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卵转铁蛋白间接竞争ELISA方法的建立 被引量:1
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作者 王薇 魏世杰 许文徽 《农村实用技术》 2016年第1期48-52,共5页
卵转铁蛋白是鸡蛋中的主要过敏原,针对鸡蛋中主要过敏原卵转铁蛋白建立了间接竞争ELISA方法,该方法检出限为(619.26±65.6)ng/m L。该方法对卵类黏蛋白、溶菌酶、α-乳白蛋白、牛奶总蛋白、β-乳球蛋白、酪蛋白、花生总蛋白、大豆... 卵转铁蛋白是鸡蛋中的主要过敏原,针对鸡蛋中主要过敏原卵转铁蛋白建立了间接竞争ELISA方法,该方法检出限为(619.26±65.6)ng/m L。该方法对卵类黏蛋白、溶菌酶、α-乳白蛋白、牛奶总蛋白、β-乳球蛋白、酪蛋白、花生总蛋白、大豆、杏仁和绿豆等致敏蛋白没有交叉反应。板内和板间重复性较好,因此所建立的方法可用于对卵转铁蛋白的检测。 展开更多
关键词 卵转铁蛋白 间接竞争elisa方法 过敏原
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欧亚类禽H1N1猪流感病毒HA蛋白单克隆抗体的制备及竞争ELISA检测方法的建立 被引量:6
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作者 王飞飞 黄凯伦 +6 位作者 宋祖晨 刘雅茹 张丹丹 杨焕良 乔传玲 陈化兰 陈艳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期946-951,976,共7页
为建立一种快速检测欧亚类禽H1N1猪流感病毒(EA H1N1 SIV)抗体的检测方法,本研究以EA H1N1 SIV代表株A/Swine/Liaoning/445/2018(LN445)灭活的全病毒免疫BALB/c小鼠,通过HI试验筛选得到7株HA蛋白单克隆抗体(MAb),分别命名为1B3、2B12、... 为建立一种快速检测欧亚类禽H1N1猪流感病毒(EA H1N1 SIV)抗体的检测方法,本研究以EA H1N1 SIV代表株A/Swine/Liaoning/445/2018(LN445)灭活的全病毒免疫BALB/c小鼠,通过HI试验筛选得到7株HA蛋白单克隆抗体(MAb),分别命名为1B3、2B12、2E1、3B4、3F6、3G5、3H12。抗体亚类鉴定结果显示,HA蛋白MAb除3B4重链为IgG1之外,其余均为IgG2a,7株MAb轻链均为κ链。间接免疫荧光试验结果显示,7株HA蛋白MAb均可以与EA H1N1 SIV发生特异性反应。采用纯化的EA H1N1 SIV(LN445)灭活全病毒作为包被抗原,以EA H1N1 SIV SPF猪阳性血清作为待检血清,选取HA蛋白MAb 2B12作为竞争抗体,经条件优化后初步建立了检测EA H1N1 SIV抗体的竞争ELISA方法。特异性试验结果显示EA H1N1 SIV的阳性血清对2B12 MAb具有良好的阻断作用,而甲型H1N1 SIV、H3N2 SIV、猪圆环病毒2型(PCV2)、轮状病毒(RV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)和肠致病性大肠杆菌(EPEC)阳性血清对其均无阻断作用,表明该方法的特异性较强;敏感性试验结果显示,该方法对HI效价为1:10的EA H1N1 SIV阳性血清检测仍为阳性结果,敏感性较高;重复性试验结果显示,该方法批内、批间变异系数均小于10%,重复性较好。利用本研究建立的竞争ELISA方法与GB/T 27535-2011猪流感HI抗体检测方法同时对100份临床猪血清样品进行检测,结果显示该方法与国标HI检测方法总体符合率为81%,表明该方法的准确性较高。本研究为EA H1N1 SIV抗体检测和流行病学调查提供了有效的检测手段。 展开更多
关键词 欧亚类禽H1N1 猪流感病毒 单克隆抗体 竞争elisa方法
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山羊血清中CD58间接竞争ELISA检测方法的建立 被引量:2
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作者 高纪振 周丽梅 +3 位作者 王爱华 靳亚平 宋毓民 吴庆侠 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2009年第8期25-30,共6页
【目的】制备抗CD58单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测山羊血清中CD58含量的间接竞争ELISA方法。【方法】以纯化的CD58蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术制备抗CD58单抗,并对其特异性进行鉴定;在此基础上,建立CD5... 【目的】制备抗CD58单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测山羊血清中CD58含量的间接竞争ELISA方法。【方法】以纯化的CD58蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术制备抗CD58单抗,并对其特异性进行鉴定;在此基础上,建立CD58间接竞争ELISA检测方法,对不同生理时期山羊血清中CD58的含量进行检测。【结果】筛选出1株稳定分泌抗CD58单克隆抗体的杂交瘤细胞株G6;玫瑰花环抑制试验和Western-blotting试验表明,制备的细胞株能分泌针对CD58的特异性单克隆抗体;对间接竞争ELISA方法的反应条件进行优化后,建立了检测CD58的间接竞争ELISA方法,该方法最适可测范围为10-1000000 ng/mL,理论最低检测限为3.087 ng/mL,批内和批间平均变异系数分别为3.50%和5.22%;用建立的方法检测未发情和发情山羊血清中CD58含量分别为(32.160±3.69)和(35.929±3.08)μg/mL,怀孕山羊血清中CD58含量为(61.564±5.10)μg/mL。【结论】建立了山羊血清中CD58间接竞争ELISA检测方法,该方法敏感、特异,具有良好的重复性对不同生理时期山羊血清中CD58含量的检测表明,怀孕山羊血清中CD58含量显著高于未发情和发情山羊。 展开更多
关键词 CD58蛋白 单克隆抗体 间接竞争elisa方法
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猪伪狂犬病毒gE蛋白单克隆抗体的制备及竞争ELISA抗体检测方法的建立 被引量:3
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作者 袁梦 常巍 +3 位作者 杨世丽 周海欧 李翠婷 马燕梅 《江西农业学报》 CAS 2022年第8期114-121,共8页
为了制备抗猪伪狂犬病病毒(PRV)糖蛋白gE的单克隆抗体并制备竞争ELISA猪伪狂犬病病毒gE抗体检测试剂盒,以原核表达系统表达PRV FA株囊膜蛋白gE的主要抗原表位区段(aa52~aa238)的His标签,获得了融合蛋白gE-6×His;将gE-6×His纯... 为了制备抗猪伪狂犬病病毒(PRV)糖蛋白gE的单克隆抗体并制备竞争ELISA猪伪狂犬病病毒gE抗体检测试剂盒,以原核表达系统表达PRV FA株囊膜蛋白gE的主要抗原表位区段(aa52~aa238)的His标签,获得了融合蛋白gE-6×His;将gE-6×His纯化后免疫BALB/c小鼠,取其脾脏制备脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0),进行细胞融合,以感染PRV的PK15细胞的蛋白为样本检测抗体,使用间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞系,获得了2株稳定分泌抗PRV gE单克隆抗体的杂交瘤细胞系。结果显示:制备的抗体特异性好,效价为1∶5120;以单克隆抗体为检测抗体建立的竞争ELISA抗体检测方法灵敏、特异。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 gE蛋白 单克隆抗体 竞争elisa抗体检测方法
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