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微小隐孢子虫类钙调蛋白基因的克隆与原核表达
1
作者
杨晓娇
周鹏
+7 位作者
米荣升
黄燕
石凯
王晓娟
王向佩
刘宇轩
雷晓思
陈兆国
《动物医学进展》
北大核心
2015年第1期26-30,共5页
为了对微小隐孢子虫(C.parvum)类钙调蛋白(CML)基因进行原核表达,分析重组表达蛋白的反应原性。以C.parvum卵囊cDNA为模板,用PCR方法扩增得到C.parvum CML基因。将CML基因连接到克隆载体pMD18-T,获得重组质粒pMD-CML,经限制性内切酶Bam...
为了对微小隐孢子虫(C.parvum)类钙调蛋白(CML)基因进行原核表达,分析重组表达蛋白的反应原性。以C.parvum卵囊cDNA为模板,用PCR方法扩增得到C.parvum CML基因。将CML基因连接到克隆载体pMD18-T,获得重组质粒pMD-CML,经限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,连接到经相同内切酶酶切的表达载体pGEX-6p-1上,构建重组表达质粒,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达。利用GST亲和树脂法纯化重组表达蛋白,对纯化的重组蛋白进行Western blot分析。结果表明,成功构建了重组原核表达质粒pGEX-CML,重组质粒转化菌经IPTG诱导后成功地表达出了分子质量约为51ku的重组蛋白rCML,纯化的蛋白rCML能与感染兔隐孢子虫(C.cuniculus)的兔血清发生特异性反应,具有很好的反应原性。
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关键词
微小隐孢子虫
类钙调蛋白基因
克隆
原核表达
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职称材料
题名
微小隐孢子虫类钙调蛋白基因的克隆与原核表达
1
作者
杨晓娇
周鹏
米荣升
黄燕
石凯
王晓娟
王向佩
刘宇轩
雷晓思
陈兆国
机构
中国农业科学院上海兽医研究所
四川农业大学动物医学院
吉林农业大学动物科学技术学院
出处
《动物医学进展》
北大核心
2015年第1期26-30,共5页
基金
国家科技重大专项项目(2012ZX10004220)
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(2013JB13)
+1 种基金
家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金课题(SKLVEB2013KFKT017)
上海市科技兴农重点攻关项目[沪农科攻字(2005)第3-4号]
文摘
为了对微小隐孢子虫(C.parvum)类钙调蛋白(CML)基因进行原核表达,分析重组表达蛋白的反应原性。以C.parvum卵囊cDNA为模板,用PCR方法扩增得到C.parvum CML基因。将CML基因连接到克隆载体pMD18-T,获得重组质粒pMD-CML,经限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,连接到经相同内切酶酶切的表达载体pGEX-6p-1上,构建重组表达质粒,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达。利用GST亲和树脂法纯化重组表达蛋白,对纯化的重组蛋白进行Western blot分析。结果表明,成功构建了重组原核表达质粒pGEX-CML,重组质粒转化菌经IPTG诱导后成功地表达出了分子质量约为51ku的重组蛋白rCML,纯化的蛋白rCML能与感染兔隐孢子虫(C.cuniculus)的兔血清发生特异性反应,具有很好的反应原性。
关键词
微小隐孢子虫
类钙调蛋白基因
克隆
原核表达
Keywords
Cryptosporidium parvum
calmodulin-like protein gene
cloning
prokaryotic expression
分类号
S852.723 [农业科学—基础兽医学]
Q785 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
微小隐孢子虫类钙调蛋白基因的克隆与原核表达
杨晓娇
周鹏
米荣升
黄燕
石凯
王晓娟
王向佩
刘宇轩
雷晓思
陈兆国
《动物医学进展》
北大核心
2015
0
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