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禽网状内皮组织增生症病毒囊膜蛋白单克隆抗体的制备及初步应用
1
作者 韩京哲 黄萌萌 +11 位作者 许萌萌 王国栋 张玉龙 刘润杭 于航博 吴子文 柯二靖 凌丹 于晓雪 高玉龙 李留安 祁小乐 《中国家禽》 北大核心 2025年第9期66-73,共8页
为研制禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)囊膜蛋白gp90单克隆抗体,试验构建重组原核表达质粒pCold-gp90,转化至感受态细胞BL21中进行蛋白诱导表达;采用纯化的gp90蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备杂... 为研制禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)囊膜蛋白gp90单克隆抗体,试验构建重组原核表达质粒pCold-gp90,转化至感受态细胞BL21中进行蛋白诱导表达;采用纯化的gp90蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和流式细胞分选技术筛选鉴定阳性杂交瘤细胞,并制备单克隆抗体腹水,对单克隆抗体的亚型、效价进行测定;并初步测试单克隆抗体在Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)中检测gp90蛋白和REV中的应用效果。结果显示:REV囊膜蛋白gp90获得成功表达和纯化,获得3株能稳定分泌REV gp90单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,该单克隆抗体亚型均为IgG1、Kappa,腹水效价均可达1∶64000;该单克隆抗体不仅可用于Western blot或IFA检测gp90原核表达蛋白和真核表达蛋白,还可用于IFA检测REV的TCID50效价。研究表明,成功制备的REV gp90单克隆抗体为进一步的REV检测方法建立和gp90蛋白功能研究提供了重要工具。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 囊膜蛋白gp90 原核表达 杂交瘤细胞 单克隆抗体
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禽网状内皮组织增殖病研究进展
2
作者 吴淑玉 任庆玲 +9 位作者 任书麟 石梦圆 王嘉 赵潇楠 翁鸿宇 唐志鹏 胡小然 郭龙宗 郭艳 王一新 《动物医学进展》 北大核心 2025年第9期96-102,共7页
禽网状内皮组织增殖病(Reticuloendotheliosis,RE)是由网状内皮组织增殖病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)引起的肿瘤性、免疫抑制性传染病。流行病学调查显示,REV在我国不同种类的鸡群中感染率逐年升高,导致疫苗免疫失败并继发... 禽网状内皮组织增殖病(Reticuloendotheliosis,RE)是由网状内皮组织增殖病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)引起的肿瘤性、免疫抑制性传染病。流行病学调查显示,REV在我国不同种类的鸡群中感染率逐年升高,导致疫苗免疫失败并继发其他病原感染,给我国家禽业的健康发展带来严重威胁。目前尚未有针对REV的商品化疫苗和特异性治疗药物,主要依靠日常监测和淘汰阳性种鸡进行防控。因此,加强对REV的基础和应用研究具有重要意义。论文综述了RE的病原学、流行病学、临床症状及其发病机制,并对当前常用的诊断方法进行了评价,以期为RE的诊断和综合防控提供参考。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增殖病 发病机制 混合感染 检测方法
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IFN-α对禽网状内皮组织增殖病病毒体内外增殖的抑制作用
3
作者 徐凤霞 孙万里 +3 位作者 张亚文 常爽 王一新 赵鹏 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第10期10-17,共8页
为明确禽源α干扰素(IFN-α)对禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)体内外增殖的抑制效果,本试验在细胞和动物水平上分别采用鸡胚成纤维(DF-1)细胞和海兰褐鸡作为模型,于REV接种前(预防)和接种后(治疗)分别添加不同浓度的禽IFN-α处理,分析禽... 为明确禽源α干扰素(IFN-α)对禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)体内外增殖的抑制效果,本试验在细胞和动物水平上分别采用鸡胚成纤维(DF-1)细胞和海兰褐鸡作为模型,于REV接种前(预防)和接种后(治疗)分别添加不同浓度的禽IFN-α处理,分析禽IFN-α在体外和体内对REV增殖的影响。体外试验结果显示,与阳性对照组相比,禽IFN-α浓度为33 IU/mL的治疗组72 h细胞和上清中REV的增殖受到了显著抑制(P<0.05),禽IFN-α浓度为33 IU/mL的预防组72 h细胞中REV的增殖受到了显著抑制(P<0.05)。通过比较各组海兰褐鸡的平均体重、血液中REV阳性率和病毒载量、泄殖腔REV阳性率和排毒量、免疫器官指数和病毒载量系统评估禽IFN-α对REV体内增殖的影响,结果显示,与阳性对照组相比,禽IFN-α浓度为1 500 IU的治疗组海兰褐鸡21和28日龄时体重显著升高(P<0.05),14日龄时肝脏发育指数以及14和28日龄时的脾脏发育指数显著降低(P<0.05),14日龄时血液和脾脏中病毒载量显著降低(P<0.05),7和21日龄时泄殖腔排毒量显著降低(P<0.05)。本试验在体外细胞和体内动物2个层面均证实了禽IFN-α对REV增殖具有显著的抑制效果,这不仅为禽网状内皮组织增殖病的防控策略提供了新的思路和辅助手段,也为未来抗病毒药物的研发和应用提供了科学依据。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增殖病病毒(REV) 干扰素 体外水平 体内水平 抑制作用
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3种方法检测禽网状内皮组织增殖病毒人工感染鸡胚孵化雏鸡的带毒比较
4
作者 徐凤霞 孙万里 +3 位作者 张亚文 常爽 王一新 赵鹏 《中国动物检疫》 CAS 2024年第2期80-85,共6页
为比较血液和粪便等样品采用不同方法检测禽网状内皮组织增殖病毒(REV)的准确率,从而为制定禽网状内皮组织增殖病(RE)净化程序提供参考,利用鸡胚卵黄囊接种构建REV垂直传播感染雏鸡模型,分别采用DF-1细胞病毒分离、RT-PCR检测和荧光定量... 为比较血液和粪便等样品采用不同方法检测禽网状内皮组织增殖病毒(REV)的准确率,从而为制定禽网状内皮组织增殖病(RE)净化程序提供参考,利用鸡胚卵黄囊接种构建REV垂直传播感染雏鸡模型,分别采用DF-1细胞病毒分离、RT-PCR检测和荧光定量RT-PCR检测,对1日龄雏鸡血液和胎粪样品,7~70日龄鸡(每隔1周)的血液和泄殖腔棉拭子样品,进行REV检测和结果比较。结果显示:对1日龄出壳的SPF鸡血浆进行检测,荧光定量RT-PCR灵敏度最高,阳性检出率为100%(25/25),其次为病毒分离,阳性检出率为96%(24/25),RT-PCR检出率最低;对1日龄出壳的SPF鸡胎粪进行检测,荧光定量RT-PCR与病毒分离灵敏度一致,阳性检出率均为80%(20/25),RT-PCR检出率最低,为28%(7/25)。对7~70日龄鸡(每隔1周)进行血液和泄殖腔棉拭子检测,3种方法阳性检出率与1日龄检测情况总体相似,检出率从高到低依次为荧光定量RT-PCR、病毒分离和RT-PCR。结果表明,在同一检测时间点使用同一检测方法,胎粪/泄殖腔棉拭子REV阳性检出率基本低于血液检出率。本研究初步比较了不同方法检测REV人工感染鸡胚孵化雏鸡的带毒情况,为实施REV净化奠定了基础。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增殖病毒 病毒分离 RT-PCR 荧光定量RT-PCR
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不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒的动态监测
5
作者 徐凤霞 孙万里 +3 位作者 张亚文 常爽 王一新 赵鹏 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期11-17,共7页
为明确鸡群经不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的排毒动态,本试验通过设立无特定病原体(SPF)鸡胚6胚龄卵黄囊感染组、1日龄SPF鸡腹腔感染组以及对上述两组SPF鸡分别加入感染鸡的卵黄囊感染同居组和腹腔感染同居组,建立SPF鸡感... 为明确鸡群经不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的排毒动态,本试验通过设立无特定病原体(SPF)鸡胚6胚龄卵黄囊感染组、1日龄SPF鸡腹腔感染组以及对上述两组SPF鸡分别加入感染鸡的卵黄囊感染同居组和腹腔感染同居组,建立SPF鸡感染REV模型,同时设置空白对照组,在不同日龄记录各组鸡的体重和死亡情况,并综合运用反转录PCR(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和间接免疫荧光试验(IFA)3种检测方法对各感染组进行REV的动态监测。结果显示:(1)与空白对照组相比,腹腔感染组和卵黄囊感染组SPF鸡体重增长在感染后第21~70天均受到显著抑制(P<0.05),卵黄囊感染组SPF鸡的死亡率在感染后第49和63天显著升高(P<0.05),腹腔感染组SPF鸡的死亡率在感染后第42天显著升高(P<0.05),卵黄囊感染组SPF鸡血浆中REV病毒载量在感染后第21天显著高于腹腔感染组(P<0.05);(2)卵黄囊感染组SPF鸡自出壳即可检测到病毒血症阳性,并在感染后第21天时达到排毒高峰,腹腔感染组SPF鸡在感染后第14天时达到排毒高峰;(3)卵黄囊感染同居组的10只SPF鸡在感染后第7天时即检测到2只鸡呈病毒血症阳性,腹腔感染同居组SPF鸡在感染后第21天时检测到1只鸡呈阳性;(4)3种检测方法中,RT-qPCR和IFA检出REV效果更好。本试验通过分析不同途径感染REV后鸡群血浆中的带毒状态,为REV感染的科学防控和净化提供参考数据。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增殖病病毒(REV) 排毒规律 反转录PCR(RT-PCR) 实时荧光定量PCR(RT-qPCR) 间接免疫荧光试验(IFA)
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禽网状内皮组织增殖病病毒GD09株的分离与全基因组测序 被引量：2
6
作者 史伟伟 刘红波 +2 位作者 徐成刚 廖明 曹伟胜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第9期170-174,共5页
从广东某鸡场送检的疑似禽网状内皮组织增殖病的病鸡中采集病料,处理后经接种DF-1细胞,经聚合酶链式反应(PCR)及特异性间接免疫荧光试验(IFA),分离并鉴定出1株禽网状内皮组织增殖病病毒(reticuloendotheliosis virus,REV),命名为GD09。... 从广东某鸡场送检的疑似禽网状内皮组织增殖病的病鸡中采集病料,处理后经接种DF-1细胞,经聚合酶链式反应(PCR)及特异性间接免疫荧光试验(IFA),分离并鉴定出1株禽网状内皮组织增殖病病毒(reticuloendotheliosis virus,REV),命名为GD09。依据已发表的REV前病毒全基因组序列设计并合成6对引物,采用分段扩增的方法完成了分离株的全基因组序列测定。结果显示,该分离株基因组序列全长8295bp,符合典型的复制完全型反转录病毒的基因组结构,基因序列中不含已知致癌基因。将该分离株的亚群特异性gp90基因序列与国内外各参考株相应序列进行相似性比较分析,结果表明,GD09分离株与中国分离株HA9901亲缘关系最近,核苷酸相似性最高。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增殖病 禽网状内皮组织增殖病病毒 gp90 分离与鉴定
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鸡肿瘤病料中马立克氏病病毒和禽网状内皮组织增生症病毒共感染的研究 被引量：44
7
作者 张志 崔治中 +1 位作者 姜世金 周蛟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期274-278,共5页
采用细胞培养、间接荧光抗体试验(IFA)、聚合酶链式反应 (PCR)和斑点杂交 (Dotblot)的方法从我国不同地区发生肿瘤的病料中同时进行MDV和REV的分离和鉴定。在分离到的 1 3株MDV野毒株中 ,有 4株培养物既能在IFA中与REV的单抗反应 ,又可... 采用细胞培养、间接荧光抗体试验(IFA)、聚合酶链式反应 (PCR)和斑点杂交 (Dotblot)的方法从我国不同地区发生肿瘤的病料中同时进行MDV和REV的分离和鉴定。在分离到的 1 3株MDV野毒株中 ,有 4株培养物既能在IFA中与REV的单抗反应 ,又可以用PCR扩增出REV的LTR ;另有 4株培养物能扩增出REV的LTR ,但在IFA中却不与REV的单抗反应。结果表明我国MD肿瘤中存在着REV的共感染 ,且我国MDV某些野毒株的基因组中有可能已经整合进了REV的LTR序列。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 禽网状内皮组织增生症病病毒 共感染
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禽网状内皮组织增生症流行现状及检测技术研究进展 被引量：11
8
作者 邓小芸 祁小乐 +4 位作者 高玉龙 高宏雷 秦立廷 王永强 王笑梅 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第9期93-96,共4页
禽网状内皮组织增生症(RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,国内外鸡群中网状内皮组织增生症病毒(REV)流行比较严重;REV与马立克病病毒(MDV)、鸡贫血病病毒(CAV)和J亚群禽白血病病毒(Avianleukosis virus subgroup J,AL... 禽网状内皮组织增生症(RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,国内外鸡群中网状内皮组织增生症病毒(REV)流行比较严重;REV与马立克病病毒(MDV)、鸡贫血病病毒(CAV)和J亚群禽白血病病毒(Avianleukosis virus subgroup J,ALV-J)几种免疫抑制性病毒的混合感染在我国部分养鸡场中均普遍存在,使得鸡群处于免疫力低下的状态,导致禽流感、新城疫等重要疫苗免疫失败,并容易造成继发感染,使疫病的诊断和防控难度加大。另外,REV可以整合到MDV和鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)基因组中,从而导致商品化疫苗受到污染,并可用做将外源基因插入到鸡和哺乳动物细胞内的表达载体;基于REV传统检测方法的基础上,新型的分子生物学检测技术如PCR、实时荧光PCR、LAMP提高了诊断REV的敏感性和特异性。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症 流行 感染 基因重组 检测技术
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商品代肉鸡群中禽网状内皮组织增生病病毒和马立克氏病病毒的混合感染 被引量：7
9
作者 张志 王锡乐 +2 位作者 庄国庆 姜世金 崔治中 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期39-41,共3页
山东兖州某商品代肉鸡场的 2 0日龄肉鸡开始出现大批死亡 ,剖检发现肝脏、脾脏、肾脏和心脏等主要脏器均出现大小不等的肿瘤结节 ,采用细胞培养和间接荧光抗体试验的方法从这些病料中同时分离到了禽网状内皮组织增生病病毒 (REV)和马立... 山东兖州某商品代肉鸡场的 2 0日龄肉鸡开始出现大批死亡 ,剖检发现肝脏、脾脏、肾脏和心脏等主要脏器均出现大小不等的肿瘤结节 ,采用细胞培养和间接荧光抗体试验的方法从这些病料中同时分离到了禽网状内皮组织增生病病毒 (REV)和马立克氏病病毒 (MDV) ,通过组织病理学检查和斑点杂交的方法表明该鸡场的疫病为REV和MDV共感染引起的肿瘤病。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生病病毒 马立克氏病病毒 混合感染 肉鸡
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禽网状内皮组织增生病病毒感染对SPF鸡免疫器官和疫苗免疫效果的影响 被引量：6
10
作者 李凯 高立 +4 位作者 祁小乐 高宏雷 高玉龙 王永强 王笑梅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期340-345,共6页
禽网状内皮组织增生病(RE)是禽类的一种重要免疫抑制性疾病,目前对其造成免疫抑制的机制尚不十分清楚。本研究对实验室分离的一株REV流行毒株(HLJR0901株)感染1日龄SPF鸡后对感染鸡免疫器官和免疫功能造成的影响进行研究。结果表明,1日... 禽网状内皮组织增生病(RE)是禽类的一种重要免疫抑制性疾病,目前对其造成免疫抑制的机制尚不十分清楚。本研究对实验室分离的一株REV流行毒株(HLJR0901株)感染1日龄SPF鸡后对感染鸡免疫器官和免疫功能造成的影响进行研究。结果表明,1日龄SPF鸡感染REV后出现生长迟缓,法氏囊、胸腺萎缩,脾肿大的症状。感染鸡出现法氏囊滤泡淋巴细胞大量坏死减少,间质结缔组织增生;胸腺出血,胸腺小体增多;脾小结明显萎缩,淋巴细胞减少等病理变化。荧光定量PCR检测发现,病毒在感染鸡法氏囊、胸腺和脾内均有分布,且持续存在。SPF鸡感染REV后出现严重的免疫抑制,使AIV灭活疫苗和NDV弱毒疫苗的免疫效果显著下降。本研究为阐明REV的免疫抑制机制提供了重要的实验数据。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生病 致病性 免疫器官 免疫抑制
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禽网状内皮组织增生病流行现状及防控 被引量：9
11
作者 邓小芸 祁小乐 +4 位作者 李凯 胡峰 高玉龙 高宏雷 王笑梅 《中国家禽》 北大核心 2015年第1期1-4,共4页
禽网状内皮组织增生病(RE)是危害养禽业的一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染范围不断扩大,已证明野鸟也能够携带该病毒。免疫抑制、混合感染、基因整合使得该病的防控形势日趋严峻。目前,生... 禽网状内皮组织增生病(RE)是危害养禽业的一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染范围不断扩大,已证明野鸟也能够携带该病毒。免疫抑制、混合感染、基因整合使得该病的防控形势日趋严峻。目前,生物制品的污染已经不是该病传播的主要原因,REV已经从早期的种源性病毒演变成了在自然界广泛存在的病原。通过疫苗免疫将该病控制到尽可能低的水平,进而进行REV的种群净化,是防控该病的科学策略。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生病 流行 免疫抑制 混合感染 亚单位疫苗
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野鸭源禽网状内皮组织增生症病毒的分离与鉴定 被引量：5
12
作者 姜莉莉 祁小乐 +9 位作者 高玉龙 邓小芸 柴洪亮 张礼洲 贠炳岭 秦立廷 王永强 高宏雷 王笑梅 华育平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1277-1282,共6页
利用扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列(LTR)的特异性引物作为检测引物,对采集于吉林省某地健康野鸭的脏器样品进行PCR检测。阳性样品经DF1培养增殖,进行病毒的分离,经PCR和间接免疫荧光(IFA)方法鉴定,确定分离到2株REV... 利用扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列(LTR)的特异性引物作为检测引物,对采集于吉林省某地健康野鸭的脏器样品进行PCR检测。阳性样品经DF1培养增殖,进行病毒的分离,经PCR和间接免疫荧光(IFA)方法鉴定,确定分离到2株REV,分别来自于针尾鸭和绿头鸭,将分离病毒分别命名为DBYR1101和DBYR1102。克隆2个病毒株的主要保护性抗原基因gp90,并进行序列分析。结果显示,2个分离株gp90基因氨基酸相似性为99.5%;DBYR1101 gp90基因与REV 3个型的代表株170A、SNV和CSV的氨基酸相似性分别为95.7%、94.2%和98.2%;DBYR1102 gp90基因与REV 3个型的代表株170A、SNV和CSV的氨基酸相似性分别为95.2%、93.7%和97.7%;与中国早期南方分离株HA9901的氨基酸序列相似性分别为94.7%和94.2%;与中国北方分离株氨基酸序列相似性为99.2%~100%。核苷酸遗传进化分析表明,2个野鸟源REV分离株与现有的东北分离株亲缘关系较近,趋于形成1个北方分离群;与SNV株亲缘关系最远;与170A株亲缘关系较远;与美国和中国台湾地区的某些分离株相似性较高。该研究首次自野鸭体内分离到REV,丰富了REV流行病学资料,同时提醒我们重视野生鸟类迁徙在疾病传播中所扮演的角色,为深入研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定基础。 展开更多
关键词 野鸟 禽网状内皮组织增生病病毒 分离 鉴定
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四川部分鸡场禽网状内皮组织增生症病毒感染情况调查 被引量：7
13
作者 任玉鹏 张焕容 +3 位作者 王小楠 索化夷 汤承 岳华 《动物医学进展》 北大核心 2015年第6期162-166,共5页
对四川部分鸡场禽网状内皮组织增生症病毒(REV)感染情况进行调查,为鸡群REV净化和防控提供依据。采用文献报道的PCR方法,分别对来自四川新津、温江、眉山、大邑、崇州和德阳等地6个肉种鸡群共160只外表健康鸡或生长发育不良、具有腺胃... 对四川部分鸡场禽网状内皮组织增生症病毒(REV)感染情况进行调查,为鸡群REV净化和防控提供依据。采用文献报道的PCR方法,分别对来自四川新津、温江、眉山、大邑、崇州和德阳等地6个肉种鸡群共160只外表健康鸡或生长发育不良、具有腺胃炎症状的鸡只样本进行PCR检测,同时将扩增片段克隆测序以确定其正确性。结果表明,6个鸡群REV群体阳性率均为100%(6/6),其中外表健康鸡REV检出率为65.8%(79/120),患腺胃炎病鸡REV检出率为82.5%(33/40);同一只鸡不同组织器官样本的检测结果显示,REV在骨髓和法氏囊中的检出率最高,分别为30%(36/120)和28.3%(34/120),提示骨髓和法氏囊是REV检测的主要靶器官;患腺胃炎鸡的腺胃中REV检出率达25%(10/40),而外表健康鸡腺胃样本REV阳性率仅0.8%(1/120),表明REV是导致鸡腺胃炎的重要病原之一。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 靶器官 腺胃炎 PCR检测
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应用PCR法检测禽源生物制品中禽网状内皮组织增生症病毒 被引量：6
14
作者 庄金秋 毕研丽 +3 位作者 梅建国 王金良 苗立中 沈志强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第7期36-39,共4页
为了快速、准确检测禽源生物制品中的禽网状内皮组织增生症病毒,根据GenBank中登录的REV参考毒株LTR基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计合成了1对特异性引物,其扩增产物长度为314bp,建立了PCR法,其特异性和敏感性较好。经与间接... 为了快速、准确检测禽源生物制品中的禽网状内皮组织增生症病毒,根据GenBank中登录的REV参考毒株LTR基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计合成了1对特异性引物,其扩增产物长度为314bp,建立了PCR法,其特异性和敏感性较好。经与间接免疫荧光法进行同步比较试验,发现结果吻合性较高,且PCR法的结果更为直观,易于判断,样品保存方便,重检也方便,当日即可完成,显示出了较好的可行性。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 PCR 检测
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禽网状内皮组织增生症病毒env蛋白的表达及其在ELISA方法中的应用 被引量：6
15
作者 张文娟 裴宗飞 牛钟相 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1521-1525,共5页
以pb101质粒为模板,PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段。构建原核表达质粒pGEX-4T-3-env后,转化入宿主菌BL21,IPTG诱导表达env蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果表明,表达的重组蛋白具... 以pb101质粒为模板,PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段。构建原核表达质粒pGEX-4T-3-env后,转化入宿主菌BL21,IPTG诱导表达env蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果表明,表达的重组蛋白具有良好的反应原性,相对分子质量约66.4 ku。将表达产物纯化后作为包被抗原,建立了检测REV抗体的间接ELISA方法(Ienv-ELISA)。经应用表明该方法具有良好的特异性、可重复性和敏感性,与IFA及iREV-ELISA结果相比其准确率均超过90%。该方法为检测REV抗体提供了一种快速、准确、简便的技术手段。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 REV env蛋白 原核表达 间接ELISA
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肉鸡感染禽网状内皮组织增殖病的诊断及流行病学分析 被引量：4
16
作者 赵丽青 王树峰 +1 位作者 吕朋 吴延功 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第6期37-39,共3页
禽网状内皮组织增殖病病毒（REV）引起鸡、鸭、鹅、火鸡及其它禽类的网状内皮组织增殖病（RE），它是以急性网状细胞肿瘤形成、矮小综合征、淋巴组织和其它组织的慢性肿瘤形成为特征的一群病理综合征，由于病毒引起的肿瘤以网状组织增... 禽网状内皮组织增殖病病毒（REV）引起鸡、鸭、鹅、火鸡及其它禽类的网状内皮组织增殖病（RE），它是以急性网状细胞肿瘤形成、矮小综合征、淋巴组织和其它组织的慢性肿瘤形成为特征的一群病理综合征，由于病毒引起的肿瘤以网状组织增生为特征，因此称为禽网状内皮组织增殖病。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增殖病病毒 流行病学分析 肉鸡 诊断 感染 肿瘤形成 网状细胞 淋巴组织
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禽网状内皮组织增生病病毒的分离鉴定及其体外复制研究 被引量：5
17
作者 邓小芸 祁小乐 +4 位作者 高玉龙 高宏雷 秦立廷 高立 王笑梅 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第1期23-27,共5页
禽网状内皮组织增生病是一种重要的肿瘤病和免疫抑制病。本研究从黑龙江省某鸡场分离到一株禽网状内皮组织增生病病毒,经间接免疫荧光、PCR和电镜鉴定,将该株病毒命名为HLJR0901。克隆HLJR0901主要保护性抗原的基因gp90,并进行了序列分... 禽网状内皮组织增生病是一种重要的肿瘤病和免疫抑制病。本研究从黑龙江省某鸡场分离到一株禽网状内皮组织增生病病毒,经间接免疫荧光、PCR和电镜鉴定,将该株病毒命名为HLJR0901。克隆HLJR0901主要保护性抗原的基因gp90,并进行了序列分析。HLJR0901与我国早期分离的南方毒株HA9901亲缘关系较远,而与美国和台湾的某些毒株同源性较高。HLJR0901的TCID_(50)为10^(5.2)/mL。通过绘制复制动力学曲线对HLJR0901在CEF细胞上的增殖动态规律进行了研究,发现d6和d7 REV增殖的滴度最高。该研究丰富了REV流行病学调查,为后续研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定基础。本研究不仅丰富了我国REV流行病学资料,也为深入研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定了基础。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生病病毒 鉴定 复制
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禽网状内皮组织增生病病毒囊膜蛋白基因的克隆及其原核表达 被引量：3
18
作者 瞿晓兰 王宏俊 +1 位作者 陈小玲 章振华 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2006年第B10期154-157,共4页
以本实验室保存的REV毒株为模板,采用RT_PCR技术扩增了REV env部分基因,长为939 bp,并进行亚克隆到pMD18_T质粒载体上,连接、转化、鉴定后得到阳性重组质粒pET_env,将目的片段进行序列分析,结果表明,该REV的env基因与已发表的SNV株、中... 以本实验室保存的REV毒株为模板,采用RT_PCR技术扩增了REV env部分基因,长为939 bp,并进行亚克隆到pMD18_T质粒载体上,连接、转化、鉴定后得到阳性重组质粒pET_env,将目的片段进行序列分析,结果表明,该REV的env基因与已发表的SNV株、中国HA9901株以及A株同源性均达94%以上,推导的氨基酸同源性为94%以上。将该基因片段与原核表达载体pET_32a重组,并将重组质粒转化至宿主菌BL21中,用IPTG诱导表达,对表达的蛋白用SDS_PAGE电泳,免疫印迹和薄层凝胶扫描分析,表达产物与理论推理一致;免疫印迹结果证明,表达的env蛋白可被REV阳性血清所识别。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增殖病病毒 ENV基因 克隆 原核表达
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禽网状内皮组织增生症病毒LN1201株的全基因组序列分析及其U3区的独特性 被引量：2
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作者 王一新 栾怀彪 +4 位作者 许书珍 李阳 常爽 崔治中 赵鹏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期855-859,共5页
为比较分析近年来禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的基因组变异情况,本研究对分离自某父母代肉种鸡场患病鸡的REV LN1201株进行PCR扩增和克隆测序,获得了LN1201株的前病毒全基因组序列,并将其与不同参考株基因组进行了比较分析。结果显示... 为比较分析近年来禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的基因组变异情况,本研究对分离自某父母代肉种鸡场患病鸡的REV LN1201株进行PCR扩增和克隆测序,获得了LN1201株的前病毒全基因组序列,并将其与不同参考株基因组进行了比较分析。结果显示,LN1201株前病毒基因组全长8 438 bp,具有典型复制完整型逆转录病毒的基因组结构。与参考株相比,LN1201与国内分离株HLJR0901和疫苗污染病毒株MD-2同源性较高,但其U3区与不同病毒株的同源性相对较低,并且在U3区出现了罕见的14 bp碱基插入,显示该病毒株可能为LTR发生重组的病毒。本研究有助于了解我国鸡群中REV的基因组特性,提示有必要继续关注REV诱发的肿瘤及其基因变异。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 全基因组 序列分析 U3区
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表达禽网状内皮组织增生病病毒ggpp90蛋白的毕赤酵母基因工程菌发酵工艺优化研究 被引量：2
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作者 李凯 刘鹤 +2 位作者 赵宪成 高宏雷 王笑梅 《中国家禽》 北大核心 2015年第9期16-20,共5页
禽网状内皮组织增生病(RE)是危害养禽业的重要传染病,基因工程亚单位疫苗是防治该病的最佳选择。研究对表达REV主要保护性抗原基因gp90的重组毕赤酵母基因工程菌株进行了发酵工艺优化,以实现重组gp90蛋白的高效稳定表达。发酵培养基、... 禽网状内皮组织增生病(RE)是危害养禽业的重要传染病,基因工程亚单位疫苗是防治该病的最佳选择。研究对表达REV主要保护性抗原基因gp90的重组毕赤酵母基因工程菌株进行了发酵工艺优化,以实现重组gp90蛋白的高效稳定表达。发酵培养基、诱导温度和诱导酸碱度的优化结果表明,当诱导温度为28℃,诱导pH6.0,基础盐培养基中CaSO4、MgSO4、K2SO43种硫酸盐的使用量降低至常用浓度的50%时,目的蛋白获得高水平稳定表达,表达的重组蛋白具有良好生物活性和稳定性。本系列优化试验为重组gp90蛋白制备基因工程亚单位疫苗的产业化奠定了基础。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生病 gp90蛋白 毕赤酵母 发酵 工艺优化
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