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基于报告基因和PPARγ信号通路的药物筛选模型的建立 被引量:16
1
作者 谢洁琼 吕秋军 +3 位作者 温利青 赵金红 叶棋浓 陈振花 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期504-507,共4页
目的 建立基于报告基因和PPARγ(peroxisomeprolif erator activatedreceptorγ)信号通路的药物筛选模型,用此模型筛选具有胰岛素增敏活性的小分子化合物。方法 五种细胞分别进行瞬时转染,将含有目的片段PPRE(peroxisomeproliferatorr... 目的 建立基于报告基因和PPARγ(peroxisomeprolif erator activatedreceptorγ)信号通路的药物筛选模型,用此模型筛选具有胰岛素增敏活性的小分子化合物。方法 五种细胞分别进行瞬时转染,将含有目的片段PPRE(peroxisomeproliferatorresponseelement)和报告基因荧光素酶(Luc)的质粒及表达PPARγ的质粒共转染到细胞中,通过测定荧光素酶活力来考察马来酸罗格列酮对PPARγ信号通路的影响,选取诱导表达倍数最高的细胞株建立模型。用其他类型核受体激动剂对此模型进行特异性考察。结果 293T细胞中,荧光素酶的表达受马来酸罗格列酮的诱导倍数最高,可达4 9倍,并呈现一定的剂量依赖关系,Z′因子为0 .72。而其他各类核受体激动剂的诱导表达率均在1倍左右。马来酸罗格列酮在转染剂量范围内无促进细胞增殖的作用。结论 马来酸罗格列酮对共转染报告基因质粒和表达PPARγ质粒的293T细胞Luc的表达具有较强的诱导作用,此模型具有较好的特异性和稳定性,适用于建立筛选PPARγ激动剂的高通量筛选模型。 展开更多
关键词 PPARΓ 罗格列酮 荧光素酶 筛选模型 报告基因
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海洋放线菌杀虫抗生素的一种快速筛选模型 被引量:21
2
作者 胡志钰 刘三震 +2 位作者 黄浩 黄耀坚 苏文金 《海洋通报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期36-41,共6页
报道了以卤虫为指示动物,采用双层琼脂扩散方法构建的一种杀虫微生物筛选模型。该模型具有灵敏度高,快速简便等优点,适合于海洋微生物杀虫活性物质的早期大量初筛工作。利用该模型对1240株分离于厦门海区潮间带的放线菌进行了初... 报道了以卤虫为指示动物,采用双层琼脂扩散方法构建的一种杀虫微生物筛选模型。该模型具有灵敏度高,快速简便等优点,适合于海洋微生物杀虫活性物质的早期大量初筛工作。利用该模型对1240株分离于厦门海区潮间带的放线菌进行了初筛,杀虫阳性率为2.3%,展示了海洋微生物是杀虫活性物质研究和开发的重要来源。 展开更多
关键词 海洋微生物 杀虫抗生素 筛选模型
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10种南药植物提取物乙酰胆碱酯酶抑制活性的筛选模型研究 被引量:9
3
作者 丁运华 郭少敏 +1 位作者 刘燕 郑建灵 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期1451-1455,共5页
采用筛选模型对10种南药样品乙酸乙酯提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性进行了评价。结果表明:10种南药(益智、鸡血藤、决明子、巴戟天、溪黄草、金樱子、化橘红、佛手、绞股蓝、五指毛桃)均具有不同程度的乙酰胆碱酯酶抑制活性。当提取物... 采用筛选模型对10种南药样品乙酸乙酯提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性进行了评价。结果表明:10种南药(益智、鸡血藤、决明子、巴戟天、溪黄草、金樱子、化橘红、佛手、绞股蓝、五指毛桃)均具有不同程度的乙酰胆碱酯酶抑制活性。当提取物浓度为1.0 mg/mL时,溪黄草、益智、化橘红、绞股蓝、五指毛桃表现出较强的抑制活性,平均抑制率大于50%,分别为89.59%,77.10%,67.54%,52.62%,52.29%,其他5种南药的平均抑制率在20.81%~49.81%之间;提取物浓度为0.1 mg/mL时,溪黄草、益智、佛手仍表现出相对较强的抑制活性,平均抑制率大于25%,其他7种南药的平均抑制率在6.07%~24.78%之间。应该深入研究复方中药治疗老年痴呆的药效物质基础,加大对南药资源的开发利用。 展开更多
关键词 南药 乙酰胆碱酯酶 抑制活性 筛选模型
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人高密度脂蛋白受体表达上调剂筛选模型的建立 被引量:6
4
作者 刘晓辉 洪斌 +3 位作者 王丽非 杨媛 司书毅 李元 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期354-358,共5页
目的 建立靶向人高密度脂蛋白受体基因(CLA-1)调控序列的药物筛选模型,为筛选人高密度脂蛋白受体表达上调剂奠定基础。方法 PCR扩增CLA-1上游调控序列,构建重组报告基因质粒pGL3-CLAP,瞬时转染人肝癌细胞BEL-7402,通过检测荧光素酶报告... 目的 建立靶向人高密度脂蛋白受体基因(CLA-1)调控序列的药物筛选模型,为筛选人高密度脂蛋白受体表达上调剂奠定基础。方法 PCR扩增CLA-1上游调控序列,构建重组报告基因质粒pGL3-CLAP,瞬时转染人肝癌细胞BEL-7402,通过检测荧光素酶报告基因表达水平的变化筛选人高密度脂蛋白受体表达上调剂。结果 建立了CLA-1表达上调剂筛选模型,pGL3-CLAP与阴性对照pGL3-Basic组间差异显著(P<0.001),变异系数(CV)不超过10%。对124个化合物和800个微生物次级代谢产物进行初筛和复筛,1个化合物和3个菌株发酵液为阳性。结论 该系统可有效地应用于人高密度脂蛋白受体表达上调剂的高通量筛选。 展开更多
关键词 高密度脂蛋白受体 药物筛选模型 报告基因
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以端粒酶为靶标抗癌药物筛选模型建立及端粒酶抑制剂筛选 被引量:6
5
作者 郑晓飞 王升启 孙志贤 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期125-128,共4页
Telomerase, a ribonucleoprotein enzyme, has been found in immortalized but not in most somatic adult human tissues, and thus emerged as a novel target for cancer chemotherapy. Recently it has been found that telomeras... Telomerase, a ribonucleoprotein enzyme, has been found in immortalized but not in most somatic adult human tissues, and thus emerged as a novel target for cancer chemotherapy. Recently it has been found that telomerase is a fruitful target for oncologic drug development. A new method for screening antitumor agents by using telomerase as a target has been established according to the phenomena that the enzyme activity can be affected by some types of antitumor agents or chemicals. The telomerase was extracted from HeLa cells. The telomeric repeat amplification protocol(TRAP) was used to measure enzyme activity. Telomerase activity can be inhibited by 4 kinds of chemical compounds. 展开更多
关键词 端粒酶 抗癌药物 靶标 筛选模型 抑制剂
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害虫拒食行为调控物质的筛选模型研究 被引量:4
6
作者 尚稚珍 徐建华 +2 位作者 苏胜忠 蒋志胜 杨淑华 《农药学学报》 CAS CSCD 1999年第2期25-30,共6页
以亚洲玉米螟 (Ostrinia furnacalis)幼虫为试材 ,以电生理技术顶端记录法 ,确定栓锥感受器是拒食活性的靶标器官 ,建立拒食活性物质规范化的筛选模型 ,作为检测合成或半合成的克罗烷二萜类化合物的拒食活性。结果表明 :既可抑制其糖电... 以亚洲玉米螟 (Ostrinia furnacalis)幼虫为试材 ,以电生理技术顶端记录法 ,确定栓锥感受器是拒食活性的靶标器官 ,建立拒食活性物质规范化的筛选模型 ,作为检测合成或半合成的克罗烷二萜类化合物的拒食活性。结果表明 :既可抑制其糖电位诱发侧栓锥感受器的脉冲频率 ,亦可直接诱发中栓锥感受器特定细胞引起的脉冲频率变化 ,且与拒食行为生测法的结果基本吻合 ,成正相关。利用离体的味觉感受靶标器官的电生理方法 ,可以定性或定量检测拒食活性 ,研究构效关系 ,具有快速、灵敏。 展开更多
关键词 拒食行为调控物质 栓锥感受器 电生理技术顶端记录法 害虫 筛选模型
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人LDHA原核表达、纯化及体外抑制剂筛选模型的建立 被引量:5
7
作者 金科华 吴昕瑞 +1 位作者 王苗苗 宋思扬 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期36-40,共5页
在多数肿瘤细胞中高度表达的乳酸脱氢酶A(LDHA)与肿瘤的发生、发展和预后密切相关,筛选LDHA小分子抑制剂可提供一种富有潜力的靶向抗肿瘤策略.本研究以pET-28a为载体,构建了人LDHA表达质粒并于大肠杆菌BL21(DE3)中稳定表达,产量达到2.65... 在多数肿瘤细胞中高度表达的乳酸脱氢酶A(LDHA)与肿瘤的发生、发展和预后密切相关,筛选LDHA小分子抑制剂可提供一种富有潜力的靶向抗肿瘤策略.本研究以pET-28a为载体,构建了人LDHA表达质粒并于大肠杆菌BL21(DE3)中稳定表达,产量达到2.65mg/L.基于LDHA的催化反应建立了以丙酮酸钠和还原型烟酰胺腺嘌呤二核甘酸(NADH)为底物的筛选模型.实验结果表明:模型的LDHA最适质量浓度为60ng/mL,以质量分数0.25%草酸铵为阳性对照,筛选模型的Z因子为0.812.至此,本研究建立了LDHA抑制剂体外生化筛选模型,其成本低、可操作性强,符合高通量筛选要求,为发现新颖的LDHA抑制剂奠定了基础. 展开更多
关键词 乳酸脱氢酶A 表达 抑制剂 筛选模型
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乙酰胆碱酯酶抑制剂微量筛选模型的比较研究 被引量:17
8
作者 孙黔云 杨付梅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1387-1392,共6页
目的为新药发现阶段乙酰胆碱酯酶(acetylcholinest-erase,AChE)抑制剂的筛选提供实用的微量筛选方法。方法分别以电鳗AChE、大鼠大脑匀浆、蛇毒AChE为酶源,以96孔板为载体,在生理pH值和温度的条件下,用正交试验法研究酶浓度、底物浓度... 目的为新药发现阶段乙酰胆碱酯酶(acetylcholinest-erase,AChE)抑制剂的筛选提供实用的微量筛选方法。方法分别以电鳗AChE、大鼠大脑匀浆、蛇毒AChE为酶源,以96孔板为载体,在生理pH值和温度的条件下,用正交试验法研究酶浓度、底物浓度、反应时间、显色剂浓度对酶反应速率的影响,确定酶反应最佳条件。在研究样品溶媒DMSO对酶反应的影响和SDS终止酶反应的效果后,最终确定筛选模型运行条件并对492种贵州民族药植物提取物进行筛选研究。结果采用上述3种酶源均成功构建了微量化的AChE抑制剂筛选模型。筛选结果表明,电鳗AChE有较高的筛选灵敏度,而蛇毒AChE的筛选结果则与大鼠大脑匀浆的筛选结果有较好的一致性。结论以上述3种具有代表性的酶源构建的AChE抑制剂微量筛选模型均具备了简便、快速、可靠、经济、灵活的优点。其中电鳗AChE最适合用于新药发现阶段粗提物样品的筛选,而高纯度的蛇毒AChE更适合用于从化合物库中大规模筛选AChE抑制剂。 展开更多
关键词 乙酰胆碱酯酶 乙酰胆碱酯酶抑制剂 筛选模型 阿尔采末病
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以组织蛋白酶L为靶位的骨质疏松新药筛选模型的研究 被引量:7
9
作者 杨隽 刘斌 张月琴 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期264-266,312,共4页
对骨质疏松症分子水平上的研究发现 ,破骨细胞溶酶体向骨小腔分泌组织蛋白酶L ,进而造成以I 胶原为主要成分的骨支持蛋白分解亢进 ,成为导致骨质疏松症形成的重要因素之一。因此 ,寻找一种针对组织蛋白酶L的专一性抑制剂尤为重要。我们... 对骨质疏松症分子水平上的研究发现 ,破骨细胞溶酶体向骨小腔分泌组织蛋白酶L ,进而造成以I 胶原为主要成分的骨支持蛋白分解亢进 ,成为导致骨质疏松症形成的重要因素之一。因此 ,寻找一种针对组织蛋白酶L的专一性抑制剂尤为重要。我们以组织蛋白酶L为靶位建立了寻找专一性抑制剂筛选模型。初筛模型 :以木瓜蛋白酶为靶酶筛选出半胱胺酸蛋白酶B、L的半数抑制浓度 (IC50 )之比 (B/L)为参照系数 ,以Chymostatin为强选择性对照 (B/L >30 ) ,以Leupeptin为弱选择性对照 (B/L <10 ) ,筛选出组织蛋白酶L的专一性抑制剂。应用此模型筛选得到JF 2 6 2、JF 2 87两株阳性菌。其发酵液对L型组织蛋白酶有强烈的选择性抑制活性。经初步鉴定 ,其产生菌培养特征及生理生化特性与文献报道的几株组织蛋白酶L抑制剂产生菌不同。 展开更多
关键词 骨质疏松症 组织蛋白酶L 筛选模型
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丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂高通量筛选模型的建立及应用 被引量:4
10
作者 李健蕊 武燕彬 +3 位作者 司书毅 陈鸿珊 蒋建东 彭宗根 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期98-101,共4页
目的应用荧光共振能量转移(FRET)法检测丙型肝炎病毒(HCV)丝氨酸蛋白水解酶(NS3-4A)活性,建立HCV蛋白酶抑制剂筛选模型。方法将质粒pMAL-c2/NS3-4A转化到大肠杆菌K12TB1中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,亲和层析柱纯化得... 目的应用荧光共振能量转移(FRET)法检测丙型肝炎病毒(HCV)丝氨酸蛋白水解酶(NS3-4A)活性,建立HCV蛋白酶抑制剂筛选模型。方法将质粒pMAL-c2/NS3-4A转化到大肠杆菌K12TB1中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,亲和层析柱纯化得到麦芽糖结合的NS3-4A融合蛋白,用FRET法测定蛋白水解酶活性,建立特异性蛋白酶抑制剂筛选模型,优化反应体系,评价模型的可靠性。结果建立了HCV蛋白酶抑制剂高通量筛选模型,经优化确定了酶及底物用量。在模型可靠性评价中,Z因子高达0.80,变异系数为1.91%。蛋白酶的Km值为4.74μmol/L,测得已知HCV蛋白酶抑制剂BILN 2061的Ki值为0.30 nmol/L。结论建立的HCV丝氨酸蛋白酶抑制剂FRET法筛选模型稳定可靠,适用于高通量筛选。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 丝氨酸蛋白水解酶 高通量筛选模型 荧光共振能量转移
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基于抗氧化反应元件的药物筛选模型的建立 被引量:3
11
作者 谢玲 黄海潇 +5 位作者 张浩 熊国林 邢爽 华平 从玉文 罗庆良 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1525-1528,共4页
目的建立基于抗氧化反应元件(antioxident responseelement,ARE)和SEAP报告基因的细胞筛选模型,用此模型对金雀异黄素、芹菜苷配基、儿茶素、茨非醇4种化合物进行活性比较,观察上述化合物拮抗过氧化氢损伤的作用,寻找具有强抗氧化活性... 目的建立基于抗氧化反应元件(antioxident responseelement,ARE)和SEAP报告基因的细胞筛选模型,用此模型对金雀异黄素、芹菜苷配基、儿茶素、茨非醇4种化合物进行活性比较,观察上述化合物拮抗过氧化氢损伤的作用,寻找具有强抗氧化活性作用的黄酮类化合物。方法构建重组报告基因表达载体pARE-TAL-SEAP与对照载体分别转染HEK-293细胞,检测上述黄酮类化合物作用后对SEAP的活性和抗氧化作用的影响。结果在加入25μmol.L-1H2O2进行氧化损伤的HEK-293细胞中,加入100μmol.L-1的4种化合物进行比较时金雀异黄素的抗氧化作用最强,金雀异黄素诱导SEAP的最大表达水平较对照孔升高1.3倍;加入25μmol.L-14种化合物的抗氧化作用时茨非醇的抗氧化作用最强,茨非醇诱导SEAP的最大表达水平较对照孔升高1.5倍。结论利用此模型可以检测H2O2的氧化应激反应并可筛选到抗氧化活性强的黄酮类化合物。 展开更多
关键词 抗氧化反应元件 报告基因 药物筛选模型 黄酮类化合物
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α-葡萄糖苷酶抑制剂微量筛选模型的正交法构建和筛选 被引量:17
12
作者 杨付梅 孙黔云 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1113-1116,共4页
目的为新药发现阶段α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选提供实用的微量筛选方法。方法以α-葡萄糖苷酶为酶源,96孔板为载体,在生理pH值和温度的条件下,用正交试验法研究酶浓度、底物浓度、反应时间对酶活力的影响,确定酶反应最佳条件。在确定筛... 目的为新药发现阶段α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选提供实用的微量筛选方法。方法以α-葡萄糖苷酶为酶源,96孔板为载体,在生理pH值和温度的条件下,用正交试验法研究酶浓度、底物浓度、反应时间对酶活力的影响,确定酶反应最佳条件。在确定筛选模型运行条件后,对阳性药物和492种贵州民族药植物提取物进行筛选研究。结果采用正交试验法成功构建了实用灵敏的α-葡萄糖苷酶抑制剂微量筛选模型。492种植物提取物筛选结果表明,有145种提取物的抑制率达到了50%以上。结论本研究构建的α-葡萄糖苷酶抑制剂微量筛选模型具备了简便、快速、灵敏、高效、经济的优点,适用于大规模筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂。 展开更多
关键词 Α-葡萄糖苷酶 Α-葡萄糖苷酶抑制剂 筛选模型 药物筛选 糖尿病 正交试验
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人二型大麻受体激动剂高通量筛选模型的建立 被引量:4
13
作者 刘媛 董志 +3 位作者 肖晓秋 唐红 王乐乐 程玉洁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期194-196,共3页
目的:基于二型大麻受体(CB2)的信号传递通路,建立体外高通量筛选CB2受体激动剂的药物模型。方法:将目的基因质粒pIRES2-EGFP-CB2、报告基因质粒pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro]、内参质粒PRL-TK共转染CHO细胞,通过检测双荧光素酶报告基因的表... 目的:基于二型大麻受体(CB2)的信号传递通路,建立体外高通量筛选CB2受体激动剂的药物模型。方法:将目的基因质粒pIRES2-EGFP-CB2、报告基因质粒pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro]、内参质粒PRL-TK共转染CHO细胞,通过检测双荧光素酶报告基因的表达水平变化来筛选人CB2受体的激动剂。并对加入激动剂的浓度和作用时间进行优化及考察模型的稳定性。结果:给予10μmol/L JWH-015 6 h后能取得最大相对诱导率。成功建立CB2受体激动剂的高通量筛选模型,筛选模型Z'因子为0.81,表现为良好的稳定性。结论:成功地建立了CB2受体激动剂的筛选模型,为从中药中高通量筛选有效物质奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 CB2受体 报告基因 高通量筛选模型
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防治烟草赤星病农用抗生素筛选模型的研究 被引量:11
14
作者 丁立孝 方善康 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期249-252,共4页
为了能够快速、简便、定向地筛选出对烟草赤星病菌(Alternariaalternata)选择性强,内吸渗透性好,对植株无药害,具有实际应用价值的农用抗生素,设计采用了离体烟叶平皿叠培养新型筛选模型,与以往多采用的初筛... 为了能够快速、简便、定向地筛选出对烟草赤星病菌(Alternariaalternata)选择性强,内吸渗透性好,对植株无药害,具有实际应用价值的农用抗生素,设计采用了离体烟叶平皿叠培养新型筛选模型,与以往多采用的初筛方法相比较,该模型是一个快速。 展开更多
关键词 烟草赤星病 农用抗生素 筛选模型
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碱性脂肪酶高产菌的平板筛选模型 被引量:3
15
作者 李江华 房峻 邬显章 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期11-14,共4页
通过研究三丁酸甘油酯和丁酸对圆弧青霉白色变株PI4 2生长及产脂肪酶的影响 ,建立了碱性脂肪酶高产菌的平板筛选模型。以该模型对PI4 2进行自然分离 ,从中得到一株遗传性状稳定的高产菌 ,脂肪酶产率提高了 85%。该菌株在 2 5L罐中采用... 通过研究三丁酸甘油酯和丁酸对圆弧青霉白色变株PI4 2生长及产脂肪酶的影响 ,建立了碱性脂肪酶高产菌的平板筛选模型。以该模型对PI4 2进行自然分离 ,从中得到一株遗传性状稳定的高产菌 ,脂肪酶产率提高了 85%。该菌株在 2 5L罐中采用流加发酵工艺培养 72h ,发酵产酶水平达到 550 0U/mL。 展开更多
关键词 筛选 碱性脂肪酶 平板筛选模型 高产菌 发酵
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CHO细胞源性二肽基肽酶Ⅳ抑制剂筛选模型的建立及食药用菌活性提取物筛选 被引量:3
16
作者 张超 杨焱 +4 位作者 汪雯翰 樊华 颜梦秋 冯娜 张劲松 《食用菌学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期55-60,共6页
建立中国仓鼠卵巢(CHO)细胞来源的二肽基肽酶Ⅳ(Dipeptidyl peptidase IV,DPPIV)抑制剂筛选模型并对多种食药用菌提取物及萃取物抑制DPPIV活性的效果进行研究。以H-甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺(H-Gly-pNA·HCl)为反应底物,通过发色底物... 建立中国仓鼠卵巢(CHO)细胞来源的二肽基肽酶Ⅳ(Dipeptidyl peptidase IV,DPPIV)抑制剂筛选模型并对多种食药用菌提取物及萃取物抑制DPPIV活性的效果进行研究。以H-甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺(H-Gly-pNA·HCl)为反应底物,通过发色底物法检测CHO细胞来源DPPIV的活性,优化的筛选模型条件为:底物浓度90mmol/L、显色时间60min、孵育温度37℃、pH 7.6,阳性对照药物Ile-Pro-Ile的最佳作用浓度5mmol/L。利用此模型检测供试样品抑制CHO细胞源性DPPIV活性结果表明,鲍姆木层孔菌(Phellinus baumii)和灵芝(Ganoderma lucidum)醇提物的抑制效果明显好于其他7种食用菌;鲍姆木层孔菌及灵芝的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇等四种萃取物在10g/mL和100g/mL浓度下均具有一定抑制效果,其中鲍姆木层孔菌及灵芝的乙酸乙酯萃取物抑制效果较好。 展开更多
关键词 二肽基肽酶Ⅳ抑制剂 筛选模型 食药用菌 Ⅱ型糖尿病
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以大肠埃希氏菌肽脱甲酰基酶为靶点的高通量筛选模型的建立(英文) 被引量:4
17
作者 唐先兵 司书毅 张月琴 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期621-626,共6页
本文用 PCR法从大肠埃希氏菌 K-12中克隆出肽脱甲酰基酶 (peptide deformylase,PDF)基因 ,通过测序确证与文献报道的 pdf基因序列完全一致。将 p df连接到原核蛋白表达载体 p ET-3 0 -a(+ )上 ,并转化到大肠埃希氏菌 BL 2 1(DE3 )菌株中... 本文用 PCR法从大肠埃希氏菌 K-12中克隆出肽脱甲酰基酶 (peptide deformylase,PDF)基因 ,通过测序确证与文献报道的 pdf基因序列完全一致。将 p df连接到原核蛋白表达载体 p ET-3 0 -a(+ )上 ,并转化到大肠埃希氏菌 BL 2 1(DE3 )菌株中 ,IPTG诱导表达。过量表达的 PDF酶用 Q Sepharose HP离子交换柱和 Superdex 75纯化得到高纯度 Ni-PDF。应用荧光测试仪Polar Fluostar检测 PDF对底物 For-Met-Ala-Ser的水解活性 ,PDF酶的已知抑制剂放线酰胺素 (actinonin)为阳性对照 ,通过优化酶反应条件 ,建立了以 展开更多
关键词 肽脱甲酰基酶 高通量筛选模型 放线酰胺素
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作用于铜绿假单胞菌外排泵的药物筛选模型的建立及初步应用 被引量:2
18
作者 王玉峰 余利岩 +2 位作者 杨喆 左联 姚天爵 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期6-10,共5页
铜绿假单胞菌是耐药性十分突出的一类院内感染条件致病革兰氏阴性细菌 ,根据外排泵是铜绿假单胞菌产生耐药性的主要原因这一原理 ,以铜绿假单胞菌的外排泵为靶点 ,用过量表达外排泵的铜绿假单胞菌 Y5和外膜微孔蛋白 (Opr D2 )缺陷菌株 7... 铜绿假单胞菌是耐药性十分突出的一类院内感染条件致病革兰氏阴性细菌 ,根据外排泵是铜绿假单胞菌产生耐药性的主要原因这一原理 ,以铜绿假单胞菌的外排泵为靶点 ,用过量表达外排泵的铜绿假单胞菌 Y5和外膜微孔蛋白 (Opr D2 )缺陷菌株 72 0 8以及铜绿假单胞菌标准菌株 PAO1建立了一个作用于铜绿假单胞菌外排泵的药物筛选模型。应用此模型可以初筛作用于铜绿假单胞菌外排泵的药物以及与现有已知的抗生素有协同作用的活性物质的筛选。应用所建立的方法从 2 44 9株微生物发酵液中 (真菌 170 0株 ,放线菌70 0株 ,海洋细菌 49株 )筛选得到 4株阳性菌 ,多次发酵表明这 4株阳性菌产生抗铜绿假单胞菌的活性物质的性质比较稳定 。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 筛选模型 外排泵 耐药性
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人离体骨肉瘤组织血管噬菌体肽库筛选模型的建立及其意义 被引量:3
19
作者 李中齐 史占军 +1 位作者 郝文波 吕海 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期212-214,共3页
目的建立人离体骨肉瘤血管亲和筛选模型。方法(1)建立模型。术前对患肢局部行数字减影造影检查,标记肿瘤固有动脉大致走行,术后小心修剪,并连接类似于Langendorff的灌流装置,监控模型血管内的pH值、温度、氧分压等;(2)对噬菌体十二肽库... 目的建立人离体骨肉瘤血管亲和筛选模型。方法(1)建立模型。术前对患肢局部行数字减影造影检查,标记肿瘤固有动脉大致走行,术后小心修剪,并连接类似于Langendorff的灌流装置,监控模型血管内的pH值、温度、氧分压等;(2)对噬菌体十二肽库进行筛选。结果28例骨肉瘤离体标本均建模成功,可直接用于灌流实验,并筛选出具有较高特异性的亲和短肽(基序为RLTR),各项指标显示离体骨肉瘤较好模拟了人体内的环境。结论建立人离体骨肉瘤血管亲和筛选模型是可行的,可直接用于对噬菌体随机肽库的亲和筛选,为骨肉瘤的靶向化疗提供参考。 展开更多
关键词 噬菌体 肽库 骨肉瘤 体内生物淘筛 亲和筛选模型
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甜瓜白粉病防治药剂活体筛选模型研究 被引量:2
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作者 所凤阅 唐莎莎 +2 位作者 石延霞 谢学文 李宝聚 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期893-897,I0004,共6页
【目的】寻找新的甜瓜白粉病杀菌剂筛选方法。【方法】在不同品种和不同部位的甜瓜叶片上接种白粉病菌,并在不同的温度和光照条件下培养。【结果】选用厚皮甜瓜真叶叶盘(4cm×2cm)为试材,从叶盘背面喷雾接种白粉病菌的孢子悬浮... 【目的】寻找新的甜瓜白粉病杀菌剂筛选方法。【方法】在不同品种和不同部位的甜瓜叶片上接种白粉病菌,并在不同的温度和光照条件下培养。【结果】选用厚皮甜瓜真叶叶盘(4cm×2cm)为试材,从叶盘背面喷雾接种白粉病菌的孢子悬浮液,孢子浓度为3×10^4个·mL^-1,处理后的叶盘置于铺有湿滤纸的密封培养皿(9cm×9cm)中,RH80%~90%,培养条件为温度20℃,光照12h·d^-1。【结论】建立出一种甜瓜白粉病防治药剂活体微量筛选模型,为新合成化合物杀菌剂活忡的筛洗槔供了新方法。 展开更多
关键词 甜瓜白粉病 活体微量筛选模型 离体叶盘
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