羊源类鼻疽伯克霍尔德菌BPSS1512基因克隆、原核表达及其蛋白的生物信息学分析 被引量：3

1

作者 曹瑞勇 聂鑫 +9 位作者 李宝宝 张振兴 黄海峰 李亚颖 彭冬梅 李国华 朱姝 杨小健 杜丽 王凤阳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第8期2234-2240,共7页

为克隆羊源类鼻疽伯克霍尔德菌BPSS1512基因,并对其编码的蛋白进行生物信息学分析,以类鼻疽伯克霍尔德菌基因组为模板,参照GenBank中Burkholderia pseudomallei K96243株基因组DNA序列(登录号:NC_006351.1)设计引物,PCR扩增BPSS1512基因... 为克隆羊源类鼻疽伯克霍尔德菌BPSS1512基因,并对其编码的蛋白进行生物信息学分析,以类鼻疽伯克霍尔德菌基因组为模板,参照GenBank中Burkholderia pseudomallei K96243株基因组DNA序列(登录号:NC_006351.1)设计引物,PCR扩增BPSS1512基因,构建重组质粒,SDS-PAGE和Western blotting分析其蛋白表达,DNAMAN等软件对BPSS1512基因编码的氨基酸序列进行分析。结果显示,PCR扩增成功得到1 425bp的特异性条带,BamHⅠ和HindⅢ双酶切后得到约为5 000和1 500bp的条带,表明重组质粒pET-28a-BPSS1512构建成功,IPTG浓度为10mmol/L,诱导时间8h为最适宜的诱导条件。BPSS1512基因编码的蛋白质分子质量为53ku,在包涵体中表达;在BPSS1512蛋白二级结构中,α-螺旋、延伸链和无规卷曲分别占24.05%、14.77%、61.18%,并且疏水性区域分布在-2.0^+2.4之间,说明BPSS1512蛋白具有较强的疏水性,本试验结果可为类鼻疽病的防制提供参考依据。 展开更多

关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 BPSS1512基因 克隆 原核表达 生物信息学分析

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类鼻疽伯克霍尔德菌败血症25例误诊分析 被引量：7

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作者 何远学 贾杰 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第6期110-111,共2页

关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 败血症 误诊分析 表现多样化 类鼻疽病 首诊误诊 误诊原因 热带病

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海南地区类鼻疽伯克霍尔德菌感染特点及其耐药性 被引量：2

3

作者 吴多荣 郭红荔 陈海 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第12期79-80,共2页

收集海南地区确诊类鼻疽伯克霍尔德菌感染病例82例,采用药敏纸片扩散法对菌株进行药敏试验。发现类鼻疽感染病例中,以败血症多见(占41.5%),其次是肺部感染、肝脓肿,还可见肾脓肿、溃疡感染、尿路感染等。类鼻疽伯克霍尔德菌对亚胺培南... 收集海南地区确诊类鼻疽伯克霍尔德菌感染病例82例,采用药敏纸片扩散法对菌株进行药敏试验。发现类鼻疽感染病例中,以败血症多见(占41.5%),其次是肺部感染、肝脓肿,还可见肾脓肿、溃疡感染、尿路感染等。类鼻疽伯克霍尔德菌对亚胺培南和美洛培南的耐药率最低,其次为头孢他啶、哌拉西林/三唑巴坦等。提示类鼻疽伯克霍尔德菌是引起败血症、肺部感染和肝脓肿的主要致病菌,其对多种常用抗菌药物耐药率较高,必须引起临床的高度重视。 展开更多

关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 感染 耐药性

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Vitek 2 Compact GN卡用于不同培养基生长类鼻疽伯克霍尔德菌鉴定结果分析 被引量：2

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作者 黄梅会 郑霄 +1 位作者 吴华 王旭明 《临床检验杂志》 CAS 2019年第7期518-520,共3页

目的评估不同培养基生长类鼻疽伯克霍尔德菌在Vitek 2 Compact中的鉴定结果。方法收集2010年6月至2017年5月海南省人民医院分离的类鼻疽伯克霍尔德菌127株,分别接种于哥伦比亚羊血平板(CBA)、麦康凯平板(MAC)和流感嗜血巧克力平板(CHA)... 目的评估不同培养基生长类鼻疽伯克霍尔德菌在Vitek 2 Compact中的鉴定结果。方法收集2010年6月至2017年5月海南省人民医院分离的类鼻疽伯克霍尔德菌127株,分别接种于哥伦比亚羊血平板(CBA)、麦康凯平板(MAC)和流感嗜血巧克力平板(CHA)上,以多位点序列分型(MLST)为金标准,评估Vitek 2 Compact VT2.R7.01版GN卡对不同培养基上生长的类鼻疽伯克霍尔德菌的鉴定准确性。结果 CBA平板上生长的类鼻疽伯克霍尔德菌鉴定准确率最高,为98.4%,2株被错误鉴定为洋葱伯克霍尔德菌;MAC次之,准确率为94.5%,其中4株被错误鉴定为洋葱伯克霍尔德菌,2株为伯克霍尔德菌某种,1株被错误鉴定为铜绿假单胞菌;CHA鉴定准确率最低,为91.3%,其中4株被错误鉴定为洋葱伯克霍尔德菌,2株为伯克霍尔德菌某种,5株无鉴定结果。结论 Vitek 2 Compact GN卡对不同培养基上类鼻疽伯克霍尔德菌鉴定准确率不同,建议优先选择CBA平板上菌落。 展开更多

关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 培养基 VITEK 2 COMPACT

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类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因的克隆、原核表达及其蛋白的生物信息学分析 被引量：5

5

作者 黄海峰 张振兴 +9 位作者 杨小健 曹瑞勇 李宝宝 聂鑫 朱姝 李国华 彭冬梅 李亚颖 王凤阳 杜丽 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第2期302-309,共8页

试验旨在对类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因进行克隆与原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。提取该菌基因组DNA作为模板,参考GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因序列,设计1对引物。通过PCR扩增得到大小为1 641bp的groEL基因片段... 试验旨在对类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因进行克隆与原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。提取该菌基因组DNA作为模板,参考GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因序列,设计1对引物。通过PCR扩增得到大小为1 641bp的groEL基因片段,将其连接至pMD19-T载体,构建pMD19-T-groEL重组质粒,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定正确后,构建重组质粒pET-28a(+)-groEL。将鉴定正确的pET-28a(+)-groEL质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达,运用SDS-PAGE和Western blotting方法进行蛋白质鉴定,利用DNAMAN和BioEdit等软件进行生物信息学分析。结果发现,试验成功克隆了类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因并进行了蛋白表达,表达的融合蛋白大小约为64 ku,GroEL蛋白的分子式为C4510H7381N1641O1840S521,原子总个数为15 893,消光系数为32 500,不稳定指数为40.31,亲水性平均值为0.901。GroEL蛋白二级结构中α-螺旋(Hh)、延伸链(Ee)、无规则卷曲(Cc)分别占48.71%、13.19%和38.10%。本试验结果为深入探究类鼻疽杆菌groEL基因的分子作用机理奠定了基础。 展开更多

关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 groEL基因 克隆 原核表达 蛋白质鉴定 生物信息学分析

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哌拉西林他唑巴坦对类鼻疽伯克霍尔德菌的体外抗菌活性评估

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作者 黄梅会 吴华 +1 位作者 周晓君 王旭明 《临床检验杂志》 CAS 2021年第8期585-589,共5页

目的评估哌拉西林他唑巴坦体外抗类鼻疽伯克霍尔德菌的活性,为临床用药提供理论依据。方法采用E-test法,对临床分离的109株类鼻疽伯克霍尔德菌进行哌拉西林他唑巴坦最低抑菌浓度(MIC)的检测,计算MIC50和MIC90,与有CLSI敏感性判断标准的... 目的评估哌拉西林他唑巴坦体外抗类鼻疽伯克霍尔德菌的活性,为临床用药提供理论依据。方法采用E-test法,对临床分离的109株类鼻疽伯克霍尔德菌进行哌拉西林他唑巴坦最低抑菌浓度(MIC)的检测,计算MIC50和MIC90,与有CLSI敏感性判断标准的亚胺培南、强力霉素、复方磺胺甲噁唑、头孢他啶、四环素、阿莫西林克拉维酸及有EUCAST敏感性判断标准的美罗培南药敏检测结果进行比较。结果所检测的8种抗菌药物的MIC50分别为哌拉西林他唑巴坦0.25/4μg/mL、亚胺培南0.5μg/mL、美罗培南0.5μg/mL、强力霉素0.5μg/mL、复方磺胺甲噁唑1μg/mL、头孢他啶1μg/mL、四环素2μg/mL、阿莫西林克拉维酸2μg/mL;MIC90分别为哌拉西林他唑巴坦0.5μg/mL、亚胺培南0.5μg/mL、美罗培南1μg/mL、复方磺胺甲噁唑2/38μg/mL、头孢他啶2μg/mL、强力霉素2μg/mL、四环素4μg/mL、阿莫西林克拉维酸4μg/mL。所测有CLSI判断标准的6种抗菌药物敏感性显示,亚胺培南、头孢他啶、阿莫西林克拉维酸的敏感性均为100%,其他药物敏感性依次为强力霉素99.08%,复方磺胺甲噁唑95.41%,四环素94.49%。结论哌拉西林他唑巴坦体外对类鼻疽伯克霍尔德菌的MIC50和MIC90均低于其他7种抗菌药物,表明其在体外对该菌有较强的抗菌活性,结合其体内药代学特点,临床可尝试使用以获取体内对该菌药效学的评估。 展开更多

关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 哌拉西林他唑巴坦 E-TEST 最低抑菌浓度

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类鼻疽伯克霍尔德菌误鉴定1例 被引量：6

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作者 郑敏玲 王丽娜 +1 位作者 陈茶 屈平华 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2018年第4期319-320,共2页

伯克霍尔德菌（Burkholderia）是一种革兰阴性非发酵菌,其中与人类疾病相关的病原菌主要包括洋葱伯克霍尔德菌复合群（B.cepacia complex）、类鼻疽伯克霍尔德菌复合群（B.pseudomallei complex）等。而类鼻疽伯克霍尔德菌复合群可进一... 伯克霍尔德菌（Burkholderia）是一种革兰阴性非发酵菌,其中与人类疾病相关的病原菌主要包括洋葱伯克霍尔德菌复合群（B.cepacia complex）、类鼻疽伯克霍尔德菌复合群（B.pseudomallei complex）等。而类鼻疽伯克霍尔德菌复合群可进一步分为类鼻疽伯克霍尔德菌、鼻疽伯克霍尔德菌（B.mallei）、泰国伯克霍尔德菌（B.thailandensis）、俄克拉何马伯克霍尔德菌（B.oklahomensis）和汉普蒂社伯克霍尔德菌（B.humptydooensis）5个种. 展开更多

关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 尿路感染

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羊源类鼻疽伯克霍尔德菌BPSL 1467基因克隆、表达及其蛋白生物信息学分析 被引量：2

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作者 张萌萌 李宝宝 +7 位作者 曹瑞勇 黄海峰 张振兴 杨小健 聂鑫 朱姝 王凤阳 杜丽 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第9期2401-2408,共8页

试验旨在克隆和表达羊源性类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,B.pseudomallea)的BPSL1467基因,并对其表达的蛋白进行生物信息学分析。以羊源类鼻疽伯克霍尔德菌(BPHN1株)基因组为模板,参照GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌K9624... 试验旨在克隆和表达羊源性类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,B.pseudomallea)的BPSL1467基因,并对其表达的蛋白进行生物信息学分析。以羊源类鼻疽伯克霍尔德菌(BPHN1株)基因组为模板,参照GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌K96243标准株BPSL1467基因序列设计引物,PCR扩增获得目的基因片段,将所得片段与pET-28a(+)载体连接,构建pET-28a(+)-BPSL1467重组质粒。将鉴定正确的pET-28a(+)-BPSL1467重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,通过IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达产物。使用DNAMAN、ProtParam、SOPMA和Protscale相关生物信息学软件对BPSL1467基因编码的氨基酸序列进行分析。结果显示,本试验成功克隆了462bp的BPSL1467基因,诱导表达重组蛋白大小约为22ku,主要以包涵体的形式存在。BPSL1467蛋白分子式为C763H1209N203O217S6,分子质量为16 890.58u;其不稳定系数为33.95,属于稳定蛋白;理论等电点(pI)为8.85,为碱性蛋白;总平均疏水性(GRAVY)为-0.190,为亲水性蛋白。该蛋白的二级结构中以无规则卷曲和α-螺旋为主。本试验结果为深入研究羊源类鼻疽伯克霍尔德菌的BPSL1467基因的分子作用机理提供了参考依据。 展开更多

关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 BPSL 1467基因 克隆 原核表达 生物信息学分析

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类鼻疽伯克霍尔德菌肺炎伴脓毒症、坏死性淋巴结炎1例并文献复习 被引量：2

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作者 何宇福 何俊冰 邵义明 《中国医药导报》 CAS 2023年第30期185-188,共4页

类鼻疽病是一种需氧型革兰氏阴性杆菌类鼻疽伯克霍尔德菌引起的疾病,具有多种临床表现,其中以类鼻疽伯克霍尔德菌性脓毒症最为严重。本文介绍了广东医科大学附属东莞第一医院1例以反复发热、咳嗽、咳痰为主要临床表现的患者,该患者上述... 类鼻疽病是一种需氧型革兰氏阴性杆菌类鼻疽伯克霍尔德菌引起的疾病,具有多种临床表现,其中以类鼻疽伯克霍尔德菌性脓毒症最为严重。本文介绍了广东医科大学附属东莞第一医院1例以反复发热、咳嗽、咳痰为主要临床表现的患者,该患者上述症状反复,常规抗生素治疗无效,通过超声引导下肺门淋巴结穿刺术等检查考虑类鼻疽伯克霍尔德菌肺炎伴脓毒症、坏死性淋巴结炎,予维护器官功能、亚胺培南等抗感染为主要治疗手段。患者无主诉不适出院,后期随访无再次发热等症状。结合治疗中的问题,本文回顾复习相关文献,对假鼻疽伯克霍尔德菌肺炎伴脓毒症、坏死性淋巴结炎患者诊治经验进行报道。类鼻疽病临床诊断非常具有挑战性,容易误诊或漏诊。临床上碰到诊断不明确的相关感染性疾病,要及时考虑到类鼻疽伯克霍尔德菌感染可能,明确临床工作者对类鼻疽病早期诊断和治疗的重要性,避免误诊、漏诊。 展开更多

关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 脓毒症 肺炎 坏死性淋巴结炎

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类鼻疽伯克霍尔德菌BPSS0180基因的克隆、原核表达及生物信息学分析 被引量：1

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作者 张振兴 聂鑫 +9 位作者 杨小健 曹瑞勇 李宝宝 黄海峰 朱姝 李国华 彭冬梅 李亚颖 王凤阳 杜丽 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第11期3313-3319,共7页

试验旨在对类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,B.pseudomallea)的BPSS0180基因进行克隆和原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。参照GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌K96243标准株BPSS0180基因序列设计1对引物,对类鼻疽... 试验旨在对类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,B.pseudomallea)的BPSS0180基因进行克隆和原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。参照GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌K96243标准株BPSS0180基因序列设计1对引物,对类鼻疽伯克霍尔德菌hn-1株进行PCR扩增获得BPSS0180基因片段。将得到的BPSS0180基因连接到pET-28a(+)载体,构建pET-28a(+)-BPSS0180重组质粒,转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后,将构建成功的pET-28a(+)-BPSS0180重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blotting进行分析。应用DNAMAN、ProtParam、SOPMA和Protscale对BPSS0180基因序列进行生物信息学分析。结果显示,本试验成功克隆了1 146bp的BPSS0180基因,诱导表达得到的His-BPSS0180融合蛋白大小约为45ku,且主要以包涵体形式存在。BPSS0180蛋白的分子式为C_1779H_2809N_545O_536S_7,分子质量为40.6ku,消光系数为40 575,疏水指数为85.43。其不稳定系数为46.52,属于不稳定蛋白;理论等电点(pI)为5.54,为酸性蛋白;总平均疏水性(GRAVY)是-0.261,为亲水性蛋白。该蛋白的二级结构以α-螺旋(58.79%)和无规卷曲(32.02%)为主,预测其在哺乳动物网织红细胞的半衰期为30h。本试验结果为进一步探究类鼻疽伯克霍尔德菌的BPSS0180基因提供了一定的理论依据。 展开更多

关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 BPSS0180基因 克隆 原核表达 生物信息学分析

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儿童结核感染合并类鼻疽伯克霍尔德氏菌脓毒症1例

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作者 符彬莎 黄梅会 王灵 《中国医药科学》 2021年第22期231-234,共4页

目的分析儿童类鼻疽伯克霍尔德氏菌脓毒症合并结核感染的临床特点。方法回顾分析1例儿童类鼻疽伯克霍尔德氏菌脓毒症合并结核感染的临床资料。结果患儿,男,9岁,以发热、头痛、呕吐为临床表现,既往结核感染不规则治疗,血培养发现类鼻疽... 目的分析儿童类鼻疽伯克霍尔德氏菌脓毒症合并结核感染的临床特点。方法回顾分析1例儿童类鼻疽伯克霍尔德氏菌脓毒症合并结核感染的临床资料。结果患儿,男,9岁,以发热、头痛、呕吐为临床表现,既往结核感染不规则治疗,血培养发现类鼻疽伯克霍尔德氏菌,亚胺培南西司他丁钠联合利福平、异烟肼抗感染治疗有效,随访至今无复发。结论类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染临床特点复杂多样,常规抗生素治疗效果欠佳,在儿童感染中少见,儿科医生应充分重视,早诊断,早治疗。 展开更多

关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 结核感染 小儿 脓毒症

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泰国伯克霍尔德菌错误鉴定1例 被引量：6

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作者 段梦 唱凯 +3 位作者 王艺 黎敏 周道红 鲁卫平 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2016年第3期237-239,共3页

目的鉴定1例曾被错误鉴定为类鼻疽伯克霍尔德菌的泰国伯克霍尔德菌。方法对1例肺脓肿合并败血症患者的痰液和血液标本进行细菌分离培养、生化鉴定、分子生物学鉴定和药敏试验鉴定。结果培养出革兰阴性短小杆菌;生化鉴定特征符合泰国伯... 目的鉴定1例曾被错误鉴定为类鼻疽伯克霍尔德菌的泰国伯克霍尔德菌。方法对1例肺脓肿合并败血症患者的痰液和血液标本进行细菌分离培养、生化鉴定、分子生物学鉴定和药敏试验鉴定。结果培养出革兰阴性短小杆菌;生化鉴定特征符合泰国伯克霍尔德菌;测序结果显示与泰国伯克霍尔德菌相似度达100%,与类鼻疽伯克霍尔德菌相似度为99%;全基因组测序结果显示该菌与泰国伯克霍尔德菌E444具有最近的亲缘关系。药敏试验结果显示该菌对亚胺培南、左氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑敏感。结论成功鉴定了1例泰国伯克霍尔德菌。 展开更多

关键词 泰国伯克霍尔德菌 类鼻疽伯克霍尔德菌 鉴定

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海南地区类鼻疽病流行病学调查和耐药性研究 被引量：5

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作者 郭红荔 董文 +2 位作者 陈海 吴多荣 李天娇 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第48期61-62,共2页

目的了解海南地区类鼻疽病流行病学特点和耐药性。方法采用回顾性分析方法,总结类鼻疽病的流行病学特点、临床表现、特征以及耐药性情况。结果类鼻疽病在海南以散发为主,各地区的发病率无显著性差异。好发于多雨秋季,接触疫水、免疫功... 目的了解海南地区类鼻疽病流行病学特点和耐药性。方法采用回顾性分析方法,总结类鼻疽病的流行病学特点、临床表现、特征以及耐药性情况。结果类鼻疽病在海南以散发为主,各地区的发病率无显著性差异。好发于多雨秋季,接触疫水、免疫功能低下为易感因素。感染以败血症多见,多伴有基础性疾病。类鼻疽伯克霍尔德菌对亚胺培南和美洛培南最敏感。结论类鼻疽伯克霍尔德菌在海南地区广泛存在,加强对本病的认识程度,早期进行细菌培养确诊,及时选用有效的抗生素治疗具有重要意义。 展开更多

关键词 类鼻疽病 类鼻疽伯克霍尔德菌 流行病学 抗生素

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