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等温多自配引发扩增技术快速检测学校餐饮中三种食源性致病菌 被引量：3
1
作者 焦强 陈万胜 +2 位作者 周楠 张庆发 刘智勇 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2023年第18期371-377,共7页
目的:本文研究了一种适合学校餐饮中快速鉴别三种食源性致病菌的检测方法。方法:基于等温多自配引发扩增技术(isothermal multiple self-matching-initiated amplification,IMSA),选择沙门氏菌的invA基因、大肠埃希氏菌O157:H7/NM的rfb... 目的:本文研究了一种适合学校餐饮中快速鉴别三种食源性致病菌的检测方法。方法:基于等温多自配引发扩增技术(isothermal multiple self-matching-initiated amplification,IMSA),选择沙门氏菌的invA基因、大肠埃希氏菌O157:H7/NM的rfbE基因和单核细胞增生李斯特氏菌的prfA基因设计特异性引物,检测菌液灵敏度、特异性、最短增菌时间、最低含菌量检出限等指标;以食品安全国家标准食品微生物学检验(GB/T 4789.4-2016、GB/T 4789.30-2016、GB/T 4789.36-2016)为参考方法,比较两种方法的一致性。结果:该方法对沙门氏菌、大肠埃希氏菌O157:H7/NM和单核细胞增生李斯特氏菌的菌液灵敏度分别为2.14×10^(3)、2.79×10^(3)和3.62×10^(3)CFU/mL;特异性高达100%;人工污染最短的增菌时间分别为6、8和8 h;最低含菌量检出限分别为2.14、2.79和3.62 CFU/25 g;74例食品样本的IMSA法结果与国标法一致性达100%。结论:IMSA技术检测食源性致病菌的灵敏度高、特异性强、结果准确,可在短时间内完成食品中三种致病菌的检测,适合于学校餐饮中致病菌的快速鉴别。 展开更多
关键词 沙门氏菌 大肠埃希氏菌 O157:H7/NM 单核细胞增生李斯特氏菌 等温多自配引发扩增技术
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基于重组酶介导等温核酸扩增技术快速检测食品中骆驼源性成分的方法建立及评价
2
作者 周臣清 张娟 +3 位作者 綦艳 赵玲 黄宝莹 杨纯佳 《中国乳品工业》 北大核心 2025年第2期75-80,共6页
文章开发一种基于重组酶介导等温核酸扩增技术(Recombinase Aided Amplification,RAA)的方法,实现对食品中骆驼源性成分快速检测。针对骆驼细胞色素B(Cytochrome b,Cyt b)基因设计特异性引物,对建立的RAA体系优化其反应扩增条件,评估其... 文章开发一种基于重组酶介导等温核酸扩增技术(Recombinase Aided Amplification,RAA)的方法,实现对食品中骆驼源性成分快速检测。针对骆驼细胞色素B(Cytochrome b,Cyt b)基因设计特异性引物,对建立的RAA体系优化其反应扩增条件,评估其特异性和灵敏度,并用建立的RAA法与GB/T 38164标准方法分别对24份市售骆驼制品进行检测并比对结果。结果表明,本研究建立的RAA法特异性强,乳及乳制品检出限为1.0%,肉及肉制品检出限为0.1%,且2种方法对24份骆驼乳肉及其制品检测结果一致。因此,本研究开发的RAA方法具有快速、特异性强、灵敏度高、操作简单等优点,市场应用前景广阔。 展开更多
关键词 重组酶介导等温核酸扩增技术 骆驼源性成分 细胞色素B基因 快速检测
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环介导等温扩增技术在真菌检测中的应用研究进展
3
作者 段吉燕 舒平 +1 位作者 郭启新 徐幸 《食品安全质量检测学报》 2025年第4期284-290,共7页
真菌是日常生活中较为常见的一种微生物,与我们的生活息息相关、有利有弊。其有害影响体现在多个方面,例如有些真菌会导致农作物病害而减产,误食毒蕈会引起食物中毒,威胁人们的生命安全,此外致病真菌还会引起真菌感染等疾病危害人们的... 真菌是日常生活中较为常见的一种微生物,与我们的生活息息相关、有利有弊。其有害影响体现在多个方面,例如有些真菌会导致农作物病害而减产,误食毒蕈会引起食物中毒,威胁人们的生命安全,此外致病真菌还会引起真菌感染等疾病危害人们的身体健康,因此能快速、准确地检测出病原真菌和识别出毒蕈是非常重要的。环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是近几年广泛使用的一种核酸扩增技术,该技术使用DNA聚合酶和特异性引物,在恒温条件下,短时间内高效率扩增核酸,相较于传统的分子生物学方法,该方法对仪器要求不高,具有快速、灵敏、简单等特点。目前LAMP已广泛应用于细菌、真菌和病毒等微生物的检测,本文对LAMP在真菌检测方面的应用进行总结,以期为相关研究提供参考。 展开更多
关键词 环介导等温扩增技术 真菌 核酸扩增
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等温扩增荧光技术用于检测阪崎肠杆菌的研究
4
作者 段真文 许绍坤 +2 位作者 姜仁普 梁振瑞 张薇 《现代食品》 2025年第5期161-164,共4页
目的:针对阪崎肠杆菌建立一种快速简便的检测方法。方法:通过对阪崎肠杆菌Esa16S基因序列保守区设计引物,建立阪崎肠杆菌的检测方法;采用直扩法提取核酸,通过引物筛选、最佳反应体系、反应条件的优化、特异性验证与常规普通聚合酶链式反... 目的:针对阪崎肠杆菌建立一种快速简便的检测方法。方法:通过对阪崎肠杆菌Esa16S基因序列保守区设计引物,建立阪崎肠杆菌的检测方法;采用直扩法提取核酸,通过引物筛选、最佳反应体系、反应条件的优化、特异性验证与常规普通聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)进行灵敏度对比实验。结果:EBSZ-2为最佳引物组;最佳反应体系配比为15∶6∶4;最佳反应温度为65℃。与常规PCR检测法比较,等温扩增荧光技术的灵敏度为5.76×10^(-4)ng·μL^(-1),是常规方法的1000倍且具有良好的特异性。结论:等温扩增荧光技术可以用来检测阪崎肠杆菌,该技术具有特异性强、灵敏度高、操作简单等优点,能实现快速检测和现场检测。 展开更多
关键词 等温扩增荧光技术 阪崎肠杆菌 特异性 灵敏度
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等温扩增技术在水产品寄生虫检测中的应用研究进展
5
作者 孙晓红 张妮 +3 位作者 赵嘉怡 李达容 赵勇 蓝蔚青 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期383-388,共6页
水产品中寄生虫可引起食源性疾病,已成为影响食品安全的重要因素之一。近年来,基于传统分子生物学发展而来的等温扩增技术以其恒温、高效、耗时短、不过度依赖设备和仪器等优点,逐渐应用于分子诊断和疾病检测。该文在介绍等温扩增技术... 水产品中寄生虫可引起食源性疾病,已成为影响食品安全的重要因素之一。近年来,基于传统分子生物学发展而来的等温扩增技术以其恒温、高效、耗时短、不过度依赖设备和仪器等优点,逐渐应用于分子诊断和疾病检测。该文在介绍等温扩增技术原理与特点的基础上,综述了其在水产品中寄生虫检测方面的应用研究进展,提出存在问题与解决办法,并展望了等温扩增技术的应用前景,以期为快检技术在水产品质量安全控制技术中的研究开发提供理论参考。 展开更多
关键词 水产品 寄生虫 环介导等温扩增技术 重组酶聚合酶等温扩增技术
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基于RPA等温扩增的松材线虫快速检测技术体系建立
6
作者 张伟 车吉明 +3 位作者 理永霞 马健 李东振 张星耀 《中国森林病虫》 北大核心 2024年第3期1-8,共8页
利用松材线虫Bursaphelenchus xylophilus基因组分析和等温扩增技术,设计生产松材线虫野外快速检测技术产品并测试其效果。结果表明:比较分析松材线虫和拟松材线虫Bursaphelenchus mucronatus基因组发现松材线虫特异性基因Bx-gene12,以... 利用松材线虫Bursaphelenchus xylophilus基因组分析和等温扩增技术,设计生产松材线虫野外快速检测技术产品并测试其效果。结果表明:比较分析松材线虫和拟松材线虫Bursaphelenchus mucronatus基因组发现松材线虫特异性基因Bx-gene12,以此为基础设计特异性扩增引物和探针,对采集自不同地区的松材线虫、拟松材线虫和松树内其他线虫株系采用研磨颗粒以1500 r/min转速震荡5 min的破碎方法有效释放线虫DNA,40℃等温扩增15 min反应条件下可有效区分松材线虫和其他线虫,检测灵敏度达到100 fg或1条线虫;该快速检测方法在25 min内有效检测出染病黑松Pinus thunbergii和赤松Pinus densiflora松木内的松材线虫。利用RPA等温扩增技术实现25 min内对野外环境下松材线虫的快速检测,可为松材线虫病及时有效防控提供支持。 展开更多
关键词 松材线虫 快速检测 等温扩增 技术体系
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向日葵核盘菌环介导等温扩增检测技术
7
作者 常海城 李虎 +2 位作者 郑立秋 李海燕 孟庆林 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1412-1420,共9页
应用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立了基于颜色变化、反应灵敏的向日葵核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)检测方法。筛选出检测核盘菌的LAMP特异性引物,建立了LAMP反应体系与优化条件,并进行灵... 应用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立了基于颜色变化、反应灵敏的向日葵核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)检测方法。筛选出检测核盘菌的LAMP特异性引物,建立了LAMP反应体系与优化条件,并进行灵敏度和特异性试验。结果表明,以F3-1(ATGCCTGTTCGAGCGTCA)、B3-1(AGTTCAGC-GGGTATCCCTA)、FIP-1(GCCGCCACTGATTTTAGAGCCTTTTCAACCCTCAAGCTCAGC)、BIP-1(TCGTTACAG-GTTCTCGGTGTGCCCTGATCCGAGGTCAACCAT)为引物,反应体系中10×Bst Reaction Buffer 2.4μL、dNTP Mixture1.28 mmol·L^(-1)、F3/B3 0.15μmol·L^(-1)、FIP/BIP 0.8μmol·L^(-1)、HNB 150μmol·L^(-1)、MgSO_(4) 1.2 mmol·L^(-1)、Bst DNA聚合酶0.19 U·L^(-1)、ddH_(2)O 13.4μL等温条件下(64℃)进行核酸扩增反应1 h,即可通过肉眼直接目测试验结果,且琼脂糖凝胶电泳验证显示清晰的梯形扩增结果。灰葡萄孢、疫霉、腐霉等其他供试菌株中均没有观察到这些现象,对核盘菌的特异性较强;LAMP技术最低检测限为1×10^(-3) ng·μL^(-1)。该方法的建立为向日葵核盘菌的检疫及其所致病害的快速诊断提供了新的技术。 展开更多
关键词 向日葵核盘菌 环介导等温扩增技术 羟基萘酚蓝(HNB)
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环介导等温扩增技术结合乳胶微球试纸条检测副溶血性弧菌 被引量：3
8
作者 贾博涵 张琳 +3 位作者 陈耀 黄小桃 谭有将 关烨锋 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第1期74-84,共11页
目的建立环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术结合乳胶微球试纸条(latex microsphere test strips,LMTS)快速检测副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的方法。方法以副溶血性弧菌的不耐热溶血素(TLH... 目的建立环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术结合乳胶微球试纸条(latex microsphere test strips,LMTS)快速检测副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的方法。方法以副溶血性弧菌的不耐热溶血素(TLH)基因作靶标设计引物,6-羧基荧光素(6-carboxyfluorescein,6-FAM)和生物素(Biotin)标记引物,对体系各项反应参数进行优化;将新鲜菌液作10倍梯度稀释后进行LAMP、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和实时荧光定量LAMP(quantitative LAMP,qLAMP)反应,比较三者的敏感度;对副溶血性弧菌、大肠埃希氏菌、福氏志贺氏菌、粪链(肠)球菌、单核细胞增生李斯特菌、鼠伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌进行LAMP扩增,验证其特异性;虾样品用菌液进行模拟污染,分析LAMP-LMTS的可靠性。结果LAMP-LMTS方法的灵敏度可达4.16×10^(2)copies/μL,与qLAMP、LAMP-琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis,AGE)方法结果一致,检出限要比利用外引物建立的PCR方法低10倍的拷贝数,灵敏度更高。结论该方法检测副溶血性弧菌具有检测时间短、灵敏度高、特异性强、操作简便等特点,可应用于基层实验室、应急检测或现场监测,具有较高的推广价值。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 乳胶微球试纸条 环介导等温扩增技术 快速检测
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核酸等温扩增技术在病毒检测中的应用 被引量：1
9
作者 肖航 王小燕 +3 位作者 邓兆佳 廖文静 谢文菁 彭汉勇 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1-17,共17页
病毒是引发人类疾病的主要病原体之一.传统的聚合酶链式反应(PCR)技术虽然被广泛应用于病毒分子诊断,但其对温度的要求较为严格,限制了其在现场诊断中的应用.为了满足现场快速诊断的需求,核酸等温扩增技术得到快速发展,其无需热循环,可... 病毒是引发人类疾病的主要病原体之一.传统的聚合酶链式反应(PCR)技术虽然被广泛应用于病毒分子诊断,但其对温度的要求较为严格,限制了其在现场诊断中的应用.为了满足现场快速诊断的需求,核酸等温扩增技术得到快速发展,其无需热循环,可以在恒定温度下实现核酸扩增,可适应不同的应用场景.本文综合评述了等温扩增技术在病毒检测领域的最新进展,从病毒样本采集、核酸提取、等温扩增检测等几个方面分别进行阐述,探讨了酶辅助等温扩增技术、无酶等温扩增技术以及与多体系串联的级联扩增技术的原理、关键参数及其病毒检测应用,并对比了市场上相关试剂盒的特点.此外,讨论了当前核酸等温扩增技术在病原体检测应用中面临的一些难题,如提取效率、稳定性和成本等,提出了未来的发展方向,为进一步改善现场诊断效率提供了新的思路. 展开更多
关键词 等温扩增技术 CRISPR检测 核酸扩增 环境病毒 病毒提取
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交叉引物等温扩增技术检测志贺氏菌 被引量：17
10
作者 祁军 张霞 +3 位作者 蒋刚强 蔡国瑞 董亚学 郑文杰 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2013年第11期65-67,76,共4页
建立一种新型志贺氏菌简洁快速检测方法——交叉引物恒温扩增检测方法。针对志贺氏菌的四个血清型设计保守的特异性引物及探针,建立交叉引物等温扩增法并应用免疫金标试纸条进行检测。用6株志贺氏菌,32株近源菌进行特异性试验;通过纯菌... 建立一种新型志贺氏菌简洁快速检测方法——交叉引物恒温扩增检测方法。针对志贺氏菌的四个血清型设计保守的特异性引物及探针,建立交叉引物等温扩增法并应用免疫金标试纸条进行检测。用6株志贺氏菌,32株近源菌进行特异性试验;通过纯菌液计数、干扰菌试验检测进行灵敏度验证。建立方法具有较好的特异性,增菌液及干扰菌检测灵敏度均为103cfu/mL。建立的交叉引物恒温检测方法灵敏度高,可满足对志贺氏菌进行现场快速筛查目的。 展开更多
关键词 志贺氏菌 交叉引物 等温扩增技术
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环介导等温扩增检测技术的应用与方法改进 被引量：12
11
作者 杨粤 付博宇 +2 位作者 张蕴哲 马晓燕 张伟 《食品安全质量检测学报》 CAS 2016年第4期1526-1530,共5页
环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是近些年发展起来的一种新型核酸扩增技术,其原理是利用在线软件设计4条特异性引物,在具有强链置换活性的DNA聚合酶作用下,使模板两端引物的结合处循环出现环状单链结构,... 环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是近些年发展起来的一种新型核酸扩增技术,其原理是利用在线软件设计4条特异性引物,在具有强链置换活性的DNA聚合酶作用下,使模板两端引物的结合处循环出现环状单链结构,以实现恒温条件下的连续快速扩增,该方法具有特异性强、灵敏度高、耗时短且无需昂贵的热循环设备等优点。目前该技术在国内外已经广泛应用于细菌、病毒及寄生虫等病原体的检测以及鉴定胚胎性别。本文从LAMP技术的原理、方法改造、检测应用以及与其他检测方法的比较这4方面进行综述,为今后LAMP技术的应用提供理论依据并对未来的发展进行了展望。 展开更多
关键词 环介导等温扩增技术 核酸扩增 检测方法 应用
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利用环介导等温扩增技术对奶粉中阪崎肠杆菌进行检测 被引量：12
12
作者 张宏伟 于佳 +6 位作者 郑文杰 刘超 赵良娟 赵宏 侯丽平 阎煜 刘寅 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2009年第6期114-117,共4页
利用阪崎肠杆菌16S-23S rDNA间区(ITS)序列,在比较阪崎肠杆菌与其近源株ITS序列的基础上,设计了4条阪崎肠杆菌LAMP检测特异性引物,建立了奶粉中阪崎肠杆菌LAMP检测方法。用15株阪崎肠杆菌,61株近源菌验证试验表明,所建立的LAMP方法准确... 利用阪崎肠杆菌16S-23S rDNA间区(ITS)序列,在比较阪崎肠杆菌与其近源株ITS序列的基础上,设计了4条阪崎肠杆菌LAMP检测特异性引物,建立了奶粉中阪崎肠杆菌LAMP检测方法。用15株阪崎肠杆菌,61株近源菌验证试验表明,所建立的LAMP方法准确且灵敏度高。加菌试验表明,奶粉样品中阪崎肠杆菌检测低限为1.2CFU/100g。新建的LAMP方法与FDABAM方法比较试验表明,两种方法的检测结果完全符合。 展开更多
关键词 奶粉 阪崎肠杆菌 环介导等温扩增技术
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环介导等温扩增技术及其在病原检测中的应用 被引量：9
13
作者 潘树德 刘宝山 +3 位作者 刘金铃 李学俭 边连全 付静涛 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第2期74-77,共4页
近年来，环介导等温扩增技术已经被开发利用。它采用能特异识别靶序列上6个位点的4条引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶，在恒温条件（60℃～65℃）下，不到1h的时间里进行核酸扩增，其扩增效率可达到10^9～10^10个数量级，具有特异... 近年来，环介导等温扩增技术已经被开发利用。它采用能特异识别靶序列上6个位点的4条引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶，在恒温条件（60℃～65℃）下，不到1h的时间里进行核酸扩增，其扩增效率可达到10^9～10^10个数量级，具有特异性强、等温灵敏、操作简单、产物易检测等优点。环介导等温扩增法已经被用来快速检测动物病原（病毒、细菌、寄生虫）。论文就环介导等温扩增法的原理、特点及其在动物病原快速检测中的应用等做了简要的综述。 展开更多
关键词 环介导等温扩增技术 病原检测 应用
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等温扩增技术的原理及其在病原检测中的应用 被引量：13
14
作者 高瑶 孟星宇 +2 位作者 罗玉子 胡永浩 仇华吉 《动物医学进展》 北大核心 2017年第8期103-109,共7页
等温扩增技术(IAT)作为一种新型的体外核酸扩增技术,与PCR相比,该技术具有特异性强、敏感性高、简单便捷和成本低等优点。目前,等温扩增技术在病原检测方面得以应用,论文对环介导等温扩增(LAMP)、依赖解旋酶的等温扩增(HDA)、依赖核酸... 等温扩增技术(IAT)作为一种新型的体外核酸扩增技术,与PCR相比,该技术具有特异性强、敏感性高、简单便捷和成本低等优点。目前,等温扩增技术在病原检测方面得以应用,论文对环介导等温扩增(LAMP)、依赖解旋酶的等温扩增(HDA)、依赖核酸序列的等温扩增(NASBA)、链置换等温扩增(SDA)、交叉引物扩增(CPA)5种扩增技术的原理、特点及应用分别予以介绍,为该技术在病原检测的实际应用提供参考。 展开更多
关键词 等温扩增技术 原理 病原检测
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环介导等温扩增技术检测食品中铜绿假单胞菌 被引量：11
15
作者 刘伟 侯丽萍 +3 位作者 赵良娟 曲鹏 郑文杰 张宏伟 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2012年第5期140-142,共3页
建立食品中铜绿假单胞菌环介导等温扩增(LAMP)检测方法。利用铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)基因序列,设计3对铜绿假单胞菌LAMP检测特异性引物,用36株铜绿假单胞菌,14株近源菌验证方法的特异性。建立的LAMP方法特异性好,灵敏度达到2.2 cfu/10... 建立食品中铜绿假单胞菌环介导等温扩增(LAMP)检测方法。利用铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)基因序列,设计3对铜绿假单胞菌LAMP检测特异性引物,用36株铜绿假单胞菌,14株近源菌验证方法的特异性。建立的LAMP方法特异性好,灵敏度达到2.2 cfu/100 g^3.5 cfu/100 g。建立的食品中铜绿假单胞菌LAMP检测方法特异性好,灵敏度高,适用于的检测食品中的铜绿假单胞菌。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 PEA基因 环介导等温扩增技术(LAMP) 食品
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一种新的等温扩增技术检测阪崎肠杆菌 被引量：7
16
作者 张霞 吴冬雪 +5 位作者 曲鹏 刘红梅 张宏伟 高旗利 郑文杰 王硕 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第2期187-190,共4页
目的：建立一种新型阪崎肠杆菌快速筛选检测方法——交叉引物恒温扩增结合免疫金标检测方法。方法：针对阪崎肠杆菌16S-23SrDNA间区序列设计特异性引物及探针，建立交叉引物等温扩增法，利用免疫金标试纸条对结果进行检测。用18株阪崎... 目的：建立一种新型阪崎肠杆菌快速筛选检测方法——交叉引物恒温扩增结合免疫金标检测方法。方法：针对阪崎肠杆菌16S-23SrDNA间区序列设计特异性引物及探针，建立交叉引物等温扩增法，利用免疫金标试纸条对结果进行检测。用18株阪崎肠杆菌及其他36株近源菌进行特异性试验；通过定量DNA、纯菌液计数、添加干扰菌检测进行灵敏度验证。结果：建立方法具有很好的特异性；增菌液检测灵敏度为10^1CFU／mL，DNA检测灵敏度为10^0fg／test。结论：建立的交叉引物恒温扩增结合免疫金标检测方法特异性好、灵敏度高，不需要复杂仪器，对口岸快速筛查、基层或偏远经济不发达地区顺利开展检测具有实际意义。 展开更多
关键词 阪崎肠杆菌 等温扩增技术
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环介导等温扩增技术在动物传染病诊断中的应用进展 被引量：11
17
作者 陈伯祥 杨明 +1 位作者 常亮 李杰 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第4期90-96,共7页
环介导等温扩增技术是一门新兴的分子生物学检测技术,已广泛用于各种微生物的检测。通过对环介导等温扩增技术的原理、引物设计遵循原则、操作程序简要说明,对近年来环介导等温扩增技术在细菌、RNA病毒、DNA病毒引起的动物传染病中研究... 环介导等温扩增技术是一门新兴的分子生物学检测技术,已广泛用于各种微生物的检测。通过对环介导等温扩增技术的原理、引物设计遵循原则、操作程序简要说明,对近年来环介导等温扩增技术在细菌、RNA病毒、DNA病毒引起的动物传染病中研究和具体应用进展做了重点综述,并对其研究应用前景进行了展望,为该技术广泛应用于动物传染病的诊断提高参考。 展开更多
关键词 环介导等温扩增技术 动物传染病 诊断
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环介导等温扩增技术快速检测志贺氏菌的研究 被引量：9
18
作者 马晓燕 张会彦 +3 位作者 宋明明 张先舟 王羽 张伟 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第14期8191-8193,8240,共4页
[目的]利用环介导等温扩增技术快速检测志贺氏菌。[方法]以志贺氏菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)作为靶序列,设计引物,优化Mg2+浓度、Bst酶浓度等反应条件,建立LAMP反应体系。[结果]确定了环介导等温扩增技术检测志贺氏菌的适宜反应条件;... [目的]利用环介导等温扩增技术快速检测志贺氏菌。[方法]以志贺氏菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)作为靶序列,设计引物,优化Mg2+浓度、Bst酶浓度等反应条件,建立LAMP反应体系。[结果]确定了环介导等温扩增技术检测志贺氏菌的适宜反应条件;该法检测志贺氏菌的灵敏度为62 cfu/ml。[结论]该研究初步建立了一种利用LAMP快速检测志贺氏菌的方法,为食品中志贺氏菌快速检测构建了一个技术平台。 展开更多
关键词 环介导等温扩增技术 检测 志贺氏菌
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环介导等温扩增技术检测肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌 被引量：22
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作者 刘毅 黄曙海 +4 位作者 谭慧媚 戴广明 蓝兰 姚贻强 陈洵 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期24-26,共3页
目的建立环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测肺结核患者痰标本和分枝杆菌阳性培养物中的结核分枝杆菌(MTB)。方法选择临床可疑肺结核患者痰标本121份、MTB阳性分离物14份,非结核分枝杆菌(NTM)阳性分... 目的建立环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测肺结核患者痰标本和分枝杆菌阳性培养物中的结核分枝杆菌(MTB)。方法选择临床可疑肺结核患者痰标本121份、MTB阳性分离物14份,非结核分枝杆菌(NTM)阳性分离物14种共31株,用涂片抗酸染色镜检、罗氏固体培养基培养、LAMP技术分别进行检测,用LAMP技术对人MTB标准菌株H37Rv及卡介苗(BCG)进行检测,判断LAMP检出限并评价敏感性和特异性。结果涂片法抗酸杆菌检出率为38.02%(46/121),培养法MTB检出率为42.15%(51/121),LAMP法MTB检出率为49.28%(56/121),差异无统计学意义(χ2分别为3.146和1.247,P均>0.05)。对121例可疑肺结核患者痰标本进行MTB检测,以罗氏固体培养基培养结果为金标准,LAMP检测结果的敏感性为92.16%(47/51),特异性为87.14%(61/70),二者无显著性差异(χ2=1.247,P>0.05),且一致性强(kappa=0.78,P<0.01)。LAMP能准确分辨MTB和NTM阳性分离物,对H37Rv、BCG检测结果均为阳性;对H37Rv菌株的检出限为120 CFU/mL。结论 LAMP检测MTB敏感性和特异性高,操作简便易行、快速准确,不需要昂贵的检验设备,适于基层医院结核病诊断的推广和应用。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 非结核分枝杆菌 痰标本 环介导等温扩增技术
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环介导等温扩增技术在鸭源成分检测中的研究 被引量：3
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作者 吴潇 吕贝贝 +6 位作者 蒋玮 白蓝 武国干 王金斌 王荣谈 潘爱虎 唐雪明 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期126-133,共8页
为了建立肉产品中鸭源成分的现场快速检测技术,根据动物种间特异性的原则,筛选出一对品种特异的PCR引物,在此引物扩增片段的基础上,设计了环介导等温扩增(LAMP)引物序列,能特异检测鸭源成分。通过条件优化实验,发现在25μL的扩增体系中... 为了建立肉产品中鸭源成分的现场快速检测技术,根据动物种间特异性的原则,筛选出一对品种特异的PCR引物,在此引物扩增片段的基础上,设计了环介导等温扩增(LAMP)引物序列,能特异检测鸭源成分。通过条件优化实验,发现在25μL的扩增体系中,内外引物浓度比为1∶4,温度为63.5℃,MgSO4添加量为5mM/μL,dNTPs添加量为1.75mM/μL,BstDNA聚合酶添加量为0.4U/μL,甜菜碱添加量为0.25μmol/μL,LAMP反应时间为30min时,LAMP检测体系检测效果达到最优,鸭肉DNA的检测灵敏度可达到10pg/μL。对牛羊肉中鸭源成分比例的检测灵敏度为0.0001%。应用该方法对上海市闵行区市场中的牛羊肉产品进行抽样检测,结果从21份样品中成功检测出5份含鸭源成分的混合肉。本研究建立的LAMP检测方法灵敏、快捷,可以实现鸭源成分的现场速测,为肉制品市场的监管提供了一种新方法。 展开更多
关键词 牛、羊肉制品 等温扩增技术 环介导等温扩增技术 可视化检测
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