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人精胺氧化酶的原核表达及多克隆抗体制备
被引量：
3
1
作者
曹春雨
韩钰
+1 位作者
任玉珊
王艳林
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第10期920-923,共4页
目的:克隆、原核表达有酶活性的重组人精胺氧化酶(SMO)蛋白,并制备兔抗人SMO多克隆抗体。方法:采用RT-PCR法从人非小细胞肺腺癌A549细胞株总RNA中克隆人精胺氧化酶cDNA,构建SMO原核表达质粒pET-15b/SMO。将SMO原核表达质粒转化E.coli的B...
目的:克隆、原核表达有酶活性的重组人精胺氧化酶(SMO)蛋白,并制备兔抗人SMO多克隆抗体。方法:采用RT-PCR法从人非小细胞肺腺癌A549细胞株总RNA中克隆人精胺氧化酶cDNA,构建SMO原核表达质粒pET-15b/SMO。将SMO原核表达质粒转化E.coli的BL21(DE3)菌并使用IPTG诱导重组SMO表达。表达的蛋白产物经Ni-NTA亲和层析纯化、透析复性后,化学荧光法测定其酶活性。使用制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、纯化重组人SMO蛋白,以此蛋白作为抗原皮内接种日本大耳白兔来制备抗人SMO多克隆抗体。分别以ELISA、Westernblot和免疫细胞化学法检测兔血清中抗体的滴度和抗原特异性。结果:纯化并透析复性后的重组人SMO蛋白具备快速氧化精胺的酶活性。用此重组蛋白制备的抗体具有较高抗体滴度和针对人SMO的特异性。结论:建立了人SMO原核表达、纯化系统,获得了有酶活性的高纯度人SMO蛋白并成功制备了兔抗人SMO的多克隆抗体,为以SMO为靶点的抗肿瘤基础和临床研究提供了有力的研究工具。
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关键词
精胺氧化酶
原核表达
抗体制备
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职称材料
siRNA抑制精胺氧化酶的表达可降低人A549肺癌细胞对多胺类似物CPENSpm的敏感性
被引量：
2
2
作者
韩钰
任玉珊
+1 位作者
任东明
王艳林
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期466-470,共5页
目的研究精胺氧化酶(spermine oxidase,SMO)基因表达抑制对多胺类似物CPENSpm抗瘤活性的影响。方法用siRNA技术获得SMO基因表达抑制的人A549肺癌细胞株,QT-RT-PCR法和酶活性分析法用于鉴定SMO基因的表达水平,MTT法检测细胞的存活率,DNA...
目的研究精胺氧化酶(spermine oxidase,SMO)基因表达抑制对多胺类似物CPENSpm抗瘤活性的影响。方法用siRNA技术获得SMO基因表达抑制的人A549肺癌细胞株,QT-RT-PCR法和酶活性分析法用于鉴定SMO基因的表达水平,MTT法检测细胞的存活率,DNA降解分析和流式细胞/亚凋亡峰分析检测细胞凋亡状况。结果成功获得SMO基因表达抑制的人A549肺癌细胞株。用SMO-siRNA质粒转染的细胞中,SMO mRNA和酶活性的基础水平分别降低53%和14%。用10μmol·L-1 CPENSpm处理对照细胞24h可使SMO mRNA和酶活性分别升高10倍和20倍,但在SMO-siRNA质粒转染的细胞中,这种药物对SMO的表达诱导被抑制。细胞增殖实验发现,SMO表达抑制的细胞对CPENSpm(0～20μmol·L-1)的药物敏感性低于对照细胞。细胞凋亡分析发现,与对照细胞相比,CPENSpm诱导SMO表达,抑制细胞发生细胞凋亡的能力明显减弱。结论CPENSpm诱导肿瘤细胞内SMO高表达可能是其抗癌药理活性的分子基础之一。
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关键词
精胺氧化酶
siRNA
多胺
多胺类似物
肺癌细胞
药物敏感性
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职称材料
抗人精胺氧化酶单克隆抗体的制备与鉴定
3
作者
李春红
杨建林
+2 位作者
韩钰
蔡富强
王艳林
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期1286-1290,共5页
目的:制备小鼠抗人精胺氧化酶(SMO)单克隆抗体(mAb),并验证其在Western blot,免疫组织化学等方法中的应用价值。方法:用pET-15b/SMO质粒转化BL2(DE3)后,IPTG诱导表达带6×His标签的SMO重组蛋白并用Ni-NTA树脂亲和层析纯化。用SMO重...
目的:制备小鼠抗人精胺氧化酶(SMO)单克隆抗体(mAb),并验证其在Western blot,免疫组织化学等方法中的应用价值。方法:用pET-15b/SMO质粒转化BL2(DE3)后,IPTG诱导表达带6×His标签的SMO重组蛋白并用Ni-NTA树脂亲和层析纯化。用SMO重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞杂交融合,获得能高效合成和分泌抗SMO mAb的杂交瘤细胞株。所得抗体的特异性和效价用ELISA和Western blot法以及免疫组织化学技术检测。结果:成功建立了稳定分泌鼠抗人SMO的mAb杂交瘤细胞株,获得的mAb效价高、特异性强,可用于ELISA,Western blot,免疫组织化学等分析技术。结论:成功制备出高特异性并能用于多种生物分析技术的SMO mAb。
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关键词
精胺氧化酶
重组蛋白
单克隆抗体
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职称材料
题名
人精胺氧化酶的原核表达及多克隆抗体制备
被引量：
3
1
作者
曹春雨
韩钰
任玉珊
王艳林
机构
三峡大学医学院分子生物学研究所
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第10期920-923,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30772590)
文摘
目的:克隆、原核表达有酶活性的重组人精胺氧化酶(SMO)蛋白,并制备兔抗人SMO多克隆抗体。方法:采用RT-PCR法从人非小细胞肺腺癌A549细胞株总RNA中克隆人精胺氧化酶cDNA,构建SMO原核表达质粒pET-15b/SMO。将SMO原核表达质粒转化E.coli的BL21(DE3)菌并使用IPTG诱导重组SMO表达。表达的蛋白产物经Ni-NTA亲和层析纯化、透析复性后,化学荧光法测定其酶活性。使用制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、纯化重组人SMO蛋白,以此蛋白作为抗原皮内接种日本大耳白兔来制备抗人SMO多克隆抗体。分别以ELISA、Westernblot和免疫细胞化学法检测兔血清中抗体的滴度和抗原特异性。结果:纯化并透析复性后的重组人SMO蛋白具备快速氧化精胺的酶活性。用此重组蛋白制备的抗体具有较高抗体滴度和针对人SMO的特异性。结论:建立了人SMO原核表达、纯化系统,获得了有酶活性的高纯度人SMO蛋白并成功制备了兔抗人SMO的多克隆抗体,为以SMO为靶点的抗肿瘤基础和临床研究提供了有力的研究工具。
关键词
精胺氧化酶
原核表达
抗体制备
Keywords
spermine oxidase
prokaryotic expression
antibody preparation
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
siRNA抑制精胺氧化酶的表达可降低人A549肺癌细胞对多胺类似物CPENSpm的敏感性
被引量：
2
2
作者
韩钰
任玉珊
任东明
王艳林
机构
三峡大学医学院
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期466-470,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(No30772590)
湖北省教育厅重点研究资助项目(NoD200713003)
文摘
目的研究精胺氧化酶(spermine oxidase,SMO)基因表达抑制对多胺类似物CPENSpm抗瘤活性的影响。方法用siRNA技术获得SMO基因表达抑制的人A549肺癌细胞株,QT-RT-PCR法和酶活性分析法用于鉴定SMO基因的表达水平,MTT法检测细胞的存活率,DNA降解分析和流式细胞/亚凋亡峰分析检测细胞凋亡状况。结果成功获得SMO基因表达抑制的人A549肺癌细胞株。用SMO-siRNA质粒转染的细胞中,SMO mRNA和酶活性的基础水平分别降低53%和14%。用10μmol·L-1 CPENSpm处理对照细胞24h可使SMO mRNA和酶活性分别升高10倍和20倍,但在SMO-siRNA质粒转染的细胞中,这种药物对SMO的表达诱导被抑制。细胞增殖实验发现,SMO表达抑制的细胞对CPENSpm(0～20μmol·L-1)的药物敏感性低于对照细胞。细胞凋亡分析发现,与对照细胞相比,CPENSpm诱导SMO表达,抑制细胞发生细胞凋亡的能力明显减弱。结论CPENSpm诱导肿瘤细胞内SMO高表达可能是其抗癌药理活性的分子基础之一。
关键词
精胺氧化酶
siRNA
多胺
多胺类似物
肺癌细胞
药物敏感性
Keywords
spermine oxidase
siRNA
polyamine
polyamine analogue
lung cancer line
drug sensitivity
分类号
R329.25 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R342.2 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
抗人精胺氧化酶单克隆抗体的制备与鉴定
3
作者
李春红
杨建林
韩钰
蔡富强
王艳林
机构
三峡大学医学院
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期1286-1290,共5页
基金
国家自然科学基金(30772590)
文摘
目的:制备小鼠抗人精胺氧化酶(SMO)单克隆抗体(mAb),并验证其在Western blot,免疫组织化学等方法中的应用价值。方法:用pET-15b/SMO质粒转化BL2(DE3)后,IPTG诱导表达带6×His标签的SMO重组蛋白并用Ni-NTA树脂亲和层析纯化。用SMO重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞杂交融合,获得能高效合成和分泌抗SMO mAb的杂交瘤细胞株。所得抗体的特异性和效价用ELISA和Western blot法以及免疫组织化学技术检测。结果:成功建立了稳定分泌鼠抗人SMO的mAb杂交瘤细胞株,获得的mAb效价高、特异性强,可用于ELISA,Western blot,免疫组织化学等分析技术。结论:成功制备出高特异性并能用于多种生物分析技术的SMO mAb。
关键词
精胺氧化酶
重组蛋白
单克隆抗体
Keywords
spermine oxidase
recombinant protein
monoclonal antibody
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
R392-33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
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被引量
操作
1
人精胺氧化酶的原核表达及多克隆抗体制备
曹春雨
韩钰
任玉珊
王艳林
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
3
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职称材料
2
siRNA抑制精胺氧化酶的表达可降低人A549肺癌细胞对多胺类似物CPENSpm的敏感性
韩钰
任玉珊
任东明
王艳林
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
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职称材料
3
抗人精胺氧化酶单克隆抗体的制备与鉴定
李春红
杨建林
韩钰
蔡富强
王艳林
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
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