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用Cre/LoxP和CRISPR基因工程技术构建猪肌肉生长抑制素双等位基因敲除细胞系
被引量：
3
1
作者
綦世金
毕延震
+6 位作者
刘西梅
华文君
郑新民
李奎
唐中林
华再东
陈彬
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第3期311-318,共8页
肌肉生长抑制素(myostatin,Mstn)基因失活可引起哺乳动物的肌肉增生,但其调控机制尚不清楚,且缺乏可靠的试验材料验证Mstn相关分子通路的变化。本研究所用PK3108细胞系是在野生型PK15细胞系的基础上成功靶向敲除一条等位基因,在其靶位...
肌肉生长抑制素(myostatin,Mstn)基因失活可引起哺乳动物的肌肉增生,但其调控机制尚不清楚,且缺乏可靠的试验材料验证Mstn相关分子通路的变化。本研究所用PK3108细胞系是在野生型PK15细胞系的基础上成功靶向敲除一条等位基因,在其靶位点敲入标记基因,敲除了204bp的外显子3序列,LoxP锚定在其标记基因两侧。利用Cre/LoxP重组酶删除系统删除插入PK3108Mstn靶位点的标记,借助流式细胞仪和荧光蛋白甄别得到无标记的过渡型细胞系PK3108-2。将Cas9/sgRNA表达载体和供体DNA共转染PK3108-2,借助G418抗性筛选和倒置荧光显微镜挑选出仅带阳性标记的克隆L18,对其基因组进行PCR产物凝胶电泳与PCR产物测序,证明克隆L18在预设位点发生同源重组;对其蛋白质进行Western印迹实验表明,Mstn被成功地敲除失活。综上结果证明,本研究实现了双等位基因的精准敲除,构建了Mstn双敲除梯度回复表达细胞系。本研究为揭示Mstn的作用机制提供理想的实验材料,也为双等位基因的敲除提供了可借鉴的技术路线。
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关键词
猪肌肉
抑制
素双
等位
基因
敲除
CRISPR/Cas9
CRE/LOX
P重组酶删除系统
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职称材料
1对复等位基因控制的油菜(Brassica napus L.)显性核不育系609AB的遗传验证
被引量：
18
2
作者
宋来强
傅廷栋
+2 位作者
杨光圣
涂金星
马朝芝
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第7期869-875,共7页
在确认609AB不育系类型的基础上,采用临保系测验法和测交后代可育株自交与回交等方法,有效区分了甘蓝型油菜显性核不育的1对复等位和2对显性基因互作控制的两种遗传模式。不育系类型鉴定结果表明,609AB是纯合型显性核不育系;遗传分析证...
在确认609AB不育系类型的基础上,采用临保系测验法和测交后代可育株自交与回交等方法,有效区分了甘蓝型油菜显性核不育的1对复等位和2对显性基因互作控制的两种遗传模式。不育系类型鉴定结果表明,609AB是纯合型显性核不育系;遗传分析证明所测恢复系的抑制基因均与Ms等位,不育系可育株的抑制基因也与不育基因等位,确认其育性符合1对复等位基因遗传模式,Ms为显性雄性不育基因,Mf为Ms的等位显性抑制位点,ms为正常可育位点,并且Mf>Ms>ms。在这一不育系群体中不育株的基因型为MsMs,可育株的基因型为MsMf,相应的恢复系为MfMf,临保系为msms。探讨了甘蓝型油菜显性核不育遗传的可能模式。
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关键词
甘蓝型油菜
显性核不育
等位抑制基因
1对复
等位
基因
遗传
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职称材料
题名
用Cre/LoxP和CRISPR基因工程技术构建猪肌肉生长抑制素双等位基因敲除细胞系
被引量：
3
1
作者
綦世金
毕延震
刘西梅
华文君
郑新民
李奎
唐中林
华再东
陈彬
机构
贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室
贵州大学贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室
贵州大学动物科学学院
湖北省农业科学院畜牧研究所动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第3期311-318,共8页
基金
转基因生物新品种培育重大专项(No.2016ZX08006001-005
No.2016ZX08006002-006
+4 种基金
No.2016ZX08010003-006)
湖北省科技支撑计划(No.2014BBB010)
湖北省农业科技创新中心(No.2016-620-000-001-027)
湖北省农业科学院青年基金(No.2016NKYJJ19)
湖北省农业科学院竞争性项目(No.2016 jzxjh013)资助~~
文摘
肌肉生长抑制素(myostatin,Mstn)基因失活可引起哺乳动物的肌肉增生,但其调控机制尚不清楚,且缺乏可靠的试验材料验证Mstn相关分子通路的变化。本研究所用PK3108细胞系是在野生型PK15细胞系的基础上成功靶向敲除一条等位基因,在其靶位点敲入标记基因,敲除了204bp的外显子3序列,LoxP锚定在其标记基因两侧。利用Cre/LoxP重组酶删除系统删除插入PK3108Mstn靶位点的标记,借助流式细胞仪和荧光蛋白甄别得到无标记的过渡型细胞系PK3108-2。将Cas9/sgRNA表达载体和供体DNA共转染PK3108-2,借助G418抗性筛选和倒置荧光显微镜挑选出仅带阳性标记的克隆L18,对其基因组进行PCR产物凝胶电泳与PCR产物测序,证明克隆L18在预设位点发生同源重组;对其蛋白质进行Western印迹实验表明,Mstn被成功地敲除失活。综上结果证明,本研究实现了双等位基因的精准敲除,构建了Mstn双敲除梯度回复表达细胞系。本研究为揭示Mstn的作用机制提供理想的实验材料,也为双等位基因的敲除提供了可借鉴的技术路线。
关键词
猪肌肉
抑制
素双
等位
基因
敲除
CRISPR/Cas9
CRE/LOX
P重组酶删除系统
Keywords
porcine Mstn bi-allelic knock-out
CRISPR/Cas9
Cre/LoxP recombinase deletion system
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
1对复等位基因控制的油菜(Brassica napus L.)显性核不育系609AB的遗传验证
被引量：
18
2
作者
宋来强
傅廷栋
杨光圣
涂金星
马朝芝
机构
华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室
出处
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第7期869-875,共7页
基金
国家重大基础研究资助项目(2001CB10807)。
文摘
在确认609AB不育系类型的基础上,采用临保系测验法和测交后代可育株自交与回交等方法,有效区分了甘蓝型油菜显性核不育的1对复等位和2对显性基因互作控制的两种遗传模式。不育系类型鉴定结果表明,609AB是纯合型显性核不育系;遗传分析证明所测恢复系的抑制基因均与Ms等位,不育系可育株的抑制基因也与不育基因等位,确认其育性符合1对复等位基因遗传模式,Ms为显性雄性不育基因,Mf为Ms的等位显性抑制位点,ms为正常可育位点,并且Mf>Ms>ms。在这一不育系群体中不育株的基因型为MsMs,可育株的基因型为MsMf,相应的恢复系为MfMf,临保系为msms。探讨了甘蓝型油菜显性核不育遗传的可能模式。
关键词
甘蓝型油菜
显性核不育
等位抑制基因
1对复
等位
基因
遗传
Keywords
Brassica napus
Dominant genic male sterility
Allelic inhibitor
Multiple alleles of one gene
分类号
S565.4 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
用Cre/LoxP和CRISPR基因工程技术构建猪肌肉生长抑制素双等位基因敲除细胞系
綦世金
毕延震
刘西梅
华文君
郑新民
李奎
唐中林
华再东
陈彬
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
1对复等位基因控制的油菜(Brassica napus L.)显性核不育系609AB的遗传验证
宋来强
傅廷栋
杨光圣
涂金星
马朝芝
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005
18
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职称材料
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