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简单异尖线虫PCR检测方法的建立 被引量:8
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作者 曹庭盛 李孝军 +1 位作者 蔡渭明 杜爱芳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期279-282,共4页
根据GenBank上公布的简单异尖线虫核糖体DNA的内转录区(ITS-1、5.8S、ITS-2)序列设计特异性引物,对线虫样品进行PCR扩增并将产物克隆到pMD18-T载体后测序。结果表明,扩增的目的片段大小为430bp,与预期扩增序列同源性为99%。该PCR检测体... 根据GenBank上公布的简单异尖线虫核糖体DNA的内转录区(ITS-1、5.8S、ITS-2)序列设计特异性引物,对线虫样品进行PCR扩增并将产物克隆到pMD18-T载体后测序。结果表明,扩增的目的片段大小为430bp,与预期扩增序列同源性为99%。该PCR检测体系的特异性强,不能在宫脂线虫、伪地新线虫DNA中扩增出条带;敏感性高,最低检测的DNA含量为0.4pg。该检测体系的建立为简单异尖线虫的检测、鉴定和流行病学调查提供了有力的技术支持。 展开更多
关键词 简单异尖线虫 内转录区 PCR
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恒温实时荧光法快速检测简单异尖线虫方法的建立 被引量:3
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作者 张森 邓艳 +5 位作者 黄燕琼 何淑华 戴金 赵尚志 石磊 柏建山 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第24期53-57,共5页
为了快速鉴定简单异尖线虫,本研究建立了一套检测简单异尖线虫DNA的恒温实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,根据LAMP方法原理,针对简单异尖线虫ITS2区域设计引物特异性识别靶标基因。进行了特... 为了快速鉴定简单异尖线虫,本研究建立了一套检测简单异尖线虫DNA的恒温实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,根据LAMP方法原理,针对简单异尖线虫ITS2区域设计引物特异性识别靶标基因。进行了特异性、灵敏度、重复性和实际样品的测试,并与传统的PCR方法进行比较。结果表明,该方法能够特异性扩增简单异尖线虫DNA,对含有简单异尖线虫ITS2目的基因片段的质粒DNA检测限为1 fg/μL,灵敏度比传统的PCR方法高100倍,重复性良好,对实际样品进行检测,与传统的PCR测序方法结果相符。本研究建立的恒温实时荧光快速检测方法适用于特异性检测简单异尖线虫。 展开更多
关键词 恒温实时荧光法 简单异尖线虫 快速检测
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花鲈感染简单异尖线虫及扫描电镜观察
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作者 刘问 钱冬 毛芝娟 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期549-550,555,共3页
目的简单异尖线虫(Anisakis simplex)是一类寄生于海水鱼类及哺乳类动物,可引起人类异尖线虫病(anisaki-osis)的食源性人兽共患寄生虫。作者从浙江宁波患病花鲈(Latealabrax japonicus)体内检出简单异尖线虫,检出率为100%(11/11)。患病... 目的简单异尖线虫(Anisakis simplex)是一类寄生于海水鱼类及哺乳类动物,可引起人类异尖线虫病(anisaki-osis)的食源性人兽共患寄生虫。作者从浙江宁波患病花鲈(Latealabrax japonicus)体内检出简单异尖线虫,检出率为100%(11/11)。患病鲈鱼体表无异常症状,解剖鱼体在肝脏、胃壁、肠壁、肠系膜等部位均有简单异尖线虫寄生,线虫盘成螺旋状包于包囊内,病鱼感染线虫强度为20~30条/尾。感染严重病鱼出现胃穿孔、胃壁出血、肝脏具白色结节等病症。光学显微镜观察线虫虫体为长圆筒形,两端较细,肌质食道,腺体的胃位于食管后面,黑色不透明,和肠连接处有一斜的分界线。扫描电镜观察虫体体表具致密环纹,前端钝圆,具1个钻齿和4个钝角状乳突,排泄口位于腹侧两个乳突之间,尾部短而圆,末端具一明显尾突。 展开更多
关键词 花鲈 简单异尖线虫 扫描电镜
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环介导等温扩增联合横向流动试纸条检测简单异尖线虫/派氏异尖线虫方法的建立 被引量:7
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作者 乔艳 周前进 +2 位作者 李孝军 苗亮 陈炯 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期324-335,共12页
简单异尖线虫复合种(Anisakissimplexspeciescomplex)是人兽共患寄生虫,其中的简单异尖线虫(A. simplex sensu stricto)和派氏异尖线虫(A. pegreffii)能引起人异尖线虫病。本研究利用环介导等温扩增技术(loop-mediatedisothermalamplifi... 简单异尖线虫复合种(Anisakissimplexspeciescomplex)是人兽共患寄生虫,其中的简单异尖线虫(A. simplex sensu stricto)和派氏异尖线虫(A. pegreffii)能引起人异尖线虫病。本研究利用环介导等温扩增技术(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)结合流动试纸条(lateralflowdipstick,LFD)建立了简单异尖线虫/派氏异尖线虫的快检技术。本研究以简单异尖线虫核糖体DNA的内转录间隔区(ribosomal internal transcribed spacer 2, rDNA-ITS2)序列为检测靶标,设计6条特异性的引物进行(荧光)LAMP反应。将生物素化的LAMP产物与异硫氰酸荧光素标记的探针杂交并通过LFD可视化显示。结果表明,本研究建立的LAMP-LFD可以特异性检测出简单异尖线虫/派氏异尖线虫,而对其它10种蠕虫的检测结果呈阴性;针对两个异尖线虫姊妹种的第三期幼虫(third-stagelarvae,L3)的检测灵敏度为单条虫体基因组DNA的10–5倍。优化后的LAMP反应时间为40min,加之探针杂交和LFD显色,整个检测时程只需50min。利用本LAMP-LFD方法对2015—2017年收集于140尾海鱼的1573条线虫进行检测的结果表明,简单异尖线虫/派氏异尖线虫是东海海域的优势种,这与经rDNA-ITS1-5.8S-ITS2测序的结果一致。因此, LAMP-LFD方法能快速、灵敏且准确地检测简单异尖线虫/派氏异尖线,在经济鱼类中简单异尖线虫复合种的筛检和常规检验检疫具有巨大潜力。 展开更多
关键词 简单异尖线虫 派氏线 环介导等温扩增技术 横向流动试纸条 检测
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用PCR-RFLP法在海鱼中检出简单异尖线虫幼虫
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作者 石椿丽 《福建畜牧兽医》 2011年第2期8-11,共4页
2008年底至2010年初从进境的竹荚鱼、带鱼等海鱼中多次检出体色米黄色、长16~19mm的一种线虫。用异尖线虫的通用引物和特异性引物对提取的核酸进行PCR扩增,并对扩增产物进行测序和酶切。确定该线虫为简单异尖线虫。
关键词 带鱼 竹荚鱼 简单异尖线虫 PCR-RFLP
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PCR-RFLP技术鉴别简单异尖线虫姊妹种的研究 被引量:2
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作者 李孝军 王勇 +3 位作者 王亚楠 王筱筱 杨赛军 唐行忠 《中国动物检疫》 CAS 2010年第2期37-38,共2页
为建立简单异尖线虫姊妹种分子生物学检测体系,以实现对其快速准确的鉴定,本实验对简单异尖线虫单条线虫总DNA进行PCR扩增,获得其rDNA-ITS序列,测序后与基因库中DNA序列比较,并根据rDNA-ITS序列比较结果鉴定线虫的种类,最后通过酶切技... 为建立简单异尖线虫姊妹种分子生物学检测体系,以实现对其快速准确的鉴定,本实验对简单异尖线虫单条线虫总DNA进行PCR扩增,获得其rDNA-ITS序列,测序后与基因库中DNA序列比较,并根据rDNA-ITS序列比较结果鉴定线虫的种类,最后通过酶切技术获得线虫的PCR-RFLP图谱并以此作为线虫鉴定的分子标签。 展开更多
关键词 PCR—RFLP 简单异尖线虫姊妹种 RDNA ITS序列
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入境旅客携带海鱼中截获国家禁止入境的二类动物寄生虫病——简单异尖线虫 被引量:2
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作者 梁卫平 金永平 +1 位作者 王雯丽 王忠宽 《中国兽医寄生虫病》 1999年第1期63-64,共2页
1998年3月4日和3月24日,我局检疫人员从韩国、台湾入境旅客携带的海鱼中先后两次检出国家禁止入境的二类动物寄生虫病——简单异尖线虫(Anisakis(A)simplex),后经中国预防医学科学院寄生虫病研究所常正... 1998年3月4日和3月24日,我局检疫人员从韩国、台湾入境旅客携带的海鱼中先后两次检出国家禁止入境的二类动物寄生虫病——简单异尖线虫(Anisakis(A)simplex),后经中国预防医学科学院寄生虫病研究所常正山研究员复核无误,为开展对外贸易,... 展开更多
关键词 简单异尖线虫 感染 寄生 检疫
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异尖线虫病研究进展 被引量:12
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作者 张望 陈秀开 +1 位作者 李正高 彭勇 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第7期93-97,共5页
异尖线虫病是由于食用了含有异尖线虫第三期幼虫活体的鱼类或头足类引起的一种人兽共患寄生虫病,主要表现为急腹症症状或过敏症状。论文综述了异尖线虫病的病原学、流行病学、症状、病理变化、治疗和预防,并重点概括了异尖线虫的免疫刺... 异尖线虫病是由于食用了含有异尖线虫第三期幼虫活体的鱼类或头足类引起的一种人兽共患寄生虫病,主要表现为急腹症症状或过敏症状。论文综述了异尖线虫病的病原学、流行病学、症状、病理变化、治疗和预防,并重点概括了异尖线虫的免疫刺激、过敏症的流行病学、症状、过敏原,以及已死亡的异尖线虫幼虫造成过敏的风险。该病在公共卫生方面的意义不容忽视,国内应对该病进行深入广泛的研究。 展开更多
关键词 线 简单异尖线虫 人兽共患寄生 免疫刺激 过敏原
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利用PCR-RFLP技术鉴别异尖线虫 被引量:4
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作者 郑洋妹 龚艳清 陈信忠 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2010年第4期374-378,共5页
应用PCR-RFLP技术对福建沿海海鱼中常见的简单异尖线虫、典型异尖线虫、对盲囊线虫和针蛔线虫幼虫进行鉴定.采用通用引物扩增上述4种异尖线虫幼虫的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列,对PCR产物进行回收、克隆和测序.根据序列分析结果,选... 应用PCR-RFLP技术对福建沿海海鱼中常见的简单异尖线虫、典型异尖线虫、对盲囊线虫和针蛔线虫幼虫进行鉴定.采用通用引物扩增上述4种异尖线虫幼虫的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列,对PCR产物进行回收、克隆和测序.根据序列分析结果,选用限制性内切酶HinfⅠ和RsaⅠ进行酶切,酶切产物经琼脂糖电泳分析.结果表明:同时使用HinfⅠ和RsaⅠ酶,可以将4种异尖线虫进行分类;应用特异性引物扩增这4种异尖线虫,获得了预期扩增片段.可见,根据4种线虫ITS序列建立的PCR-RFLP技术能够对这4种异尖线虫进行准确、特异和快速的鉴定. 展开更多
关键词 PCR-RFLP 简单异尖线虫 典型线 对盲囊线 针蛔线
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乌鲁木齐市售海鱼中首次检出异尖线虫 被引量:1
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作者 郭爱民 段成任 +4 位作者 杨昆明 谢志胜 焦丽 马江霞 岳城 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2018年第5期58-61,共4页
为配合检疫部门检查,2017年8月对乌鲁木齐市市售海鱼随机采样,收集寄生虫并通过形态学和分子生物学进行鉴定。从鳕鱼块中发现5只线虫,虫体无胃盲囊和肠盲囊,黑色圆柱形的胃与"Y"型的肠管以斜线相连,尾短且有一圆塔形的尾突。... 为配合检疫部门检查,2017年8月对乌鲁木齐市市售海鱼随机采样,收集寄生虫并通过形态学和分子生物学进行鉴定。从鳕鱼块中发现5只线虫,虫体无胃盲囊和肠盲囊,黑色圆柱形的胃与"Y"型的肠管以斜线相连,尾短且有一圆塔形的尾突。PCR扩增ITS基因片段获得924 bp的基因序列,测序后经BLAST比对分析显示,与简单异尖线虫(Anisakis simplex)(GenBank登录号:KY275505.1)相似性达99%,确定分离出来的虫体为简单异尖线虫。本研究在远离海洋的乌鲁木齐市发现随海鱼运输携带到新疆的异尖线虫,系异尖属线虫在新疆的首次发现和报道。 展开更多
关键词 简单异尖线虫 食品安全 鳕鱼 乌鲁木齐
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