类枯草杆菌蛋白酶基因GmSBT1在大豆共生固氮中的功能

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作者 雷思杰 黄诗宸 +1 位作者 李友国 林会 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期133-139,共7页

为研究SBT(subtilases)家族蛋白在豆科植物共生固氮中的作用机制,分别利用生物信息学分析、时空表达定位、GUS染色定位和基因沉默等方法来研究GmSBT1在大豆-根瘤菌共生中的作用。结果显示:GmSBT1受根瘤菌特异性诱导,在成熟根瘤中高量表... 为研究SBT(subtilases)家族蛋白在豆科植物共生固氮中的作用机制,分别利用生物信息学分析、时空表达定位、GUS染色定位和基因沉默等方法来研究GmSBT1在大豆-根瘤菌共生中的作用。结果显示:GmSBT1受根瘤菌特异性诱导,在成熟根瘤中高量表达,且在根瘤皮层以及含菌细胞中发挥功能。GmSBT1-RNAi植株地上鲜质量、瘤质量、固氮酶活显著降低。结果表明,GmSBT1蛋白对根瘤的形成和发育以及根瘤的固氮具有重要的作用。 展开更多

关键词 蛋白酶 类枯草杆菌蛋白酶 根瘤菌 共生固氮 大豆

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蝉拟青霉类枯草杆菌蛋白酶基因的克隆及其序列和蛋白质分析

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作者 陈官菊 柴一秋 +3 位作者 厉晓腊 方鸣 刘又高 金轶伟 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第10期1663-1670,共8页

蝉拟青霉是一种常见的昆虫病原真菌,被广泛应用于生物防治。本研究根据GenBank中已登录的淡紫拟青霉、粉拟青霉、球孢白僵菌和金龟子绿僵菌的类枯草杆菌蛋白酶基因序列的同源性比较,以它们高度保守的核苷酸序列设计一对引物,采用RT-PCR... 蝉拟青霉是一种常见的昆虫病原真菌,被广泛应用于生物防治。本研究根据GenBank中已登录的淡紫拟青霉、粉拟青霉、球孢白僵菌和金龟子绿僵菌的类枯草杆菌蛋白酶基因序列的同源性比较,以它们高度保守的核苷酸序列设计一对引物,采用RT-PCR和3′/5′-RACE相结合的方法,从蝉拟青霉中克隆出完整的类枯草杆菌蛋白酶(subtilisin-likeprotease)cDNA基因序列。cDNA全序列为2031bp,该序列5′-端和3′-端的非编码序列长度分别为170bp和262bp,开放阅读框为1599bp,编码532个氨基酸,信号肽长度为18个氨基酸,前肽长度为133个氨基酸。该基因编码的蛋白序列与虫草棒束孢(Isariafarinosa)、球孢白僵菌(Beauveriabassiana)、蛹虫草(Cordycepsmilitaris)和哈茨木霉(Trichodermaharzianum)类枯草杆菌蛋白酶有较高的同源性,同源性分别为88%、88%、89%和71%。成熟蛋白具有典型的丝氨酸蛋白酶活性位点,同时有5个半胱氨酸,4个潜在的N-糖基化位点,位于细胞的液泡中与分泌途径相关,二级结构中以α-螺旋和无规则卷曲为主。 展开更多

关键词 虫生真菌 蝉拟青霉 类枯草杆菌蛋白酶基因 克隆

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柑橘类枯草杆菌蛋白酶基因CcSubtilisin的克隆及遗传转化

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作者 吴天利 李菊 +6 位作者 张永艳 胡敏伦 闫化学 姜波 谢丹 袁超力 钟广炎 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期59-66,共8页

以克里曼丁橘[Citrus clementina]叶片RNA为材料,采用RT-PCR技术克隆获得了一个编码类枯草杆菌蛋白酶的基因,命名为CcSubtilisin.该基因的开放阅读框(ORF)长度为2 337bp,预测可编码778个氨基酸残基的多肽.分析发现CcSubtilisin与拟南芥... 以克里曼丁橘[Citrus clementina]叶片RNA为材料,采用RT-PCR技术克隆获得了一个编码类枯草杆菌蛋白酶的基因,命名为CcSubtilisin.该基因的开放阅读框(ORF)长度为2 337bp,预测可编码778个氨基酸残基的多肽.分析发现CcSubtilisin与拟南芥、蓖麻、番茄、毛果杨、大豆、挪威云杉、欧洲桤木、百合等18个物种的同源蛋白具有相同的4个保守区域,属于枯草杆菌蛋白酶.通过构建该基因的超表达载体并以沙田柚为材料进行遗传转化,获得了该基因的9个转基因沙田柚株系.实时定量PCR结果表明,4个用于检测的株系中有3株的表达量明显高于对照. 展开更多

关键词 丝氨酸蛋白酶 枯草杆菌蛋白酶 基因克隆 序列分析 遗传转化

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杀虫球孢白僵菌菌株筛选及类枯草杆菌蛋白酶基因的克隆 被引量：2

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作者 贺小红 曾智 +4 位作者 付祖姣 丁学知 胡胜标 孙运军 夏立秋 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2008年第1期100-103,共4页

在水稻叶蝉僵虫中分离出一株球孢白僵菌(Beauveria bassiana),根据GenBank上球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶基因序列同源性设计引物,采用RT-PCR法得到一个球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶CDEP2基因的cD-NA片段.利用表达载体pET28 a(+),在大肠... 在水稻叶蝉僵虫中分离出一株球孢白僵菌(Beauveria bassiana),根据GenBank上球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶基因序列同源性设计引物,采用RT-PCR法得到一个球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶CDEP2基因的cD-NA片段.利用表达载体pET28 a(+),在大肠杆菌中表达了CDEP2蛋白. 展开更多

关键词 RT-PCR 球孢白僵菌 类枯草杆菌蛋白酶

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类枯草杆菌蛋白酶的生物学功能及其在农牧业疾病控制中的应用 被引量：2

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作者 廖素环 张民秀 +2 位作者 施李鸣 黄伟坚 韦英益 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第23期13897-13899,共3页

综述国内外研究类枯草杆菌蛋白酶基因在生物生长过程中参与表型的稳定性、致病性和自噬等重要生理功能及其在农牧业疾病控制中的应用前景。

关键词 类枯草杆菌蛋白酶 表型的稳定性 毒力因子 自噬 疾病控制

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刚地弓形虫类枯草杆菌蛋白酶的研究进展 被引量：1

6

作者 郑斌 尹志奎 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期93-97,共5页

刚地弓形虫的类枯草杆菌蛋白酶是虫体粘附、入侵宿主细胞过程中的一种重要蛋白酶。研究发现弓形虫的类枯草杆菌蛋白酶的催化区域高度保守;蛋白酶有多个作用底物,并与虫体的运动及毒力相关。本文对已发现的弓形虫类枯草杆菌蛋白酶的结构... 刚地弓形虫的类枯草杆菌蛋白酶是虫体粘附、入侵宿主细胞过程中的一种重要蛋白酶。研究发现弓形虫的类枯草杆菌蛋白酶的催化区域高度保守;蛋白酶有多个作用底物,并与虫体的运动及毒力相关。本文对已发现的弓形虫类枯草杆菌蛋白酶的结构及性能作一综述。 展开更多

关键词 刚地弓形虫 类枯草杆菌蛋白酶 蛋白结构 蛋白酶解加工

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枯草杆菌中性蛋白酶基因的表达 被引量：1

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作者 刘白玲 何先祺 张义正 《皮革科学与工程》 CAS 1995年第3期1-7,24,共8页

本文研究了中性蛋白酶基因在不同宿主菌及各种培养条件下的蛋白酶表达水平。用含有中性蛋白酶基因的重组质粒ｐＭＰＲ４、ｐＭＰＲ８和ｐＭＰＲ１６转化ＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＢＧ２０３６，Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉ... 本文研究了中性蛋白酶基因在不同宿主菌及各种培养条件下的蛋白酶表达水平。用含有中性蛋白酶基因的重组质粒ｐＭＰＲ４、ｐＭＰＲ８和ｐＭＰＲ１６转化ＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＢＧ２０３６，ＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＡＳ１．３９８和ＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＭＬ，对转化菌产生的蛋白酶活性分析表明：三个重组质粒的导入，均使宿主菌的酶活性有大幅度的提高。其规律是：宿主菌的蛋白酶活性越低，提高的幅度越大；宿主菌本身的酶活性越高，所获得的克隆茵的酶活性也越高。对Ｂ、ｓｕｂｔｉｌｉｓＢＧ２０３６的三种转化菌在不同ｐＨ培养基、温度、培养时间，通气量及不同的抗性和抗生素浓度条件下的蛋白酶性测定结果表明，在实验范围内，培养温度对蛋白酶基因表达水平的影响很大，培养时间次之，培养基ｐＨ对表达无明显影响。不同的抗性对表达水平的影响最大，同一抗生素的不同浓度对表达水平也有明显的影响。 展开更多

关键词 枯草杆菌 中性蛋白酶 基因表达 皮革学

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基因工程枯草杆菌生产中性蛋白酶的研究 被引量：8

8

作者 王丽影 叶勤 +3 位作者 张宏 张嗣良 吴自荣 王林发 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1995年第6期691-695,共5页

使用一株基因工程枯草杆菌ＤＢ４０３（ｐＷＬ２６７）生产中性蛋白酶，其宿主ＤＢ４０３失去了野生菌株９９％的胞外蛋白酶生产能力，质粒ｐＷＬ２６７则带有野生菌株中性蛋白酶的全部结构基因。在分批培养中，中性蛋白酶的活性为２６... 使用一株基因工程枯草杆菌ＤＢ４０３（ｐＷＬ２６７）生产中性蛋白酶，其宿主ＤＢ４０３失去了野生菌株９９％的胞外蛋白酶生产能力，质粒ｐＷＬ２６７则带有野生菌株中性蛋白酶的全部结构基因。在分批培养中，中性蛋白酶的活性为２６２ｍｇ／ｍｉｎ·Ｌ左右，通过培养基改进达到３．２８６ｇ／ｍｉｎ·Ｌ。连续培养表明，中性蛋白酶的比生产速率在比生长速率为０．２ｈ￣（－１）时最大。在控制补加葡萄糖和其它培养基成分的补料分批培养中，中性蛋白酶活性达１７．６７０ｇ／ｍｍ·Ｌ。 展开更多

关键词 中性蛋白酶 枯草杆菌 基因工程菌 蛋白酶

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抗氧化型枯草杆菌碱性蛋白酶高产工程菌的构建及其酶学特性 被引量：2

9

作者 李心治 章银梅 +2 位作者 张宇 黄凡 汤懋竑 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2000年第10期13-18,共6页

通过基因重组、定点突变、基因整合和诱变等手段构建了一个抗氧化型枯草杆菌碱性蛋白酶高产工程菌株B135,试管及三角瓶发酵结果显示 ,酶产量是 10 0 4 8U /ml,是2 70 9碱性蛋白酶产量的 55% ,抗氧化型碱性蛋白酶浓度是 5.9mg/ml。该酶与... 通过基因重组、定点突变、基因整合和诱变等手段构建了一个抗氧化型枯草杆菌碱性蛋白酶高产工程菌株B135,试管及三角瓶发酵结果显示 ,酶产量是 10 0 4 8U /ml,是2 70 9碱性蛋白酶产量的 55% ,抗氧化型碱性蛋白酶浓度是 5.9mg/ml。该酶与 1mol/L过氧化氢作用 15min后 ,酶活保存 90 %以上 ,而 2 70 9则保存 12 % ,说明B135碱性蛋白酶是抗氧化的。 展开更多

关键词 抗氧化型 碱性蛋白酶 枯草杆菌 基因整合 高产工程菌

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木薯枯草杆菌蛋白酶家族鉴定及MeSDD1的功能分析 被引量：1

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作者 肖亮 鲍茹雪 +5 位作者 曹升 陆柳英 尚小红 曾文丹 聂宣红 严华兵 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期1308-1317,共10页

枯草杆菌蛋白酶基因家族(SBT)是控制植物生长发育和响应环境胁迫的重要基因家族。为进一步了解木薯SBT基因家族的数量、基本特征、功能域和进化关系等,在全基因组水平通过生物信息学方法对SBT基因家族进行了鉴定和分析,并对其中一个成... 枯草杆菌蛋白酶基因家族(SBT)是控制植物生长发育和响应环境胁迫的重要基因家族。为进一步了解木薯SBT基因家族的数量、基本特征、功能域和进化关系等,在全基因组水平通过生物信息学方法对SBT基因家族进行了鉴定和分析,并对其中一个成员的功能进行了分析。进化树分析结果表明,在木薯基因组中共鉴定到69个SBT成员,其中Manes.18G044300与拟南芥抗旱基因SDD1亲缘关系最近,因此将该成员命名为MeSDD1;22个成员无内含子,69个成员的蛋白携带5个高度保守的结构域,一部分SBT成员在染色体上呈紧密的串联分布,启动子存在干旱响应元件。用qRT-PCR检测筛选出表达量高的2个纯合株系用于后续研究。相关生理指标检测结果表明,2个转基因株系叶片的相对含水量均显著高于野生型;转基因株系离体叶片失水率小于野生型;转基因株系的气孔密度显著小于野生型;断水处理14 d,转基因株系的萎焉程度轻于野生型,表明MeSDD1增强了拟南芥植株的抗旱性。本研究结果为木薯抗旱育种提供了基因资源,并为后续研究MeSDD1介导的抗旱分子机制奠定了理论基础。 展开更多

关键词 木薯 枯草杆菌蛋白酶家族 转基因拟南芥 抗旱性 功能分析

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不同光质对烟草叶片生长发育过程中类半胱氨酸蛋白酶活性及其基因表达调控的影响 被引量：9

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作者 赵娟 柯学 +2 位作者 徐超华 李军营 龚明 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第23期13965-13968,共4页

[目的]探讨不同光质对烟草叶片生长发育及衰老进程中类半胱氨酸蛋白酶活性及其基因表达的调控。[方法]通过覆盖不同颜色滤膜(白膜、红膜、黄膜、蓝膜和紫膜)获得不同光质,监测不同光质下烟草叶片在生长发育及衰老过程中叶绿素含量、类... [目的]探讨不同光质对烟草叶片生长发育及衰老进程中类半胱氨酸蛋白酶活性及其基因表达的调控。[方法]通过覆盖不同颜色滤膜(白膜、红膜、黄膜、蓝膜和紫膜)获得不同光质,监测不同光质下烟草叶片在生长发育及衰老过程中叶绿素含量、类半胱氨酸蛋白酶活性及相关几个基因表达的变化。[结果]与白、红、黄膜处理相比,蓝膜和紫膜处理延缓了烟草叶片生长后期叶绿素含量的下降和衰老进程,同时蓝、紫膜处理的烟草叶片有相对较低的类半胱氨酸蛋白酶活性和相关的几个基因的表达量。[结论]不同光质对烟草叶片的生长发育及衰老进程有不同的影响,这在某种程度上是通过影响类半胱氨酸蛋白酶及其相应的基因表达来实现的。 展开更多

关键词 光质 烟草叶片 生长发育 类半胱氨酸蛋白酶 基因表达

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内毒素对人的类糜蛋白转基因小鼠生存率及组织内类糜蛋白酶活性的影响

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作者 范愈燕 孙永新 +4 位作者 吕翠岩 张越颍 李平 西山成 支楠 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1071-1074,共4页

目的探究人的类糜蛋白酶过度表达对脂多糖(LPS)治疗的小鼠生存率及组织内类糜蛋白酶活性的影响。方法 4周龄的野生型(WT)小鼠和人的类糜蛋白酶转基因(Tg)小鼠分别采用不同剂量LPS(0.03、0.10、0.30 mg/kg)治疗2周,即分为WT-0.03组(LPS 0... 目的探究人的类糜蛋白酶过度表达对脂多糖(LPS)治疗的小鼠生存率及组织内类糜蛋白酶活性的影响。方法 4周龄的野生型(WT)小鼠和人的类糜蛋白酶转基因(Tg)小鼠分别采用不同剂量LPS(0.03、0.10、0.30 mg/kg)治疗2周,即分为WT-0.03组(LPS 0.03 mg/kg,n=11)、WT-0.10组(LPS 0.10 mg/kg,n=11)、WT-0.30组(LPS 0.30 mg/kg,n=9)、Tg-0.03组(LPS0.03 mg/kg,n=10)、Tg-0.10组(LPS 0.10 mg/kg,n=9)、Tg-0.30组(LPS 0.30 mg/kg,n=6)。结果在LPS诱导的急性炎症中,Tg小鼠皮肤和心脏的类糜蛋白酶活性明显高于WT小鼠。0.10 mg/kg LPS未降低WT小鼠生存率,但Tg小鼠死亡率为25%,0.30mg/kg LPS诱导WT小鼠和Tg小鼠生存率分别为87.5%和0%。结论人的类糜蛋白酶异常升高可能会导致LPS诱导的小鼠死亡率增加。 展开更多

关键词 类糜蛋白酶活性 脂多糖 转基因小鼠 野生型小鼠

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类泛素化蛋白酶1基因的表达与肝癌细胞株侵袭转移的关系

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作者 刘延 李湘竑 杨定华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期309-313,共5页

目的:研究类泛素化蛋白酶-1(sentrin-specific protease-1,SENP-1)基因在不同侵袭潜能肝细胞肝癌细胞株及人永生化肝细胞中mRNA和蛋白的表达水平及其与肝癌细胞侵袭能力的关系。方法:使用RT-PCR、Real-time PCR、Western blotting和免... 目的:研究类泛素化蛋白酶-1(sentrin-specific protease-1,SENP-1)基因在不同侵袭潜能肝细胞肝癌细胞株及人永生化肝细胞中mRNA和蛋白的表达水平及其与肝癌细胞侵袭能力的关系。方法:使用RT-PCR、Real-time PCR、Western blotting和免疫荧光方法对肝癌细胞株MHCC97L(低侵袭性)、MHCC97H和HCCLM3(高侵袭性)、SMMC-7721和HepG2(无明显侵袭性)SENP-1 mRNA和蛋白表达水平进行检测,以人永生化肝细胞株HL-7702为对照,分析SENP-1的表达与肝癌细胞株侵袭转移能力的关系。结果:RT-PCR和Real-time PCR检测结果显示,SENP-1 mRNA(F=5.658;P=0.042)和蛋白(F=88.909,P=0.000)在肝癌细胞株中的表达随着肝癌细胞株侵袭潜能的增高而增高;Western blotting检测结果显示,5种肝癌细胞株SENP-1蛋白水平均显著高于人永生化肝细胞株;免疫荧光法观察发现,SENP-1蛋白在肝癌细胞株内主要为胞质表达,部分胞核表达。结论:SENP-1基因在肝癌细胞株中的高表达可能具有促进肝癌细胞侵袭转移的作用。 展开更多

关键词 类泛素化蛋白酶-1基因 肝细胞癌 侵袭 转移

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家蚕类胰凝乳蛋白酶基因的发掘与表达特征分析

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作者 龙菲菲 席建 +2 位作者 张进 司马杨虎 徐世清 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期424-433,共10页

类胰凝乳蛋白酶(CTLP)是鳞翅目昆虫幼虫中肠中的主要蛋白酶。基于构建的家蚕中肠等组织差异表达基因的SSH文库,发掘和克隆了一条新的家蚕类胰凝乳蛋白酶基因Ctlp(GenBank登录号:JQ081296)。该基因定位于18号染色体nscaf2901,靠近端粒,有... 类胰凝乳蛋白酶(CTLP)是鳞翅目昆虫幼虫中肠中的主要蛋白酶。基于构建的家蚕中肠等组织差异表达基因的SSH文库,发掘和克隆了一条新的家蚕类胰凝乳蛋白酶基因Ctlp(GenBank登录号:JQ081296)。该基因定位于18号染色体nscaf2901,靠近端粒,有5个外显子和4个内含子,全长cDNA序列976 bp,ORF为840 bp,编码279个氨基酸残基,信号肽序列1～18 aa(分值0.985),1～20 aa和50～100 aa区域为2个由内到外的跨膜螺旋,推测蛋白质相对分子质量为29 780.10,pI为8.75,蛋白质功能域(保守区)和分子进化分析显示其为丝氨酸蛋白酶家族的类胰凝乳蛋白酶。家蚕Ctlp基因具有在5龄幼虫中肠特异性高表达和伴随进食量增加而上调表达的特征,同时也具有性别差异性和熟蚕期特异性上调表达的现象,暗示CTLP可能具有促进消化以外的功能。构建pET32a-ctlp重组表达载体,SDS-PAGE分析和Western blot鉴定结果显示,重组蛋白在原核表达系统中的表达量较低。 展开更多

关键词 家蚕 类胰凝乳蛋白酶 基因克隆 表达谱 原核表达

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氧化型胆固醇下调血管平滑肌细胞金属蛋白酶组织抑制剂基因表达 被引量：1

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作者 崔鸣 陈凤荣 +1 位作者 宋清华 朱应葆 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期622-624,I002,共4页

目的 :研究氧化型胆固醇对血管平滑肌细胞MMP - 9及TIMP - 1表达的影响。方法 :离体培养兔主动脉血管平滑肌细胞 ,分别用胆固醇、Triol与 2 5 -OH负载细胞 ,狭缝杂交测定TIMP - 1mRNA表达 ,细胞免疫化学测定MMP - 9与TIMP - 1蛋白表达... 目的 :研究氧化型胆固醇对血管平滑肌细胞MMP - 9及TIMP - 1表达的影响。方法 :离体培养兔主动脉血管平滑肌细胞 ,分别用胆固醇、Triol与 2 5 -OH负载细胞 ,狭缝杂交测定TIMP - 1mRNA表达 ,细胞免疫化学测定MMP - 9与TIMP - 1蛋白表达。结果 :Triol与 2 5 -OH(1mg/L ,2 4h)抑制TIMP - 1mRNA及蛋白表达 ,对MMP - 9蛋白表达无影响。结论 :氧化型胆固醇可以下调血管平滑肌细胞TIMP - 1基因表达。 展开更多

关键词 氧化型胆固醇 血管平滑肌 金属蛋白酶类 基因表达 金属蛋白酶组织抑制剂 动脉粥样硬化 AS 发病机制

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利用染色质隔离子构建人基质金属蛋白酶-12转基因表达载体

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作者 关亚群 赵学信 +1 位作者 焦谊 范江霖 《实用医学杂志》 CAS 2007年第23期3659-3662,共4页

目的:在构建巨噬细胞特异表达且带有染色质隔离子的人基质金属蛋白酶-12(hMMP-12)转基因表达载体的基础上构建hMMP-12转基因兔动物模型。方法:首先通过RT-PCR方法扩增hMMP-12基因,产物亚克隆到pGEM-T载体,测序后获得pGEM-T-hMMP-12,然... 目的:在构建巨噬细胞特异表达且带有染色质隔离子的人基质金属蛋白酶-12(hMMP-12)转基因表达载体的基础上构建hMMP-12转基因兔动物模型。方法:首先通过RT-PCR方法扩增hMMP-12基因,产物亚克隆到pGEM-T载体,测序后获得pGEM-T-hMMP-12,然后利用pJC13构建带有染色质隔离子和清道夫受体A增强子、启动子和人生长激素尾的亚克隆pJC13-SR,再利用pGEM-T-hMMP-12和pJC13-SR重组质粒,构建巨噬细胞特异性的转基因表达载体pJC13-SR-hMMP-12,最后pJC13-SR-hMMP-12表达载体线性化,显微注射家兔受精卵制备转基因兔,并进行PCR扩增及Southern Blot转基因效果分析鉴定。结果:(1)通过DNA测序和限制性核酸内切酶酶切鉴定证实,hMMP-12成功克隆到所需表达载体中;(2)转基因后获得仔兔36只,以PCR检测结果计算,转基因总效率为1.4%～3.4%,整合率为20%～50%;以Southern Blot检测结果计算,转基因总效率为0.5%～2.2%,整合率为13%～17%。结论:转基因表达载体的成功构建,为hMMP-12转基因兔动物模型的构建和研究MMP-12在动脉粥样硬化的形成和发展中的作用机制奠定了基础。 展开更多

关键词 基质金属蛋白酶类 转基因 染色质隔离子

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CD147基因沉默对兔外周血单核巨噬细胞基质金属蛋白酶表达的影响 被引量：2

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作者 杜大勇 李运田 +3 位作者 李雪杰 柳杨 薛峰 杨升华 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2012年第11期1193-1196,共4页

目的筛选出高效抑制兔外周血单核巨噬细胞中CD147表达的短链RNA(shRNA)慢病毒载体,观察CD147基因沉默后对基质金属蛋白酶(MMP)的影响。方法兔源CD147 mRNA序列,设计并构建shRNA慢病毒载体,实验分为空白组,阴性组,加CD147 shRNA慢病毒干... 目的筛选出高效抑制兔外周血单核巨噬细胞中CD147表达的短链RNA(shRNA)慢病毒载体,观察CD147基因沉默后对基质金属蛋白酶(MMP)的影响。方法兔源CD147 mRNA序列,设计并构建shRNA慢病毒载体,实验分为空白组,阴性组,加CD147 shRNA慢病毒干扰依次为A组、B组、C组、D组,将其分别转染兔外周血单核巨噬细胞,72 h后观察转染效果,用RT-PCR测CD147 mRNA表达,ELISA法测CD147 MMP-2及MMP-9蛋白表达。结果 A、B、C、D组CD147 mRNA及CD147、MMP-2和MMP-9蛋白较空白组显著减少(P<0.01),A组CD147 mRNA和蛋白降低最显著,较空白组分别减少57.7%和50.9%(P<0.01),MMP-2、MMP-9蛋白表达分别减少95.9%和45.4%。结论成功构建并筛选出能高效、且特异阻断CD147基因表达的shRNA慢病毒载体。CD147基因沉默后,MMP-2和MMP-9表达明显减少,可能成为防治动脉粥样硬化新的治疗靶点。 展开更多

关键词 基因沉默 单核巨噬细胞系统 基质金属蛋白酶类 RNA 信使 基因表达 转染

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球孢白僵菌不同世代菌株胞外蛋白酶与毒力的关系 被引量：25

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作者 彭国雄 张永军 +2 位作者 杨星勇 王中康 裴炎 《中国生物防治》 CSCD 2000年第2期61-64,共4页

以蝉蜕、蝇蛆壳两种培养基培养球孢白僵菌不同世代菌株 ,分析其类枯草杆菌蛋白酶(Pr1)和总胞外蛋白酶的产生水平及其与菌株毒力的相关性。结果表明 ,菌株的 Pr1产生水平达到最高的时间较总胞外蛋白酶早 1～ 2天。在蝉蜕培养基中 ,菌株 ... 以蝉蜕、蝇蛆壳两种培养基培养球孢白僵菌不同世代菌株 ,分析其类枯草杆菌蛋白酶(Pr1)和总胞外蛋白酶的产生水平及其与菌株毒力的相关性。结果表明 ,菌株的 Pr1产生水平达到最高的时间较总胞外蛋白酶早 1～ 2天。在蝉蜕培养基中 ,菌株 Pr1产生水平较高 ,而总胞外蛋白酶产生水平大大低于蝇蛆壳培养基中的产生水平。随着世代数的增加 ,Pr1和总胞外蛋白酶产生水平及对家蚕的毒力都明显下降。不同世代菌株在蝉蜕和蝇蛆壳培养基上的 Pr1产生水平与其毒力的相关系数分别为 0 .92和 0 .89,高于总胞外蛋白酶与其毒力的相关系数(0 .84和 0 .6 7)。因此认为在总胞外蛋白酶中 ,Pr1是影响菌株主要毒力因子之一 。 展开更多

关键词 球孢白僵菌 类枯草杆菌蛋白酶 胞外蛋白酶 毒力

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金属蛋白酶MMP-9可调控型表达与人黑色素瘤细胞侵袭表型的相关性 被引量：6

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作者 孔灵玲 方伟岗 +3 位作者 钟镐镐 衡万杰 李燕 吴秉铨 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期7-11,共5页

目的 :探讨金属蛋白酶MMP 9与肿瘤恶性表型的相关性以及其可调控型表达在肿瘤基因治疗中的应用。方法 :利用基因重组技术构建正义MMP 9cDNA四环素可调控型表达载体 ,用脂质体法转染正义MMP 9至早期人黑色素瘤细胞株WM35 (不表达MMP 9)... 目的 :探讨金属蛋白酶MMP 9与肿瘤恶性表型的相关性以及其可调控型表达在肿瘤基因治疗中的应用。方法 :利用基因重组技术构建正义MMP 9cDNA四环素可调控型表达载体 ,用脂质体法转染正义MMP 9至早期人黑色素瘤细胞株WM35 (不表达MMP 9)。检测转染后细胞MMP 9表达水平的改变以及体外生长、侵袭能力的变化。结果 :在外源性四环素存在时 ,转染基因不表达 ,细胞表型无明显变化。去除四环素 ,WM35细胞MMP 9的表达及活性增强 ,细胞生长速度加快、锚着非依赖性生长能力增加、体外侵袭能力增强。结论 :正义MMP 9基因的可调控型表达能促进人黑色素瘤细胞的生长和侵袭 ,进一步证明MMP 9在人黑色素瘤细胞侵袭过程中起重要作用。 展开更多

关键词 黑色素瘤 肿瘤转移 金属蛋白酶类 基因表达调控 表型

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未行调脂治疗的冠心病患者血浆前蛋白转化酶枯草溶菌素9水平与促甲状腺激素的相关性分析 被引量：3

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作者 王梅 李艳芳 +3 位作者 郭彦青 陈萌萌 蒋志丽 宋俊迎 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 2017年第11期1153-1156,共4页

目的探讨未行调脂治疗的冠心病患者血浆前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)与血脂各指标,甲状腺功能等影响因素的相关性。方法选择2013年7月~2014年3月在首都医科大学附属北京安贞医院就诊的未行调脂治疗的胸痛患者160例,入院后根据冠状动... 目的探讨未行调脂治疗的冠心病患者血浆前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)与血脂各指标,甲状腺功能等影响因素的相关性。方法选择2013年7月~2014年3月在首都医科大学附属北京安贞医院就诊的未行调脂治疗的胸痛患者160例,入院后根据冠状动脉造影结果分为冠心病组102例和对照组58例。收集临床资料,采集空腹静脉血,检测血常规、血生化、甲状腺功能等各项指标。结果冠心病组糖尿病、吸烟、空腹血糖、糖化血红蛋白、LDL-C明显高于对照组,HDL-C明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。冠心病组促甲状腺激素(TSH)及PCSK9明显高于对照组[(2.26±1.49)mU/L vs(1.88±0.98)mU/L,P=0.038;(0.29±0.28)mg/L vs(0.15±0.22)mg/L,P=0.027]。logistic回归分析显示,年龄、吸烟、糖尿病、TSH、LDL-C、HDL-C、脂蛋白(a)、PCSK9是冠心病患者的危险因素(P<0.05)。冠心病患者血浆PCSK9与LDL-C、载脂蛋白B、TSH呈正相关(r=0.524,P=0.004;r=0.412,P=0.021;r=0.571,P=0.021)。结论 TSH和PCSK9共同参与了动脉粥样硬化的形成和发展。PCSK9与TSH存在相关性,两者共同影响了冠心病的发生、发展。 展开更多

关键词 冠心病 促甲状腺素 血脂异常 动脉粥样硬化 前蛋白转化酶类 枯草杆菌蛋白酶类

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