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烟草花叶病毒移动蛋白基因转化烟草及在转基因烟草中的表达 被引量:3
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作者 陈青 薛朝阳 +2 位作者 吴俊杰 凌建群 周雪平 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期119-123,共5页
根据烟草花叶病毒蚕豆株系 (TMV- B)的已知序列合成引物 ,经 PCR扩增获得 TMV- B的移动蛋白 (MP)基因 .该基因测序验证后 ,分别以正、反向克隆到植物表达载体 p BI12 1中 ,并置于 Ca MV35S启动子控制之下 ,通过三亲交配及叶盘转化 ,将 M... 根据烟草花叶病毒蚕豆株系 (TMV- B)的已知序列合成引物 ,经 PCR扩增获得 TMV- B的移动蛋白 (MP)基因 .该基因测序验证后 ,分别以正、反向克隆到植物表达载体 p BI12 1中 ,并置于 Ca MV35S启动子控制之下 ,通过三亲交配及叶盘转化 ,将 MP基因导入烟草 .经卡那霉素抗性筛选 ,PCR扩增 ,Southern点杂交 ,Northern点杂交及 Western blot检测 ,获得了正义表达 MP基因及反义表达 MP基因的转基因烟草 ,分别命名为 p TMP(+ )烟草和 p TMP(- ) 展开更多
关键词 烟草花叶病毒 移动蛋白基因 基因 基因表达 烟草 互作机制
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广东烟草花叶病毒移动蛋白基因的cDNA克隆和酶切鉴定 被引量:2
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作者 王得元 刘志昕 +3 位作者 潘俊松 王鸣 郑学勤 王西雨 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 1998年第3期334-338,共5页
根据已报道的烟草花叶病毒移动蛋白基因序列,设计合成一对特异性引物。以广东TMV株系RNA为模板,用AMV反转录酶反转录合成cDNA第一链;在复性温度51℃条件下进行PCR扩增,获得了一条0.8Kb的特异扩增产物,与已... 根据已报道的烟草花叶病毒移动蛋白基因序列,设计合成一对特异性引物。以广东TMV株系RNA为模板,用AMV反转录酶反转录合成cDNA第一链;在复性温度51℃条件下进行PCR扩增,获得了一条0.8Kb的特异扩增产物,与已发表的TMVMP基因编码区803bp大小相近;并将之克隆于pBluescriptⅡSK(+)质粒。限制性内切酶酶切分析表明,本研究筛选到的是含TMVMPcDNA的正向插入组质粒。 展开更多
关键词 烟草花叶病毒 移动蛋白基因 CDNA克隆 酶切分析
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烟草花叶病毒蚕豆分离物移动蛋白基因克隆及序列分析 被引量:3
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作者 陈青 周雪平 +1 位作者 薛朝阳 李德葆 《浙江农业大学学报》 CSCD 北大核心 1999年第3期239-242,共4页
根据已报道的TMV U1株系(TMV-U1)的序列设计了特异性引物,利用RT-PCR技术,从烟 草花叶病毒蚕豆分离物(TMV-B)上扩增移动蛋白(MP)基因及其邻近序列。将此cDNA片段克隆于 pBluscript SK... 根据已报道的TMV U1株系(TMV-U1)的序列设计了特异性引物,利用RT-PCR技术,从烟 草花叶病毒蚕豆分离物(TMV-B)上扩增移动蛋白(MP)基因及其邻近序列。将此cDNA片段克隆于 pBluscript SK质粒上,进行测序分析。结果表明:MP基因由807个核苷酸组成,编码268个氨基酸。与 TMV-U1的MP基因序列比较,核苷酸序列及推导出的氨基酸序列的同源性分别为99.01%和 98.89%。与TMV-Yu的MP基因序列比较,同源性分别为98.14%和98.89%。说明TMV的MP基因 在不同株系中是非常保守的。 展开更多
关键词 烟草 花叶病毒 移动蛋白基因 克隆 蚕豆分离物
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鸡蛋花花叶病毒3’端序列的克隆与分析
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作者 邓晓东 费小雯 +1 位作者 黄俊生 郑学勤 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 2000年第3期185-192,共8页
根据烟草花叶病毒组(Tobamoviruses)3’端非编码区保守区域,人工合成下游引物P1,P2,P3,分别以这些引物引导在反转录酶作用下合成双链 cDNA,并克隆到 pBS载体上。Hind Ⅲ+ PstⅠ双酶切分析重... 根据烟草花叶病毒组(Tobamoviruses)3’端非编码区保守区域,人工合成下游引物P1,P2,P3,分别以这些引物引导在反转录酶作用下合成双链 cDNA,并克隆到 pBS载体上。Hind Ⅲ+ PstⅠ双酶切分析重组稿子后,得到 15个阳性重组子,其中重组子 pBF3含有 2 432 bp外源 DNA。序列分析结果表明:该 2 432bp的序列含 2个开放读框,即鸡蛋花花叶病毒移动蛋白基因序列和外壳蛋白基因序列。移动蛋白基因序列起始于806位ATG,中止于 1576位TAG。推导的氨基酸序列共256个氨基酸,分子量为28.5 kDa。外壳蛋白基因序列起始于 1635位ATG,中止于 2 158位TAA。推导的氨基酸序列共 174个氨基酸,分子量为19.4 kDa.此外该片段还包含部分180 kDa蛋白和全部3’端非编码区核苷酸序列。 展开更多
关键词 鸡蛋花花叶病毒 移动蛋白基因 序列分析
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美国农业部提出新的遗传工程生物管理规则
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作者 孙雷心 《生物技术通报》 CAS CSCD 1996年第6期17-19,共3页
美国农业部动植物健康监察局(APHIS)新提出的一项规则将简化引入遗传工程生物、报告在通告条件下进行田间试验、以及申请确定非管制状态的程序。 提出的这项修正案的作用是:(1)扩展生物引种范围,即在通告程序和缩减特定管理必备条件的... 美国农业部动植物健康监察局(APHIS)新提出的一项规则将简化引入遗传工程生物、报告在通告条件下进行田间试验、以及申请确定非管制状态的程序。 提出的这项修正案的作用是:(1)扩展生物引种范围,即在通告程序和缩减特定管理必备条件的情况下, 展开更多
关键词 田间试验 遗传工程 通告程序 美国农业部 非管制 移动蛋白基因 植物病毒 基因植物 数据报告 植物品种
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