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杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白PbCBL10基因的克隆和表达特性研究 被引量:9
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作者 李慧 丛郁 +2 位作者 常有宏 蔺经 盛宝龙 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期550-556,共7页
【目的】为了探明杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白(CalcineurinB—likeprotein,CBL)基因的序列特征和表达特点,【方法】以杜梨幼苗为试材,运用同源克隆和半定量RT—PCR对PbCBLIO基因进行克隆和表达分析。【结果】结果表明.PbCBLIO基因... 【目的】为了探明杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白(CalcineurinB—likeprotein,CBL)基因的序列特征和表达特点,【方法】以杜梨幼苗为试材,运用同源克隆和半定量RT—PCR对PbCBLIO基因进行克隆和表达分析。【结果】结果表明.PbCBLIO基因编码区cDNA长度为801bp,编码的多肽由266个氨基酸组成。该多肽预测的等电点为4.56,估计的相对分子质量为30.45ku。其对应基因组DNA序列长1983bp,包括9个外显子和8个内含子。通过PSORT进行亚细胞定位分析发现PbCBLl0蛋白位于质膜上的几率最大。PbCBLIO基因编码的多肽具有4个钙离子结合域EF手形结构和1个钙调磷酸酶A亚基结合位点。PbCBLl0与番茄S1CBLIO(NP_001239045)和拟南芥AtCBLl0(NP_195026)蛋白间的同源性较高,分别为82%和77%,并与AtCBL10亲缘关系最近。PbCBL10基因在杜梨幼苗根、茎和叶片中均为诱导型表达,50~200mmol·L^(-1)CaCl2、20μmol·L^(-1)ABA、100mmol·L^(-1)NaCl、10%(w/v)PEG6000或180mmol·L^(-1)甘露醇处理后其表达量明显上调。【结论】PbCBLIO基因具备植物CBL基因家族的固有特征,能够响应胞内钙浓度变化,对ABA、盐碱、干旱和渗透胁迫均存在转录响应。 展开更多
关键词 杜梨 磷酸酶b亚基蛋白 基因克隆 表达特性
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葡萄类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因VvCBL4的克隆与表达分析 被引量:4
2
作者 余义和 李秀珍 +4 位作者 郭大龙 杨英军 李桂荣 李学强 张国海 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期385-392,共8页
【目的】在京秀(Vitis vinifera‘Jingxiu’)葡萄中克隆类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因Vv CBL4及其启动子,分析Vv CBL4的表达特性与逆境胁迫的关系。【方法】用RACE技术克隆Vv CBL4的全长,实时荧光定量PCR检测Vv CBL4在不同逆境下的表达;用... 【目的】在京秀(Vitis vinifera‘Jingxiu’)葡萄中克隆类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因Vv CBL4及其启动子,分析Vv CBL4的表达特性与逆境胁迫的关系。【方法】用RACE技术克隆Vv CBL4的全长,实时荧光定量PCR检测Vv CBL4在不同逆境下的表达;用同源克隆技术获得Vv CBL4的启动子,在烟草叶片中瞬时表达分析Vv CBL4启动子的活性。【结果】Vv CBL4全长为959 bp,ORF为642 bp,编码213个氨基酸,具有3个EF手钙结合结构域。Vv CBL4在根部表达量最高,其次是果实。Vv CBL4的转录本能对干旱、低温和盐胁迫处理快速做出响应。Vv CBL4启动子富含与逆境响应相关的顺式作用元件。干旱、低温和盐胁迫处理能够增强启动子活性。【结论】获得Vv CBL4及其启动子序列,Vv CBL4的表达能对逆境胁迫做出响应,Vv CBL4启动子的活性受逆境胁迫诱导,说明Vv CBL4在葡萄逆境胁迫反应中具有重要的作用。 展开更多
关键词 葡萄 磷酸酶b亚基蛋白 VvCbL4 逆境 表达分析
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类钙调磷酸酶B亚基蛋白GhCBL3-A01调控棉花黄萎病抗性的功能分析 被引量:1
3
作者 高升旗 邵武奎 +3 位作者 赵准 邵盘霞 胡文冉 黄全生 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2023年第6期447-458,共12页
【目的】解析类钙调磷酸酶B亚基蛋白(calcium B-like protein,CBL)基因GhCBL3-A01在棉花抗黄萎病反应中的功能,为棉花抗病育种提供基因资源。【方法】从棉花基因组数据库获得GhCBL3-A01基因的同源序列,进行生物信息学分析。采用实时荧... 【目的】解析类钙调磷酸酶B亚基蛋白(calcium B-like protein,CBL)基因GhCBL3-A01在棉花抗黄萎病反应中的功能,为棉花抗病育种提供基因资源。【方法】从棉花基因组数据库获得GhCBL3-A01基因的同源序列,进行生物信息学分析。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)、茉莉酸甲酯(methyl jasminate,MeJA)和H2O2处理的棉株中GhCBL3-A01基因的表达量变化。利用病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术研究GhCBL3-A01在棉花抗黄萎病中的功能。通过检测活性氧积累以及相关基因的表达量,初步分析GhCBL3-A01的作用机制。【结果】陆地棉中GhCBL3-A01及其3个同源蛋白均含有3个CBL家族典型的EF-hand结构域。大丽轮枝菌、MeJA和H2O2处理后,GhCBL3-A01的表达量显著升高。VIGS沉默GhCBL3-A01导致病株率和病情指数显著降低,茎秆维管束褐变程度减轻,有病菌繁殖的茎段数量明显减少,增强了棉株对黄萎病的抗性。GhCBL3-A01基因沉默棉株叶片中活性氧积累增多,防御相关基因PR1、NPR1、PR4和PDF1.2以及茉莉酸信号通路关键基因AOS1、OPR3、MYC2和LOX2的表达量增加。【结论】GhCBL3-A01通过调控防御相关基因、茉莉酸信号通路基因的表达和活性氧积累负调控棉花对黄萎病的抗性,是提高棉花黄萎病抗性的候选基因。 展开更多
关键词 棉花 黄萎病 磷酸酶b亚基蛋白 GhCbL3-A01 抗病基因 病毒诱导的基因沉默
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大豆类钙调磷酸酶B亚基GmCBL1互作候选蛋白的筛选 被引量:4
4
作者 李林蔚 张双喜 +6 位作者 周永斌 裴丽丽 陈明 李连城 马有志 刘生祥 徐兆师 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期359-363,共5页
Ca2+是非生物胁迫信号转导途径中的重要信号分子,植物类钙调磷酸酶B亚基蛋白(CBL,calcineurin B-like proteins)是一类重要的钙信号受体蛋白,主要通过与其他蛋白的特异结合传递信号,使植物形成对非生物胁迫的响应。本实验室已经获得大豆... Ca2+是非生物胁迫信号转导途径中的重要信号分子,植物类钙调磷酸酶B亚基蛋白(CBL,calcineurin B-like proteins)是一类重要的钙信号受体蛋白,主要通过与其他蛋白的特异结合传递信号,使植物形成对非生物胁迫的响应。本实验室已经获得大豆Gm CBL1基因,功能鉴定显示Gm CBL1增强了转基因拟南芥对非生物胁迫的耐性。为了进一步研究Gm CBL1的作用机理,本研究构建诱饵载体p GBKT7::Gm CBL1,利用酵母双杂交技术筛选大豆Gm CBL1的互作蛋白。通过对筛选获得的106个蛋白基因测序和Blast比对分析,并根据其可能的生理功能对这些候选蛋白归类,整理得到4类蛋白:能量代谢相关蛋白、修饰蛋白、防御蛋白、钙信号转导相关蛋白。筛选得到候选蛋白的功能预测初步表明,大豆Gm CBL1参与多条信号途径,为进一步研究探索大豆CBL介导的抗逆信号转导途径奠定了基础。 展开更多
关键词 大豆 磷酸酶b亚基 GmCbL1 酵母双杂交 互作蛋白
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香蕉钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白基因MaCBL1的克隆及序列分析 被引量:3
5
作者 李美英 徐碧玉 +3 位作者 杨小亮 刘菊华 张建斌 金志强 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第26期11257-11259,共3页
[目的]为香蕉钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白基因MaCBL1调控机理的研究奠定基础。[方法]根据在香蕉果实抑制缩减文库中获得的一个CBL基因片段,采用PCR方法克隆了MaCBL1基因全长cDNA序列并对其进行了初步的生物信息学分析。[结果]MaCBL1基因c... [目的]为香蕉钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白基因MaCBL1调控机理的研究奠定基础。[方法]根据在香蕉果实抑制缩减文库中获得的一个CBL基因片段,采用PCR方法克隆了MaCBL1基因全长cDNA序列并对其进行了初步的生物信息学分析。[结果]MaCBL1基因cDNA序列全长1 078 bp,编码213个氨基酸残基。多重序列比对结果显示,MaCBL1推导的氨基酸序列与其他植物来源的CBL基因的氨基酸序列同源性较高。遗传进化分析表明MaCBL1与其他植物如杨树、甘蓝、沙冬青、棉花和水稻的CBL基因的亲缘关系较近,并在同一个进化枝上。[结论]该研究为进一步研究香蕉钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白对香蕉生长发育、果实的成熟调控及对各种逆境反应的调控提供了依据。 展开更多
关键词 香蕉 调神经磷酸酶b亚基蛋白基因 克隆 序列分析
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桃钙调磷酸酶B类似蛋白基因家族鉴定与分析 被引量:2
6
作者 张杰伟 吴婷 +2 位作者 任飞 谢华 魏建华 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期511-516,共6页
为了研究桃钙调磷酸酶B类似蛋白(CBLs)基因家族在桃中如何发挥作用。利用桃基因组数据库,通过生物信息学手段,鉴定桃CBL家族基因的基因结构、染色体定位和编码蛋白,通过序列比对进行进化和分类分析。结果表明,桃基因组中含有8个CBL家族... 为了研究桃钙调磷酸酶B类似蛋白(CBLs)基因家族在桃中如何发挥作用。利用桃基因组数据库,通过生物信息学手段,鉴定桃CBL家族基因的基因结构、染色体定位和编码蛋白,通过序列比对进行进化和分类分析。结果表明,桃基因组中含有8个CBL家族基因,分布于桃的5条染色体上。MEME和Pfam保守结构域分析显示,桃CBL蛋白均含有4个保守的EF结构域。进化树分析表明CBLs可分为4个亚家族。TMHMM 2.0Server分析显示仅PpCBL1含有1个跨膜区。PlantsPFeatureScan分析显示PpCBL2、3和5均含有1个N-豆蔻酰化位点。NetPhos 2.0 Server结果显示PpCBLs存在着大量的丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)及酪氨酸(Tyr)潜在磷酸化位点。以上结果将为今后揭示桃CBL的功能提供重要的理论基础。 展开更多
关键词 磷酸酶b蛋白 基因家族 进化分析 序列特征
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大麦类钙调磷酸酶B互作蛋白激酶基因克隆及表达分析
7
作者 方伏荣 金平 +5 位作者 王峰 聂石辉 王仙 杜卫军 张金汕 吴志明 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1079-1084,共6页
采用RT-PCR法从大麦抗旱品种‘甘啤7号’中克隆了1个类钙调磷酸酶B互作蛋白激酶(CIPK)基因HvCIPK1(GenBank登录号为JX679077)。序列分析表明,该基因全长1 359bp,编码的蛋白含有452个氨基酸,分子量为51.05kD,等电点为9.13。推断具有植物C... 采用RT-PCR法从大麦抗旱品种‘甘啤7号’中克隆了1个类钙调磷酸酶B互作蛋白激酶(CIPK)基因HvCIPK1(GenBank登录号为JX679077)。序列分析表明,该基因全长1 359bp,编码的蛋白含有452个氨基酸,分子量为51.05kD,等电点为9.13。推断具有植物CIPK家族典型的功能结构域,在N端有一特异的催化结构域,该结构域在保守的氨基酸DFG和APE之间含有一个催化所需的活性环;同时C端区域存在一个独特的24个氨基酸组成的调节域,即NAF结构域。荧光定量分析结果表明,在PEG、NaCl和ABA处理下,HvCIPK1基因在大麦幼苗叶片中表达显著上调。推测HvCIPK1基因参与多种逆境信号的转导,可能在大麦的多种非生物胁迫响应中起着重要的作用。 展开更多
关键词 大麦 磷酸酶b互作蛋白激酶(CIPK) 克隆 非生物胁迫 实时定量PCR
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桃钙调磷酸酶B类似蛋白互作蛋白激酶基因家族鉴定与分析
8
作者 张杰伟 杨育峰 +2 位作者 任飞 谢华 魏建华 《科学技术与工程》 北大核心 2016年第24期127-131,共5页
钙调磷酸酶B类似蛋白互作蛋白激酶(CIPKs)在植物生长发育和抗逆过程中发挥着重要作用。为了对桃中CIPK家族基因进行系统分析,利用桃基因组数据库,通过生物信息学手段,鉴定桃CIPK家族基因的基因结构、染色体定位和编码蛋白,通过序列比对... 钙调磷酸酶B类似蛋白互作蛋白激酶(CIPKs)在植物生长发育和抗逆过程中发挥着重要作用。为了对桃中CIPK家族基因进行系统分析,利用桃基因组数据库,通过生物信息学手段,鉴定桃CIPK家族基因的基因结构、染色体定位和编码蛋白,通过序列比对进行进化和分类分析。结果表明,桃基因组中含有18个CIPK基因,分布于桃的6条染色体上。MEME和Pfam保守结构域分析显示,桃CIPK蛋白均含有2个保守的PKinase和NAF结构域。进化树分析表明CIPKs可分为2个亚家族。Net Phos 2.0 Server结果显示Pp CIPKs存在着大量的丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)及酪氨酸(Tyr)潜在磷酸化位点。以上结果将为今后揭示桃CIPK蛋白的功能提供重要的理论基础。 展开更多
关键词 磷酸酶b蛋白互作蛋白激酶 基因家族 进化分析
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HPLC和MALDI-TOF-MS法分析重组人钙调磷酸酶B亚基的纯度和肽图谱 被引量:3
9
作者 高锦 王艳丽 魏群 《北京师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期114-119,共6页
用反相高效液相色谱 (RP HPLC)法对重组人钙调磷酸酶B亚基 (rhCNB)的纯度和肽图谱进行了测定 ,以比较不同批次产品的纯度及其一级结构的一致性 ,对其进行质量控制 .并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)法进行验证 .结... 用反相高效液相色谱 (RP HPLC)法对重组人钙调磷酸酶B亚基 (rhCNB)的纯度和肽图谱进行了测定 ,以比较不同批次产品的纯度及其一级结构的一致性 ,对其进行质量控制 .并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)法进行验证 .结果表明 ,运用梯度洗脱RP HPLC法能对样品进行纯度检查和肽图谱分析 ,测得 3批样品纯度均达到 98%以上 ,肽图谱能达到批间一致 .同时用MALDI TOF MS法测定 ,纯度结果二者相符 ,质谱肽图经计算机辅助分析 ,确证rhCNB一级结构与天然CNB一致 .证明该方法灵敏、准确、可靠 . 展开更多
关键词 重组人磷酸酶b亚基(rhCNb) 高效液相色谱法 基质辅肋激光解吸电离飞行时间质谱法 纯度 肽图谱
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黑鲷钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)基因克隆及表达差异 被引量:1
10
作者 陈淑吟 张志勇 +5 位作者 孙瑞健 贾超峰 孟乾 祝斐 张志伟 吴国均 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期661-669,共9页
钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)为参与细胞内pH及细胞增殖调控的关键因子。用RACE末端PCR方法得到黑鲷CHP2(AsCHP2)基因全长cDNA,并利用生物信息学方法分析该基因的序列特征与同源性;同时利用实时荧光定量PCR方法检测AsCHP2的mRNA在黑鲷整... 钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)为参与细胞内pH及细胞增殖调控的关键因子。用RACE末端PCR方法得到黑鲷CHP2(AsCHP2)基因全长cDNA,并利用生物信息学方法分析该基因的序列特征与同源性;同时利用实时荧光定量PCR方法检测AsCHP2的mRNA在黑鲷整体仔鱼,90d、180d黑鲷,杂交F_(2)(真鲷♂×黑鲷♀)及回交F_(1)(黑鲷♂×杂交F_(1)♀)的脑、心脏、肌肉、肝脏和性腺等组织中的表达。研究结果表明:(1)AsCHP2cDNA序列全长1722bp,5'-非编码区(UTR)长度69bp,3'-UTR长度1069bp,开放阅读框长度为585bp,编码194个氨基酸;其结构域包含2个EF-hand结构及1个核输出信号;其蛋白分子质量为21.87ku,理论等电点为4.89;同源建模获得了CHP2的二级与三维结构。AsCHP2基因的核苷酸序列与其他鱼类的相似性为86%~81%,编码的氨基酸序列与其他鱼类的相似性为80%~72%。邻接系统树显示了黑鲷CHP2氨基酸序列与其他鱼类的进化关系。序列比对与结构分析表明,AsCHP2基因具有典型的CHP2基因结构。(2)AsCHP2的mRNA在黑鲷的仔鱼期(5~35d)及大规格个体的脑、肝脏及肌肉组织中均有表达,在90d个体各组织中的表达量均高于在180d个体各组织中的表达量;在180d黑鲷、杂交F_(2)及回交F_(1)的个体中,基因在脑、肝脏、肌肉及性腺等不同组织中均有表达,且均在心脏中高表达、在性腺中低表达。这些结果显示,CHP2基因在海水鱼类的生长、发育过程中发挥功能。 展开更多
关键词 黑鲷 磷酸酶b同源蛋白2基因 基因克隆 MRNA表达
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卡托普利对高血压心脏钙调蛋白磷酸酶与核因子κBp65蛋白表达的影响 被引量:1
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作者 陈金星 惠汝太 +2 位作者 张芊 郑翼 付春燕 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期40-43,共4页
目的:探讨卡托普利对高血压大鼠心脏钙调蛋白磷酸酶(calcineurin)、核因子κBp65(NFκBp65)蛋白表达影响及其机制。方法:建立腹主动脉缩窄高血压大鼠模型,术后1周用卡托普利治疗,连续10周。以尾动脉测压法观察血压变化,用免疫组织化学... 目的:探讨卡托普利对高血压大鼠心脏钙调蛋白磷酸酶(calcineurin)、核因子κBp65(NFκBp65)蛋白表达影响及其机制。方法:建立腹主动脉缩窄高血压大鼠模型,术后1周用卡托普利治疗,连续10周。以尾动脉测压法观察血压变化,用免疫组织化学和形态计量学方法,观察calcineurin、NF-κBp65在心脏表达和心脏系数的变化。结果:经卡托普利治疗,高血压大鼠血压降低(mmHg,P<0.01),心脏系数显著减小(g/100g,P<0.01),心脏calcineurin和NF-κBp65蛋白高表达下调,阳性表达面积和面积百分比缩小(μm2,P<0.01,或P<0.01)。结论:卡托普利能通过调控信号转导通路calcineurin-NFAT-NF-κBp65关键蛋白表达,逆转高血压心血管重构。 展开更多
关键词 高血压 蛋白磷酸酶 NF—κb 卡托普利 信号转导
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重组人钙调蛋白磷酸酶B亚基在大鼠体内的药动学和组织分布特征
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作者 韩丽芳 张彩云 +3 位作者 刘莹 邵继平 谢学立 符健 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2020年第8期610-615,共6页
目的研究重组人钙调蛋白磷酸酶B亚基(rhCNB)在大鼠体内的药动学和组织分布特征。方法利用双抗体夹心ELISA法,对组织样本中rhCNB检测的选择性、线性范围、精密度、回收率和稳定性等进行方法学验证。SD大鼠单次iv给予rhCNB 5,10和20 mg... 目的研究重组人钙调蛋白磷酸酶B亚基(rhCNB)在大鼠体内的药动学和组织分布特征。方法利用双抗体夹心ELISA法,对组织样本中rhCNB检测的选择性、线性范围、精密度、回收率和稳定性等进行方法学验证。SD大鼠单次iv给予rhCNB 5,10和20 mg·kg^-1,多次iv给予rhCNB 20 mg·kg^-1,于给药前及给药后0.033,0.25,0.5,1,2,4,8和12 h采血,用ELISA法测定rhCNB浓度,用DAS3.0软件计算药动学参数。大鼠单次iv给予rhCNB 10 mg·kg^-1后,分别在0.25,1,2和8 h采集脑、心、肝、脾、肺、肾、全胃、睾丸或卵巢、体脂、骨骼肌、胸腺和血浆,用ELISA测定血浆和组织样品中rhCNB浓度。结果rhCNB 5,10和20 mg·kg^-1单次给药,主要药动学参数为:消除半衰期(t1/2)分别为0.95±0.28,0.85±0.27和(0.91±0.32)h;药时曲线下面积(AUC0-12 h)分别为41.0±4.3,59.5±9.1和(150.6±18.9)mg·h·L^-1;血浆峰浓度(Cmax)分别为44.6±14.4,62.7±15.7和(160.1±27.3)mg·L^-1;在5~20 mg·kg^-1剂量范围内,rhCNB的Cmax和AUC0-12 h比值随着剂量增加而增大。rhCNB多次给药主要药动学参数为:t1/2为(1.16±0.46)h;AUC0-12 h为(94.9±11.0)mg·h·L^-1;Cmax为(121.2±18.9)mg·L^-1。单次给药和多次给药的主要药动学参数无显著性差异。不同组织中rhCNB的分布由高到低的顺序为体脂>肺>肾>脾>睾丸/卵巢>心>肝>胸腺>胃>脑>骨骼肌。结论rhCNB在大鼠体内呈现线性动力学特征,多次给药后大鼠体内无明显蓄积并广泛分布于各个组织。 展开更多
关键词 重组人蛋白磷酸酶b亚基 药动学 组织分布
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血脑屏障对钙调神经磷酸酶B亚基及其降解肽段阻碍作用的研究
13
作者 姜国华 魏群 《北京师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期387-390,共4页
应用 1,3,4 ,6 , 四氯 3α ,6α 二苯基苷尿 (Iodogen)法对钙调神经磷酸酶B亚基进行12 5I标记 ,获得了比活度为 74 0MBq·mg- 1,放化纯度为 95 7%的12 5I标记的钙调神经磷酸酶B亚基 ,标记率高达 85% .利用该标记物研究血脑屏障对... 应用 1,3,4 ,6 , 四氯 3α ,6α 二苯基苷尿 (Iodogen)法对钙调神经磷酸酶B亚基进行12 5I标记 ,获得了比活度为 74 0MBq·mg- 1,放化纯度为 95 7%的12 5I标记的钙调神经磷酸酶B亚基 ,标记率高达 85% .利用该标记物研究血脑屏障对其进入脑的阻碍作用 .结果显示血脑屏障能够阻止完整的钙调神经磷酸酶B亚基进入脑 ,但是它的降解肽段能够透过血脑屏障进入脑组织 . 展开更多
关键词 调神经磷酸酶 血脑屏障 125I标记 阻碍作用 b亚基 降解肽段
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蛋白磷酸酶1调节亚基14B对神经母细胞瘤细胞有丝分裂进程的调控作用 被引量:1
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作者 简肖肖 张万鹏 +3 位作者 常艳 张学敏 李慧艳 胡怀斌 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2023年第9期688-694,共7页
目的 研究蛋白磷酸酶1调节亚基14B(PPP1R14B)对神经母细胞瘤(NB)细胞有丝分裂进程的调控作用,为其治疗提供潜在新靶标。方法 在NB细胞SK-N-BE(2)-M17中转染2条不同序列小干扰RNA(siRNA)(PPP1R14B siRNA#1和#2)敲低PPP1R14B,实时定量PCR... 目的 研究蛋白磷酸酶1调节亚基14B(PPP1R14B)对神经母细胞瘤(NB)细胞有丝分裂进程的调控作用,为其治疗提供潜在新靶标。方法 在NB细胞SK-N-BE(2)-M17中转染2条不同序列小干扰RNA(siRNA)(PPP1R14B siRNA#1和#2)敲低PPP1R14B,实时定量PCR和Western印迹法检测PPP1R14B的敲低效果。在SK-N-BE(2)-M17 GFP-H2B细胞中转染PPP1R14B siRNA#1和#2,Time-lapse活细胞成像技术动态监测敲低PPP1R14B对该细胞有丝分裂进程的影响。采用酶切克隆法构建靶向PPP1R14B的2条不同序列短发夹RNA(shRNA)(sh PPP1R14B#1或#2)慢病毒质粒,并感染SK-N-BE(2)-M17细胞建立PPP1R14B稳定敲低细胞,Western印迹法检测其敲低效果,克隆形成实验观察敲低PPP1R14B对SK-N-BE(2)-M17细胞生长的影响。基于GEO数据库的临床数据,按NB不同临床分期分组,分析各组样本中PPP1R14B mRNA表达水平及其与预后的相关性。结果 与转染对照siRNA相比,转染PPP1R14B siRNA#1和#2均可有效敲低SK-N-BE(2)-M17细胞中PPP1R14B mRNA和蛋白表达(P<0.01)。Timelapse活细胞成像结果显示,与转染对照siRNA相比,转染PPP1R14B siRNA#1和#2组SK-N-BE(2)-M17GFP-H2B细胞有丝分裂期时间延长(P<0.05),且主要是有丝分裂前中期时间显著延长(P<0.01)。Western印迹法结果显示,与转染对照shRNA相比,转染sh PPP1R14B#1和#2均可有效敲低SK-N-BE(2)-M17细胞中PPP1R14B蛋白表达(P<0.01);克隆形成实验结果表明,转染sh PPP1R14B#1或#2稳定敲低组细胞克隆形成数亦明显降低(P<0.01)。GEO数据库分析显示,PPP1R14B mRNA表达水平与NB恶性程度呈正相关,与患者预后呈负相关。结论 敲低PPP1R14B导致SK-N-BE(2)-M17细胞有丝分裂期阻滞和生长减慢,PPP1R14B在NB发生发展中发挥重要作用。 展开更多
关键词 蛋白磷酸酶1调节亚基14b 神经母细胞瘤 有丝分裂
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钙调神经磷酸酶B亚基高表达条件及产业化研究
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作者 靳风智 石太平 +1 位作者 王小萌 魏群 《北京师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期255-259,共5页
重组人CNB高表达大肠杆菌已由本室构建成功 ,摇瓶发酵液表达量可达 10 0mg·L- 1.通过改进培养基配方及摇瓶表达工艺 ,使CNB在摇瓶发酵液中表达量达到 5 0 0mg·L- 1以上 .在高表达量的基础上 ,又进行了产业化改进 ,以蒸馏水添... 重组人CNB高表达大肠杆菌已由本室构建成功 ,摇瓶发酵液表达量可达 10 0mg·L- 1.通过改进培养基配方及摇瓶表达工艺 ,使CNB在摇瓶发酵液中表达量达到 5 0 0mg·L- 1以上 .在高表达量的基础上 ,又进行了产业化改进 ,以蒸馏水添加无机盐取代了原配方中的自来水 ,并提高了表达量 . 展开更多
关键词 调神经磷酸酶 调节亚基b 表达 基因工程 产业化
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非特异性抑制脊髓蛋白酪氨酸磷酸酶的活性对炎性疼痛的影响及其机制
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作者 李帅 杨娴 +5 位作者 索占伟 时蕾 刘燕妮 曹静 许英明 胡晓东 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1397-1400,共4页
目的研究脊髓蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatases,PTPs)在炎性疼痛中的作用及其机制。方法昆明种♂小鼠,左后足底皮下注射完全弗氏佐剂(CFA),建立炎性疼痛动物模型;24 h后,鞘内给予PTPs抑制剂正钒酸钠(sodium orthovanadat... 目的研究脊髓蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatases,PTPs)在炎性疼痛中的作用及其机制。方法昆明种♂小鼠,左后足底皮下注射完全弗氏佐剂(CFA),建立炎性疼痛动物模型;24 h后,鞘内给予PTPs抑制剂正钒酸钠(sodium orthovanadate,Na3VO4),观察对缩足阈值的影响;免疫印迹法检测正钒酸钠对损伤侧脊髓背角NMDA受体NR2B亚基第1472位酪氨酸(NR2B-Y1472)磷酸化水平的影响。结果鞘内注射正钒酸钠50、100和200 ng,虽然不影响正常动物的痛阈,但却能够剂量依赖性地缓解CFA诱发的机械性痛觉超敏,给药后30 min,炎性疼痛小鼠的缩足阈值从(0.24±0.07)g分别升高至(0.17±0.06)g(P>0.05,n=4)、(1.07±0.51)g(P<0.05,n=4)和(1.38±0.47)g(P<0.05,n=4);同时,CFA诱发的脊髓NR2B-Y1472的磷酸化也被正钒酸钠100 ng所完全阻断。结论 PTPs抑制剂正钒酸钠,通过降低脊髓NR2B的酪氨酸磷酸化,逆转炎性疼痛动物的NMDA受体功能亢进,产生明显的镇痛作用。 展开更多
关键词 蛋白酪氨酸磷酸酶 正钒酸钠 炎性疼痛 NMDA受体 NR2b亚基 脊髓背角
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敲低葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基(G6PC)阻断AKT/mTOR通路抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭和迁移 被引量:7
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作者 邓春玲 朱坤 +1 位作者 刘涛瑞 陈丽艳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期520-526,共7页
目的探讨葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基(G6PC)对宫颈癌HeLa细胞的增殖、侵袭和迁移性能的影响及可能的分子机制.方法采用RNA干扰技术(RNAi)沉默宫颈癌HeLa细胞中G6PC的表达,Western blot法检测沉默效果.敲低G6PC,噻唑蓝(MTT)法和集落形成实... 目的探讨葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基(G6PC)对宫颈癌HeLa细胞的增殖、侵袭和迁移性能的影响及可能的分子机制.方法采用RNA干扰技术(RNAi)沉默宫颈癌HeLa细胞中G6PC的表达,Western blot法检测沉默效果.敲低G6PC,噻唑蓝(MTT)法和集落形成实验检测宫颈癌HeLa细胞增殖,TranswellTM实验和划痕愈合实验检测细胞的侵袭和迁移能力,血管形成实验检测血管生成能力;Western blot法检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、snail、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达.结果RNAi可有效下调宫颈癌HeLa细胞G6PC的表达,敲低G6PC能明显抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖、侵袭、迁移和血管生成,同时抑制EMT进程以及AKT、mTOR蛋白的磷酸化.结论敲低G6PC抑制HeLa细胞的增殖、侵袭、迁移、血管形成和EMT进程,与阻断AKT/mTOR信号通路相关. 展开更多
关键词 葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基(G6PC) 宫颈癌 细胞增殖 上皮间质转化(EMT) 血管形成 蛋白激酶b(AKT) 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)
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植物CBL调控逆境胁迫响应的作用机制
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作者 王从欢 伍国强 魏明 《生物技术通报》 北大核心 2025年第7期1-16,共16页
钙调磷酸酶B蛋白(calcineurin B like protein,CBL)是一类植物特有的Ca^(2+)传感器,在植物生长发育和逆境胁迫响应中发挥重要作用。CBL由4个典型的用于Ca^(2+)结合的手性延伸因子(elongation factor hands,EF-hands)结构域构成,并且每个... 钙调磷酸酶B蛋白(calcineurin B like protein,CBL)是一类植物特有的Ca^(2+)传感器,在植物生长发育和逆境胁迫响应中发挥重要作用。CBL由4个典型的用于Ca^(2+)结合的手性延伸因子(elongation factor hands,EF-hands)结构域构成,并且每个EF-hand含有12个相对保守氨基酸组成的α-螺旋-环-α-螺旋结构。CBL启动子区域的顺式调控作用元件(如W-box、MBS和G-BOX等)可与上游转录因子(transcription factors,TFs)结合,通过激活或抑制下游基因的表达,从而进行转录调控。CBL通过脱落酸(abscisic acid,ABA)、呼吸爆发氧化酶同源物(respiratory burst oxidases homolog,RBOH)以及活性氧(reactive oxygen species,ROS)等信号通路调控植物气孔运动,减少水分蒸发,以适应各种逆境胁迫。大量研究表明,当植物受到盐、干旱、极端温度、营养胁迫和病原菌等逆境胁迫时,CBL能够迅速感知细胞内瞬时Ca^(2+)信号变化,不仅与CBL互作蛋白激酶(CBL-interacting protein kinase,CIPK)互作磷酸化下游靶标蛋白实现Ca^(2+)信号传导,还与其他蛋白质(如高亲和力K^(+)转运蛋白5、蛋白S-酰化转移酶10和2C类蛋白磷酸酶等)互作,从而正向或负向调控植物的抗逆性。此外,CBL介导植物器官和组织生长发育,通过调节糖信号促进果实成熟。CBL也与开花时间基因(gigantea,GI)结合以影响植物的开花时间。论文综述了植物CBL的发现、结构、分类、调控机制、生物学功能及其调控逆境胁迫响应的作用机制,并对其未来研究方向进行了展望,以期为农作物抗逆性遗传改良和生物育种提供基因资源和理论依据。 展开更多
关键词 磷酸酶b蛋白 调控机制 蛋白互作 生长发育 抗逆性 顺式调控元件 蛋白激酶
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月季类钙调神经素B亚基蛋白RcCBL3在Na^(+)胁迫下的生物学功能分析
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作者 杜俊 王换换 +4 位作者 刘蓉 王淞 迟娇娇 奉树成 明凤 《上海农业学报》 2025年第4期1-10,共10页
为探究月季类钙调神经素B亚基蛋白RcCBL3在维持Na^(+)稳态中的作用及其调控机制,成功克隆了月季RcCBL3基因,并分析其结构特征和表达模式。结果表明:RcCBL3蛋白含有4个EF-Hand结构域,定位于液泡膜系统,且在叶片中高表达。在高浓度Na^(+)... 为探究月季类钙调神经素B亚基蛋白RcCBL3在维持Na^(+)稳态中的作用及其调控机制,成功克隆了月季RcCBL3基因,并分析其结构特征和表达模式。结果表明:RcCBL3蛋白含有4个EF-Hand结构域,定位于液泡膜系统,且在叶片中高表达。在高浓度Na^(+)处理下,RcCBL3基因表达显著上调,而在高浓度K^(+)处理下,其表达无显著变化。病毒诱导的基因沉默(VIGS)实验表明,RcCBL3基因沉默株系对Na^(+)胁迫的耐受性显著降低,表现为叶片枯萎和相对电导率升高。酵母双杂交和双分子荧光互补实验进一步证实,RcCBL3蛋白能够与RcCIPK1/2/3蛋白相互作用。沉默RcCBL3基因后,RcCIPK1基因表达量上升,而RcCIPK3基因表达量下降,暗示RcCBL3蛋白可能与RcCIPK1/3蛋白共同参与维持细胞Na^(+)稳态。该研究可为揭示月季细胞Na^(+)稳态调控网络提供理论基础,也可为月季耐盐育种工作提供指导意见。 展开更多
关键词 月季 Na^(+)胁迫 调神经素b亚基(CbL)蛋白 CbL互作蛋白激酶(CIPK) 稳态
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类转录激活因子效应物核酸酶介导的E-cad和Bmi-1基因联合干预鼻咽癌的体外研究 被引量:8
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作者 罗婷婷 严爱芬 +6 位作者 刘连 蒋泓 冯翠兰 刘冠男 刘芳 唐冬生 周天鸿 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期229-239,共11页
目的:检测类转录激活因子效应物核酸酶(transcription activator-like effector nuclease,TALEN)介导的E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)、B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1(B-lymphoma Moloney murine leukemia virus insertion regi... 目的:检测类转录激活因子效应物核酸酶(transcription activator-like effector nuclease,TALEN)介导的E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)、B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1(B-lymphoma Moloney murine leukemia virus insertion region-1,Bmi-1)基因联合干预对鼻咽癌细胞生物学行为的影响。方法:构建多位点基因打靶载体p UC-DS1-E-cad-2ANeo-DS2(以下简称E-cad打靶载体)和p UC-DS1-Bmi-1 sh RNA-Zeo-DS2(以下简称Bmi-1打靶载体),将E-cad打靶载体、Bmi-1打靶载体及佛山科学技术学院分子医学研究院前期构建的TALEN载体以不同组合转染鼻咽癌CNE-2细胞。采用PCR检测靶基因的整合,Western印迹检测靶基因蛋白表达水平变化,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖能力变化,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡变化,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力变化。结果:靶基因E-cad和Bmi-1 sh RNA表达元件成功整合到鼻咽癌CNE-2细胞的基因组中;转染后鼻咽癌CNE-2细胞中E-cad的蛋白表达水平明显上升,Bmi-1的蛋白表达水平明显下降;干预E-cad及Bmi-1不影响细胞的增殖、周期和凋亡,但显著抑制细胞的迁移和侵袭能力,且E-cad和Bmi-1联合干预比单独干预更能显著抑制鼻咽癌CNE-2细胞体外迁移能力(均P<0.01)。结论:TALEN介导的E-cad和Bmi-1联合干预能有效抑制鼻咽癌CNE-2细胞的体外迁移和侵袭,可为人类癌症的基因治疗建立前期的实验基础。 展开更多
关键词 转录激活因子效应物核酸酶 E-蛋白 b细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1 基因打靶 鼻咽癌
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