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柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子中的Etmic-2基因克隆及测序 被引量:6
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作者 蒋建林 蒋金书 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2002年第3期7-10,共4页
作者根据子孢子微线基因 (Etmic- 2 )的 c DNA序列 ,利用计算机设计出 1对引物 ,从柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子中用 RT- PCR技术扩增出 1个片段 (m ic2 - m z)。把这个片段克隆到 p GEM- T- Easy Vector中后 ,我们得到 1个阳性克隆 pmic... 作者根据子孢子微线基因 (Etmic- 2 )的 c DNA序列 ,利用计算机设计出 1对引物 ,从柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子中用 RT- PCR技术扩增出 1个片段 (m ic2 - m z)。把这个片段克隆到 p GEM- T- Easy Vector中后 ,我们得到 1个阳性克隆 pmic2 - mz,酶切分析证明 pm ic2 - m z含有 m ic2 - m z,并且外源片段以反方向插入 T载体中。核苷酸序列测定结果表明 m ic2 - m z与 Etmic- 2基因的编码区序列一样长 ,分子量都为 112 7bp,并且两序列之间也只有 3个碱基不同 ,也没有造成氨基酸编码错位 ,这说明球虫从子孢子到第二代裂殖子的二次无性生殖过程中 ,微线基因Etm ic- 2 c NDA序列没有发生太大的变化。 展开更多
关键词 Etmic-2基因 克隆 测序 柔嫩艾美耳球虫 微线基因 第二代裂殖子
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柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子表面抗原基因(λMZ5-7)的克隆及序列分析 被引量:3
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作者 韩红玉 黄兵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第5期358-360,共3页
本文选择E .tenella第 2代裂殖子表面抗原基因 (λMZ5_7)为侯选抗原基因 ,利用RT_PCR方法从E .tenella第 2代裂殖子中扩增出了λMZ5_7基因 ,把这一片段克隆到PGEM_T_easy克隆载体上 ,得到的阳性克隆经PCR鉴定及酶切分析。结果表明 ,重组... 本文选择E .tenella第 2代裂殖子表面抗原基因 (λMZ5_7)为侯选抗原基因 ,利用RT_PCR方法从E .tenella第 2代裂殖子中扩增出了λMZ5_7基因 ,把这一片段克隆到PGEM_T_easy克隆载体上 ,得到的阳性克隆经PCR鉴定及酶切分析。结果表明 ,重组子 (PGEM_T_λMZ)中含有λMZ5_7基因 ,且是正向插入的。核苷酸序列分析结果表明 ,该序列全长 984bp ,有一个开放阅读框 (933bp) ,与国外报道的λMZ5_7基因比较 ,同源性为 98.8% ,只是在 335~ 347bp处缺少 12bp ,其余部分相同 ,缺少的 12bp没有造成氨基酸编码的错位 ,缺少的 4个氨基酸为Thr、Ser、Gln、Gln。 展开更多
关键词 柔嫩艾美球虫 第二代裂殖子 序列分析 表面抗原基因
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柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子表面抗原基因(λMZ5-7)在大肠杆菌中的表达 被引量:1
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作者 韩红玉 黄兵 《生物技术通报》 CAS CSCD 2001年第6期34-37,共4页
将重组克隆质粒 (PGEM -λMZ)用EcoRI酶切后 ,电泳回收目的片段 ,克隆到经EcoRI酶切、CIAP处理的表达载体 pET - 2 8a中 ,转化大肠杆菌JM 10 9感受态细胞 ,得到的转化子经PCR鉴定和酶切分析 ,筛选出符合正确阅读框的重组子 ,构建成重组... 将重组克隆质粒 (PGEM -λMZ)用EcoRI酶切后 ,电泳回收目的片段 ,克隆到经EcoRI酶切、CIAP处理的表达载体 pET - 2 8a中 ,转化大肠杆菌JM 10 9感受态细胞 ,得到的转化子经PCR鉴定和酶切分析 ,筛选出符合正确阅读框的重组子 ,构建成重组表达质粒 (PET -λMZ) ,并在大肠杆菌BL2 1(DE3)表达菌中成功地表达了含目的蛋白的融合蛋白 ,融合蛋白的分子量约 34KDa ,加入IPTG诱导 6h后 ,蛋白表达接近最高水平。表达产物经Ni-NTA亲和层析柱纯化 ,SDS -PAGE检测为单一条带。经Western -blotting杂交实验 ,纯化出的目的蛋白能与兔抗E .tenella第二代裂殖子抗血清发生反应 ,说明MZP蛋白是E .tenella第二代裂殖子抗原蛋白 ,具有一定的免疫原性 。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 第二代裂殖子 表达 表面抗原基因
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毒害艾美耳球虫第二代裂殖子cDNA文库的构建
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作者 蔡秀清 刘丹丹 +4 位作者 宿世杰 王乐乐 贾传礼 许金俊 陶建平 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第5期65-69,共5页
本文采用Trizol试剂提取毒害艾美耳球虫第二代裂殖子总RNA,用oliogo(d T)磁珠法纯化m RNA后,采用SMART技术构建了毒害艾美耳球虫第二代裂殖子cDNA噬菌体表达文库。经鉴定,原始文库容量为2.14×106pfu/m L,扩增后的文库容量为4.47&... 本文采用Trizol试剂提取毒害艾美耳球虫第二代裂殖子总RNA,用oliogo(d T)磁珠法纯化m RNA后,采用SMART技术构建了毒害艾美耳球虫第二代裂殖子cDNA噬菌体表达文库。经鉴定,原始文库容量为2.14×106pfu/m L,扩增后的文库容量为4.47×1010pfu/m L,扩增文库的重组率为90%。随机挑取100个单克隆,通过菌液PCR检测得知文库插入片段长度以400~1000 bp为主。本研究结果为毒害艾美耳球虫新基因的筛选和功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 毒害艾美耳球虫 第二代裂殖子 CDNA文库
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柔嫩艾美耳球虫的抗原分析 被引量:5
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作者 蒋建林 蒋金书 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期146-151,共6页
本文采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,免疫印渍技术,用抗柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)抗体分析了第二代裂殖子、子孢子和未孢子化卵囊的蛋白质。SDS-PAGE电泳银染表明第二代裂殖子主要蛋白质为:17.6K... 本文采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,免疫印渍技术,用抗柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)抗体分析了第二代裂殖子、子孢子和未孢子化卵囊的蛋白质。SDS-PAGE电泳银染表明第二代裂殖子主要蛋白质为:17.6KD,29.9KD,38.9KD和53.7KD,但用抗E.tenela抗体免疫印渍法检测出的主要抗原为:78.0KD,83.2KD和95.5KD,这说明并不是含量高的蛋白质就是产生抗体的抗原;子孢子蛋白质含量相对较高的有:40.3KD,41.7KD,44.7KD,46.8KD,另有分子量>100KD的4种蛋白质的含量也相对较高,用抗E.tenela抗体免疫印渍法检测出一条>100KD的抗原带,以及41.2KD,43.2KD,46.7KD,55.0KD和58.9KD抗原带;未孢子化卵囊主要蛋白质为:17.2KD,28.5KD,36.5KD和58.9KD,但用抗E.tenela抗体免疫印渍法未能检测出抗原。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 抗原分析 卵囊 第二代裂殖子
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