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人端粒相关蛋白T-STAR的克隆及其与端粒酶催化亚单位hTERT的相互作用研究
被引量：
1
1
作者
周平
房殿春
+4 位作者
毛高平
张启杰
曹传平
步晓华
刘为纹
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期546-548,共3页
目的克隆人端粒相关蛋白T-STAR并研究其与端粒酶催化亚单位hTERT在哺乳细胞内的相互作用。方法构建表达载体pGBKT7-hTERT,以pGBKT7-hTERT为诱饵,采用酵母双杂交技术进行cDNA文库筛选;构建pVP16-T-STAR和pMhTERT重组载体,脂质体法将其与...
目的克隆人端粒相关蛋白T-STAR并研究其与端粒酶催化亚单位hTERT在哺乳细胞内的相互作用。方法构建表达载体pGBKT7-hTERT,以pGBKT7-hTERT为诱饵,采用酵母双杂交技术进行cDNA文库筛选;构建pVP16-T-STAR和pMhTERT重组载体,脂质体法将其与报告质粒共转染入胃腺癌细胞株SGC-7901,以pM-53＋pVP16-T、pM3-VP16为阳性对照,以pM53＋pVP16-CP为阴性对照;以pM-hTERT＋pVP16、pM＋pVP16-T-STAR、pM＋pVP16为交叉阴性对照。ELISA法检测报告基因CAT的表达。结果成功构建真核表达载体pGBKT7-hTERT,将获得的阳性克隆测序,并进行同源性比较证实为是已收录的人cDNA序列T-STAR。pGBKT7-hTERT和pVP16-T-STAR共转染之后,报告基因CAT的表达（A值为0.258）显著高于阴性对照（A值为0.002~0.015）。结论T-STAR与hTERT在胃癌细胞内发生了相互作用,T-STAR可能是人端粒相关蛋白新成员,通过hTER参与端粒酶活性的调控。
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关键词
端粒
末端转移酶
端粒
结合
蛋白
质
类
双杂交系统技术
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职称材料
TRF1 219位磷酸化在细胞周期调控中的作用研究
被引量：
2
2
作者
徐熠熠
蓝建平
+4 位作者
朱园园
余建
来晓喻
孙洁
黄河
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
2007年第4期325-330,共6页
目的:研究端粒结合因子-1(TRF1)丝氨酸219位磷酸化对细胞周期的影响。方法:突变TRF1的219位氨基酸,构建模拟磷酸化和非磷酸化状态的突变体TRF1S219D-GFP和TRF1S219A-GFP,核苷酸测序和免疫印迹验证目的基因序列及蛋白表达。将野生型和突...
目的:研究端粒结合因子-1(TRF1)丝氨酸219位磷酸化对细胞周期的影响。方法:突变TRF1的219位氨基酸,构建模拟磷酸化和非磷酸化状态的突变体TRF1S219D-GFP和TRF1S219A-GFP,核苷酸测序和免疫印迹验证目的基因序列及蛋白表达。将野生型和突变体质粒用脂质体转染法转入H eLa细胞,观察它们在细胞中的定位、流式细胞仪检测各细胞周期的细胞数量、免疫印迹检测转染后ATM蛋白水平的改变。结果:测序证实突变成功,GFP抗体免疫印迹证实了突变体的蛋白表达。荧光显微镜下观察到TRF1S219A-GFP和TRF1S219D-GFP均呈点状定位于细胞端粒。流式细胞仪结果显示,过表达野生型和非磷酸化突变体的H eLa细胞产生G 2/M期的阻滞(P<0.05)。转染野生型和突变体后H eLa细胞中ATM蛋白含量均比对照组增高。结论:ATM激酶对TRF1丝氨酸219位的磷酸化可以抑制由于TRF1过量表达而引起的细胞周期G 2/M期的阻滞。
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关键词
端粒
端粒结合蛋白类
端粒
结合
因子-1
ATM
磷酸化
细胞周期
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职称材料
题名
人端粒相关蛋白T-STAR的克隆及其与端粒酶催化亚单位hTERT的相互作用研究
被引量：
1
1
作者
周平
房殿春
毛高平
张启杰
曹传平
步晓华
刘为纹
机构
北京空军总医院消化内科
第三军医大学西南医院消化科
山东淄博市中心医院消化内镜中心
出处
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期546-548,共3页
文摘
目的克隆人端粒相关蛋白T-STAR并研究其与端粒酶催化亚单位hTERT在哺乳细胞内的相互作用。方法构建表达载体pGBKT7-hTERT,以pGBKT7-hTERT为诱饵,采用酵母双杂交技术进行cDNA文库筛选;构建pVP16-T-STAR和pMhTERT重组载体,脂质体法将其与报告质粒共转染入胃腺癌细胞株SGC-7901,以pM-53＋pVP16-T、pM3-VP16为阳性对照,以pM53＋pVP16-CP为阴性对照;以pM-hTERT＋pVP16、pM＋pVP16-T-STAR、pM＋pVP16为交叉阴性对照。ELISA法检测报告基因CAT的表达。结果成功构建真核表达载体pGBKT7-hTERT,将获得的阳性克隆测序,并进行同源性比较证实为是已收录的人cDNA序列T-STAR。pGBKT7-hTERT和pVP16-T-STAR共转染之后,报告基因CAT的表达（A值为0.258）显著高于阴性对照（A值为0.002~0.015）。结论T-STAR与hTERT在胃癌细胞内发生了相互作用,T-STAR可能是人端粒相关蛋白新成员,通过hTER参与端粒酶活性的调控。
关键词
端粒
末端转移酶
端粒
结合
蛋白
质
类
双杂交系统技术
Keywords
telomerase
telomere binding proteins
two-hybrid system techniques
分类号
R34-33 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
TRF1 219位磷酸化在细胞周期调控中的作用研究
被引量：
2
2
作者
徐熠熠
蓝建平
朱园园
余建
来晓喻
孙洁
黄河
机构
浙江大学医学院附属第一医院血液科
出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
2007年第4期325-330,共6页
基金
国家重点基础研究发展计划(973计划)资助项目(2002CB713700)
国家自然科学基金资助项目(39870339)
文摘
目的:研究端粒结合因子-1(TRF1)丝氨酸219位磷酸化对细胞周期的影响。方法:突变TRF1的219位氨基酸,构建模拟磷酸化和非磷酸化状态的突变体TRF1S219D-GFP和TRF1S219A-GFP,核苷酸测序和免疫印迹验证目的基因序列及蛋白表达。将野生型和突变体质粒用脂质体转染法转入H eLa细胞,观察它们在细胞中的定位、流式细胞仪检测各细胞周期的细胞数量、免疫印迹检测转染后ATM蛋白水平的改变。结果:测序证实突变成功,GFP抗体免疫印迹证实了突变体的蛋白表达。荧光显微镜下观察到TRF1S219A-GFP和TRF1S219D-GFP均呈点状定位于细胞端粒。流式细胞仪结果显示,过表达野生型和非磷酸化突变体的H eLa细胞产生G 2/M期的阻滞(P<0.05)。转染野生型和突变体后H eLa细胞中ATM蛋白含量均比对照组增高。结论:ATM激酶对TRF1丝氨酸219位的磷酸化可以抑制由于TRF1过量表达而引起的细胞周期G 2/M期的阻滞。
关键词
端粒
端粒结合蛋白类
端粒
结合
因子-1
ATM
磷酸化
细胞周期
Keywords
Telomere
Telomere-binding proteins
Telomere repeat binding faetor 1
ATM
Phosphorylation
Cell eyele
分类号
R329 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人端粒相关蛋白T-STAR的克隆及其与端粒酶催化亚单位hTERT的相互作用研究
周平
房殿春
毛高平
张启杰
曹传平
步晓华
刘为纹
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
TRF1 219位磷酸化在细胞周期调控中的作用研究
徐熠熠
蓝建平
朱园园
余建
来晓喻
孙洁
黄河
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
2007
2
在线阅读
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职称材料
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