性哮喘豚鼠血清中糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)含量的变化,探寻可能的机制.以rhPLD2干预慢性哮喘豚鼠,用TX-114分相法检测豚鼠血清中GPI-PLD酶活性.与正常状态豚... 通过建立慢性豚鼠哮喘模型,研究重组人磷脂酶D2(rhPLD2)干预慢性哮喘豚鼠血清中糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)含量的变化,探寻可能的机制.以rhPLD2干预慢性哮喘豚鼠,用TX-114分相法检测豚鼠血清中GPI-PLD酶活性.与正常状态豚鼠相比较,慢性哮喘状态豚鼠其血清中GPI-PLD酶活性显著升高.但以rhPLD2及地塞米松干预慢性哮喘豚鼠后,该指标显著下降.rhPLD2可通过抑制其血清中GPI-PLD酶活性表达,来抑制哮喘发生过程中的炎症反应. 展开更多

关键词 重组人磷脂酶D2 糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D 慢性哮喘 豚鼠

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朊病毒治疗候选药物的研究进展 被引量：7

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作者 钟正伟 宋有涛 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期828-835,共8页

疯牛病（BSE）、羊瘙痒症（scrapie）、人库鲁病（kuru）和人克雅氏症（CJD）等都是由朊病毒（prion）引起的一类具有高度传染性和致死性的中枢神经系统疾病。研究表明,细胞内正常朊病毒（PrPC）是一种广泛地表达于脊椎动物细胞表面的... 疯牛病（BSE）、羊瘙痒症（scrapie）、人库鲁病（kuru）和人克雅氏症（CJD）等都是由朊病毒（prion）引起的一类具有高度传染性和致死性的中枢神经系统疾病。研究表明,细胞内正常朊病毒（PrPC）是一种广泛地表达于脊椎动物细胞表面的内源性糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白,在体内以单体的形式出现,不具有致病性。 展开更多

关键词 正常朊病毒 病毒治疗 糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白 中枢神经系统疾病 药物 候选 克雅氏症 人库鲁病

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GPI-CTLA4Ig嵌合分子的构建和在CHO-dhfr^-细胞膜上的表达 被引量：3

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作者 于继云 沈倍奋 +4 位作者 黎燕 陈兴 程绍辉 田蓉 曲梅花 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期212-214,共3页

目的 :研制GPI锚定修饰的新型免疫抑制分子GPI CT LA4Ig。方法 :通过将从促衰变因子 (DAF)来源的GPI修饰性信号序列与CTLA4Ig嵌合 ,获得GPI修饰的CTLA4Ig分子。将编码GPI CTLA4Ig嵌合分子的基因克隆到真核表达载体pCI dhfr中 ,并用脂质... 目的 :研制GPI锚定修饰的新型免疫抑制分子GPI CT LA4Ig。方法 :通过将从促衰变因子 (DAF)来源的GPI修饰性信号序列与CTLA4Ig嵌合 ,获得GPI修饰的CTLA4Ig分子。将编码GPI CTLA4Ig嵌合分子的基因克隆到真核表达载体pCI dhfr中 ,并用脂质体法转染CHO dhfr 细胞 ,用氨甲喋呤 (MTX)进行筛选。重组蛋白的表达用RT PCR、ELISA、细胞免疫荧光和Westernblot进行鉴定。最后采用ProteinA亲和层析纯化。结果 :构建了GPI CTLA4Ig嵌合分子 ,并在CHO dhfr 细胞膜上稳定表达。结论 :GPI修饰的CTLA4Ig分子有可能作为新型的免疫抑制剂用于器官移植中 。 展开更多

关键词 CTLA4IG 蛋白质表达 糖基化磷脂酰肌醇 CHO-dhfr^-细胞

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GPI信号肽序列与B7-1基因的拼接及其真核表达载体的构建和序列分析 被引量：3

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作者 易平勇 余海 马文学 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2002年第2期152-152,共1页

B7-1提供T细胞激活需要的辅助信号,大多数的肿瘤细胞表面并不表达B7-1分子,这可能是肿瘤逃避机体免疫攻击的原因之一。通过基因转染法,将B7-1基因导入肿瘤细胞中表达,能诱导抗肿瘤免疫反应,但基因转染有其局限性,因此有必要探寻更好的... B7-1提供T细胞激活需要的辅助信号,大多数的肿瘤细胞表面并不表达B7-1分子,这可能是肿瘤逃避机体免疫攻击的原因之一。通过基因转染法,将B7-1基因导入肿瘤细胞中表达,能诱导抗肿瘤免疫反应,但基因转染有其局限性,因此有必要探寻更好的转染法。糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白是通过其羧基末端的GPI结构锚定于细胞膜表面的一类蛋白,人胎盘碱性磷酸酶-1(hPLAP-1)也是一种GPI锚定蛋白,指导蛋白锚定附着的信号是C末端信号肽。 展开更多

关键词 GPI 信号肽序列 肿瘤 免疫治疗 共刺激分子 糖基化磷脂酰肌醇 融合基因 人胎盘碱性磷酸酶

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GPI-PLD过表达对肝癌细胞株HepG2生物学特征的影响 被引量：2

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作者 贺望娇 唐建华 +4 位作者 谭超超 段琼 王锴佳 左克强 袁宪宇 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期103-109,共7页

目的:研究GPI-PLD基因转染并过度表达对HepG2细胞的影响。方法:用脂质体转染法将本室已经构建的GPI-PLD真核表达载体pcDNA3.1(+)/GPI-PLD转入HepG2细胞,以未转染的HepG2细胞及转染空载体pcDNA3.1(+)的细胞为对照,G418筛选出阳性细胞克... 目的:研究GPI-PLD基因转染并过度表达对HepG2细胞的影响。方法:用脂质体转染法将本室已经构建的GPI-PLD真核表达载体pcDNA3.1(+)/GPI-PLD转入HepG2细胞,以未转染的HepG2细胞及转染空载体pcDNA3.1(+)的细胞为对照,G418筛选出阳性细胞克隆。用自制具完整GPI结构的胎盘碱性磷酸酶为底物,定量检测GPI-PLD活性,RT-PCR法确定GPI-PLD mRNA表达水平。细胞计数绘制生长曲线,荧光染色观察HepG2细胞形态学改变,流式细胞术检测凋亡,台盼蓝排斥法观察补体介导的细胞毒(CDC)杀伤率,ELISA检测癌胚抗原(CEA)的表达情况。结果:阳性细胞克隆GPI-PLD酶活性水平比对照组升高约2倍,GPI-PLD mRNA表达水平约增加5倍;GPI-PLD基因过度表达可促进GPI锚定的蛋白质如CEA和PLAP等被大量水解释放入培养基,导致细胞增殖能力减弱,对补体杀伤的敏感性增强,细胞呈现典型的凋亡形态特征,流式细胞术检测到凋亡峰,细胞凋亡率明显增加。结论:成功将GPI-PLD基因转染入HepG2细胞,并在细胞中稳定表达。GPI-PLD过表达能抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞的凋亡,增强肿瘤细胞对补体杀伤的敏感性。 展开更多

关键词 糖基化磷脂酰肌醇特异性磷酯酶D HEPG2细胞 转基因

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GPI-PLD通过下调PI3K-Akt信号通路活性抑制肝癌细胞的生长 被引量：2

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作者 杨智英 谭超超 +2 位作者 杨治平 黄河 唐建华 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期873-878,共6页

目的:明确糖基化磷脂酰肌醇特异性磷酯酶D(glycosylphosphatidylinositol-specific phospholipase D,GPIPLD)对肝癌细胞HepG2的影响以及可能的调控分子机制。方法:通过转染构建高表达GPI-PLD模型,利用M、荧光染色以及Western印迹检测高... 目的:明确糖基化磷脂酰肌醇特异性磷酯酶D(glycosylphosphatidylinositol-specific phospholipase D,GPIPLD)对肝癌细胞HepG2的影响以及可能的调控分子机制。方法:通过转染构建高表达GPI-PLD模型,利用M、荧光染色以及Western印迹检测高表达GPI-PLD对肝癌细胞的影响,同时接种于裸鼠模型中,进一步明确GPI-PLD在体内对肝癌细胞的影响。结果:与空白组和对照组相比,GPI-PLD组PI3K-Akt信号通路活性明显受到抑制,肝癌细胞增殖活性明显受到抑制并呈现典型的凋亡形态。肝癌裸鼠模型结果显示GPI-PLD组肿瘤的生长速度、肿瘤质量[(1.87±0.09)g]小于空白组[(2.20±0.17)g]和对照组[(2.15±0.09)g],GPI-PLD组AST,ALT,AFP血清浓度显著低于空白组和对照组(P<0.05)。结论:GPI-PLD可通过下调PI3K-Akt信号通路活性,抑制肝癌细胞的增殖及体内生长,促进肝癌细胞的凋亡。 展开更多

关键词 糖基化磷脂酰肌醇特异性磷酯酶D 肝癌细胞 PI3K-AKT 凋亡

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