-
题名针对ALK4基因的TALEN质粒构建与活性鉴定
- 1
-
-
作者
曾凡才
顾洪
王轲
周红
-
机构
电子科技大学生命科学与技术学院
-
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期210-216,共7页
-
基金
国家自然科学基金资助项目(30972280)
四川省教育厅自然科学基金资助项目(11ZA241)
-
文摘
旨在利用类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)技术构建具有活性的敲除类激活素激酶受体4(Activin receptor-like kinase 4,ALK4)的TALEN质粒。利用TALEN在线设计工具,根据TALEN设计原则和ALK4剪接异构体的共同序列确定基因敲除的靶位点、TALEN识别序列和用于活性验证的限制性酶切位点。利用质粒文库试剂盒快速构建TALEN质粒,并通过酶切、测序和BLAST比对加以验证。应用脂质体转染法将构建质粒导入HEK293T细胞,通过共转染的pEGFP-N1质粒判断转染效率。利用嘌呤霉素进行阳性筛选后提取基因组DNA,PCR扩增靶序列,HhaⅠ酶切纯化后的PCR产物。结果显示,来自转染TALEN质粒细胞基因组的PCR产物的酶切效率明显下降,提示部分细胞的ALK4基因发生了突变。首次成功构建了在HEK293T细胞中有活性的TALEN质粒。
-
关键词
类激活素激酶受体4
类转录激活因子效应物核酸酶
基因敲除
HEK293T细胞
质粒构建
-
Keywords
Activin receptor-Like kinase 4 Transcription activator-like effector nuclease Gene knock-out HEK293T cell Plasmidconstruction
-
分类号
Q78
[生物学]
-
