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液相芯片技术联合等位基因特异性引物延伸反应检测结核分枝杆菌耐多药突变
被引量：
4
1
作者
李婧婵
姜春来
+1 位作者
于源华
宋海鹏
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
2016年第3期165-168,共4页
目的建立一种耐多药结核分枝杆菌检测方法。方法设计并构建含有kat G315、rpo B526、rpo B531耐药基因突变位点的质粒;通过PCR扩增及纯化、等位基因特异性引物延伸反应（ASPE）、荧光微球杂交反应及液相芯片系统Luminex 200检测;并对该...
目的建立一种耐多药结核分枝杆菌检测方法。方法设计并构建含有kat G315、rpo B526、rpo B531耐药基因突变位点的质粒;通过PCR扩增及纯化、等位基因特异性引物延伸反应（ASPE）、荧光微球杂交反应及液相芯片系统Luminex 200检测;并对该方法反应条件进行探索及方法学评价。结果 ASPE反应中Tsp DNA聚合酶最适浓度为0.025 U/μL,杂交荧光微球浓度为每μL 100个,链霉亲和素藻红蛋白浓度及杂交时间分别为2μg/m L和20 min;所建立方法的检测灵敏度最低可达1ng/m L;当质粒浓度为1.5×105ng/m L时,批间和批内变异系数（CV）分别为6.48%～12.15%和0.35%～6.92%;当质粒浓度为2 ng/m L时,批间和批内变异系数（CV）分别为5.73%～10.77%和0.97%～8.91%;特异性引物探针与其他突变位点均无交叉反应。结论液相芯片技术联合等位基因特异性引物延伸反应检测耐多药结核分枝杆菌灵敏且具有成本低、高通量等特点,极具临床应用潜力。
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关键词
液相芯片技术
等位基因特异性引物
延伸反应
结核分枝杆菌
耐多药性
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职称材料
汾远2号远志的rDNA ITS等位基因特异性PCR鉴别研究
被引量：
2
2
作者
李娟
王丹丹
+4 位作者
孔冉冉
田洪岭
张福生
秦雪梅
马存根
《山西医科大学学报》
CAS
2019年第8期1143-1148,共6页
目的设计出鉴别汾远2号远志的特异性PCR引物,建立快速鉴别汾远2号远志的方法。方法利用植物核糖体DNA(rDNA)的内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)通用型引物扩增远志样品,并对所有样品进行双向测定,采用DNAMAN软件对远志...
目的设计出鉴别汾远2号远志的特异性PCR引物,建立快速鉴别汾远2号远志的方法。方法利用植物核糖体DNA(rDNA)的内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)通用型引物扩增远志样品,并对所有样品进行双向测定,采用DNAMAN软件对远志样品rDNA ITS序列进行比对,找到汾远2号远志(Polygala tenuifolia,简称FY2)的等位基因差异位点,并利用NCBI网上已有的远志序列以及作者测序得到的卵叶远志(P.sibirica)序列和FY2序列比对,进行等位基因差异位点的验证。最后根据FY2的碱基差异位点,采用Primer 5.0软件设计特异性PCR引物,用于FY2的特异性PCR鉴别。结果测序所得的序列与NCBI中远志的相似度高达99.36%。找到了两个FY2的等位基因差异位点,第123位点为T,其余样品均为A,第553位点为T,其余样品均为C。设计了4对特异性PCR引物对FY2进行特异性PCR扩增,在约463 bp处出现单一的扩增条带,而其他远志及卵叶远志则无相应的扩增条带。结论等位基因特异性PCR能有效地从远志和卵叶远志药材中鉴别出汾远2号远志,具有准确、高效、灵敏、简便的特点。
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关键词
远志
汾远2号
ITS
等位基因特异性引物
分子鉴别
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职称材料
题名
液相芯片技术联合等位基因特异性引物延伸反应检测结核分枝杆菌耐多药突变
被引量：
4
1
作者
李婧婵
姜春来
于源华
宋海鹏
机构
长春理工大学生命科学技术学院
吉林大学生命科学学院
出处
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
2016年第3期165-168,共4页
基金
吉林省科技发展计划项目基金(20130102086JC)
文摘
目的建立一种耐多药结核分枝杆菌检测方法。方法设计并构建含有kat G315、rpo B526、rpo B531耐药基因突变位点的质粒;通过PCR扩增及纯化、等位基因特异性引物延伸反应（ASPE）、荧光微球杂交反应及液相芯片系统Luminex 200检测;并对该方法反应条件进行探索及方法学评价。结果 ASPE反应中Tsp DNA聚合酶最适浓度为0.025 U/μL,杂交荧光微球浓度为每μL 100个,链霉亲和素藻红蛋白浓度及杂交时间分别为2μg/m L和20 min;所建立方法的检测灵敏度最低可达1ng/m L;当质粒浓度为1.5×105ng/m L时,批间和批内变异系数（CV）分别为6.48%～12.15%和0.35%～6.92%;当质粒浓度为2 ng/m L时,批间和批内变异系数（CV）分别为5.73%～10.77%和0.97%～8.91%;特异性引物探针与其他突变位点均无交叉反应。结论液相芯片技术联合等位基因特异性引物延伸反应检测耐多药结核分枝杆菌灵敏且具有成本低、高通量等特点,极具临床应用潜力。
关键词
液相芯片技术
等位基因特异性引物
延伸反应
结核分枝杆菌
耐多药性
Keywords
suspension array technology
allele-specific primer extension reaction
Mycobacterium Tuberculosis
multidrug resistance
分类号
R446.5 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
汾远2号远志的rDNA ITS等位基因特异性PCR鉴别研究
被引量：
2
2
作者
李娟
王丹丹
孔冉冉
田洪岭
张福生
秦雪梅
马存根
机构
山西药科职业技术学院药学系
山西大学中医药现代研究中心
石家庄四药有限公司
山西大学化学化工学院
山西省农业科学院经济作物研究所
山西中医药大学
出处
《山西医科大学学报》
CAS
2019年第8期1143-1148,共6页
基金
山西省重点研发计划重点项目(201603D3111003)
国家中药标准化项目(ZYBZH-Y-JIN-34)
文摘
目的设计出鉴别汾远2号远志的特异性PCR引物,建立快速鉴别汾远2号远志的方法。方法利用植物核糖体DNA(rDNA)的内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)通用型引物扩增远志样品,并对所有样品进行双向测定,采用DNAMAN软件对远志样品rDNA ITS序列进行比对,找到汾远2号远志(Polygala tenuifolia,简称FY2)的等位基因差异位点,并利用NCBI网上已有的远志序列以及作者测序得到的卵叶远志(P.sibirica)序列和FY2序列比对,进行等位基因差异位点的验证。最后根据FY2的碱基差异位点,采用Primer 5.0软件设计特异性PCR引物,用于FY2的特异性PCR鉴别。结果测序所得的序列与NCBI中远志的相似度高达99.36%。找到了两个FY2的等位基因差异位点,第123位点为T,其余样品均为A,第553位点为T,其余样品均为C。设计了4对特异性PCR引物对FY2进行特异性PCR扩增,在约463 bp处出现单一的扩增条带,而其他远志及卵叶远志则无相应的扩增条带。结论等位基因特异性PCR能有效地从远志和卵叶远志药材中鉴别出汾远2号远志,具有准确、高效、灵敏、简便的特点。
关键词
远志
汾远2号
ITS
等位基因特异性引物
分子鉴别
Keywords
Polygala tenuifolia
FY2
ITS
allele-specific primers
molecular authentication
分类号
R282.5 [医药卫生—中药学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
液相芯片技术联合等位基因特异性引物延伸反应检测结核分枝杆菌耐多药突变
李婧婵
姜春来
于源华
宋海鹏
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
2016
4
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下载PDF
职称材料
2
汾远2号远志的rDNA ITS等位基因特异性PCR鉴别研究
李娟
王丹丹
孔冉冉
田洪岭
张福生
秦雪梅
马存根
《山西医科大学学报》
CAS
2019
2
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