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血管内皮细胞特异性Traf2基因敲除小鼠的制备及鉴定
1
作者 陈卓 蒯佳婕 +2 位作者 王凤玲 何菊 魏伟 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第8期1592-1598,共7页
目的构建血管内皮细胞(endothelial cell,EC)特异性肿瘤坏死因子受体相关因子2(tumor necrosis factor receptor-associated factor 2,Traf2)基因敲除小鼠,为研究通过TRAF2调控血管EC活性致血管功能障碍相关疾病提供实验动物模型。方法C... 目的构建血管内皮细胞(endothelial cell,EC)特异性肿瘤坏死因子受体相关因子2(tumor necrosis factor receptor-associated factor 2,Traf2)基因敲除小鼠,为研究通过TRAF2调控血管EC活性致血管功能障碍相关疾病提供实验动物模型。方法Cre-loxP系统构建血管EC特异性Traf2基因敲除(Traf2^(flox/flox)Tek-iCre^(+))小鼠;PCR和凝胶电泳鉴定小鼠基因型;流式分离小鼠血管原代EC;Western blot和免疫荧光验证小鼠血管EC中Traf2敲除效果;HE染色检测小鼠血管及主要器官病理形态改变;基质胶成管检测小鼠血管原代EC成管能力。结果敲除小鼠基因型符合要求;流式结果表明,成功分选出血管原代EC,敲除小鼠血管EC中TRAF2表达降低(P<0.01);组织学结果显示,敲除小鼠血管TRAF2表达降低,血管及主要器官形态无明显改变。基质胶成管表明模型小鼠血管原代EC成管能力下降。结论成功构建血管EC特异性Traf2基因敲除小鼠,可为研究血管功能障碍相关疾病中TRAF2对血管EC的调控机制提供可靠的动物模型。 展开更多
关键词 血管内皮细胞 TRAF2 特异性基因敲除 胸主动脉血管 CRE-LOXP 血管功能障碍
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肝星状细胞特异性Grk2基因敲除小鼠模型的制备及鉴定 被引量：3
2
作者 王语涵 许雅萍 +6 位作者 李南 陈婷婷 李玲 高萍萍 王华 魏伟 孙妩弋 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期189-194,共6页
目的利用Cre-loxP基因敲除技术建立肝星状细胞特异性G蛋白偶联受体激酶2(G protein-coupled receptor kinase 2,GRK2)基因敲除小鼠模型,为研究GRK2在肝星状细胞中的生物学功能提供动物模型基础。方法将loxP标记的Grk2基因小鼠(Grk2^(fl/... 目的利用Cre-loxP基因敲除技术建立肝星状细胞特异性G蛋白偶联受体激酶2(G protein-coupled receptor kinase 2,GRK2)基因敲除小鼠模型,为研究GRK2在肝星状细胞中的生物学功能提供动物模型基础。方法将loxP标记的Grk2基因小鼠(Grk2^(fl/fl))和Lrat-Cre工具鼠进行多次繁殖,建立肝星状细胞特异性Grk2基因敲除(Grk2^(ΔHSC))小鼠模型。观察和分析小鼠的生长繁殖情况;通过PCR反应鉴定flox和Cre基因型;免疫荧光双染检测肝星状细胞中GRK2表达;Western blot检测小鼠肝星状细胞及肺、脾、肾脏、心脏组织中GRK2蛋白表达;HE染色观察肝脏及肺、脾、心脏、肾脏组织学形态。结果成功鉴定Grk2^(ΔHSC)小鼠基因型;两组小鼠体质量、繁殖能力无明显差异;免疫荧光双染及Western blot结果表明,Grk2^(ΔHSC)小鼠的肝星状细胞中GRK2蛋白水平明显低于对照组小鼠,Grk2^(ΔHSC)小鼠肺、脾、肾脏和心脏组织中GRK2蛋白表达与对照组相比无明显变化;HE染色结果显示,Grk2^(ΔHSC)小鼠肝脏及主要组织结构与Grk2^(fl/fl)相比差异无显著性,可用于后续研究。结论本研究应用Cre-loxP技术成功构建了肝星状细胞特异性Grk2基因敲除小鼠,为进一步研究GRK2在肝脏中的作用提供了优良工具。 展开更多
关键词 G蛋白偶联受体激酶2 Cre-loxP重组酶系统 细胞特异性敲除 肝星状细胞 基因鉴定 繁育
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巨噬细胞特异性TDO2基因敲除小鼠的构建 被引量：2
3
作者 董伟波 陈悦兰 +3 位作者 王燚 程梦 魏伟 常艳 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第6期994-1000,共7页
目的构建巨噬细胞特异性色氨酸2,3-双加氧酶(TDO2)基因敲除小鼠,为研究TDO2调控巨噬细胞功能影响疾病发生发展提供动物模型。方法基于Cre-Loxp系统构建巨噬细胞特异性TDO2基因敲除(TDO2^(flox/flox)Lyz2-iCre^(+))小鼠。采用PCR和琼脂... 目的构建巨噬细胞特异性色氨酸2,3-双加氧酶(TDO2)基因敲除小鼠,为研究TDO2调控巨噬细胞功能影响疾病发生发展提供动物模型。方法基于Cre-Loxp系统构建巨噬细胞特异性TDO2基因敲除(TDO2^(flox/flox)Lyz2-iCre^(+))小鼠。采用PCR和琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型;采用Western blot和免疫荧光验证小鼠巨噬细胞中TDO2敲除效果;通过苏木精-伊红(HE)染色,观察主要组织器官是否存在自发病变。结果基因型鉴定结果表明,flox扩增产物长度在407 bp或408 bp处仅有一条条带且Cre扩增产物长度在543 bp处有一条条带的小鼠即为TDO2^(flox/flox)Lyz2-iCre^(+)小鼠。Western blot结果显示,与TDO2^(flox/flox)小鼠相比,TDO2^(flox/flox)Lyz2-iCre^(+)小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs)中TDO2表达降低(P<0.01)。免疫荧光结果显示,与TDO2^(flox/flox)小鼠相比,TDO2^(flox/flox)Lyz2-iCre^(+)小鼠腹腔巨噬细胞和BMDMs中TDO2表达降低。HE染色结果显示,与TDO2^(flox/flox)小鼠相比,TDO2^(flox/flox)Lyz2-iCre^(+)小鼠肝脏、脑、肾脏和脾脏组织内细胞形态无明显差异。结论成功构建TDO2^(flox/flox)Lyz2-iCre^(+)小鼠,为后续深入研究TDO2调控巨噬细胞活化在疾病中的作用和机制提供更加精准的实验动物模型。 展开更多
关键词 TDO2 特异性基因敲除 巨噬细胞 基因型鉴定 CRE-LOXP
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A1/A2β-酪蛋白基因型的鉴定及其消化性能的比较 被引量：1
4
作者 李师行 徐洪涛 +6 位作者 李笑 孙美玲 杨鑫焱 项鹏宇 杨智浩 满朝新 姜毓君 《食品工业科技》 北大核心 2025年第5期160-167,共8页
A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白由于一级结构上的差异,消化后产生的物质也不相同。为了更全面地探究其对人体可能产生的生物活性影响,通过分析和监测该蛋白质在消化过程中的变化情况,进一步实现对A1/A2β-酪蛋白生物功能的探索。在本研究中,... A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白由于一级结构上的差异,消化后产生的物质也不相同。为了更全面地探究其对人体可能产生的生物活性影响,通过分析和监测该蛋白质在消化过程中的变化情况,进一步实现对A1/A2β-酪蛋白生物功能的探索。在本研究中,对采自某一牧场不同奶牛的牛奶进行等位基因特异性PCR鉴别,并借助阴离子交换色谱和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法对牛奶分离出的β-酪蛋白进行纯化和鉴定,最后构建静态体外消化模型比较β-酪蛋白在消化性能上的差异。结果显示,分离纯化的A1和A2β-酪蛋白的浓度分别为0.62 mg/mL和0.66 mg/mL,纯度分别为95.28%和96.60%。两种β-酪蛋白的最终消化率均在90%左右,差异不显著。A2β-酪蛋白自肠消化阶段开始直至消化结束表现出了更高的水解度,为25.34%。随着胃肠消化时间的增加,两种β-酪蛋白的粒径不断减小,电位绝对值不断增大,并且A2β-酪蛋白在粒径和电位上的变化程度大于A1β-酪蛋白。综上所述,本研究揭示了A1和A2β-酪蛋白在静态体外消化过程中的理化特性差异,并在一定程度上表明A2β-酪蛋白可能具有比A1β-酪蛋白更好的消化性能,为进一步拓宽A2β-酪蛋白在乳制品中的应用提供一定科学依据。 展开更多
关键词 A1 Β-酪蛋白 A2 Β-酪蛋白 等位基因特异性PCR 体外模拟消化 消化性能
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小麦及其近缘种中基因组特异性DNA重复序列的研究进展 被引量：7
5
作者 白建荣 贾旭 王道文 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期595-600,共6页
本文对小麦族植物中基因组特异性DNA重复序列的分类、基本特征、分离和鉴定方法、在小麦遗传改良中的应用以及未来研究的发展趋势进行了简述。综合已有的研究结果可以看出基因组特异性DNA重复序列是小麦族植物基因组特异性形成的重要构... 本文对小麦族植物中基因组特异性DNA重复序列的分类、基本特征、分离和鉴定方法、在小麦遗传改良中的应用以及未来研究的发展趋势进行了简述。综合已有的研究结果可以看出基因组特异性DNA重复序列是小麦族植物基因组特异性形成的重要构成部分。对基因组特异性DNA重复序列的研究是认识小麦族植物基因组的有效途径之一,基因组特异性DNA重复序列的应用将进一步促进小麦族植物分子细胞遗传学和普通小麦遗传改良研究的进展。 展开更多
关键词 小麦 近缘种 基因组特异性DNA重复序列 研究进展 染色体
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等位基因特异性引物和TaqMan-MGB探针双抑制野生等位基因扩增的实时荧光定量PCR检测JAK2V617F突变率 被引量：2
6
作者 梁国威 邵冬华 +1 位作者 何美琳 曹清芸 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1486-1491,共6页
本研究建立在外周血基因组DNA中定量检测JAK2V617F突变率的荧光定量PCR检测方法并探讨其临床应用价值。在实时荧光定量PCR分析系统中,应用等位基因突变引物和等位基因野生TaqMan-MGB探针共同抑制JAK2V617F野生等位基因扩增,从而特异性... 本研究建立在外周血基因组DNA中定量检测JAK2V617F突变率的荧光定量PCR检测方法并探讨其临床应用价值。在实时荧光定量PCR分析系统中,应用等位基因突变引物和等位基因野生TaqMan-MGB探针共同抑制JAK2V617F野生等位基因扩增,从而特异性地扩增JAK2V617F突变等位基因。通过测定不同JAK2V617F突变率标准品及其循环阈值(Ct值),建立JAK2V617F突变率定量测定方法,并对89例表观健康人外周血基因组DNA中JAK2V617F突变率进行检测。结果表明,建立的方法定量检测JAK2V617F突变率的下限为0.1%,检测JAK2V617F突变率的批内、批间平均变异率分别为4.1%和6.1%。对89例表观健康人外周血基因组DNA中JAK2V617F突变率检测显示,其中2例为JAK2V617F阳性,突变率分别为0.64%和0.98%。结论:建立的JAK2V617F突变率定量检测方法具有检测灵敏度高和重复性好的特性,适合骨髓增殖性疾病的诊断及疾病进程和疗效监测。本方法检测原理可用于各种单碱基突变率的检测,具有广泛的应用前景。 展开更多
关键词 JAK2V617F突变 骨髓增殖性疾病 实时荧光定量PCR 等位基因特异性引物 TAQMAN-MGB探针 双抑 制扩增 野生等位基因
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小鼠3种α1,2岩藻糖转移酶的底物特异性 被引量：1
7
作者 林蓓 齐藤真木子 岩森正男 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期761-766,共6页
目的对比小鼠3种GDP岩藻糖O!半乳糖苷"112-岩藻糖转移酶("112-FT)的底物特异性。方法利用RT-PCR方法克隆小鼠3种"112-FT基因编码区MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ、MFUT-Ⅲ,测序后分别将其插入表达载体pcDNA3.1的多克隆位点,构建表达... 目的对比小鼠3种GDP岩藻糖O!半乳糖苷"112-岩藻糖转移酶("112-FT)的底物特异性。方法利用RT-PCR方法克隆小鼠3种"112-FT基因编码区MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ、MFUT-Ⅲ,测序后分别将其插入表达载体pcDNA3.1的多克隆位点,构建表达载体pcDNA3.1-MFUT-Ⅰ、pcDNA3.1-MFUT-Ⅱ及pcDNA3.1-MFUT-Ⅲ;采用磷酸钙法将其转染于COS-7细胞进行表达,通过检测3种酶对不同种底物特性比较酶的特异性。结果小鼠基因MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ、MFUT-Ⅲ分别与人类H基因(77%)、Se基因(79%)和Sec1基因(75%)具有序列同源性。MFUT-Ⅰ和MFUT-Ⅱ基因转染后的COS-7细胞均具有"112-FT活性1而MFUT-Ⅲ基因转染的COS-7细胞无此活性。MFUT-Ⅱ同时对底物缺乏唾液酸的神经节苷脂(GA1)及单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)存在活性1分别生成产物岩藻糖基化GA1(FGA1)及岩藻糖基化神经节苷脂GM1(FGM1)<而MFUT-Ⅰ仅对底物GA1存在活性。MFUT-Ⅱ对GA1的比活性约为MFUT-Ⅰ的80～90倍。MFUT-Ⅱ对GA1的比活性为GM1的10￣20倍。MFUT-Ⅱ不仅具有合成Ⅳ型H抗原FGA1及FGM1活性,同时具有对乳丁糖神经酰胺(Lc4Cer)及异乳丁糖神经酰胺(nLc4Cer)的活性,可合成Ⅰ型及Ⅱ型H抗原。结论MFUT-Ⅱ是小鼠的主要"112-FT,具有合成Ⅳ型H抗原FGA1及FGM1的功能;MFUT-I仅有合成Ⅳ型H抗原FGA1的功能;MFUT-Ⅲ无"112-FT活性。 展开更多
关键词 小鼠 α1 2-岩藻糖转移酶 基因 糖脂 底物特异性
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副猪嗜血杆菌种特异性基因的筛选与鉴定
8
作者 李继昌 崔宁 +6 位作者 刘娇 周泷 张艳禾 谢芳 李刚 牛惠 王春来 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期79-83,共5页
为筛选副猪嗜血杆菌(HPS)种特异性的基因,采用抑制消减杂交(SSH)技术,以HPS DNA为Tester,以猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)DNA为Driver,通过2轮消减杂交和2次PCR扩增,将第2次PCR产物连接pMD19-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克... 为筛选副猪嗜血杆菌(HPS)种特异性的基因,采用抑制消减杂交(SSH)技术,以HPS DNA为Tester,以猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)DNA为Driver,通过2轮消减杂交和2次PCR扩增,将第2次PCR产物连接pMD19-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆后测序,经Southern Blot验证和BLAST分析,获得6个HPS特异基因片段。研究为建立副猪嗜血杆菌基因鉴别诊断方法及ELISA抗原靶标的鉴定奠定基础。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 抑制消减杂交 种特异性基因 鉴定
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转基因苜蓿草KK179-2品系特异性实时荧光PCR检测方法的建立
9
作者 刘二龙 卢丽 +5 位作者 吕英姿 蒋湘 李嘉琪 林学勤 杜雅萍 郑高彬 《中国饲料》 北大核心 2017年第14期31-35,共5页
根据转基因低木质素苜蓿草品系KK179-2 5’端外源插入序列与苜蓿草基因组DNA之间的邻接区序列设计引物和探针,建立了KK179-2品系特异性实时荧光PCR检测方法,并对其特异性、灵敏度及可重复性进行了测定。结果表明:建立的定量实时荧光PCR... 根据转基因低木质素苜蓿草品系KK179-2 5’端外源插入序列与苜蓿草基因组DNA之间的邻接区序列设计引物和探针,建立了KK179-2品系特异性实时荧光PCR检测方法,并对其特异性、灵敏度及可重复性进行了测定。结果表明:建立的定量实时荧光PCR检测方法特异性良好;标准曲线线性相关系数(R^2)为0.99,扩增效率E为105%;检测限为20拷贝,定量限为200拷贝。重复性实验显示本方法的标准偏差(SD)及相对标准偏差(RSD)都在可接受范围内。综上,建立的KK179-2品系特异性定量PCR检测方法适于快速、准确、稳定地对转基因苜蓿草KK179-2品系进行检测。 展开更多
关键词 转基因苜蓿KK179-2 品系特异性 定量实时荧光PCR
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诱导型巨噬细胞特异性敲除GRK2基因小鼠模型的构建及应用 被引量：3
10
作者 魏琦 朱学敏 +2 位作者 刘潇一 杨雪枝 魏伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第4期534-540,共7页
目的 建立诱导型巨噬细胞特异性敲除G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)基因(GRK2^(flox/flox)Lyz2-CreERT^(+))小鼠模型。方法 基于Cre/LoxP系统构建GRK2^(flox/flox)Lyz2-CreERT^(+)小鼠。通过PCR扩增程序及琼脂糖凝胶电泳鉴定GRK2^(flox/flox)... 目的 建立诱导型巨噬细胞特异性敲除G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)基因(GRK2^(flox/flox)Lyz2-CreERT^(+))小鼠模型。方法 基于Cre/LoxP系统构建GRK2^(flox/flox)Lyz2-CreERT^(+)小鼠。通过PCR扩增程序及琼脂糖凝胶电泳鉴定GRK2^(flox/flox)Lyz2-CreERT^(+)小鼠的基因型。二氧化碳法处死小鼠后,Western blot检测骨髓源巨噬细胞(BMDMs)和腹腔巨噬细胞(PMs)中GRK2表达。免疫荧光检测小鼠脑、心脏和脾脏巨噬细胞中GRK2表达。流式细胞术分析前列腺素E2(PGE2)诱导的PMs中M1/M2比例。结果 基因型鉴定结果表明,flox扩增产物长度在355 bp处有一条条带且Cre扩增产物长度在355 bp处有一条条带的小鼠即为GRK2^(flox/flox)Lyz2-CreERT^(+)小鼠。Western blot结果显示,与GRK2^(flox/flox)小鼠相比,GRK2^(flox/flox)Lyz2-CreERT^(+)小鼠BMDMs和PMs中GRK2表达降低(P<0.01)。免疫荧光结果显示,与GRK2^(flox/flox)小鼠相比,GRK2^(flox/flox)Lyz2-CreERT^(+)小鼠脑、心脏和脾脏中GRK2表达降低(P<0.01)。流式细胞术结果显示,与GRK2^(flox/flox)小鼠相比,GRK2^(flox/flox)Lyz2-CreERT^(+)小鼠PMs中CD86/CD206比例变化差异无统计学意义。在PGE2(10μmol/L)刺激下,GRK2^(flox/flox)Lyz2-CreERT^(+)小鼠PMs中CD86/CD206比例升高(P<0.01),且GRK2^(flox/flox)小鼠PMs中CD86/CD206比例高于GRK2^(flox/flox)Lyz2-CreERT^(+)小鼠(P<0.01)。结论 该研究成功构建出GRK2^(flox/flox)Lyz2-CreERT^(+)小鼠模型,且该小鼠可促进PGE2诱导的PMs向M2型巨噬细胞极化。 展开更多
关键词 G蛋白偶联受体激酶2 CRE/LOXP系统 特异性敲除小鼠 巨噬细胞 基因型鉴定
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IL-2基因转导自身肿瘤特异性细胞毒T细胞对小鼠实体瘤作用的实验研究
11
作者 吴之辉 曾民德 +4 位作者 邱德凯 李继强 陈成伟 陈诗书 张腾飞 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1995年第4期284-284,共1页
许多研究发现自身肿瘤特异性细胞毒T细胞(CTL)能定位于体内肿瘤所在部位．其杀瘤细胞活性及特异性远在LAK细胞之上，来源和增殖性方面较TIL为优，因此可作为较为理想的载体细胞导入各种治疗基因。将IL-2基因导入CTL中表达并回输．通过... 许多研究发现自身肿瘤特异性细胞毒T细胞(CTL)能定位于体内肿瘤所在部位．其杀瘤细胞活性及特异性远在LAK细胞之上，来源和增殖性方面较TIL为优，因此可作为较为理想的载体细胞导入各种治疗基因。将IL-2基因导入CTL中表达并回输．通过其聚集在肿瘤发生局部持续分泌一定量的IL-2，激活机体肿瘤免疫反应或直接杀伤肿瘤细胞， 展开更多
关键词 肿瘤 特异性细胞毒 T细胞 IL-2基因 转导 CTL 小鼠 体细胞 分泌 发现
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应用IL-2基因转染的小鼠肿瘤特异性T淋巴细胞进行过继免疫治疗的研究
12
作者 马施华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1995年第2期93-93,共1页
尽管过继免疫基因疗法是一种非常有希望的肿瘤基因治疗方法，但开展的研究并不多。因为遇到的一个主要困难是很难有效地向T淋巴细胞内进行基因转染。本研究应用新近发展起来的重组腺病毒载体，成功地将IL-2基因转染至肿瘤特异性CTL中，... 尽管过继免疫基因疗法是一种非常有希望的肿瘤基因治疗方法，但开展的研究并不多。因为遇到的一个主要困难是很难有效地向T淋巴细胞内进行基因转染。本研究应用新近发展起来的重组腺病毒载体，成功地将IL-2基因转染至肿瘤特异性CTL中，并证明IL-2基因转染的并能分泌IL-2的CTL能有效提高体内抗肿瘤免疫功能。 展开更多
关键词 基因转染 IL-2基因 T淋巴细胞 过继免疫治疗 小鼠肿瘤 特异性 抗肿瘤免疫 分泌 重组腺病毒载体 研究应用
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水稻种胚特异性启动子OsESP1的克隆及其表达特性 被引量：12
13
作者 房孝良 刘炜 +1 位作者 安静 王庆国 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1904-1909,共6页
以水稻品种"中花11"基因组DNA为模板,通过PCR的方法,对水稻基因OsESG1上游调控序列扩增,获得长度约为1.4kb的特异性条带,命名为OsESP1。以OsESP1与带有GUS报告基因的植物表达载体连接,经农杆菌介导转化获得转基因水稻阳性植... 以水稻品种"中花11"基因组DNA为模板,通过PCR的方法,对水稻基因OsESG1上游调控序列扩增,获得长度约为1.4kb的特异性条带,命名为OsESP1。以OsESP1与带有GUS报告基因的植物表达载体连接,经农杆菌介导转化获得转基因水稻阳性植株。结合组织化学染色法,检测GUS报告基因的表达特性,结果表明,由OsESP1所调控的GUS报告基因仅在水稻种胚中特异表达,而在其他组织中均未被检测到,初步证明OsESP1为水稻种胚特异性启动子。 展开更多
关键词 水稻 种胚特异性启动子 表达特性分析 GUS报告基因
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口腔鳞状细胞癌间质特异性基因HMGA2的表达【英】／Miyazawa J…／／Cancer Res．
14
作者 钟来平 赵士芳 《国外医学（口腔医学分册）》 2005年第1期12-12,共1页
上皮来源的癌细胞在向上皮一间质肿瘤转变过程中较容易获得纤维母细胞的特征。HMGA2是一种表达于未分化间质细胞的结构转录因子，在细胞分化时停止表达，同时启动间质性肿瘤的形成。然而HMGA2在上皮恶性肿瘤的病理学研究中的生物学意义... 上皮来源的癌细胞在向上皮一间质肿瘤转变过程中较容易获得纤维母细胞的特征。HMGA2是一种表达于未分化间质细胞的结构转录因子，在细胞分化时停止表达，同时启动间质性肿瘤的形成。然而HMGA2在上皮恶性肿瘤的病理学研究中的生物学意义尚存在争议。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞癌 间质特异性基因 HMGA2 表达 癌细胞 病理学研究
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采用种间特异性PCR对海参产品的物种鉴定研究 被引量：1
15
作者 文菁 胡超群 +1 位作者 张吕平 范嗣刚 《水产科学》 CAS 北大核心 2011年第12期768-773,共6页
运用设计出的11个种特异性PCR反向引物,通过与通用正向引物16Sar进行PCR扩增,分别在11种海参中扩增得到大小为269～406bp的种特异性16SrRNA基因产物,而在非特异种类中扩增不出任何产物,即可有效鉴定这11种海参。此法成功检测出2种冷冻... 运用设计出的11个种特异性PCR反向引物,通过与通用正向引物16Sar进行PCR扩增,分别在11种海参中扩增得到大小为269～406bp的种特异性16SrRNA基因产物,而在非特异种类中扩增不出任何产物,即可有效鉴定这11种海参。此法成功检测出2种冷冻海参替代产品,即用等刺参代替仿刺参,用玉足海参代替棘辐肛参,并且成功鉴定出10种海参干品盲样。本方法为海参种类鉴定、产品评估、保护生物多样性以及消费者权益提供了简单、快速、有效的手段。 展开更多
关键词 海参 种特异性PCR 16S RRNA基因 鉴定
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桑粉虱种特异性引物筛选
16
作者 柴建萍 江秀均 +2 位作者 倪婧 罗雁婕 白兴荣 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第7期1570-1575,共6页
【目的】桑粉虱Pealius mori(Takahashi)与其他种类粉虱形态相似,识别困难。设计、筛选桑粉虱种特异性引物,为桑粉虱检测和鉴定提供理论依据。【方法】DNAMAN软件比较与桑粉虱同源性较高的国内外具有代表性的7种粉虱线粒体COⅠ基因序列... 【目的】桑粉虱Pealius mori(Takahashi)与其他种类粉虱形态相似,识别困难。设计、筛选桑粉虱种特异性引物,为桑粉虱检测和鉴定提供理论依据。【方法】DNAMAN软件比较与桑粉虱同源性较高的国内外具有代表性的7种粉虱线粒体COⅠ基因序列,应用Primer 5.0软件设计5对桑粉虱COⅠ基因特异性引物。将各对引物与不同种类粉虱成虫基因组DNA模板进行PCR扩增,检测目的条带,筛选桑粉虱种的特异性引物。以桑粉虱的卵和幼虫基因组DNA为模板,验证所筛选出的桑粉虱种特异性引物的灵敏性。【结果】2对桑粉虱种特异性引物sfs1-1/sfs1-2、sfs5-1/sfs5-2对桑粉虱单头成虫基因组DNA的PCR扩增产物分别为450、300 bp,而对烟粉虱B型、温室白粉虱无扩增效果。2对引物对桑粉虱DNA模板浓度最低检测值分别为0.15 pg/μl、0.15 ng/μl。引物sfs1-1/sfs1-2灵敏性较引物sfs5-1/sfs5-2高1000倍。2对引物对桑粉虱成虫、幼虫及卵粒的线粒体COⅠ基因皆具较好扩增能力。【结论】引物sfs1-1/sfs1-2、sfs5-1/sfs5具桑粉虱种的特异性,引物sfs1-1/sfs1-2为桑粉虱检测、鉴定的首选引物。 展开更多
关键词 桑粉虱 线粒体COⅠ基因 种特异性引物 筛选
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基于种特异性COI标记的花生蚜快速鉴定技术
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作者 鞠倩 曲明静 +4 位作者 杜龙 薛明 梁景华 许婷婷 姜晓静 《花生学报》 北大核心 2019年第4期8-13,7,共7页
针对花生蚜虫体型小、在田间不易准确快速识别的问题。本文采用基于线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基I(mitochondrial DNA cytochrome coxidase subunit I,mtDNA COI)基因的种特异(species-specific COI)PCR方法,研究了其快速鉴定的分子技... 针对花生蚜虫体型小、在田间不易准确快速识别的问题。本文采用基于线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基I(mitochondrial DNA cytochrome coxidase subunit I,mtDNA COI)基因的种特异(species-specific COI)PCR方法,研究了其快速鉴定的分子技术。研究利用mtDNA COI基因通用型引物F-LCO-1490/R-HCO-700ME获得青岛地区花生蚜虫COI基因序列,并根据测序结果设计六对花生蚜特异引物,同时以同一花生田采集的、与花生蚜同生境节肢动物、线虫、软体动物的166个DNA样本为模板对六对引物的种特异性进行了检测。PCR结果显示,引物AC_F2/AC_R2对花生蚜基因组模板有特异扩增能力,片段长度为299bp;且该对引物在与花生蚜同生境节肢动物、线虫、软体动物样本中均未扩增出条带,显示出此种特异性引物对其他物种不具有交叉反应扩增能力,可用于花生蚜的快速检测及预测预报,同时对本地天敌对花生蚜捕食作用的检测也具有重要意义。 展开更多
关键词 花生蚜 线粒体基因 COI基因 种特异性引物 快速鉴定
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AS-PCR方法检测中国人群CYP2C19基因多态性 被引量：7
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作者 薛丽 叶玉兴 +1 位作者 易国辉 白玉杰 《海南医学院学报》 CAS 2010年第9期1101-1105,1110,共6页
目的:建立一种快速、灵敏的细胞色素氧化酶P4502C19基因多态性检测方法。方法:分离外周血淋巴细胞基因组DNA,分别用一对等位基因特异性(allele-specific,AS)的反向引物与共用正向引物进行PCR扩增,通过电泳分析对应的PCR产物来判断CYP2C1... 目的:建立一种快速、灵敏的细胞色素氧化酶P4502C19基因多态性检测方法。方法:分离外周血淋巴细胞基因组DNA,分别用一对等位基因特异性(allele-specific,AS)的反向引物与共用正向引物进行PCR扩增,通过电泳分析对应的PCR产物来判断CYP2C19基因型。在AS引物3′端倒数第三位或第二位引入错配碱基改进特异性。采用优化后方法对278例健康人进行CYP2C19基因型分析。结果:AS-PCR可检测CYP2C19基因多态性,引入第二个错配碱基可提高检测特异性。经直接测序验证结果完全一致。结论:建立和优化的AS-PCR方法适用于CYP2C19基因多态性快速检测。 展开更多
关键词 细胞色素氧化酶2C19 遗传多态性 基因型 等位基因特异性PCR
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小麦高分子量谷蛋白1Dx2基因启动子的克隆及功能鉴定 被引量：3
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作者 范三红 金伟波 +1 位作者 郭蔼光 杨淑慎 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2005年第5期95-99,共5页
以小偃6号基因组DNA为模板,利用聚合酶链式反应扩增到1kb左右的核酸序列,将其克隆到pMD18-T载体上。经测序鉴定及序列分析后得知,该片段为小麦高分子量谷蛋白基因(HMW-GS1Dx2)上游启动子及信号肽编码区,共1050bp。将其与β-葡糖苷酸酶(G... 以小偃6号基因组DNA为模板,利用聚合酶链式反应扩增到1kb左右的核酸序列,将其克隆到pMD18-T载体上。经测序鉴定及序列分析后得知,该片段为小麦高分子量谷蛋白基因(HMW-GS1Dx2)上游启动子及信号肽编码区,共1050bp。将其与β-葡糖苷酸酶(GUS)基因编码序列融合,用基因枪法将构建的嵌合基因转入小麦未成熟种子及叶片,检测其瞬时表达活性。组织化学检测表明,由该启动子驱动的GUS融合基因能在种子中表达,而在叶片中却未见表达,从而证实此HMW-GS1Dx2启动子具有在小麦胚乳中高效表达的活性,为小麦胚乳生物反应器的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 小麦 高分子量麦谷蛋白 启动子 胚乳特异性 瞬时表达 1Dx2基因 基因克隆 功能鉴定
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RNA干扰Gas2基因对低温胁迫下罗非鱼肾脏细胞系增殖及凋亡的影响 被引量：2
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作者 杨长庚 文华 +4 位作者 王美姿 陆星 蒋明 田娟 喻丽娟 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2019年第3期32-36,共5页
探讨低温胁迫下,干扰生长抑制特异性基因2 ( Gas2)对罗非鱼肾脏细胞系增殖和凋亡的影响。采用脂质体转染法介导Gas2短发夹RNA ( short hairpin RNA, shRNA)及阴性对照短发夹RNA处理罗非鱼肾脏细胞,24 h后,以5 ℃/d降温速率对转染后的罗... 探讨低温胁迫下,干扰生长抑制特异性基因2 ( Gas2)对罗非鱼肾脏细胞系增殖和凋亡的影响。采用脂质体转染法介导Gas2短发夹RNA ( short hairpin RNA, shRNA)及阴性对照短发夹RNA处理罗非鱼肾脏细胞,24 h后,以5 ℃/d降温速率对转染后的罗非鱼肾脏细胞进行低温胁迫,分别在25、20、15、10 ℃进行细胞采集。随后,利用实时荧光定量PCR检测Gas2基因及P53基因mRNA表达变化,利用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,并开展WST-1细胞增殖实验检测细胞的增殖情况。结果表明,低温胁迫下,阴性对照组及Gas2干扰组中Gas2和P53基因mRNA的表达在15 ℃和10 ℃时均显著升高;Gas2干扰组中Gas2和P53基因mRNA的表达水平在所有温度下均显著低于阴性对照组;随着温度降低,阴性对照组及Gas2干扰组的细胞凋亡率均明显升高,但Gas2干扰组的细胞凋亡率明显低于阴性对照组;低温胁迫下,对照组及Gas2干扰组的细胞增殖率与25 ℃时相比均显著下降;当温度降至15 ℃时,Gas2干扰组的细胞增殖率显著高于对照组。罗非鱼肾脏细胞在受低温胁迫时,抑制Gas2基因能够降低P53基因mRNA的表达水平以及细胞的凋亡率,并增加细胞的增殖。 展开更多
关键词 短发夹RNA 罗非鱼 生长抑制特异性基因2 细胞增殖 细胞凋亡
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