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基于竞争性等位基因特异性PCR技术的麦芽品种纯度定性和定量检测 被引量:3
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作者 蒋培基 王德良 +4 位作者 徐东东 黄承雪 郭刚刚 栾春光 蒲彪 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第24期322-326,共5页
利用测序技术筛选和确认4个可以区分7种大麦麦芽的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)位点,并建立区分图谱。同时,利用竞争性等位基因特异性聚合酶链式反应检测技术对预混样品进行定量测试,其检测的结果与真实性之间... 利用测序技术筛选和确认4个可以区分7种大麦麦芽的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)位点,并建立区分图谱。同时,利用竞争性等位基因特异性聚合酶链式反应检测技术对预混样品进行定量测试,其检测的结果与真实性之间相对误差小于3%。该技术的建立对大麦麦芽纯度检测提供方法,对大麦麦芽SNP指纹数据库的完善提供了数据支持。 展开更多
关键词 大麦麦芽 竞争性等位基因异性pcr(kasp) 定性检测 定量检测
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基于高通量测序的青花菜KASP标记开发与应用 被引量:1
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作者 张振超 陶美奇 +4 位作者 潘永飞 孙国胜 王传友 安林海 戴忠良 《核农学报》 北大核心 2025年第3期513-521,I0003-I0005,共12页
为提高青花菜分子标记辅助育种水平,本研究基于高通量测序数据开发了70组KASP标记,并采用KASP检测平台对43份青花菜试验材料进行分型,根据分型结果筛选出分型效果好、多态性高的标记,用于指纹图谱构建、遗传关系确定和纯度鉴定。结果表... 为提高青花菜分子标记辅助育种水平,本研究基于高通量测序数据开发了70组KASP标记,并采用KASP检测平台对43份青花菜试验材料进行分型,根据分型结果筛选出分型效果好、多态性高的标记,用于指纹图谱构建、遗传关系确定和纯度鉴定。结果表明,70组KASP标记中,未分型成功有3个,未分型材料>5份有13个,多态性差的有6个,分型成功48个(成功率68.6%)。48个标记中,多态性信息含量(PIC)值≥0.30的标记有37个(占比77.08%),其中PIC值为0.37的标记数量最多,为11个,0.38的标记有3个。将48个标记的分型结果转化为二元编码数据,获得了43份青花菜育种材料的SNP-DNA指纹图谱。聚类分析结果发现,Br05与其他材料的遗传关系较远;Br12和Br19、Br33和Br34之间遗传系数均为100,Br14和Br32的遗传系数为99,表明两两间为同一株系的可能性大,这与在田间的表型观察结果基本一致。10组标记对30株Br19的一致性进行鉴定,发现纯度值区间为83.3%~96.7%,说明Br19株系间存在差异;采用10组标记对亲本Br19、Br35和杂交种F1(Br19×Br35)进行基因分型,结果有5个标记(SNP07、SNP09、SNP10、SNP11和SNP19)在三者间的分型结果不同,可用于杂交制种田F1(Br19×Br35)种子纯度鉴定。本研究结果对青花菜种质资源鉴定、分子标记辅助育种与新品种保护具有重要的应用价值。 展开更多
关键词 高通量测序 竞争性等位基因异性pcr 指纹图谱 纯度鉴定 分子标记
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稻瘟病广谱抗性基因Pigm特异性分子标记的开发和应用 被引量:20
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作者 陈涛 孙旭超 +9 位作者 张善磊 梁文化 周丽慧 赵庆勇 姚姝 赵凌 赵春芳 朱镇 张亚东 王才林 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期28-36,共9页
【目的】来自籼稻品种谷梅4号的Pigm是一个对稻瘟病菌具有广谱和持久抗性的重要基因。为有效提高Pigm基因的选择效率,有必要开发具有特异性的共显性分子标记进行辅助育种。【方法】本研究根据谷梅4号Pigm位点存在的特异性核苷酸变异,利... 【目的】来自籼稻品种谷梅4号的Pigm是一个对稻瘟病菌具有广谱和持久抗性的重要基因。为有效提高Pigm基因的选择效率,有必要开发具有特异性的共显性分子标记进行辅助育种。【方法】本研究根据谷梅4号Pigm位点存在的特异性核苷酸变异,利用Tetra-primerARMS-PCR和KASP两种不同的基因分型技术开发出分子标记T-Pigm和K-Pigm,对不同品种(品系)以及淮稻9号/谷梅4号的F2分离群体进行基因型检测,并结合穗颈瘟人工接种鉴定,对标记的准确性进行评价。【结果】序列比对分析表明,谷梅4号Pigm位点中Pigm-Nbs2基因起始密码子上游515 bp处存在一个特殊的单核苷酸变异。利用已开发的两种类型的分子标记能够有效区分3种不同的基因型,且基因型与穗颈瘟人工接种鉴定结果完全一致。【结论】利用分子标记T-Pigm和K-Pigm可以实现对Pigm基因型快速、准确的检测,加快抗稻瘟病水稻新品种的选育进程。 展开更多
关键词 稻瘟病 Pigm 异性标记 四引物扩增受阻突变体系pcr 竞争性等位基因异性pcr
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水稻抽穗期调控基因Hd6功能标记的开发及应用
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作者 陈智慧 陶亚军 +8 位作者 范方军 许扬 王芳权 李文奇 古丽娜尔·巴合提别克 蒋彦婕 朱建平 李霞 杨杰 《中国水稻科学》 北大核心 2025年第1期47-54,共8页
【目的】探究Hd6等位基因型在江苏粳稻和籼稻中的分布,提高Hd6等位基因型在水稻抽穗期遗传改良中的应用价值和选择效率。【方法】根据籼稻品种Kasalath中有功能的等位基因Hd6与粳稻品种日本晴中无功能的等位基因hd6在功能区域存在的单... 【目的】探究Hd6等位基因型在江苏粳稻和籼稻中的分布,提高Hd6等位基因型在水稻抽穗期遗传改良中的应用价值和选择效率。【方法】根据籼稻品种Kasalath中有功能的等位基因Hd6与粳稻品种日本晴中无功能的等位基因hd6在功能区域存在的单核苷酸差异,设计和筛选出Hd6基因功能标记K-Hd6-21F/Hd6-1R和N-Hd6-22F/Hd6-1R,并测序分析验证;利用K-Hd6-21F/Hd6-1R和N-Hd6-22F/Hd6-1R对江苏省不同生态类型的粳稻品种和不同来源的籼稻品种的Hd6基因型进行检测。【结果】该功能标记可准确鉴定出Hd6的不同基因型;48份中熟中粳水稻品种中,携带Hd6的水稻品种占42%;30份迟熟中粳水稻品种中携带Hd6的占50%;48份早熟晚粳水稻品种中,携带Hd6的占77.5%。Hd6的2种等位基因型在江苏省3个不同生态区域粳稻品种中均有分布,但有功能的Hd6等位基因型在3个区域粳稻品种中的分布随着抽穗期变长,基因型频率增加;而Hd6基因在籼稻中表现出高度保守性,检测的62个籼稻品种均携带有功能的Hd6等位基因型。【结论】本研究为Hd6基因的育种利用和分子标记辅助选择奠定了基础,也为籼稻早熟品种的选育提供新依据和有效途径。 展开更多
关键词 水稻 抽穗期 Hd6 功能标记 等位基因异性pcr
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基于KASP标记的厚皮甜瓜种质资源遗传多样性分析及指纹图谱构建
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作者 孙国胜 张昌伟 +4 位作者 山溪 许丁帆 戴忠良 张振超 马志虎 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期2349-2355,共7页
本研究通过竞争性等位基因特异性PCR(KASP)标记对厚皮甜瓜核心种质资源进行多态性分析,以期筛选厚皮甜瓜种质资源的单核苷酸多态性(SNP)标记,应用于厚皮甜瓜种质资源及品种的纯度鉴定和指纹图谱构建。从公布的297份甜瓜重测序数据中挑... 本研究通过竞争性等位基因特异性PCR(KASP)标记对厚皮甜瓜核心种质资源进行多态性分析,以期筛选厚皮甜瓜种质资源的单核苷酸多态性(SNP)标记,应用于厚皮甜瓜种质资源及品种的纯度鉴定和指纹图谱构建。从公布的297份甜瓜重测序数据中挑选95份厚皮甜瓜重测序数据进行SNP标记开发,对课题组的20份核心厚皮甜瓜种质资源进行多态性分析。结果显示,共计开发50个SNP标记,分布在甜瓜12条染色体中。50个SNP标记中,有23个SNP标记能够将本研究中的19份核心厚皮甜瓜种质资源进行分型,其中Marker33、Marker38、Marker23、Marker36、Marker47、Marker426个标记能够完全区分19份甜瓜种质资源,本研究结果可以为后期厚皮甜瓜种质资源和品种纯度鉴定提供有利的支撑。 展开更多
关键词 厚皮甜瓜 单核苷酸多态性 竞争性等位基因异性pcr 遗传多样性 指纹图谱
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基于表型性状和KASP标记的玉米DUS测试品种的聚类分析 被引量:5
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作者 王艳平 潘红 +5 位作者 吴燕 王显生 汪鸿星 李华勇 于堃 沈奇 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第5期1171-1178,共8页
为探讨竞争性等位基因特异性PCR(KASP)标记在玉米DUS(特异性、一致性和稳定性)测试过程中近似品种筛选方面的应用,采用表型和KASP标记对玉米测试品种进行聚类分析。表型的二阶聚类结果显示,315份玉米品种可划分为普通型、甜质型以及糯... 为探讨竞争性等位基因特异性PCR(KASP)标记在玉米DUS(特异性、一致性和稳定性)测试过程中近似品种筛选方面的应用,采用表型和KASP标记对玉米测试品种进行聚类分析。表型的二阶聚类结果显示,315份玉米品种可划分为普通型、甜质型以及糯质型和甜糯混合型3类,“籽粒:类型”性状对聚类结果的影响最大;系统聚类结果显示,单交种和自交系间的分离比较明显,普通型玉米与甜质型、糯质型、甜糯混合型玉米间的分离也较明显,甜质型、糯质型、甜糯混合型玉米三者之间的分离不明显。KASP标记聚类结果显示,自交系与单交种交织在一起,普通型玉米与甜质型、糯质型、甜糯混合型玉米间明显分离,甜质型玉米与糯质型、甜糯混合型玉米间的分离也较明显,糯质型玉米和甜糯混合型玉米相互交织。综上分析可知,在繁殖类型上单交种和自交系表型聚类结果与KASP标记聚类结果不同,而在籽粒类型上2种聚类结果基本吻合。 展开更多
关键词 表型 竞争性等位基因异性pcr(kasp)标记 玉米DUS(异性、一致性和稳定性)测试 遗传多样性
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一个辣椒胞质雄性不育SCAR标记的KASP转化及其应用 被引量:7
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作者 张强 张涛 +5 位作者 常晓轲 韩娅楠 程志芳 刘卫 王彬 姚秋菊 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2019年第5期93-98,共6页
为了在辣椒三系杂交育种研究中缩小群体筛选范围,减小工作量,提高不育系和保持系选择效率,根据细胞质育性标记SCAR130的序列多态性位点设计KASP标记引物,使其转化为KASP130分子标记,并以辣椒三系材料的雄性不育系、保持系、恢复系和F 1... 为了在辣椒三系杂交育种研究中缩小群体筛选范围,减小工作量,提高不育系和保持系选择效率,根据细胞质育性标记SCAR130的序列多态性位点设计KASP标记引物,使其转化为KASP130分子标记,并以辣椒三系材料的雄性不育系、保持系、恢复系和F 1杂交种为试验对象,利用荧光定量PCR仪LC480和LGC公司的SNPline这两种检测平台将KASP130标记应用于辣椒细胞质类型检测,并对该标记稳定性和可靠性进行了检验。结果表明,KASP130标记同SCAR130标记一样可以把待试辣椒材料准确地分为可育细胞质(N)和不育细胞质(S),并在分子标记辅助选择育种中成功应用到辣椒细胞质育性的早期鉴定以及辣椒保持系和雄性不育系的回交育种研究。综上,细胞质育性标记SCAR130已经被成功转化为KASP130分子标记,该标记可以明确鉴定辣椒的细胞质类型,这为其在辣椒三系杂交育种上的应用奠定了研究基础。 展开更多
关键词 辣椒 胞质雄性不育 三系配套 竞争性等位基因异性pcr
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KASP分子标记辅助选育甜椒核雄性不育两用系 被引量:7
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作者 范妍芹 严立斌 +1 位作者 孟雅宁 张红肖 《中国蔬菜》 北大核心 2022年第12期38-44,共7页
为了进一步提高甜椒核雄性不育两用系育种效率,利用AB91核雄性不育候选基因Capana05g000747的突变位点设计KASP分子标记,以转育甜椒核雄性不育两用系的F_(2)群体及育成的两用系为试验材料,对植株的育性进行基因型检测,并检验该标记的准... 为了进一步提高甜椒核雄性不育两用系育种效率,利用AB91核雄性不育候选基因Capana05g000747的突变位点设计KASP分子标记,以转育甜椒核雄性不育两用系的F_(2)群体及育成的两用系为试验材料,对植株的育性进行基因型检测,并检验该标记的准确性。结果表明,该分子标记与甜椒核雄性不育的育性呈现共分离,在苗期对F_(2)植株的基因型进行早期鉴别,分型准确率分别为98.91%和99.04%,可有效淘汰基因型为MSMS的可育株,筛选出基因型为MSms的可育株直接用于不育系的转育,转育出了黄色和红色甜椒核雄性不育两用系AB91-HTJ412和AB91-HLD163。在苗期对两用系群体的育性基因型进行早期鉴别,可有效淘汰基因型为MSms的可育株,选留基因型为msms的不育株直接用于杂交组合选配及杂交制种。 展开更多
关键词 甜椒 核雄性不育 杂交育种 竞争性等位基因异性pcr 分子标记辅助选择
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桃花花型(铃形/蔷薇形)基因型鉴定、分子标记开发与利用 被引量:5
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作者 吉爽秋 王力荣 +7 位作者 李勇 朱更瑞 曹珂 方伟超 陈昌文 王新卫 张琦 吴金龙 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期422-431,共10页
【目的】进一步完善桃花型基因型分类,开发桃花型相关分子标记,为观赏桃花的分子辅助育种提供理论支持。【方法】利用全基因组关联分析(genome-wide association study,GWAS)、IGV可视化软件分析,以及竞争性等位基因特异性PCR(Kompetiti... 【目的】进一步完善桃花型基因型分类,开发桃花型相关分子标记,为观赏桃花的分子辅助育种提供理论支持。【方法】利用全基因组关联分析(genome-wide association study,GWAS)、IGV可视化软件分析,以及竞争性等位基因特异性PCR(Kompetitive allele-specific PCR,KASP)技术,在定位到的候选位点进行鉴定分析。【结果】GWAS定位分析在Pp08:14518604~14521291 bp存在一个ms179810转座子的缺失,x2验证结果表明,转座子的插入与缺失与花型性状无显著性关系。在转座子上游33980 bp处鉴定到一个单碱基核苷酸(SNP)变异,变异类型分为CC型、AC型、AA型3种,比对结果显示基因型为CC型、AC型,其表型为铃形,基因型为AA型,其表型为蔷薇形,在145份桃自然群体中鉴定准确率为98.62%。但是通过表型比对发现,基因型为CC时,铃形花冠直径为(1.54±0.46)cm,同时,基因型杂合的中蟠17号自交群体后代192株中基因型与表型准确率在98.44%。【结论】根据桃基因组中Pp08:14484624 bp处的变异类型以及桃花型的调查结果,首次将铃形花基因型细分为纯合铃形和杂合铃形,且开发了同时鉴定纯合铃形、杂合铃形及蔷薇形的分子标记。 展开更多
关键词 花型 基因组关联分析(GWAS) IGV 竞争性等位基因异性pcr(kasp)
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烟草种质基因分型核心SNP标记的开发 被引量:5
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作者 余世洲 曹领改 +3 位作者 王世泽 刘勇 边文杰 任学良 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期89-100,共12页
基于KASP(kompetitive allele specific PCR)技术平台,开发并验证可用于烟草核心种质基因分型的SNP(single nucleotide polymorphism)标记和对应检测引物,为烟草种质基因型鉴定评价、遗传多样性分析、核心种质筛选等提供技术和数据支持... 基于KASP(kompetitive allele specific PCR)技术平台,开发并验证可用于烟草核心种质基因分型的SNP(single nucleotide polymorphism)标记和对应检测引物,为烟草种质基因型鉴定评价、遗传多样性分析、核心种质筛选等提供技术和数据支持。利用Python和Perl脚本程序对覆盖烟草全基因组的1 179 154个SNP位点进行KASP引物设计和筛选,并通过试验验证其准确度和可用性。结果共有217 621个SNP位点完成了对应KASP引物设计,选择1 378个SNP位点进行试验验证,明确了732个可作为SNP标记,并确定48个SNP标记作为烟草种质资源基因分型的核心标记。这48个核心标记在烟草24条染色体上平均分布,平均PIC为0.36,平均MAF为0.39。利用确定的48个核心SNP标记,可以将各供试种质特别是将当前主栽烟草品种基因型进行区分,且标记具有极高的可靠性。 展开更多
关键词 烟草 种质资源 单核苷酸多态性 竞争性等位基因异性pcr
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不同绵羊品种FSHR基因多态性及其与产羔数的关联分析 被引量:7
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作者 刘玲玲 马海玉 刘武军 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1132-1140,共9页
旨在探究阿勒泰羊、和田红羊、吐鲁番黑羊中FSHR基因g.75132817C>T、g.75320579G>A、g.75320741G>A突变位点的多态性与产羔数的关系,为高繁殖力绵羊的选育提供新的分子标记。利用竞争性等位基因特异性PCR(The kompetitive alle... 旨在探究阿勒泰羊、和田红羊、吐鲁番黑羊中FSHR基因g.75132817C>T、g.75320579G>A、g.75320741G>A突变位点的多态性与产羔数的关系,为高繁殖力绵羊的选育提供新的分子标记。利用竞争性等位基因特异性PCR(The kompetitive allele specific PCR genotyping system,KASP)技术对FSHR基因的3个突变位点进行分型,利用SPSS 19.0进行关联分析。结果表明,g.75132817C>T位点在3个群体中均表现为中度多态(025<PIC<0.5);g.75320579G>A和g.75320741G>A位点在3个群体中均为低度多态(PIC<0.25)。g.75132817C>T位点中,和田红羊突变型TT个体产羔数显著高于野生型CC个体(P<0.05)。g.75320579G>A位点中,阿勒泰羊野生型GG个体产羔数显著高于杂合型GA个体。g.75320741G>A位点中,阿勒泰羊野生型GG个体产羔数极显著高于杂合型GA个体和突变型AA个体;吐鲁番黑羊突变型AA个体产羔数显著高于野生型GG个体。因此,推测FSHR基因g.75132817C>T位点适用于和田红羊产羔数的选育;g.75320741G>A位点适用于吐鲁番黑羊产羔数的选育。 展开更多
关键词 绵羊 FSHR基因 竞争性等位基因异性pcr 产羔数
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高通量基因型分型技术及其在水稻中的应用 被引量:7
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作者 张先文 贺治洲 +2 位作者 江南 邓华凤 李继明 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期67-73,共7页
作物种质资源遗传基础的深入认识与高效利用,对于品种改良和粮食安全具有重要意义。传统系谱考察的方法对指导育种实践发挥了重要作用,随着分子生物学的发展,基因组学和高通量SNP分子标记等基因型分型方法可以更便捷地对种质资源进行鉴... 作物种质资源遗传基础的深入认识与高效利用,对于品种改良和粮食安全具有重要意义。传统系谱考察的方法对指导育种实践发挥了重要作用,随着分子生物学的发展,基因组学和高通量SNP分子标记等基因型分型方法可以更便捷地对种质资源进行鉴定。就基因型分型的主要方法进行了总结,重点论述了以SNP为核心的下一代高通量测序(NGS)分型方法、竞争性等位基因特异性PCR(KASP)和SNP芯片系统,以及当前主流的SNP分析工具和数据库。同时,介绍了高通量SNP分型技术在水稻研究中的进展,并就分型技术在作物育种等领域的应用和发展趋势进行了展望。 展开更多
关键词 系谱 SNP 分型 下一代高通量测序 竞争性等位基因异性pcr
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