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小鼠端粒酶蛋白亚单位重组腺病毒载体的构建及鉴定 被引量：2
1
作者 姜楠 陆敏强 +5 位作者 李华 蔡常洁 杨扬 许赤 冯炼强 陈规划 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期11-14,共4页
目的构建小鼠端粒酶蛋白亚单位(mousetelomerasereversetranscriptase,mTERT)基因重组腺病毒载体,为下一步研究其体外表达和动物实验研究提供基础。方法从肝癌细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增mTERT的基因编码区序列,将序列定向克隆... 目的构建小鼠端粒酶蛋白亚单位(mousetelomerasereversetranscriptase,mTERT)基因重组腺病毒载体,为下一步研究其体外表达和动物实验研究提供基础。方法从肝癌细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增mTERT的基因编码区序列,将序列定向克隆至真核表达载体pAC,将此表达质粒与腺病毒重组质粒pJM17共同转染293细胞,经同源重组产生重组腺病毒载体Ad-mTERT,纯化后的重组腺病毒载体Ad-mTERT在293细胞大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化,测定病毒滴度。结果PCR及酶切证实:mTERTDNA正确克隆到穿梭质粒pAC中,带mTERTDNA的表达盒成功重组到腺病毒载体基因组E1A缺失区,并在293细胞中成功包装出具有感染活性的重组腺病毒Ad-mTERT。结论成功构建了小鼠TERT基因重组腺病毒载体,为研究其用于肿瘤的基因治疗奠定基础。 展开更多
关键词 小鼠端粒酶蛋白亚单位 重组腺病毒载体
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端粒酶及蛋白亚单位在骨巨细胞瘤中的表达 被引量：2
2
作者 王林 董书堃 文剑明 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第B03期125-126,共2页
【目的】检测人端粒酶活性和端粒酶蛋白亚单位(human telomerase catalytic subunit,hTERT)基因在不同分级骨巨细胞瘤组织中的表达情况。【方法】收集骨巨细胞瘤样本并进行病理学分级,采用 TRAP 方法检测端粒酶活性,RT-PCR方法检测各样... 【目的】检测人端粒酶活性和端粒酶蛋白亚单位(human telomerase catalytic subunit,hTERT)基因在不同分级骨巨细胞瘤组织中的表达情况。【方法】收集骨巨细胞瘤样本并进行病理学分级,采用 TRAP 方法检测端粒酶活性,RT-PCR方法检测各样本中 hTERT 基因的表达,经薄层分析扫描进行定量分析。【结果】约80%的骨巨细胞瘤组织中有端粒酶活性表达,与表达组织学分级差异无统计学意义(P>0.05)。4例骨巨细胞瘤Ⅰ级样本不表达 hTERT 基因或表达极弱,13例骨巨细胞瘤Ⅱ级与3例骨巨细胞瘤Ⅲ级的样本有较高的 hTERT 基因表达水平,与骨巨细胞瘤Ⅰ级的表达差异有统计学意义(P<0.05),骨巨细胞瘤Ⅱ级与Ⅲ级的 hTERT 表达差异无统计学意义(P>0.05)。术后复发样本 hTERT 基因表达亦较其他样本明显增高。【结论】骨巨细胞瘤组织中可检测到端粒酶活性和 hTERT 基因,hTERT 基因表达量可为骨巨细胞瘤分级及生物学行为的预测提供参考。 展开更多
关键词 端粒酶 端粒酶蛋白亚单位 基因表达
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人端粒酶蛋白催化亚单位反义基因转染对胃癌细胞恶性表型的逆转作用 被引量：21
3
作者 杨仕明 房殿春 +4 位作者 杨金亮 罗元辉 鲁荣 陈兵 刘为纹 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第8期934-937,共4页
目的 探讨人端粒酶蛋白催化亚单位（ｈＴＲＴ）反义基因治疗对胃癌细胞恶性表型的逆转作用。方法 采用基因重组技术，构建ｈＴＲＴ正、反义真核表达载体，采用脂质体法导入ＳＧＣ－７９０１细胞，检测细胞生长曲线、端粒酶活性凋亡、细... 目的 探讨人端粒酶蛋白催化亚单位（ｈＴＲＴ）反义基因治疗对胃癌细胞恶性表型的逆转作用。方法 采用基因重组技术，构建ｈＴＲＴ正、反义真核表达载体，采用脂质体法导入ＳＧＣ－７９０１细胞，检测细胞生长曲线、端粒酶活性凋亡、细胞周期、软琼脂中克隆形成率及裸鼠体内成瘤性的变化。结果 成功构建ｈＴＲＴ正、反义真核表达载体，并导入ＳＧＣ－７９０１胃癌细胞株中，获得稳定表达正、反义基因的细胞系７９０１－Ｓ、７９０１－ＡＳ１和７９０１－ＡＳ２。７９０１－ＡＳ１和７９０１－ＡＳ２出现显著生长抑制现象，端粒酶活性明显下降，细胞凋亡增加，异型性减小，Ｇ０／Ｇ１期细胞增加，Ｓ和Ｇ２Ｍ期细胞减少，增殖指数减小，软琼脂中无克隆形成，裸鼠体内成瘤消失。结论ｈＴＲＴ反义基因治疗可以明显抑制ＳＧＣ－７９０１细胞的增殖，部分逆转肿瘤细胞的恶性表型，其机制可能主要是通过诱导细胞分化而非诱导细胞凋亡途径实现的，提示ｈＴＲＴ基因可以作为肿瘤治疗的靶基因。 展开更多
关键词 人端粒酶蛋白催化亚单位 反义基因治疗 胃癌 端粒酶 恶性表型
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hTERT基因转染对人胚胎成纤维细胞端粒长度、端粒酶活性及其亚单位的影响 被引量：5
4
作者 梁光萍 罗向东 杨宗城 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期705-706,741,共3页
为了探讨外源性人端粒酶蛋白催化亚单位 (hTERT)基因转染对人胚胎成纤维细胞 (hEFs)端粒长度、端粒酶活性及其亚单位的影响 ,采用基因重组技术构建hTERT全长cDNA正义荧光真核表达载体 ,并采用脂质体法将正义重组质粒pIRES2 EGFP hTERT... 为了探讨外源性人端粒酶蛋白催化亚单位 (hTERT)基因转染对人胚胎成纤维细胞 (hEFs)端粒长度、端粒酶活性及其亚单位的影响 ,采用基因重组技术构建hTERT全长cDNA正义荧光真核表达载体 ,并采用脂质体法将正义重组质粒pIRES2 EGFP hTERT及空载质粒pIRES2 EGFP分别转染原代培养hEFs,检测转染细胞端粒长度、端粒酶活性及端粒酶亚单位的变化。结果显示 ,外源性hTERT基因转染细胞 (hEF hTERT)端粒酶活性较未转染细胞 (hEFs)及空载体转染细胞 (hEF EGFP)显著增加 (P <0 0 1) ,hEF hTERT、hEFs及hEF EGFP端粒长度分别为 6 0kb、5 3kb及 5 4kb ,端粒酶亚单位中除hTERT在mRNA和蛋白水平表达均增加外 ,hTR和TP1mRNA无明显变化。以上结果提示 ,外源性hTERT基因转染能使原代培养的hEFs端粒酶活化 ,端粒长度不再继续缩短 ,hTERT在mR 展开更多
关键词 人端粒酶蛋白催化亚单位 人胚胎成纤维细胞 端粒 末端转移酶
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hTRT反义基因转染对肝癌细胞端粒酶亚单位及细胞周期的影响 被引量：6
5
作者 杨仕明 房殿春 +3 位作者 杨金亮 罗元辉 鲁荣 刘为纹 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第24期2193-2195,共3页
目的　探讨人端粒酶蛋白催化活性亚单位 (Humantelomerasereversetranscriptase ,hTRT)反义基因转染对HepG2 肝癌细胞株端粒酶亚单位及细胞周期的影响。方法　采用流式细胞仪检测hTRT正义基因转染的HepG2 细胞(HepG2 S)以及hTRT反义基... 目的　探讨人端粒酶蛋白催化活性亚单位 (Humantelomerasereversetranscriptase ,hTRT)反义基因转染对HepG2 肝癌细胞株端粒酶亚单位及细胞周期的影响。方法　采用流式细胞仪检测hTRT正义基因转染的HepG2 细胞(HepG2 S)以及hTRT反义基因转染的HepG2 细胞 (HepG2 AS)的细胞周期 ,采用RT PCR法检测上述细胞hTRT、端粒酶RNA(hTR)、端粒酶相关蛋白 1(TP1)以及c myc和bcl 2基因的变化 ,同时采用Westernblot检测hTRT蛋白质的变化。结果　HepG2 AS出现G0 G1 期阻滞 ,增殖指数增加 ,凋亡率亦明显增加 ,进一步研究发现 ,HepG2 AS端粒酶亚单位hTRT在蛋白质和mRNA水平均表达减少 ,而TP1、hTR无明显变化 ,bcl 2和c mycmRNA的表达亦明显下调。结论　hTRT反义基因不仅可以下调HepG2 细胞hTRTmRNA和蛋白质的表达 ,而且可以下调c myc、bcl 2mRNA的表达 ,从而一方面降低端粒酶活性 ,另一方面一定程度增加凋亡细胞的比率 。 展开更多
关键词 人端粒酶蛋白催化活性亚单位 反义基因治疗 肝癌
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端粒酶与凋亡相关蛋白在卵巢交界性肿瘤中的表达 被引量：3
6
作者 刘素香 申彦 孙保存 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期149-152,共4页
目的:探讨端粒酶蛋白亚单位(hTERT)与凋亡相关蛋白(bcl-2、caspase-3)在卵巢上皮性交界性肿瘤中的表达及临床意义。方法:选取天津市肿瘤医院病理科存档的卵巢上皮性交界性肿瘤41例,采用免疫组化SP法检测hTERT、bcl-2与caspase-3在肿瘤... 目的:探讨端粒酶蛋白亚单位(hTERT)与凋亡相关蛋白(bcl-2、caspase-3)在卵巢上皮性交界性肿瘤中的表达及临床意义。方法:选取天津市肿瘤医院病理科存档的卵巢上皮性交界性肿瘤41例,采用免疫组化SP法检测hTERT、bcl-2与caspase-3在肿瘤组织中的表达,与22例良性、30例恶性肿瘤进行比较,并探讨三者间表达的相关性。结果:1)hTERT在卵巢交界性肿瘤中阳性率为46.3%,而良性与恶性肿瘤分别为36.4%,73.3%,与交界性肿瘤相比,恶性肿瘤阳性率明显升高(P=0.023),而良性肿瘤与之的差异无统计学意义(P=0.446)。2)bcl-2和caspase-3在卵巢交界性肿瘤中阳性率为58.5%和73.2%,良性与恶性肿瘤分别为59.1%、72.7%和86.7%、43.3%,其中bcl-2的阳性率在交界性肿瘤中明显低于恶性肿瘤(P=0.010),caspase-3反之(P=0.011);但它们在交界性肿瘤中的表达无相关性(r=-0.063,P>0.05),且二者在交界性与良性肿瘤间的差异无统计学意义(P=0.966,0.970)。3)对93例卵巢肿瘤研究发现,hTERT与bcl-2蛋白表达无相关性(r=0.037,P>0.05);hTERT与caspase-3表达呈显著负相关(χ2=4.8109,r=-0.227,P<0.05)。结论:hTERT蛋白表达可以反映端粒酶活性与hTERTmRNA水平,与凋亡相关蛋白(bcl-2、caspase-3)的联合检测可进一步判断卵巢交界性肿瘤良恶性。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 交界性 端粒酶蛋白亚单位(hTERT)凋亡
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反义hTRT转染对SGC-7901胃癌细胞株形态学的影响 被引量：6
7
作者 杨仕明 房殿春 +3 位作者 杨金亮 罗元辉 鲁荣 刘为纹 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第9期1034-1036,共3页
目的　探讨人端粒酶蛋白催化亚单位 (hTRT)反义基因转染对SGC 790 1胃癌细胞株形态学的影响 ;方法　采用脂质体法将hTRT正、反义真核表达载体导入SGC 790 1胃癌细胞株中 ,从光镜、电镜水平观察转染细胞形态学的变化。结果　与未转染细... 目的　探讨人端粒酶蛋白催化亚单位 (hTRT)反义基因转染对SGC 790 1胃癌细胞株形态学的影响 ;方法　采用脂质体法将hTRT正、反义真核表达载体导入SGC 790 1胃癌细胞株中 ,从光镜、电镜水平观察转染细胞形态学的变化。结果　与未转染细胞相比 ,光镜下hTRT反义基因转染的SGC 790 1胞体增大 ,胞浆丰富 ,分裂相减少 ,核浆比增大 ,异型性减小 ;透射电镜下反义基因转染细胞细胞器丰富 ,胞浆内出现分泌泡样结构及胞质内微囊 ;扫描电镜下反义基因转染细胞表面微绒毛增多 ,胞体周围可见大量颗粒样物质 ,根据AB/PAS染色结果 ,这些颗粒样物质有可能是其分泌的粘液颗粒。结论　hTRT反义基因有促进SGC 790 1细胞分化的作用。 展开更多
关键词 人端粒酶蛋白催化亚单位 反义基因 胃癌 HTRT 基因转染
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BRCA1对MCF-7细胞hTERT基因表达的抑制作用研究 被引量：1
8
作者 陈莉 姜军 +2 位作者 杨新华 苏踊跃 陈显春 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期853-855,共3页
目的　将BRCA1真核表达质粒转染人乳腺癌MCF 7细胞中,观察外源性BRCA1基因转染MCF 7细胞后对hTERT蛋白表达的抑制作用及对细胞增殖的影响。方法　应用脂质体法将BRCA1真核表达质粒转染至乳腺癌MCF 7细胞中,Westernblot检测转染细胞中hT... 目的　将BRCA1真核表达质粒转染人乳腺癌MCF 7细胞中,观察外源性BRCA1基因转染MCF 7细胞后对hTERT蛋白表达的抑制作用及对细胞增殖的影响。方法　应用脂质体法将BRCA1真核表达质粒转染至乳腺癌MCF 7细胞中,Westernblot检测转染细胞中hTERT蛋白表达的变化。MTT比色试验观察BRCA1真核表达质粒转染后MCF 7细胞增殖活性的变化。结果　外源性BRCA1真核表达质粒组MCF 7细胞较未转染组MCF 7细胞hTERT蛋白表达明显减弱。BRCA1基因转染后的MCF 7细胞的增殖活性明显降低。结论　外源性BRCA1基因的表达可以抑制人乳腺癌MCF 7细胞中hTERT基因的表达,并抑制MCF 7细胞的增殖能力。BRCA1基因的表达异常可能在乳腺肿瘤发生发展机制中具有重要的作用。 展开更多
关键词 人端粒酶蛋白催化亚单位hTERT 人乳腺癌细胞 MCF-7 BRCA1
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hTERT基因转染对人胚胎成纤维细胞表型的影响 被引量：1
9
作者 梁光萍 罗向东 +3 位作者 杨宗城 陈建 苏踊跃 刘月明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第19期1748-1750,共3页
目的　探讨外源性人端粒酶蛋白催化亚单位 (hTERT)基因转染人胚胎成纤维细胞 (hEFs)后细胞是否存在恶性表型。方法　应用脂质体法将pIRES2 EGFP hTERT正义重组质粒及pIRES2 EGFP空载质粒分别导入原代培养hEFs ,Westernblot分别检测hTE... 目的　探讨外源性人端粒酶蛋白催化亚单位 (hTERT)基因转染人胚胎成纤维细胞 (hEFs)后细胞是否存在恶性表型。方法　应用脂质体法将pIRES2 EGFP hTERT正义重组质粒及pIRES2 EGFP空载质粒分别导入原代培养hEFs ,Westernblot分别检测hTERTmRNA和蛋白质的表达。采用染色体核型分析、裸鼠皮下致瘤性实验、DNA倍体实验分析转染细胞是否存在恶性表型。结果　原代培养hEFs中存在较弱水平的hTERT基因mRNA及蛋白质表达 ,但外源性hTERT基因转染的胚胎成纤维细胞hTERTmRNA及蛋白表达显著增加。hTERT转染后细胞染色体仍为 2 3对 ,且均为正常二倍体细胞 ;裸鼠皮下不具有成瘤的能力。 展开更多
关键词 人端粒酶蛋白催化亚单位 人胚胎成纤维细胞 恶性表型
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