影像组学结合深度学习预测异柠檬酸脱氢酶野生型弥漫性星形细胞瘤的端粒酶逆转录酶启动子状态

1

作者 徐欣怡 张旺 +2 位作者 张力强 王琳玲 文明 《中国医学影像学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第11期1097-1104,共8页

目的 探讨基于MRI的影像组学和深度学习建立融合模型预测异柠檬酸脱氢酶野生型弥漫性星形细胞瘤的端粒酶逆转录酶启动子(TERTp)突变状态。资料与方法 回顾性分析2019年1月—2021年6月重庆医科大学附属第一医院癌症基因组图谱和癌症影像... 目的 探讨基于MRI的影像组学和深度学习建立融合模型预测异柠檬酸脱氢酶野生型弥漫性星形细胞瘤的端粒酶逆转录酶启动子(TERTp)突变状态。资料与方法 回顾性分析2019年1月—2021年6月重庆医科大学附属第一医院癌症基因组图谱和癌症影像档案的175例异柠檬酸脱氢酶野生型弥漫性星形细胞瘤患者(训练组122例,测试组53例),评估其TERTp突变状态。在T1c和T2f图像上勾画水肿区和肿瘤区,使用SE-Net模型构建深度学习模型,提取不同区域(水肿区、肿瘤区和整体病变)的组学特征,并通过最小绝对收缩和选择算法筛选11个特征建立组学模型。最后,将影像组学模型、深度学习模型和包含伦勃朗视觉感受图像特征的临床模型结合为融合模型,使用校准曲线和决策曲线评估模型。结果 最终建立6个预测模型,临床模型训练组和测试组曲线下面积(AUC)分别为0.815(95%CI 0.738~0.892)和0.645(95%CI 0.494~0.796);深度学习模型训练组和测试组AUC分别为0.860(95%CI 0.798~0.922)和0.735(95%CI 0.614~0.856);融合组学模型比单独水肿或肿瘤区组学模型预测性能更优,训练组和测试组AUC分别为0.906(95%CI 0.856-0.955)和0.867(95%CI 0.769~0.964);融合模型预测性能最佳,训练组和测试组AUC分别为0.964(95%CI 0.929~1.000)和0.905(95%CI 0.818~0.991)。结论 影像组学结合深度学习的临床融合模型在预测异柠檬酸脱氢酶野生型弥漫性星形细胞瘤的TERTp突变状态方面表现良好。 展开更多

关键词 星形细胞瘤 磁共振成像 影像组学 深度学习 端粒酶逆转录酶启动子 异柠檬酸脱氢酶

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E-box元件修饰端粒酶核心启动子序列及体外转录活性分析(英文) 被引量：1

2

作者 杨应斌 蔡绍皙 +8 位作者 于淑惠 杨力 李军 余松涛 戴小珍 王星星 晏小清 辛鑫 宋国立 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期510-514,共5页

人类端粒酶启动子(hTERT启动子)在肿瘤基因治疗中的有效性已经得到了证实.然而,hTERT启动子有限的肿瘤靶向转录活性困扰着它的临床应用.早期研究已经揭示,核心hTERT启动子上的-34位E-box元件与该启动子的肿瘤靶向转录活性有关.为进一步... 人类端粒酶启动子(hTERT启动子)在肿瘤基因治疗中的有效性已经得到了证实.然而,hTERT启动子有限的肿瘤靶向转录活性困扰着它的临床应用.早期研究已经揭示,核心hTERT启动子上的-34位E-box元件与该启动子的肿瘤靶向转录活性有关.为进一步探索核心hTERT启动子序列3′端富余E-box元件是否能提高启动子的肿瘤靶向转录能力,用化学合成方法在野生型hTERT(WT-hTERT)核心启动子片段(编码蛋白起始子ATG上游-268bp～-10bp)的3′端接入3个E-box序列,构建成修饰型hTERT(Mod-hTERT)启动子.然后,分别用WT-hTERT和Mod-hTERT启动子去调控增强型绿色荧光蛋白(EGFP)及荧光素酶报告基因在293FT、HepGⅡ、SGC7901、U2OS、以及原代培养人成纤维细胞(PHF)中表达.结果表明,在Mod-hTERT启动子的各实验组细胞中,能够在端粒酶阳性的293FT、HepGⅡ及SGC7901细胞组中观测到EGFP的表达,而在端粒酶阴性的U2OS及PHF细胞组中没有观测到EGFP的表达;在端粒酶阳性的293FT、HepGⅡ和SGC7901细胞株中,Mod-hTERT启动子调控下的荧光素酶活性要高于WT-hTERT启动子组(P<0.01);而在端粒酶阴性的U2OS细胞组中,Mod-hTERT启动子调控下的荧光素酶活性则低于WT-hTERT启动子组(P<0.01);在PHF细胞组中,Mod-hTERT启动子组与WT-hTERT启动子组的荧光素酶活性差异不显著(P>0.05).研究提示,在3′端增加E-box元件可以提高核心hTERT启动子序列的肿瘤靶向转录活性. 展开更多

关键词 人类端粒酶启动子 E-BOX 荧光素酶 增强型绿色荧光蛋白 肿瘤靶向性

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人端粒酶催化亚基基因启动子调控的肿瘤细胞特异表达载体 被引量：5

3

作者 杨义军 郑晓飞 +3 位作者 朱捷 付汉江 吕星 孙志贤 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期533-536,共4页

为获得端粒酶阳性肿瘤细胞特异表达载体用于癌症的基因治疗 ,克隆并构建了人端粒酶催化亚基 (hTERT)基因启动子调控的萤光素酶报告载体 .用脂质体转染法将其分别转染肿瘤细胞和正常细胞 ,检测其在肿瘤细胞和正常细胞中的转录活性 .hTER... 为获得端粒酶阳性肿瘤细胞特异表达载体用于癌症的基因治疗 ,克隆并构建了人端粒酶催化亚基 (hTERT)基因启动子调控的萤光素酶报告载体 .用脂质体转染法将其分别转染肿瘤细胞和正常细胞 ,检测其在肿瘤细胞和正常细胞中的转录活性 .hTERT启动子在所检测的 4种端粒酶阳性的肿瘤细胞中具有明显的转录活性 ,平均为阳性对照的 4 4 3% ;而在端粒酶阴性的正常人胚肺成纤维细胞中则无明显的转录活性 .提示hTRET启动子的转录活性在端粒酶阳性的肿瘤细胞中明显上调 。 展开更多

关键词 人端粒酶催化亚基基因启动子 调控 肿瘤细胞 表达载体 基因治疗

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人端粒酶逆转录酶启动子调控腺病毒介导胸苷激酶基因治疗人膀胱癌的动物实验研究 被引量：5

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作者 连文峰 林向阳 +6 位作者 张素英 王春仙 杨永安 于洋 宫香宇 陈艳军 张敏 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第18期1058-1061,共4页

目的:探讨带有人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子驱动单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶(HSV-tk)基因的重组腺病毒Ad-hTERT-HSV-tk结合无毒的环氧鸟苷(GCV)对人膀胱癌的治疗作用。方法:建立人膀胱癌细胞株253JBALB/C裸小鼠移植瘤模型,采用Ad-hTERT-... 目的:探讨带有人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子驱动单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶(HSV-tk)基因的重组腺病毒Ad-hTERT-HSV-tk结合无毒的环氧鸟苷(GCV)对人膀胱癌的治疗作用。方法:建立人膀胱癌细胞株253JBALB/C裸小鼠移植瘤模型,采用Ad-hTERT-HSV-tk裸鼠尾静脉注射,腹腔注射GCV治疗并观察结果。通过常规病理切片观察肿瘤破坏情况及安全性;通过TUNEL染色进一步观察肿瘤的凋亡情况,免疫组化法测定增值细胞核抗原(PCNA)。结果:Ad-hTERT-HSV-tk/GCV治疗组,显示出明显的肿瘤抑制作用,其肿瘤体积、重量显著低于各对照组(P<0.05),抑瘤率明显。Ad-hTERT-HSV-tk/GCV治疗组凋亡指数高于其它各组,而增殖指数却明显低于其它各组。结论:Ad-hTERT-HSV-tk/GCV系统对裸鼠移植瘤的生长有明显抑制作用,可以靶向性转入人膀胱癌细胞,治疗效果显著。 展开更多

关键词 膀胱肿瘤 单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶基因 腺病毒 人端粒酶逆转录酶启动子

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超声造影联合TERT启动子突变构建列线图模型对PTMC并发颈部淋巴结转移的预测效能

5

作者 吴昌慧 黄志平 +3 位作者 戴慧萍 邱慧芳 何春 唐芳 《实用医学杂志》 北大核心 2025年第5期756-765,共10页

目的探讨超声造影联合端粒酶逆转录酶(TERT)启动子突变构建列线图模型对甲状腺微小乳头状癌(PTMC)并发颈部淋巴结转移(CLNM)的预测能效。方法选取2021年1月至2024年3月在我院行甲状腺部分切除或全部切除+淋巴结清扫的PTMC患者202例,根... 目的探讨超声造影联合端粒酶逆转录酶(TERT)启动子突变构建列线图模型对甲状腺微小乳头状癌(PTMC)并发颈部淋巴结转移(CLNM)的预测能效。方法选取2021年1月至2024年3月在我院行甲状腺部分切除或全部切除+淋巴结清扫的PTMC患者202例,根据术后病理检查是否并发CLNM分为CLNM组(97例)和非CLNM组(105例)。收集所有PTMC患者的一般资料和超声(常规超声和超声造影)特征,采用Sanger测序检测TERT启动子突变。通过单因素和多因素非条件logistic回归分析PTMC并发CLNM的影响因素;RStudio4.4.1软件构建超声造影联合TERT启动子突变的PTMC并发CLNM列线图模型,用校准曲线、决策曲线和C指数评价列线图模型的一致性和净收益,Hosmer-Lemeshow检验列线图模型的拟合优度;MedCalc22.023软件绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评价评价超声造影、TERT启动子突变和超声造影联合TERT启动子突变构建列线图模型对PTMC并发CLNM的预测能效。结果经术后病理检查,202例PTMC患者CLNM发生率为48.02%(97/202)。单因素分析显示,甲状腺球蛋白抗体、病灶数目、纵横比、微钙化、增强时间、增强方式、增强强度、被膜连续性、TERT启动子突变与PTMC并发CLNM有关(P<0.05)。多因素非条件Logistic回归显示,多灶性肿瘤(OR=3.487,95%CI:1.641~7.406,P=0.001)、微钙化(OR=4.484,95%CI:2.113~9.516,P<0.001)、等或高增强(OR=3.187,95%CI:1.460~6.957,P=0.004)、被膜连续性中断(OR=2.201,95%CI:1.051~4.608,P=0.036)、TERT启动子突变阳性(OR=4.460,95%CI:2.132~10.103,P<0.001)为PTMC并发CLNM的独立危险因素。根据PTMC并发CLNM的独立危险因素构建超声造影联合TERT启动子突变列线图模型[Logit(P)=-4.486+1.350×病灶数目+1.399×微钙化+2.124×增强强度+1.524×被膜连续性+2.175×TERT启动子突变]。该列线图模型的C-指数为0.899(95%CI:0.893~0.905),校准曲线走形接近理想曲线,决策曲线高于两条极端曲线,Hosmer-Lemeshow检验P>0.05。ROC曲线显示,超声造影联合TERT启动子突变构建的列线图模型预测PTMC并发CLNM曲线下面积为0.899,大于超声造影、TERT启动子突变单独预测的0.857、0.697(P<0.05)。结论超声造影联合TERT启动子突变构建列线图模型对PTMC并发CLNM具有较高的预测能效。 展开更多

关键词 甲状腺微小乳头状癌 超声造影 端粒酶逆转录酶启动子突变 颈部淋巴结转移 列线图 预测能效

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人端粒酶逆转录酶基因启动子介导重组Caspase-3治疗人肺腺癌的研究 被引量：1

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作者 杨力芳 曾维忠 +1 位作者 邓凌燕 周锐 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期39-43,共5页

目的探讨使重组Caspase-3分子选择性诱导人肺腺癌细胞凋亡从而杀伤肿瘤细胞的可行性。方法构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因启动子调控下的重组Caspase-3分子,通过报告基因分析、Caspase-3酶活性分析、流式细胞分析、MTT方法和动物实验... 目的探讨使重组Caspase-3分子选择性诱导人肺腺癌细胞凋亡从而杀伤肿瘤细胞的可行性。方法构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因启动子调控下的重组Caspase-3分子,通过报告基因分析、Caspase-3酶活性分析、流式细胞分析、MTT方法和动物实验来研究其在肿瘤细胞中选择性诱导凋亡的作用。结果通过Caspase-3酶活性分析,发现phTERT-Rev-Caspase-3在人肺腺癌细胞A549中能够诱导Caspase-3的活性表达;流式细胞分析和MTT方法提示其具有明显的诱导A549细胞凋亡、抑制增殖的作用;动物实验显示其能够有效地抑制肺癌裸鼠移植瘤的生长。结论phTERT-Rev-Caspase-3是一种有效的选择性诱导人肺腺癌细胞凋亡的分子。 展开更多

关键词 肺腺癌 细胞凋亡 人端粒酶逆转录酶启动子

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端粒酶逆转录酶启动子hTERT／U6嵌合启动子的siRNA表达载体的构建及鉴定 被引量：1

7

作者 姜习新 张鹏辉 +3 位作者 刘北忠 涂植光 杨毅 刘靳波 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期763-765,共3页

目的构建有hTERT/U6嵌合启动子的小干扰RNA(small interfere RNA,siRNA)表达载体,并用分子生物学的技术和方法验证其对肝癌细胞SMMC-7721的效应。方法构建siRNA-EGFP-PTZU6+1表达载体,将其转染到稳定表达EGFP的肝癌细胞株7721(EGFP-772... 目的构建有hTERT/U6嵌合启动子的小干扰RNA(small interfere RNA,siRNA)表达载体,并用分子生物学的技术和方法验证其对肝癌细胞SMMC-7721的效应。方法构建siRNA-EGFP-PTZU6+1表达载体,将其转染到稳定表达EGFP的肝癌细胞株7721(EGFP-7721),观察细胞荧光的变化及RT-PCR,Western blot筛选出更有效的siRNA-EGFP-PTZU6+1载体。PCR扩增端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase promoter,hTERT)启动子的核心序列,构建针对EGFP基因的hTERT/U6嵌合启动子siRNA表达载体(EGFP-siRNA-PTZU6+1-U6/hTERT),正向和反向插入的hTERT启动子各1个,并将其转染至EGFP-7721细胞中,RT-PCR验证其效应。结果RT-PCR,Western blot结果表明两重组质粒siRNA-EGFP-PTZU6+1转染EGFP-7721细胞后EGFP基因的表达无统计学差异,但与对照组比较均显著抑制了EGFP基因(P<0.01)。而且,RT-PCR结果显示,反向插入的重组质粒EGFP-siRNA-PTZU6+1-U6/hTERT与对照组相比显著抑制了EGFP基因的表达(P<0.05)。结论构建的含hTERT/U6嵌合启动子的siRNA表达载体在肝癌细胞中具有功能活性,为探讨基因的靶向治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 端粒酶逆转录酶启动子 嵌合启动子 SIRNA表达载体 PTZU6+1:siRNA

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人端粒酶逆转录酶核心启动子调控的人TRAIL蛋白在人卵巢癌细胞中的表达 被引量：2

8

作者 李红梅 于月成 +4 位作者 宋天保 辛晓燕 张明 魏晓丽 许静洪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1106-1109,共4页

目的:构建人端粒酶逆转录酶基因核心启动子(hTERT)调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体真核表达载体,并检测TRAIL在转染的卵巢癌细胞SKOV3中的表达情况。方法:利用基因重组方法将TRAIL基因克隆入带有hTERT基因核心启动子pIRES2-EGFP真... 目的:构建人端粒酶逆转录酶基因核心启动子(hTERT)调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体真核表达载体,并检测TRAIL在转染的卵巢癌细胞SKOV3中的表达情况。方法:利用基因重组方法将TRAIL基因克隆入带有hTERT基因核心启动子pIRES2-EGFP真核表达载体中。获得由hTERT基因核心启动子调控的绿色荧光蛋白和带有效应型TRAIL基因的真核表达载体hTERTpromoter-pIRES2-EGFP-TRAIL。采用脂质体介导的方法将hTERT调控的TRAIL基因真核表达载体转染人卵巢癌SKOV3细胞,采用G418筛选获得阳性克隆;应用免疫细胞化学法、蛋白质印迹分析、流式细胞术(FCM)结合间接免疫荧光、RT-PCR法检测转染前后卵巢癌细胞中外源基因的表达。结果:经酶切鉴定及测序结果证实所构建载体正确。转染细胞中的TRAIL表达明显高于对照组细胞。结论:成功地构建了hTRET基因核心启动子调控的TRAIL基因真核表达载体,并在人卵巢癌细胞系SKOV3中得到稳定表达,为进一步研究其对卵巢癌细胞生物学行为的影响奠定了实验基础。 展开更多

关键词 人端粒酶逆转录酶基因核心启动子 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 基因治疗 卵巢癌细胞

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人端粒酶逆转录酶基因核心启动子调控的肿瘤细胞特异性表达载体的构建 被引量：1

9

作者 李红梅 宋天保 +2 位作者 于月成 黄红艳 张明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期96-98,102,共4页

目的构建了人端粒酶逆转录酶(human telomerasereserse transcription,hTERT)基因核心启动子调控的肿瘤细胞特异表达载体。方法提取人SKOV3细胞的基因组,利用PCR技术克隆hTERT基因核心启动子。并将其插入带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的表... 目的构建了人端粒酶逆转录酶(human telomerasereserse transcription,hTERT)基因核心启动子调控的肿瘤细胞特异表达载体。方法提取人SKOV3细胞的基因组,利用PCR技术克隆hTERT基因核心启动子。并将其插入带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的表达载体中。用脂质体转染法,将其分别转染肿瘤细胞和正常细胞,检测肿瘤细胞和正常细胞中GFP差异表达。结果HTERT基因核心启动子调控的表达载体,在所检测的3种肿瘤细胞中均具有明显的转录活性;而在正常细胞中则无明显的转录活性。结论hTRET基因核心启动子具有肿瘤特异性,构建hTERT基因核心启动子的载体可能是一种新型和有希望肿瘤治疗的途径。 展开更多

关键词 端粒酶逆转录酶和新基因启动子 基因治疗 表达载体

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人端粒酶逆转录酶启动子转录活性的磁共振成像研究

10

作者 杨燕 张冬 +3 位作者 龚明福 杨华 张松 邹利光 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期364-368,共5页

目的探索磁共振成像技术检测人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子靶向转录活性的可行性。方法构建慢病毒Lenti-hTERT-Fth-flag-Puro和对照Lenti-CMV-Fth-flag-Puro载体,将上述载体分别转染端粒酶阳... 目的探索磁共振成像技术检测人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子靶向转录活性的可行性。方法构建慢病毒Lenti-hTERT-Fth-flag-Puro和对照Lenti-CMV-Fth-flag-Puro载体,将上述载体分别转染端粒酶阳性的肺腺癌(A549)和端粒酶阴性的原代人牙周膜成纤维(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLFs)细胞。进行免疫荧光染色和Western blot检测细胞Fth-flag表达情况,采用普鲁氏蓝铁染色检测细胞摄铁量,MR扫描观察细胞T*2WI信号和T*2值改变。结果 A549细胞转染Lenti-hTERT-Fth-flag-Puro载体后,免疫荧光染色和Western blot检测结果显示转染细胞表达Fth-flag蛋白,未转染细胞不表达Fth-flag蛋白,普鲁氏蓝铁染色示转染细胞摄铁量较未转染细胞显著增加,MR扫描显示转染细胞T*2WI信号(1 340.86±49.21)和T*2值(12.10±0.92)较未转染细胞(2 049.08±87.58),(21.44±1.15)显著降低(P<0.05);HPDLFs细胞转染Lenti-hTERT-Fth-flag-Puro载体后,细胞无Fthflag蛋白表达,细胞摄铁量较未转染细胞无变化,T*2WI信号(2 225.42±73.43)和T*2值(24.01±1.13)较未转染细胞T*2WI信号(2 148.48±54.74)和T*2值(23.39±1.72)无显著差异(P>0.05)。而转染对照Lenti-CMV-Fth-flag-Puro慢病毒载体后,A549和HPDLFs细胞均表达Fth-flag蛋白,转染细胞摄铁量较未转染细胞均显著增加,转染细胞T*2WI信号[A549:(1 137.38±60.59),HPDLFs:(1 299.16±53.42)]和T*2值[A549:(9.61±1.17),HPDLFs:(11.54±0.74)]均比未转染细胞显著下降(P<0.05)。结论 MR铁蛋白报告基因成像技术可用于检测hTERT启动子转录活性,构建的慢病毒载体有望为恶性肿瘤的靶向诊断提供一种新的方法。 展开更多

关键词 磁共振成像 人端粒酶逆转录酶启动子 铁蛋白 报告基因

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人端粒酶逆转录酶启动子调控的真核荧光表达载体的构建与表达 被引量：1

11

作者 董翠 阴志刚 +1 位作者 王纯耀 张旭东 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2010年第3期448-450,共3页

目的:克隆人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子,构建真核表达载体pEGFP-C3-hTERTp。方法:PCR方法扩增出hTERTp,依次克隆至pGEM-TEasy载体和重组载体pEGFP-C3上。经酶切和测序鉴定后,重组质粒pEGFP-C3-hTERTp转染人胚肾293A细胞,并在荧光显微... 目的:克隆人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子,构建真核表达载体pEGFP-C3-hTERTp。方法:PCR方法扩增出hTERTp,依次克隆至pGEM-TEasy载体和重组载体pEGFP-C3上。经酶切和测序鉴定后,重组质粒pEGFP-C3-hTERTp转染人胚肾293A细胞,并在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况。结果:成功扩增出276bp的hTERTp,测序结果与GenBank中hTERT启动子DNA序列完全一致。重组载体pEGFP-C3-hTERTp转染293A细胞能观察到荧光表达。结论:成功构建了hTERT启动子调控的真核绿色荧光表达载体pEGFP-C3-hTERTp,其能够在人胚肾293A细胞中表达。 展开更多

关键词 人端粒酶逆转录酶启动子 真核荧光表达载体 构建 表达

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hTERT启动子驱动的TRAIL诱导宫颈癌细胞的凋亡作用 被引量：5

12

作者 张明 辛晓燕 +1 位作者 李红梅 宋晖 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期638-640,644,共4页

目的:探讨端粒酶(hTERT)启动子驱动的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对宫颈癌细胞生长抑制的作用。方法:脂质体转染将hTERT-TRAIL转染至宫颈癌细胞HeLa,RT-PCR检测TRAILmRNA的表达;通过MTT、流式细胞术检测稳定转染细胞的生长情况... 目的:探讨端粒酶(hTERT)启动子驱动的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对宫颈癌细胞生长抑制的作用。方法:脂质体转染将hTERT-TRAIL转染至宫颈癌细胞HeLa,RT-PCR检测TRAILmRNA的表达;通过MTT、流式细胞术检测稳定转染细胞的生长情况,电镜观察转染细胞的超微结构。结果:转染真核表达载体hTERT-TRAIL组细胞中TRAILmRNA细胞表达量高于对照组(P<0.05);hTERT-TRAIL组细胞对宫颈癌细胞的抑制率高于CMV-TRAIL组和对照组(P<0.05);hTERT-TRAIL组细胞对宫颈癌细胞的凋亡率明显高于转染CMV-TRAIL组和对照组(P<0.01);电镜结果显示,hTERT-TRAIL对细胞作用是以细胞凋亡为主。结论:hTERT启动子驱动的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对人宫颈癌细胞的生长有明显的抑制作用和诱导凋亡作用,为宫颈癌的研究奠定基础和临床治疗提供思路。 展开更多

关键词 宫颈肿瘤 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 端粒酶启动子 细胞凋亡

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小鼠TERT启动子调控的CD80-SEA基因重组腺病毒载体的构建及在肝癌细胞中的表达鉴定 被引量：1

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作者 司少艳 宋淑军 +5 位作者 徐冰心 赵刚 谭小青 刘俊丽 张建中 刘志国 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期717-720,共4页

目的:构建小鼠端粒酶反转录酶(mTERT)启动子调控的葡萄球菌肠毒素A(SEA)和CD80基因共表达重组腺病毒载体,并观察其介导的SEA和CD80在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中的表达情况。方法:采用AdEasy腺病毒体系,亚克隆mTERT核心启动子区至穿梭质粒pSh... 目的:构建小鼠端粒酶反转录酶(mTERT)启动子调控的葡萄球菌肠毒素A(SEA)和CD80基因共表达重组腺病毒载体,并观察其介导的SEA和CD80在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中的表达情况。方法:采用AdEasy腺病毒体系,亚克隆mTERT核心启动子区至穿梭质粒pShuttle2,并在其上游插入myc-Max反应元件MMRE,用来调控SEA及CD80基因的表达,构建SEA和CD80基因共表达重组腺病毒载体Ad-MMRE-mTERT-BIS,制备病毒并纯化,然后将病毒以感染复数为100的浓度分别感染肝癌细胞系Hepa1-6和成纤维细胞系NIH3T3。采用免疫荧光染色法检测SEA和CD80在细胞膜表面的表达情况。结果:重组腺病毒载体Ad-MMRE-mTERT-BIS感染的Hepa1-6肝癌细胞膜上能够共表达SEA和CD80;而病毒感染的NIH3T3细胞不能表达SEA和CD80。结论:成功地构建了mTERT启动子调控的SEA和CD80基因共表达重组腺病毒载体,能够调控SEA和CD80基因在肝癌细胞中的靶向表达,为进一步研究肝癌的靶向基因治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 葡萄球菌肠毒素A CD80 端粒酶反转录酶启动子 腺病毒

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AtTERT启动子结构特征及其对拟南芥非生物胁迫抗性的影响 被引量：1

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作者 孙玉萍 王杨 +6 位作者 门璟煜 董琦 杨颖 于婷乔 吴晓飞 卢存福 陈玉珍 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期769-780,共12页

端粒酶是具有逆转录酶活性的维持真核生物中染色体末端DNA完整性的核糖核蛋白复合物,而端粒酶逆转录酶(TERT,Telomerase reverse transcriptase)是端粒酶的核心组分。目前对TERT启动子的研究主要集中在人体的肿瘤细胞方面,而对植物TERT... 端粒酶是具有逆转录酶活性的维持真核生物中染色体末端DNA完整性的核糖核蛋白复合物,而端粒酶逆转录酶(TERT,Telomerase reverse transcriptase)是端粒酶的核心组分。目前对TERT启动子的研究主要集中在人体的肿瘤细胞方面,而对植物TERT基因启动子的结构及TERT表达调控机理的研究有所缺乏。本研究通过生物信息学技术对拟南芥TERT启动子结构特征进行了系统分析,并构建植物TERT启动子进化树;用半定量PCR检测野生型和AtTERT启动子区突变体拟南芥幼苗在非生物胁迫下的TRET表达模式。结果表明,系统进化分析显示TERT启动子在同一类群植物中有着较高的保守性;TERT基因启动子具有多个与干旱、盐、激素等相关调控元件;突变体AtTERT转录表达量普遍低于野生型;同时突变体对盐、干旱胁迫抗性降低,而对脱落酸处理不敏感。这说明AtTERT启动子含有抗旱、抗盐反应顺式作用元件,而无响应ABA调控机制,验证了对AtTERT基因启动子的顺式作用元件的预测,并初步证明AtTERT启动子对AtTERT的转录表达具有调控作用,对未来探讨该基因的表达调控机制提供了重要参考。 展开更多

关键词 拟南芥 端粒酶逆转录酶启动子 非生物胁迫 非端粒功能

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成人胶质母细胞瘤TERT启动子和ATRX突变预后价值 被引量：2

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作者 阴鲁鑫 徐义强 +4 位作者 肖维汉 褚夫政 邓李轶 黎传清 张路东 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期449-455,共7页

目的探究成人胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)中端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)启动子,α-地中海贫血伴智力低下综合征基因(alpha-thalassemia/mental retardation syndrome X-linked,ATRX)突变对预后的影响。... 目的探究成人胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)中端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)启动子,α-地中海贫血伴智力低下综合征基因(alpha-thalassemia/mental retardation syndrome X-linked,ATRX)突变对预后的影响。方法收集2020年至2022年在徐州医科大学附属医院神经外科行手术治疗的82例GBM患者病理及随访资料。TERT启动子区(C228T和C250T)及ATRX突变检测采用多重PCR扩增+二代测序(next generation sequencing,NGS)方法,根据患者HE染色切片的镜下结果将其分为低级别组织形态的GBM和高级别组织形态GBM两组,分析两组GBM患者TERT启动子和ATRX突变率的差异。GBM患者预后的影响因素采用多因素COX回归分析。结果两组GBM患者中TERT启动子突变率(25.0%vs.75.8%,χ^(2)=12.584,P<0.01)存在统计学差异。年龄≤60岁、术中肿瘤全切、术后放疗、化疗、TERT启动子非突变是影响GBM患者预后的独立保护性因素(P<0.05)。结论TERT启动子突变的GBM患者预后较差、临床中常规检测TERT启动子并结合其他分子标记物有助于正确评估GBM患者预后,有较高临床价值。 展开更多

关键词 胶质母细胞瘤 二代测序(NGS) 端粒酶逆转录酶(TERT)启动子 α一地中海贫血伴智力低下综 合征基因(ATRX) 预后

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重组TRAIL基因真核表达载体的构建及其诱导喉癌细胞株Hep2凋亡的效应 被引量：1

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作者 陈剑秋 成诗银 +2 位作者 张惠中 韩明坤 张丽 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期229-232,共4页

　目的: 研究TRAIL基因结合端粒酶启动子特异性靶向治疗的作用。方法: 利用已有编码凋亡诱导功能区的TRAILcDNA片断的表达载体pRNDE2 -1和IL- 2信号肽基因序列, 扩增IL- 2信号肽基因和TRAIL基因的融合基因, 并克隆入真核表达载体pGL3 18... 　目的: 研究TRAIL基因结合端粒酶启动子特异性靶向治疗的作用。方法: 利用已有编码凋亡诱导功能区的TRAILcDNA片断的表达载体pRNDE2 -1和IL- 2信号肽基因序列, 扩增IL- 2信号肽基因和TRAIL基因的融合基因, 并克隆入真核表达载体pGL3 181hTERT肿瘤特异性端粒酶启动子的下游, 构建TRAIL基因的重组真核表达载体pGL3 181hTERT/TRAIL。将该重组载体经阳离子脂质体转染入人喉癌细胞株Hep2中, 以台盼蓝拒染法和基因组DNA琼脂糖凝胶电泳, 观察转染的Hep2细胞的凋亡。结果: 构建了肿瘤人可溶性TRAIL基因的重组真核表达载体pGL3 181hTERT/TRAIL, 其表达产物能诱导喉癌细胞Hep2凋亡。结论: 成功地构建了重组真核表达载体pGL3 181hTERT/TRAIL, 为肿瘤的基因靶向治疗提供了可能性。 展开更多

关键词 TRAIL 端粒酶启动子 分泌表达 凋亡 基因治疗

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肿瘤特异性溶瘤腺病毒载体的构建及其在肿瘤细胞中特异性的表达

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作者 浦颖艳 方琳 +5 位作者 沈权 孙丽君 胡小翠 王艳 曹祥荣 苏长青 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期92-96,共5页

为构建一种由人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)调控的能够在肿瘤细胞中特异性增殖的新型肿瘤基因治疗溶瘤腺病毒载体系统,利用基因重组技术将hTERTp插入5型腺病毒E1A基因上游,构建肿瘤特异性增殖腺病毒AdSU,使其携带绿色荧光蛋白报告基因... 为构建一种由人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)调控的能够在肿瘤细胞中特异性增殖的新型肿瘤基因治疗溶瘤腺病毒载体系统,利用基因重组技术将hTERTp插入5型腺病毒E1A基因上游,构建肿瘤特异性增殖腺病毒AdSU,使其携带绿色荧光蛋白报告基因.同时构建增殖缺陷型腺病毒Ad-EGFP作为对照.通过Westernblot分析表明该特异性增殖腺病毒AdSU-EGFP在肿瘤细胞中特异性表达EIA.而通过荧光显微镜观察两者增殖实验发现,AdSU-EGFP在正常成纤维细胞株BJ及原代子宫成纤维细胞中无增殖,在肝癌细胞株MH-CC和肺癌细胞株A549中,则可见病毒增殖并裂解细胞的现象.由此可认为成功构建了肿瘤基因治疗的特异性溶瘤腺病毒载体系统AdSU,该系统能够在肿瘤细胞中特异性增殖并表达所携带的外源基因,这对肿瘤的定向基因治疗有着重要意义. 展开更多

关键词 基因治疗 溶瘤腺病毒 肿瘤 端粒酶启动子

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AdTERT-TRAIL对腺样囊性癌细胞株SACC-83靶向转基因作用的研究 被引量：1

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作者 苏涛 孙宏晨 +2 位作者 郑长玉 张红 卢东民 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期202-205,共4页

目的探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控TRAIL基因在端粒酶阳性的涎腺肿瘤细胞SACC-83中靶向表达的作用。方法通过同源重组构建腺病毒载体AdTERT-TRAIL,并转染SACC-83细胞和端粒酶阴性的HEL细胞,通过RT-PCR检测TRAIL基因表达,MTT法... 目的探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控TRAIL基因在端粒酶阳性的涎腺肿瘤细胞SACC-83中靶向表达的作用。方法通过同源重组构建腺病毒载体AdTERT-TRAIL,并转染SACC-83细胞和端粒酶阴性的HEL细胞,通过RT-PCR检测TRAIL基因表达,MTT法检测TRAIL基因表达对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果转染AdTERT-TRAIL后,TRAIL基因在SACC-83细胞中明显表达,对该肿瘤细胞的增殖有明显的抑制作用,而且诱导细胞凋亡比率增加;而在HEL细胞中未能诱导TRAIL基因表达,对该细胞的增殖没有影响,也没有诱导明显的细胞凋亡。结论成功构建腺病毒载体AdTERT-TRAIL,对涎腺肿瘤细胞具有靶向转基因作用。 展开更多

关键词 人端粒酶逆转录酶启动子 腺病毒 涎腺肿瘤

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