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突变K-ras基因siRNA腺病毒载体的构建及其对人肺腺癌细胞株H441的影响
被引量：
2
1
作者
张志平
姜冠潮
+2 位作者
杨帆
周足力
王俊
《中国肿瘤临床》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第9期481-484,共4页
目的:构建含12密码子点突变的K-ras基因siRNA腺病毒载体,并研究其对人肺腺癌细胞株H441中突变K-ras基因表达的影响。方法:首先构建含有K-rasV12 siRNA的人H1启动子真核表达载体pSilencerH1/siK-rasV12;利用EcoRⅠ与HindⅢ双酶切将人H1...
目的:构建含12密码子点突变的K-ras基因siRNA腺病毒载体,并研究其对人肺腺癌细胞株H441中突变K-ras基因表达的影响。方法:首先构建含有K-rasV12 siRNA的人H1启动子真核表达载体pSilencerH1/siK-rasV12;利用EcoRⅠ与HindⅢ双酶切将人H1载体启动子和K-rasV12 siRNA序列亚克隆至经相同酶切的腺病毒穿梭质粒pAdTrack中,形成转移质粒pAdTrack-H1/siK-rasV12,然后与腺病毒骨架质粒pAd/PL共转染至大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,酶切、序列鉴定。提取含目的基因的腺病毒重组体质粒,经PacⅠ酶切线性化后用脂质体转染293细胞,包装成重组腺病毒AdH1/siK-rasV12,扩增、纯化,并对病毒滴度进行检测。利用得到的重组腺病毒感染人肺腺癌H441细胞株,采用Westernblot检测感染前后K-rasV12蛋白表达水平的变化,观察AdH1/siK-rasV12对人肺腺癌细胞K-rasV12表达的影响。结果:成功构建K-rasV12s iRNA腺病毒载体,该载体可明显抑制H441细胞中K-rasV12蛋白的表达。结论:构建的AdH1/siK-rasV12腺病毒能有效抑制突变K-ras基因在人肺腺癌细胞株H441中的表达,为肺癌的基因治疗提供了新的方法和材料。
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关键词
SIRNA
突变k—ras基因
腺病毒H441细胞
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职称材料
人突变K-ras基因修饰lewis肺癌细胞株的建立及其生物学特性
被引量：
1
2
作者
李潞
喻璟瑞
+4 位作者
周清华
陆燕蓉
王艳萍
陈小禾
朱文
《中国肿瘤临床》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期135-138,147,共5页
目的:探讨以K-ras基因为靶点,建立人K-ras(12位密码子点突变)基因修饰的lewis肺癌细胞株3LL-pcDNA3-K-ras/V12及其生物学特性。方法:应用脂质体法将人K-ras(12位密码子点突变)基因cDNA导入lewis肺癌细胞株3LL,应用流式细胞仪检测p21/V1...
目的:探讨以K-ras基因为靶点,建立人K-ras(12位密码子点突变)基因修饰的lewis肺癌细胞株3LL-pcDNA3-K-ras/V12及其生物学特性。方法:应用脂质体法将人K-ras(12位密码子点突变)基因cDNA导入lewis肺癌细胞株3LL,应用流式细胞仪检测p21/V12蛋白的表达,同时检测3LL细胞株转基因前后生长、克隆形成率和体内成瘤的变化。结果:成功的将人K-ras(12位密码子点突变)基因cDNA导入lewis肺癌细胞株3LL,p21/V12蛋白在3LL-pcDNA3-K-ras/V12中稳定表达,转基因细胞株的生长曲线和克隆形成率与原代细胞株3LL无显著差异;但转基因细胞株在C57BL/6小鼠体内的成瘤性显著高于原代细胞株3LL。结论:成功的建立了导入K-ras(12位密码子点突变)的lewis肺癌细胞株3LL-pcDNA3-K-ras/V12。
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关键词
人
突变k—ras基因
肺癌细胞株
生物学特性
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职称材料
子宫内膜癌与K-ras基因突变的研究
被引量：
3
3
作者
黄小琪
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第7期701-702,共2页
目的：分析子宫内膜癌组织中K-ras基因突变状况及其与Ras蛋白表达的相关性，从基因水平探讨K-ras基因在子宫内膜癌发病中的作用机制。方法：诊断明确的子宫内膜癌手术切除标本108例及同期因其他病因行刮宫术的正常子宫内膜。应用免疫组...
目的：分析子宫内膜癌组织中K-ras基因突变状况及其与Ras蛋白表达的相关性，从基因水平探讨K-ras基因在子宫内膜癌发病中的作用机制。方法：诊断明确的子宫内膜癌手术切除标本108例及同期因其他病因行刮宫术的正常子宫内膜。应用免疫组织化学染色法检测K-ras的表达，PCR扩增一直接测序法检测K-ras基因第2外显子12、13密码子突变，分析K-ras基因突变对Ras蛋白表达的影响及临床意义。结果：K—ras蛋白阳性表达率在子宫内膜癌明显高于正常子宫内膜；子宫内膜癌中K-ras基因突变率为33．3％；其中第12位密码子突变占75．0％，突变位点均位于K-ras基因第12位密码子第2位碱基上；第13位密码子突变率为25％，突变位点位于K-ras基因第13位密码子第1、2位碱基上。K-ras基因突变与Ras蛋白表达成正相关。结论：K—ras蛋白的阳性表达率可能是预示子宫内膜癌预后的一个因素，K—ras基因12密码子G—T和G—A突变是主要的突变方式。12密码子的突变可能为Ras蛋白增多的原因。
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关键词
子宫内膜癌
k
—ras
基因
突变
k
—ras
蛋白
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职称材料
题名
突变K-ras基因siRNA腺病毒载体的构建及其对人肺腺癌细胞株H441的影响
被引量：
2
1
作者
张志平
姜冠潮
杨帆
周足力
王俊
机构
济南市中心医院胸外科
北京大学人民医院胸外科
出处
《中国肿瘤临床》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第9期481-484,共4页
基金
国家自然科学基金资助(编号:30440069)
文摘
目的:构建含12密码子点突变的K-ras基因siRNA腺病毒载体,并研究其对人肺腺癌细胞株H441中突变K-ras基因表达的影响。方法:首先构建含有K-rasV12 siRNA的人H1启动子真核表达载体pSilencerH1/siK-rasV12;利用EcoRⅠ与HindⅢ双酶切将人H1载体启动子和K-rasV12 siRNA序列亚克隆至经相同酶切的腺病毒穿梭质粒pAdTrack中,形成转移质粒pAdTrack-H1/siK-rasV12,然后与腺病毒骨架质粒pAd/PL共转染至大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,酶切、序列鉴定。提取含目的基因的腺病毒重组体质粒,经PacⅠ酶切线性化后用脂质体转染293细胞,包装成重组腺病毒AdH1/siK-rasV12,扩增、纯化,并对病毒滴度进行检测。利用得到的重组腺病毒感染人肺腺癌H441细胞株,采用Westernblot检测感染前后K-rasV12蛋白表达水平的变化,观察AdH1/siK-rasV12对人肺腺癌细胞K-rasV12表达的影响。结果:成功构建K-rasV12s iRNA腺病毒载体,该载体可明显抑制H441细胞中K-rasV12蛋白的表达。结论:构建的AdH1/siK-rasV12腺病毒能有效抑制突变K-ras基因在人肺腺癌细胞株H441中的表达,为肺癌的基因治疗提供了新的方法和材料。
关键词
SIRNA
突变k—ras基因
腺病毒H441细胞
Keywords
RNA Small interfering Mutant
k
-
ras
Adenovirus vector H441 cell
分类号
R734.2 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
人突变K-ras基因修饰lewis肺癌细胞株的建立及其生物学特性
被引量：
1
2
作者
李潞
喻璟瑞
周清华
陆燕蓉
王艳萍
陈小禾
朱文
机构
四川大学华西医院肿瘤中心四川省肺癌分子重点实验室
出处
《中国肿瘤临床》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期135-138,147,共5页
基金
国家自然科学基金资助(编号:30000206)
文摘
目的:探讨以K-ras基因为靶点,建立人K-ras(12位密码子点突变)基因修饰的lewis肺癌细胞株3LL-pcDNA3-K-ras/V12及其生物学特性。方法:应用脂质体法将人K-ras(12位密码子点突变)基因cDNA导入lewis肺癌细胞株3LL,应用流式细胞仪检测p21/V12蛋白的表达,同时检测3LL细胞株转基因前后生长、克隆形成率和体内成瘤的变化。结果:成功的将人K-ras(12位密码子点突变)基因cDNA导入lewis肺癌细胞株3LL,p21/V12蛋白在3LL-pcDNA3-K-ras/V12中稳定表达,转基因细胞株的生长曲线和克隆形成率与原代细胞株3LL无显著差异;但转基因细胞株在C57BL/6小鼠体内的成瘤性显著高于原代细胞株3LL。结论:成功的建立了导入K-ras(12位密码子点突变)的lewis肺癌细胞株3LL-pcDNA3-K-ras/V12。
关键词
人
突变k—ras基因
肺癌细胞株
生物学特性
Keywords
Mutant
k
-
ras
gene Lewis lung cancer cell line Biological cha
ra
cteristics
分类号
R734.2 [医药卫生—肿瘤]
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题名
子宫内膜癌与K-ras基因突变的研究
被引量：
3
3
作者
黄小琪
机构
广西中医学院第一附属医院医学分子生物学实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第7期701-702,共2页
文摘
目的：分析子宫内膜癌组织中K-ras基因突变状况及其与Ras蛋白表达的相关性，从基因水平探讨K-ras基因在子宫内膜癌发病中的作用机制。方法：诊断明确的子宫内膜癌手术切除标本108例及同期因其他病因行刮宫术的正常子宫内膜。应用免疫组织化学染色法检测K-ras的表达，PCR扩增一直接测序法检测K-ras基因第2外显子12、13密码子突变，分析K-ras基因突变对Ras蛋白表达的影响及临床意义。结果：K—ras蛋白阳性表达率在子宫内膜癌明显高于正常子宫内膜；子宫内膜癌中K-ras基因突变率为33．3％；其中第12位密码子突变占75．0％，突变位点均位于K-ras基因第12位密码子第2位碱基上；第13位密码子突变率为25％，突变位点位于K-ras基因第13位密码子第1、2位碱基上。K-ras基因突变与Ras蛋白表达成正相关。结论：K—ras蛋白的阳性表达率可能是预示子宫内膜癌预后的一个因素，K—ras基因12密码子G—T和G—A突变是主要的突变方式。12密码子的突变可能为Ras蛋白增多的原因。
关键词
子宫内膜癌
k
—ras
基因
突变
k
—ras
蛋白
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
突变K-ras基因siRNA腺病毒载体的构建及其对人肺腺癌细胞株H441的影响
张志平
姜冠潮
杨帆
周足力
王俊
《中国肿瘤临床》
CAS
CSCD
北大核心
2007
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人突变K-ras基因修饰lewis肺癌细胞株的建立及其生物学特性
李潞
喻璟瑞
周清华
陆燕蓉
王艳萍
陈小禾
朱文
《中国肿瘤临床》
CAS
CSCD
北大核心
2005
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
子宫内膜癌与K-ras基因突变的研究
黄小琪
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
3
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