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稳定过表达人SIRT1基因的HEK293细胞系的建立被引量：1: 1; 作者林蓉张凯帆 +4 位作者王维蓉林琴琴杨莉娜任峰张建丰《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第1期18-20,共3页; 目的:构建人沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)基因的真核表达载体,建立稳定过表达人SIRT1的HEK293细胞系。方法:将含有SIRT1的克隆载体pCR Ⅱ-TOPO-SIRT1双酶切后,连接至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,连接产物经酶切鉴定后进行测序。构... 展开更多; 关键词心血管疾病 SIRT1 稳定过表达 HEK293细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

稳定过表达人MGST1基因抑制肺腺癌细胞SPC-A-1的凋亡被引量：4: 2; 作者曾宝真葛春蕾 +3 位作者付桥粉张志伟宋鑫黄文华《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期608-614,共7页; 目的:建立稳定过表达微粒体谷胱甘肽S转移酶1(microsomal glutathione S-transferase 1,MGST1)基因的肺腺癌SPC-A-1细胞系,探讨MGST1在肺腺癌中的作用及其机制。方法:重组质粒pcDNA3-MGST1和空载体pcDNA3以脂质体介导的方法转染至SPC-A-... 展开更多; 关键词肺腺癌微粒体谷胱甘肽S转移酶1 基因克隆稳定过表达 caspase蛋白凋亡; 在线阅读下载PDF 职称材料

过表达整合素链接激酶通过NF-kB通路促进脑胶质瘤细胞的上皮间质转化被引量：2: 3; 作者梁峰王冰 +2 位作者鲍龙赵印生张淑芹《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期210-216,共7页; 【目的】研究过表达整合素链接激酶(ILK)对胶质瘤细胞上皮间质转化(EMT)的调控作用及初步机制。【方法】项目组前期实验已经成功构建了重组质粒p EGFP-C1-ILK,并将其转染给SHG-44胶质瘤细胞,通过G418筛选出了稳定转染的细胞株。实验分... 展开更多; 关键词稳定过表达 NF-KB EMT; 在线阅读下载PDF 职称材料

SHIP1基因过表达非小细胞肺癌细胞系的建立及其对细胞增殖能力的影响被引量：1: 4; 作者陶星宇付桥粉 +1 位作者王莹宋鑫《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期680-686,共7页; 目的:观察SHIP1对NSCLC细胞增殖的影响。方法:由NCBI Gene数据库查询获得人SHIP1基因CDS区,插至载体p TSB-CMV-MCS-SBP-3Flag-EGFP,构建SHIP1真核过表达质粒;进一步利用其构建SHIP1过表达慢病毒。用该慢病毒感染A549、SPCA-1和PC-9细胞... 展开更多; 关键词多磷酸肌醇-5-磷酸酶非小细胞肺癌基因重组稳定过表达细胞增殖; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名稳定过表达人SIRT1基因的HEK293细胞系的建立被引量：1: 1; 作者林蓉张凯帆王维蓉林琴琴杨莉娜任峰张建丰; 机构西安交通大学医学院药理系; 出处《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第1期18-20,共3页; 基金国家自然科学基金资助项目(编号:81072643); 文摘目的:构建人沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)基因的真核表达载体,建立稳定过表达人SIRT1的HEK293细胞系。方法:将含有SIRT1的克隆载体pCR Ⅱ-TOPO-SIRT1双酶切后,连接至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,连接产物经酶切鉴定后进行测序。构建的重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-SIRT1转染HEK293细胞,G418进行筛选,Real-time PCR和Western Blot分别从mRNA和蛋白水平检测SIRT1的表达。结果:酶切分析和测序结果证实,SIRT1基因成功插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中。Real-time PCR和Western Blot结果显示稳定转染pc DNA3.1(+)-SIRT1的HEK293细胞SIRT1的表达水平明显高于未转染细胞(P﹤0.01)。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-SIRT1,并建立了稳定过表达SIRT1基因的HEK293细胞系,为进一步研究SIRT1基因在心血管疾病中的作用及其机制奠定了基础。; 关键词心血管疾病 SIRT1 稳定过表达 HEK293细胞; Keywords Cardiovascular diseases SIRT1 Stable transfection HEK293 cell; 分类号 R363 [医药卫生—病理学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名稳定过表达人MGST1基因抑制肺腺癌细胞SPC-A-1的凋亡被引量：4: 2; 作者曾宝真葛春蕾付桥粉张志伟宋鑫黄文华; 机构南方医科大学基础医学院人体解剖国家重点学科昆明医科大学第三附属医院暨云南省肿瘤医院肿瘤生物治疗中心; 出处《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期608-614,共7页; 基金国家自然科学基金资助项目(No.U1502222 No.81470005 +1 种基金 No.81260307) 国家自然科学基金重大科研仪器研制项目(No.61427807)~~; 文摘目的:建立稳定过表达微粒体谷胱甘肽S转移酶1(microsomal glutathione S-transferase 1,MGST1)基因的肺腺癌SPC-A-1细胞系,探讨MGST1在肺腺癌中的作用及其机制。方法:重组质粒pcDNA3-MGST1和空载体pcDNA3以脂质体介导的方法转染至SPC-A-1细胞中,经过G418筛选稳转细胞系,标记为pcDNA3-MGST1细胞和空载体pcDNA3细胞。实时荧光定量PCR及Western blotting鉴定稳转细胞中MGST1 mRNA和蛋白的表达情况。MTS法检测稳转细胞的活力;流式细胞仪和Western blotting检测H_2O_2诱导下稳转细胞的凋亡率和下游凋亡相关蛋白水平变化。结果:酶切鉴定和测序结果显示pcDNA3-MGST1重组质粒构建成功,并获得具有G418抗性的稳转细胞株。pcDNA3-MGST1细胞中MGST1在mRNA和蛋白水平表达均显著升高(P<0.01),且细胞活力明显增加(P<0.05)。H_2O_2诱导下,pcDNA3-MGST1细胞的早期凋亡率明显低于pcDNA3组[(3.30±0.40)%vs(6.50±0.95)%,P<0.05];pcDNA3-MGST1细胞凋亡相关蛋白caspase 9、caspase 3、PARP表达增多,cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3、cleaved-PARP表达明显减少。结论:本研究成功构建了稳定过表达MGST1的SPC-A-1肺腺癌细胞系,MGST1可能通过调节caspase凋亡通路抑制肺腺癌细胞的凋亡。; 关键词肺腺癌微粒体谷胱甘肽S转移酶1 基因克隆稳定过表达 caspase蛋白凋亡; Keywords lung adenocarcinoma microsomal glutathione S-transferase 1 （MGST1） gene clone stable overexpres-sion caspase protein apoptosis; 分类号 R734.2 [医药卫生—肿瘤] R730.54 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名过表达整合素链接激酶通过NF-kB通路促进脑胶质瘤细胞的上皮间质转化被引量：2: 3; 作者梁峰王冰鲍龙赵印生张淑芹; 机构辽宁医学院附属第一医院神经外科辽宁医学院附属第一医院儿科; 出处《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期210-216,共7页; 基金辽宁省博士启动基金(201501101); 文摘【目的】研究过表达整合素链接激酶(ILK)对胶质瘤细胞上皮间质转化(EMT)的调控作用及初步机制。【方法】项目组前期实验已经成功构建了重组质粒p EGFP-C1-ILK,并将其转染给SHG-44胶质瘤细胞,通过G418筛选出了稳定转染的细胞株。实验分组如下:SHG-44(空白对照组)、p EGFP-C1(空载组),及p EGFP-C1-ILK(稳转组),先检测各组中ILK的表达情况(RNA及蛋白质水平)及侵袭能力,再检测过表达ILK后对EMT标记物的影响,最后再分别应用NF-κB通路的特异性阻断剂BAY11-7028和RNA沉默的方法阻断核因子NF-κB通路,Western blot方法检测上皮间质转化标记物Ecadherin在阻断前及阻断后的表达情况,初步探讨NF-k B通路在过表达ILK的胶质瘤细胞中对EMT的调控作用。【结果】稳转组中ILK明显过表达,同时侵袭能力增强(Transwell小室透膜细胞数在对照组、空载组和稳转组分别为:92,87,229)。Western blot检测EMT标记物蛋白的表达:稳定转染组中snail,slug,twist,vimentin的表达较对照组及空载组的表达明显增高,而E-cadherin的表达则在稳定转染组中明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。当分别用NF-k B特异性阻断剂BAY11-7028及p65 si RNA的方法阻断该通路后,稳定转染组中E-cadherin蛋白表达明显升高。【结论】胶质瘤中过表达ILK可使侵袭能力增强,同时可下调E-cadherin,上调vimentin及Snail,Slug,Twist的表达,可能通过此机制促进脑胶质瘤细胞的上皮间质转化,NF-k B通路可能参与、调控该进程。; 关键词稳定过表达 NF-KB EMT; Keywords stable overexpression, NF-kB EMT; 分类号 R651 [医药卫生—外科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名SHIP1基因过表达非小细胞肺癌细胞系的建立及其对细胞增殖能力的影响被引量：1: 4; 作者陶星宇付桥粉王莹宋鑫; 机构南方医科大学基础医学院肿瘤研究所昆明医科大学第三附属医院暨云南省肿瘤医院肿瘤生物治疗中心; 出处《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期680-686,共7页; 基金国家自然科学基金资助项目(U1502222 No.81702295) +3 种基金 No.2016NS113) 中国博士后科学基金资助项目(No.2017M613008)~~; 文摘目的:观察SHIP1对NSCLC细胞增殖的影响。方法:由NCBI Gene数据库查询获得人SHIP1基因CDS区,插至载体p TSB-CMV-MCS-SBP-3Flag-EGFP,构建SHIP1真核过表达质粒;进一步利用其构建SHIP1过表达慢病毒。用该慢病毒感染A549、SPCA-1和PC-9细胞株,获得SHIP1稳定过表达NSCLC细胞系。Western blotting和q RT-PCR分别从蛋白水平和m RNA水平检测SHIP1的表达变化。采用MTT法和克隆形成实验检测过表达SHIP1的PC-9细胞增殖活力和克隆形成能力。Western blotting检测AP-1蛋白复合体各组分的表达。结果:SHIP1真核过表达质粒经测序证实构建成功。稳定过表达SHIP1的A549、SPCA-1和PC-9细胞,在荧光显微镜下可见均一表达绿色荧光。与阴性对照组比较,细胞中SHIP1在m RNA(P<0.01)及蛋白水平均明显升高。在PC-9细胞中,过表达SHIP1使细胞增殖、克隆形成能力降低(均P<0.01),p-c-Jun、Fos B等表达降低。结论:成功构建了稳定过表达SHIP1的A549、SPCA-1和PC-9细胞模型;过表达SHIP1可通过抑制AP-1家族蛋白抑制NSCLC细胞增殖能力。; 关键词多磷酸肌醇-5-磷酸酶非小细胞肺癌基因重组稳定过表达细胞增殖; Keywords SHIP 1 non-small cell lung cancer gene recombination stable overexpression cell proliferation; 分类号 R734.2 [医药卫生—肿瘤] R730-54 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	稳定过表达人SIRT1基因的HEK293细胞系的建立	林蓉张凯帆王维蓉林琴琴杨莉娜任峰张建丰	《实用医学杂志》 CAS 北大核心	2013	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	稳定过表达人MGST1基因抑制肺腺癌细胞SPC-A-1的凋亡	曾宝真葛春蕾付桥粉张志伟宋鑫黄文华	《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心	2017	4	在线阅读下载PDF 职称材料
3	过表达整合素链接激酶通过NF-kB通路促进脑胶质瘤细胞的上皮间质转化	梁峰王冰鲍龙赵印生张淑芹	《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2016	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	SHIP1基因过表达非小细胞肺癌细胞系的建立及其对细胞增殖能力的影响	陶星宇付桥粉王莹宋鑫	《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心	2018	1	在线阅读下载PDF 职称材料