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类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白表达载体的构建及表达
1
作者
杨南扬
缪璇
+3 位作者
伍贤军
刘金美
辻一郎
李晓萌
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期1010-1014,共5页
目的:构建pGEX-4T-1/SUMO3重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化出类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白。方法:采用PCR技术利用pcDNA3.1-SUMO3质粒为模板,扩增出SUMO3全长编码序列(312bp),并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白...
目的:构建pGEX-4T-1/SUMO3重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化出类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白。方法:采用PCR技术利用pcDNA3.1-SUMO3质粒为模板,扩增出SUMO3全长编码序列(312bp),并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-4T-1中,酶切、测序鉴定获得重组质粒。将重组质粒转化E.coli BL21,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生GST-SUMO3的融合蛋白,并纯化获得相对分子质量为38 000的融合蛋白。结果:通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,确定了重组质粒pGEX-4T-1/SUMO3中包含有312bp的小片段,并测序鉴定该插入片段序列与SUMO3序列一致;在终浓度为0.1mmol·L-1的IPTG诱导时,GST-SUMO3的融合蛋白也被成功地表达和纯化。结论:成功地制备和纯化了类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白,为SUMO3多克隆抗体的制备提供了抗原基础,同时也为SUMO3及SUMO第二类家族功能的深入研究提供了保证。
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关键词
类泛素化蛋白3
GST融合
蛋白
蛋白
纯
化
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职称材料
题名
类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白表达载体的构建及表达
1
作者
杨南扬
缪璇
伍贤军
刘金美
辻一郎
李晓萌
机构
东北师范大学生命科学学院遗传与细胞研究所
日本东北大学医学部公共卫生学院
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期1010-1014,共5页
基金
国家自然科学基金资助课题(30871301
30700827)
+6 种基金
科技部国际合作项目资助课题(2010DFA31430)
教育部新世纪优秀人才支持计划资助课题(NCET-10-0316)
高校基本科研业务费专项资金资助课题(09SSXT035
10SSXT147
10JCXK004)
吉林省科技厅科研基金资助课题(20080731
200905116)
文摘
目的:构建pGEX-4T-1/SUMO3重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化出类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白。方法:采用PCR技术利用pcDNA3.1-SUMO3质粒为模板,扩增出SUMO3全长编码序列(312bp),并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-4T-1中,酶切、测序鉴定获得重组质粒。将重组质粒转化E.coli BL21,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生GST-SUMO3的融合蛋白,并纯化获得相对分子质量为38 000的融合蛋白。结果:通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,确定了重组质粒pGEX-4T-1/SUMO3中包含有312bp的小片段,并测序鉴定该插入片段序列与SUMO3序列一致;在终浓度为0.1mmol·L-1的IPTG诱导时,GST-SUMO3的融合蛋白也被成功地表达和纯化。结论:成功地制备和纯化了类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白,为SUMO3多克隆抗体的制备提供了抗原基础,同时也为SUMO3及SUMO第二类家族功能的深入研究提供了保证。
关键词
类泛素化蛋白3
GST融合
蛋白
蛋白
纯
化
Keywords
SUMO
3
GST fusion protein
protein purification
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白表达载体的构建及表达
杨南扬
缪璇
伍贤军
刘金美
辻一郎
李晓萌
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011
0
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