目的探讨三阴性乳腺癌中程序性细胞死亡基因4(programmed cell death gene 4,PDCD4)的表达及其与患者预后的关系。方法收集广东省妇幼保健院乳腺科2007年1月至2012年12月间收治的随访资料完整的三阴性乳腺癌患者共176例,均为女性,中位年...目的探讨三阴性乳腺癌中程序性细胞死亡基因4(programmed cell death gene 4,PDCD4)的表达及其与患者预后的关系。方法收集广东省妇幼保健院乳腺科2007年1月至2012年12月间收治的随访资料完整的三阴性乳腺癌患者共176例,均为女性,中位年龄44岁。采用免疫组化方法检测PDCD4的表达;采用Kaplan-meier法对患者的无病生存及总生存情况进行分析,并运用Cox回归法探讨影响三阴性乳腺癌生存预后的因素。结果 176例患者中,PDCD4表达阳性者79例(44.8%),显著低于癌旁组织阳性表达率(90.0%,P=0.005)。PDCD4表达缺失与年龄无关(P>0.05),而与肿瘤直径、淋巴结转移个数及组织学分级相关(P<0.05),肿瘤越大(r=-0.270,P<0.001)、淋巴结转移越多(r=-0.240,P=0.001)、组织学分级越高(r=-0.206,P=0.006),PDCD4阳性表达率越低。中位随访时间42个月,单因素分析显示PDCD4表达阳性者其无病生存率及总生存率均优于表达阴性者(P<0.05)。多因素分析显示PDCD4表达、肿瘤直径及分期是影响三阴性乳腺癌预后的独立因素(P<0.05)。结论三阴性乳腺癌中PDCD4表达缺失与预后不良相关,PDCD4可作为评估三阴性乳腺癌预后的指标。展开更多
目的构建大鼠程序性细胞死亡因子4(programmed cell death 4,Pdcd4)基因在体干扰模型,为进一步研究该基因的功能提供条件。方法通过给予抗原诱导肺部炎症模型大鼠,鼻腔滴入Pdcd4的干扰质粒,以下调其体内Pdcd4的表达。收集大鼠支气管肺...目的构建大鼠程序性细胞死亡因子4(programmed cell death 4,Pdcd4)基因在体干扰模型,为进一步研究该基因的功能提供条件。方法通过给予抗原诱导肺部炎症模型大鼠,鼻腔滴入Pdcd4的干扰质粒,以下调其体内Pdcd4的表达。收集大鼠支气管肺泡灌洗液细胞,提取总RNA,RT-qPCR检测Pdcd4基因mRNA的表达水平。结果在模型大鼠鼻腔滴入Pdcd4的干扰质粒,大鼠支气管肺泡灌洗液细胞中的Pdcd4的mRNA表达明显下调。结论成功构建了Pdcd4基因的在体干扰大鼠模型,为进一步研究Pdcd4基因的功能和作用机制奠定基础。展开更多
目的:探讨程序性细胞死亡蛋白4(programmed cell death protein 4,PDCD4)对人类慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞活力、凋亡以及基因表达变化的影响。方法:通过慢病毒感染的方法在K562细胞系中过表达PDCD4基因并筛选获得稳定表达的细胞系...目的:探讨程序性细胞死亡蛋白4(programmed cell death protein 4,PDCD4)对人类慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞活力、凋亡以及基因表达变化的影响。方法:通过慢病毒感染的方法在K562细胞系中过表达PDCD4基因并筛选获得稳定表达的细胞系;采用RT-qPCR和Western blot分别检测PDCD4 mRNA和蛋白的表达水平;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况;应用转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)分析PDCD4过表达组和对照组的基因表达差异及其相关的功能与信号通路,RT-qPCR验证测序结果的准确性。结果:成功建立了稳定过表达PDCD4的K562细胞系;PDCD4过表达可显著抑制K562细胞的活力,引起细胞周期阻滞并促进阿糖胞苷诱导的细胞凋亡(P<0.05);RNA-seq结果显示,在K562细胞中过表达PDCD4可引起大量的基因表达发生变化,表达明显差异的基因共有394个,其中上调16个,下调378个,主要涉及细胞周期、凋亡、细胞自噬和代谢等方面,选取的6个基因的RT-qPCR检测结果和RNA-seq的结果一致。结论:PDCD4可抑制K562细胞活力、阻滞细胞周期进展、促进细胞凋亡;RNA-seq确定了PDCD4对K562细胞基因表达谱的变化。展开更多
目的:验证程序性细胞死亡因子4(programmed cell death 4,PDCD4)在小鼠雄性生殖细胞中的表达。方法:RT-PCR检测PDCD4在不同周龄小鼠睾丸的基因表达情况;Western blot法检测PDCD4在不同周龄小鼠睾丸中蛋白表达水平;免疫荧光法检测PDCD4...目的:验证程序性细胞死亡因子4(programmed cell death 4,PDCD4)在小鼠雄性生殖细胞中的表达。方法:RT-PCR检测PDCD4在不同周龄小鼠睾丸的基因表达情况;Western blot法检测PDCD4在不同周龄小鼠睾丸中蛋白表达水平;免疫荧光法检测PDCD4在雄性生殖嵴以及在不同周龄小鼠睾丸的定位情况。结果:RT-PCR和Western blot结果均显示PDCD4在0周龄小鼠睾丸中开始有表达,并持续表达至成年;免疫荧光显示PDCD4在胚胎期雄性小鼠生殖细胞中也有表达;在出生后0周和1周龄小鼠睾丸中,PDCD4特异表达于精原细胞;在2周龄小鼠睾丸中,PDCD4分布于精原细胞和精母细胞;而在3、4和5周龄小鼠睾丸组织中,PDCD4主要分布于精原细胞、精母细胞与圆形精子细胞。结论:PDCD4分布于胚胎期和出生后各阶段生精细胞,这为进一步研究PDCD4在精子发生中的作用打下基础。展开更多
目的探讨程序性细胞死亡因子4(programmed cell death protein 4,PDCD4)对卵巢癌细胞生长、凋亡及磷酸化信号转导和转录激活因子3(phosphorylated signal transducer and activator of transcription 3,p-STAT3)、磷酸化p38丝裂原激活...目的探讨程序性细胞死亡因子4(programmed cell death protein 4,PDCD4)对卵巢癌细胞生长、凋亡及磷酸化信号转导和转录激活因子3(phosphorylated signal transducer and activator of transcription 3,p-STAT3)、磷酸化p38丝裂原激活蛋白激酶(phosphorylated p38 mitogen activation protein kinase,p-p38MAPK)表达的影响。方法卵巢癌细胞SKO-V3转染PDCD4过表达载体(pDsRes2-N1-PDCD4)和对照载体(pDsRes2-N1),分别记为过表达组和阴性组,同时以不转染的细胞作为对照组。以下列方法对三组细胞进行检测和比较:以实时逆转录聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测细胞PDCD4蛋白和mRNA表达水平,以噻唑蓝比色法和细胞克隆实验检测细胞增殖能力,以流式细胞术检测细胞凋亡情况,以蛋白质印迹法检测p-p38MAPK、p-STAT3水平。结果阴性组和对照组细胞中PDCD4 mRNA和蛋白表达水平、光密度(optical density,OD)、细胞克隆形成数目、凋亡率、p-p38MAPK和p-STAT3表达水平比较均无显著差异(P_均> 0.05)。过表达组细胞中PDCD4mRNA和蛋白表达水平及细胞凋亡率均明显高于对照组和阴性组(P_均<0.01),细胞OD和克隆形成数目均明显低于对照组和阴性组(P_均<0.01)。过表达组细胞p-STAT3/STAT3比值明显低于对照组(P <0.01),p-p38MAPK/p38MAPK比值明显高于对照组(P <0.01)。结论 PDCD4抑制卵巢癌细胞生长,促进卵巢癌细胞凋亡,这可能与其抑制STAT3信号通路激活和促进p38MAPK信号通路激活有关。展开更多
基金The project supported by Foundation of Beijing University of Chinese Medicine(2009JYBZZ-2JS038),Foundation of Beijing University of Chinese Medicine(2011JYBZZ-XS037),Foundation of Beijing University of Chinese Medicine(2011JYBZZ-XS045)~~
文摘目的构建大鼠程序性细胞死亡因子4(programmed cell death 4,Pdcd4)基因在体干扰模型,为进一步研究该基因的功能提供条件。方法通过给予抗原诱导肺部炎症模型大鼠,鼻腔滴入Pdcd4的干扰质粒,以下调其体内Pdcd4的表达。收集大鼠支气管肺泡灌洗液细胞,提取总RNA,RT-qPCR检测Pdcd4基因mRNA的表达水平。结果在模型大鼠鼻腔滴入Pdcd4的干扰质粒,大鼠支气管肺泡灌洗液细胞中的Pdcd4的mRNA表达明显下调。结论成功构建了Pdcd4基因的在体干扰大鼠模型,为进一步研究Pdcd4基因的功能和作用机制奠定基础。
文摘目的:探讨程序性细胞死亡蛋白4(programmed cell death protein 4,PDCD4)对人类慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞活力、凋亡以及基因表达变化的影响。方法:通过慢病毒感染的方法在K562细胞系中过表达PDCD4基因并筛选获得稳定表达的细胞系;采用RT-qPCR和Western blot分别检测PDCD4 mRNA和蛋白的表达水平;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况;应用转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)分析PDCD4过表达组和对照组的基因表达差异及其相关的功能与信号通路,RT-qPCR验证测序结果的准确性。结果:成功建立了稳定过表达PDCD4的K562细胞系;PDCD4过表达可显著抑制K562细胞的活力,引起细胞周期阻滞并促进阿糖胞苷诱导的细胞凋亡(P<0.05);RNA-seq结果显示,在K562细胞中过表达PDCD4可引起大量的基因表达发生变化,表达明显差异的基因共有394个,其中上调16个,下调378个,主要涉及细胞周期、凋亡、细胞自噬和代谢等方面,选取的6个基因的RT-qPCR检测结果和RNA-seq的结果一致。结论:PDCD4可抑制K562细胞活力、阻滞细胞周期进展、促进细胞凋亡;RNA-seq确定了PDCD4对K562细胞基因表达谱的变化。
文摘目的探讨程序性细胞死亡因子4(programmed cell death protein 4,PDCD4)对卵巢癌细胞生长、凋亡及磷酸化信号转导和转录激活因子3(phosphorylated signal transducer and activator of transcription 3,p-STAT3)、磷酸化p38丝裂原激活蛋白激酶(phosphorylated p38 mitogen activation protein kinase,p-p38MAPK)表达的影响。方法卵巢癌细胞SKO-V3转染PDCD4过表达载体(pDsRes2-N1-PDCD4)和对照载体(pDsRes2-N1),分别记为过表达组和阴性组,同时以不转染的细胞作为对照组。以下列方法对三组细胞进行检测和比较:以实时逆转录聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测细胞PDCD4蛋白和mRNA表达水平,以噻唑蓝比色法和细胞克隆实验检测细胞增殖能力,以流式细胞术检测细胞凋亡情况,以蛋白质印迹法检测p-p38MAPK、p-STAT3水平。结果阴性组和对照组细胞中PDCD4 mRNA和蛋白表达水平、光密度(optical density,OD)、细胞克隆形成数目、凋亡率、p-p38MAPK和p-STAT3表达水平比较均无显著差异(P_均> 0.05)。过表达组细胞中PDCD4mRNA和蛋白表达水平及细胞凋亡率均明显高于对照组和阴性组(P_均<0.01),细胞OD和克隆形成数目均明显低于对照组和阴性组(P_均<0.01)。过表达组细胞p-STAT3/STAT3比值明显低于对照组(P <0.01),p-p38MAPK/p38MAPK比值明显高于对照组(P <0.01)。结论 PDCD4抑制卵巢癌细胞生长,促进卵巢癌细胞凋亡,这可能与其抑制STAT3信号通路激活和促进p38MAPK信号通路激活有关。
