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禽脑脊髓炎病毒内蒙分离株(AEV-NH937)基因组全序列分析 被引量:3
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作者 刘丽华 马学恩 +1 位作者 顾玉芳 赵振华 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第9期19-21,共3页
关键词 脊髓炎病毒 全序列分析 基因组 分离株 小RNA病毒 内蒙 肠道病毒 VIRUS
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禽脑脊髓炎病毒YL株的分离鉴定 被引量:5
2
作者 郝华芳 张淑霞 +5 位作者 杨涛 杨增岐 王兴龙 杜恩岐 党如意 王晶钰 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第2期24-26,29,共4页
为弄清陕西杨凌某鸡场种鸡产蛋量突然下降,种蛋孵化率降低,死雏、弱雏增多的原因,通过采集发病鸡脑组织进行SPF鸡胚连续传代、琼脂扩散试验(AGP)、人工感染试验、VP1基因的克隆及序列分析等对病原进行鉴定.结果显示,分离毒YL株与AEV... 为弄清陕西杨凌某鸡场种鸡产蛋量突然下降,种蛋孵化率降低,死雏、弱雏增多的原因,通过采集发病鸡脑组织进行SPF鸡胚连续传代、琼脂扩散试验(AGP)、人工感染试验、VP1基因的克隆及序列分析等对病原进行鉴定.结果显示,分离毒YL株与AEV标准阳性血清之间出现特异的沉淀线;在人工感染试验中可见雏鸡有震颤、共济失调等症状,剖检大脑有轻微的水肿和软化;成功克隆出AEV YL株的VP1基因,全长810 bp,编码270个氨基酸残基;与AEV参考毒株VP1基因核苷酸同源性92.0%~99.8%,氨基酸同源性为89.3%~99.3%;进化树分析表明,YL株与1143株、L2Z株和SX株亲缘关系较近,与VR株、HB株、SD株和NH937株亲缘关系较远.结果表明,分离毒株为禽脑脊髓炎病毒,与AEV已知毒株在进化方面存在一定程度的差异. 展开更多
关键词 脊髓炎病毒(aev) 分离鉴定 VP1基因 序列分析
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禽脑脊髓炎病毒内蒙株(AEV-NH937)病毒含量检测和感染鸡胚病理变化的研究 被引量:1
3
作者 刘珍 赵振华 《畜牧兽医杂志》 2008年第6期12-13,共2页
关键词 脊髓炎病毒 病理变化 内蒙地区 病毒含量 鸡胚 感染 检测 病毒性传染病
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禽脑脊髓炎病毒感染雏鸡的病理组织学观察 被引量:10
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作者 张淑霞 杨增岐 +3 位作者 季芳 王向鹏 薛登民 赵余放 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第11期26-28,共3页
关键词 脊髓炎病毒 病理特征 组织学观察 雏鸡 病毒感染 中枢神经系统 接触性传染病 晶状体混浊
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禽脑脊髓炎病毒的分离鉴定 被引量:8
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作者 赵心力 赵振华 +5 位作者 马学恩 李润清 吉仁泰 顾玉芳 王凤龙 李润清 《中国畜禽传染病》 CSCD 1995年第2期3-7,共5页
通过SPF鸡胚连续、快速传代,从自然发病雏鸡脑组织中分离出一株禽脑脊髓炎病毒.暂命名为AEV-NH937株,该病毒在发病鸡胚的肠上皮细胞、胰岛细胞和大脑神经细胞的胞浆中呈颗粒状,直径25~30nm,对盐酸、氯仿、胰蛋... 通过SPF鸡胚连续、快速传代,从自然发病雏鸡脑组织中分离出一株禽脑脊髓炎病毒.暂命名为AEV-NH937株,该病毒在发病鸡胚的肠上皮细胞、胰岛细胞和大脑神经细胞的胞浆中呈颗粒状,直径25~30nm,对盐酸、氯仿、胰蛋白酶具有抵抗力,在二价镁离子保护下可抵抗热效应(50℃),病毒滴度6.16(即EID(50)=6.16),中和指数245。 展开更多
关键词 脊髓炎 病毒 分离 鉴定 鸡病
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禽脑脊髓炎病毒VP1基因的克隆及表达 被引量:2
6
作者 葛俊伟 关云涛 +5 位作者 王云峰 刘怀然 李昌文 杨增岐 曲连东 陈洪岩 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期450-453,共4页
应用RT-PCR方法,扩增出AEV Van-roekel株结构蛋白基因VP1,测序结果表明VP1基因全长810 bp,编码270个氨基酸;和AEV 1143株相比,核苷酸同源性为94.2%,氨基酸同源性为99.26%。将VP1基因定向克隆到pGEX-6p-1载体谷胱苷肽转移酶基因的下游,... 应用RT-PCR方法,扩增出AEV Van-roekel株结构蛋白基因VP1,测序结果表明VP1基因全长810 bp,编码270个氨基酸;和AEV 1143株相比,核苷酸同源性为94.2%,氨基酸同源性为99.26%。将VP1基因定向克隆到pGEX-6p-1载体谷胱苷肽转移酶基因的下游,并把重组质粒转入宿主菌BL21中,经IPTG诱导后,VP1基因得以表达。表达产物经SDS-PAGE和Western Blot鉴定,确定表达的融合蛋白大小约为58 Ku,且具有良好的反应原性。将表达产物纯化后免疫试验兔,琼脂扩散试验显示免疫血清能与禽脑脊髓炎琼脂扩散标准阳性抗原呈特异反应,表明重组VP1蛋白保留了天然蛋白的部分活性。 展开更多
关键词 脊髓炎病毒 VP1基因 克隆 表达
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禽脑脊髓炎病毒不同批次毒种致病性的研究 被引量:3
7
作者 章振华 姜北宇 +4 位作者 李林 张建伟 景小冬 毛娅卿 郑小兰 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第25期12034-12036,12062,共4页
[目的]探讨不同批次的鸡源及胚源毒种致病性,为有效控制禽脑髓炎(AE)的发生提供参考。[方法]将AEV Van Roekel(VR)株毒种用雏鸡及鸡胚进行繁殖与传代,制备了不同批次的鸡源及胚源毒种,将这些毒种以不同接毒剂量经脑内接种8~10... [目的]探讨不同批次的鸡源及胚源毒种致病性,为有效控制禽脑髓炎(AE)的发生提供参考。[方法]将AEV Van Roekel(VR)株毒种用雏鸡及鸡胚进行繁殖与传代,制备了不同批次的鸡源及胚源毒种,将这些毒种以不同接毒剂量经脑内接种8~10周龄的SPF鸡,进行致病性试验。[结果]不同批次的鸡源毒种致病性均很强,接种后可引起SPF鸡出现严重的禽脑脊髓炎症,不同批次的胚源毒种致病性存在明显差异,有强有弱。[结论]P080603和170807012个批次胚源毒种可以用作AE攻毒效检毒种。 展开更多
关键词 脊髓炎病毒 毒种 致病性
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禽脑脊髓炎病毒陕西分离株VP1基因的克隆及序列分析 被引量:2
8
作者 郝华芳 张淑霞 +4 位作者 杨涛 杨增岐 王兴龙 杜恩岐 党如意 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第7期23-27,共5页
对禽脑脊髓炎病毒(AEV)陕西分离株SX株VP1基因进行克隆和序列分析,了解VP1基因的分子生物学特征。根据发表的AEV VP1基因序列,设计并合成一对特异性引物,采用RT-PCR方法扩增出AEVSX分离株的VP1基因,将其克隆到pMD18-T载体上,进行序列测... 对禽脑脊髓炎病毒(AEV)陕西分离株SX株VP1基因进行克隆和序列分析,了解VP1基因的分子生物学特征。根据发表的AEV VP1基因序列,设计并合成一对特异性引物,采用RT-PCR方法扩增出AEVSX分离株的VP1基因,将其克隆到pMD18-T载体上,进行序列测定后与已知的AEV毒株序列进行比较分析。结果表明,获得的AEV SX分离株VP1基因的全长为810bp,编码270个氨基酸残基;SX株与参考毒株VP1基因的核苷酸同源性为91.5%~99.4%,推导的氨基酸同源性为88.5%~98.9%;在1~7、19~25、149~155处有3个潜在抗原位点。系统进化树表明,SX株与1143、L2Z参考毒株的亲缘关系较近。 展开更多
关键词 脊髓炎病毒 VP1基因 克隆 序列分析
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禽脑脊髓炎病毒Van Roekel株衣壳蛋白基因原核表达及其ELISA检测研究 被引量:3
9
作者 张二芹 赵心力 +3 位作者 赵振华 孙明 陈西钊 钱爱东 《动物医学进展》 CSCD 2005年第1期55-58,共4页
利用RT PCR方法扩增了禽脑脊髓炎病毒VP0、VP3和VP1基因 ,分别插入pGEX 4T 1原核表达载体 ,转化到E .coliER2 566表达菌内 ,经IPTG诱导表达后 ,SDS PAGE分析表达产物。结果表明 ,表达的VP0、VP3、VP1融合蛋白分子量分别为 53 ,53 ,56ku... 利用RT PCR方法扩增了禽脑脊髓炎病毒VP0、VP3和VP1基因 ,分别插入pGEX 4T 1原核表达载体 ,转化到E .coliER2 566表达菌内 ,经IPTG诱导表达后 ,SDS PAGE分析表达产物。结果表明 ,表达的VP0、VP3、VP1融合蛋白分子量分别为 53 ,53 ,56ku。以电洗脱法纯化VP0、VP3、VP1表达蛋白抗原并分别建立了间接ELISA方法 ,用阳性血清和阴性血清进行检测。结果显示 ,表达VP1蛋白反应活性相对高于VP0、VP3蛋白反应活性 ,最后再将自制VP1板用自配试剂检测其活性 ,同时用美国试剂盒检测VP1活性 ,美国ELISA试剂盒、琼脂扩散试验检测同样 1 0份血清作比较 ,三组ELISA检测结果 ,其中有 8份被检血清为阳性 ;2份被检血清为阴性。这一结果与琼脂扩散试验检测结果一致。说明VP1表达蛋白活性达到预期要求 。 展开更多
关键词 脊髓炎病毒 VP0、VP3、VP1基因 原核表达 ELISA
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AEV-NH937引起禽脑脊髓炎的病理学观察 被引量:2
10
作者 王纯洁 马学恩 赵振华 《动物医学进展》 CSCD 2002年第2期70-71,共2页
用禽脑脊髓炎病毒 NH93 7毒株脑内接种 1日龄 SPF雏鸡 ,分别在攻毒后 3 ,5,1 0 ,1 4 ,2 0 ,2 5和 3 0 d分别宰杀对照组两只和攻毒组 4只 ,取大脑和小脑、固定、HE染色。结果临床发病在第 6天出现 ,第 9天普遍发病并开始死亡 ,到第 1 4... 用禽脑脊髓炎病毒 NH93 7毒株脑内接种 1日龄 SPF雏鸡 ,分别在攻毒后 3 ,5,1 0 ,1 4 ,2 0 ,2 5和 3 0 d分别宰杀对照组两只和攻毒组 4只 ,取大脑和小脑、固定、HE染色。结果临床发病在第 6天出现 ,第 9天普遍发病并开始死亡 ,到第 1 4天死亡停止。在第 3天时 ,软脑膜充血出血、神经元出现少量变性坏死 ,第 1 0天和 1 4天损伤性变化最重 。 展开更多
关键词 脊髓炎 病毒 病理 aev-NH937
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禽脑脊髓炎病毒的分离与初步鉴定 被引量:2
11
作者 刘思当 范伟兴 +1 位作者 匡宝晓 王海荣 《山东农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 2000年第1期85-86,共2页
禽脑脊髓炎(AE)是一种主要侵害雏鸡的病毒性传染病,以共济失调、头颈快速震颤、衰竭死亡为特征。本病1930年最早发现于美国〔1〕,此后,世界所有养禽地区均有发生,我国许多省、市、区均有发生本病的报道〔2〕,山东省对本病的报道多见〔... 禽脑脊髓炎(AE)是一种主要侵害雏鸡的病毒性传染病,以共济失调、头颈快速震颤、衰竭死亡为特征。本病1930年最早发现于美国〔1〕,此后,世界所有养禽地区均有发生,我国许多省、市、区均有发生本病的报道〔2〕,山东省对本病的报道多见〔3,4〕,但大都缺乏对AE病毒分离与?.. 展开更多
关键词 脊髓炎病毒 分离 鉴定 毒力
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应用原位杂交检测禽脑脊髓炎病毒 被引量:2
12
作者 刘丽华 马学恩 赵振华 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第2期25-26,共2页
关键词 原位杂交 脊髓炎 病毒检测 探针 特异性 灵敏度
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禽脑脊髓炎病毒的分离与疫苗研制 被引量:1
13
作者 卢中华 张红英 +3 位作者 于晓军 杨霞 王之岑 张保亮 《河南农业科学》 CSCD 1997年第7期46-48,共3页
禽脑脊髓炎病毒的分离与疫苗研制卢中华张红英于晓军杨霞(河南农业大学,郑州450002)王之岑(淮阳师范学校)张保亮(许昌县畜牧兽医技术中心)禽脑脊髓炎(AvianEncephalomyelitisAE)是一种主要侵害... 禽脑脊髓炎病毒的分离与疫苗研制卢中华张红英于晓军杨霞(河南农业大学,郑州450002)王之岑(淮阳师范学校)张保亮(许昌县畜牧兽医技术中心)禽脑脊髓炎(AvianEncephalomyelitisAE)是一种主要侵害雏鸡的病毒性传染病。1930年首次... 展开更多
关键词 脊髓炎 病毒 分离 疫苗 鸡病
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禽脑脊髓炎病毒的鉴定 被引量:1
14
作者 张艳艳 靳亚平 +1 位作者 范根成 丰艳妮 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期11-13,共3页
对分离到的AEV毒株进行氯仿、乙醚、温度敏感性试验等理化性质及血凝性质的鉴定,表明该毒株理化性质稳定,无血凝性;电镜下观察接毒鸡胚的超薄切片可看到AEV病毒颗粒,大小在25-30 nm。参照 AEV的基因序列设计了一对引物,对该病毒进行了... 对分离到的AEV毒株进行氯仿、乙醚、温度敏感性试验等理化性质及血凝性质的鉴定,表明该毒株理化性质稳定,无血凝性;电镜下观察接毒鸡胚的超薄切片可看到AEV病毒颗粒,大小在25-30 nm。参照 AEV的基因序列设计了一对引物,对该病毒进行了特异性扩增,得到了目的片段。证明该分离病毒为AEV毒株,暂定名为AEV-HI)。 展开更多
关键词 脊髓炎病毒 鉴定 RT-PCR
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禽脑脊髓炎病毒(VR株)接种鸡胚的病理变化 被引量:1
15
作者 马强 张二芹 +4 位作者 王丽 高婉丽 王明伟 王金玲 赵振华 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2008年第8期139-141,共3页
通过卵黄囊接种法,将禽脑脊髓炎病毒接种到8日龄SPF鸡胚内,继续在孵化箱内孵化。第17天收病毒,经观察,接毒的鸡胚局部有出血点、体重减轻、爪子弯曲等病理变化。
关键词 脊髓炎病毒 鸡胚病理变化 VR株
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利用鸡胚成纤维细胞培养禽脑脊髓炎病毒的研究 被引量:1
16
作者 秦卓明 赵继勋 +5 位作者 杨建民 金维江 张世栋 贾强 徐怀英 何叶峰 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第4期3-5,共3页
利用鸡胚成纤维细胞 (CEF)培养禽脑脊髓炎病毒 (AEV) ,经过六次盲传发现 :AEV在 CEF上无细胞病变 (CPE) ,但利用 CEF细胞上清接种 SPF鸡胚 ,可产生不同程度的 AE鸡胚病变。分别取不同时间的感染细胞上清 ,测定 AEV浓度 ,结合培养条件 ,... 利用鸡胚成纤维细胞 (CEF)培养禽脑脊髓炎病毒 (AEV) ,经过六次盲传发现 :AEV在 CEF上无细胞病变 (CPE) ,但利用 CEF细胞上清接种 SPF鸡胚 ,可产生不同程度的 AE鸡胚病变。分别取不同时间的感染细胞上清 ,测定 AEV浓度 ,结合培养条件 ,进而确定 AEV培养的最佳时机。结果表明 :以 AEV在 CEF上培养 7天最好 ,病毒滴度可达 10 2 .8EID50 / 0 .2 ml。将经 CEF培养的 AEV差速离心 (浓缩约 5 0 0倍 ) ,接种 SPF鸡胚 ,可产生典型的鸡胚病变 ,其滴度为 8× 10 5.0 EID50 / 0 .2 m l。通过 Cs Cl密度梯度离心提纯病毒 ,在电镜下观察到了大小基本一致的病毒粒子 ,病毒直径约为 2 5 nm。利用 AEV感染的 CEF或通过“细胞飞片”制备荧光片 ,建立了间接免疫荧光快速检验 CEF是否感染 AEV的方法。 展开更多
关键词 鸡胚 成纤维细胞 细胞培养 脊髓炎病毒 病毒滴度
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禽脑脊髓炎病毒VP1基因植物表达载体的构建 被引量:3
17
作者 马强 张二芹 张同旭 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第5期25-27,共3页
以提取的禽脑脊髓炎病毒总RNA为模板,以P1和P2为引物,反转录为cDNA,再以cDNA为模板进行PCR扩增。将扩增产物克隆pMD18-T载体中,获得重组质粒pMD18-T-VP1,PstⅠ/BamHⅠ双酶切及PCR确认正确后,利用pMD18-T-VP1重组质粒为模板,以P3和P4为引... 以提取的禽脑脊髓炎病毒总RNA为模板,以P1和P2为引物,反转录为cDNA,再以cDNA为模板进行PCR扩增。将扩增产物克隆pMD18-T载体中,获得重组质粒pMD18-T-VP1,PstⅠ/BamHⅠ双酶切及PCR确认正确后,利用pMD18-T-VP1重组质粒为模板,以P3和P4为引物,经PCR扩增获得了大小约810bp的产物。VP1基因和pBI121植物表达载体用SmaⅠ和SacⅠ双酶切,经纯化后连接,再转化到EHA105农杆菌中,酶切和测序鉴定结果表明,成功地构建了重组质粒pBI121-VP1,为进一步利用转基因植物生产VP1蛋白奠定了基础。 展开更多
关键词 脊髓炎病毒 VP1基因 pBI121植物表达载体
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禽脑脊髓炎病毒VP1、VP3、VP0基因表达载体的构建 被引量:3
18
作者 王嘉慧 刘丽华 陈富荣 《化学与生物工程》 CAS 2009年第12期70-72,共3页
根据AEV-NH937基因组全序列设计3对引物,应用RT-PCR方法,扩增出AEV的外壳蛋白VP1、VP3、VP0基因,将它们克隆于pUCm-T载体上进行序列分析。结果显示,AEV-NH937病毒株VP1基因全长810 bp、编码270个氨基酸,VP3基因全长735 bp、编码245个氨... 根据AEV-NH937基因组全序列设计3对引物,应用RT-PCR方法,扩增出AEV的外壳蛋白VP1、VP3、VP0基因,将它们克隆于pUCm-T载体上进行序列分析。结果显示,AEV-NH937病毒株VP1基因全长810 bp、编码270个氨基酸,VP3基因全长735 bp、编码245个氨基酸,VP0基因全长726 bp、编码242个氨基酸;与Calnek疫苗株相比,AEV-NH937病毒株VP1、VP3、VP0基因的核苷酸同源性分别为90.62%、93.88%、95.45%,氨基酸同源性分别为88.89%、97.96%、98.35%。将VP1、VP3、VP0基因分别插入载体pcDNA4/His Max构建表达重组质粒并转入宿主菌DH5α中,使基因得以表达。 展开更多
关键词 脊髓炎病毒 VP1、VP3、VP0基因 克隆 表达
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用酶联免疫吸附试验检测禽脑脊髓炎病毒抗体 被引量:2
19
作者 曹永长 毕英佐 何洁 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 1997年第1期13-14,共2页
用酶联免疫吸附试验检测禽脑脊髓炎病毒抗体曹永长毕英佐何洁(华南农业大学动物科学系,广州510642)禽脑脊髓炎(AvianEncephalomyelitis,简称AE)是由禽脑脊髓炎病毒(AEV)引起的一种危害严重的... 用酶联免疫吸附试验检测禽脑脊髓炎病毒抗体曹永长毕英佐何洁(华南农业大学动物科学系,广州510642)禽脑脊髓炎(AvianEncephalomyelitis,简称AE)是由禽脑脊髓炎病毒(AEV)引起的一种危害严重的传染病,主要侵害幼年鸡群,其特征是... 展开更多
关键词 脊髓炎 病毒 抗体 酶联免疫吸附
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禽脑脊髓炎病毒单克隆抗体的制备、鉴定与初步应用 被引量:1
20
作者 黄小洁 张兵 +4 位作者 王兆丽 吴华伟 薛青红 刘丹 薛麒 《中国兽药杂志》 2023年第12期8-13,共6页
为获得禽脑脊髓炎病毒(Avian Encephalomyelitis virus,AEV)VP1蛋白的单克隆抗体,通过原核表达AEV VP1蛋白,纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠,并按常规方法制备杂交瘤细胞。经ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,经过3次亚克隆获得两株杂交瘤... 为获得禽脑脊髓炎病毒(Avian Encephalomyelitis virus,AEV)VP1蛋白的单克隆抗体,通过原核表达AEV VP1蛋白,纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠,并按常规方法制备杂交瘤细胞。经ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,经过3次亚克隆获得两株杂交瘤细胞株,命名为4#、19#,并进行了抗体亚类的鉴定、Western-blot和IFA检测。结果显示:制备的两株单克隆抗体亚型分别为IgG2b、IgG2a,Western-blot和IFA试验结果表明单克隆抗体均能与AEV发生特异性反应而与其他家禽常见病毒均无交叉反应。采用建立的IFA方法对单抗进行了初步运用,在疫苗外源病毒检测AEV时,与经典方法的符合率100%。本研究成功制备了AEV单克隆抗体,为进一步建立AEV检测方法和深入研究AEV的生物学特性奠定了基础。 展开更多
关键词 脊髓炎病毒 VP1蛋白 单克隆抗体
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