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猪脾转移因子增强禽白血病病毒A/B亚群抗体阳性鸡群免疫水平的研究 被引量：10
1
作者 徐磊 陈月香 +8 位作者 刘道泉 邱艳红 刘俊斌 刘友霖 林伯全 傅光华 施少华 黄瑜 朱国强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期649-653,共5页
为了解猪脾转移因子(TF)对禽白血病病毒A/B亚群(ALV—A/B)抗体阳性鸡群免疫水平的影响,本研究以新城疫(ND)HI试验和淋巴细胞增殖试验分别检测ND HI抗体效价(log2x)和刺激指数(SI)作为指示参数,采集特佳、罗曼、海兰和伊莎共4个品种蛋鸡... 为了解猪脾转移因子(TF)对禽白血病病毒A/B亚群(ALV—A/B)抗体阳性鸡群免疫水平的影响,本研究以新城疫(ND)HI试验和淋巴细胞增殖试验分别检测ND HI抗体效价(log2x)和刺激指数(SI)作为指示参数,采集特佳、罗曼、海兰和伊莎共4个品种蛋鸡血样,并从中选出各60羽份(ALV-A/B抗体阳性、阴性鸡各半,ALV p27抗原均为阴性),将4个品种的ALV-A/B抗体阳性蛋鸡均分为实验组(联合接种TF 0.02 mL+NDV La Sota疫苗1羽份/羽,TF多肽含量为3.5 mg/mL,核糖含量为72.0μg/mL,脱E受体法效力检验活力为15%)和对照组(单独接种NDV La Sota疫苗1羽份/羽),于接种后21 d采血检测。结果显示,ALV-A/B抗体阳性鸡群(120羽份)的ND HI抗体效价均值(6.1±1.3)与阴性鸡群(120羽份)均值(6.2±1.3)差异不显著,但其SI均值(1.20±0.10)显著低于阴性鸡群(1.35±0.10)(p<0.05);实验组(60羽份)的ND HI抗体效价和SI均值(9.0±1.3,1.73±0.15)显著高于对照组(60羽份)均值(7.8±1.2,1.39±0.16)(p<0.05)。研究结果表明,ALV-A/B抗体阳性与鸡ND HI抗体效价相关性不大,而对SI具有抑制作用;TF具有增强ALV-A/B抗体阳性鸡群免疫水平的作用。 展开更多
关键词 猪脾转移因子 禽白血病病毒a/b亚群 免疫水平 ND HI抗体效价 淋巴细胞转化水平
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不同方法用于检测A亚群和B亚群禽白血病病毒的比较研究
2
作者 赵方钰 崔慧珍 +4 位作者 王一新 常爽 任志浩 崔文平 赵鹏 《山东畜牧兽医》 2025年第11期16-23,共8页
禽白血病病毒(ALV)是种鸡场需要净化根除的重要病原之一,其中A亚群ALV(ALVA)和B亚群ALV(ALV-B)是蛋用型鸡常感染和携带的亚群。出壳雏鸡的检测是实施净化和评估鸡苗洁净度的重要手段。为此,本研究系统比较了6种不同检测试剂盒应用于ALV-... 禽白血病病毒(ALV)是种鸡场需要净化根除的重要病原之一,其中A亚群ALV(ALVA)和B亚群ALV(ALV-B)是蛋用型鸡常感染和携带的亚群。出壳雏鸡的检测是实施净化和评估鸡苗洁净度的重要手段。为此,本研究系统比较了6种不同检测试剂盒应用于ALV-A/B的检测结果。首先,通过卵黄囊接种ALV-A/B于SPF鸡胚,构建雏鸡ALV-A/B携带模型。出壳雏鸡逐一采集胎粪和抗凝血,胎粪滤液和血浆接种DF-1细胞进行病毒分离,维持7 d后收取细胞上清,采用3家公司的p27抗原ELISA试剂盒、磁微粒化学发光检测试剂盒、胶体金检测试纸条、荧光定量PCR检测试剂盒,分别对胎粪样本以及胎粪和血浆的病毒分离细胞上清进行检测,并对各方法的检测结果进行比较分析。结果显示,6种试剂盒对胎粪、胎粪病毒分离上清以及血浆病毒分离上清检测结果的判定总体一致,其中磁微粒化学发光检测阳性样品与阴性样品读值差距大,读数直观易判定。对不同稀释度胎粪的检测结果显示,A公司p27抗原ELISA试剂盒、磁微粒化学发光检测试剂盒和荧光定量PCR更为灵敏,可检出低滴度病原。上述结果显示,不同方法对净化检测的整体判定影响不显著,但针对低滴度样品检测时,不同方法的检出率存在差异,应根据具体情况综合选择。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 A亚群 b亚群 ELISA 磁微粒化学发光技术 胶体金检测试纸条 荧光定量PCR
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tva受体基因起始密码子突变对清远麻鸡感染K亚群禽白血病病毒的影响 被引量：1
3
作者 徐慧娟 邝智祥 +4 位作者 左珂菁 吴承洋 郑泓昊 谢青梅 陈伟国 《华南农业大学学报》 北大核心 2025年第3期351-357,共7页
【目的】探究tva受体基因起始密码子突变tva c.3G>A对清远麻鸡感染K亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup K,ALV-K)的影响。【方法】利用直接测序方法对清远麻鸡不同品系tva c.3G>A突变位点进行基因分型。利用流式细... 【目的】探究tva受体基因起始密码子突变tva c.3G>A对清远麻鸡感染K亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup K,ALV-K)的影响。【方法】利用直接测序方法对清远麻鸡不同品系tva c.3G>A突变位点进行基因分型。利用流式细胞术和RT-qPCR检测RCASBP(K)-EGFP荧光报告病毒和ALV-K GD1601病毒感染清远麻鸡tva c.3G>A突变位点不同基因型鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEFs)的情况。利用RT-qPCR检测ALV-K GD1601病毒感染清远麻鸡tva c.3G>A突变位点不同基因型雏鸡的情况。【结果】tva c.3G>A突变位点的基因分型结果显示,杂合突变基因型tva c.3G/A和纯合突变基因型tva c.3A/A存在于清远麻鸡K、M品系,tva c.3G/A频率分别为0.183、0.133,tva c.3A/A频率分别为0.116、0.033。流式细胞术和RTqPCR检测结果显示,tva c.3G>A突变位点野生型tva c.3G/G CEFs对RCASBP(K)-EGFP和ALV-K GD1601病毒易感,而纯合突变基因型tva c.3A/A CEFs有效抗RCASBP(K)-EGFP和ALV-K GD1601病毒的感染,表明tva c.3G>A突变导致清远麻鸡体外抗ALV-K的感染。ALV-K攻毒试验结果表明,tva c.3G>A突变导致清远麻鸡体内抗ALV-K的感染。【结论】tva c.3G>A突变引起清远麻鸡体外、体内抗ALV-K的感染,该突变位点可作为清远麻鸡ALV-K抗性选育的遗传标记。 展开更多
关键词 清远麻鸡 K亚群禽白血病病毒 tva受体基因 突变 遗传抗性
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腺病毒载体介导编辑chNHE1基因对J亚群禽白血病病毒抗性研究
4
作者 王震 陈运通 +5 位作者 魏天悦 陈洪岩 王旭光 高玉龙 夏长友 孟庆文 《中国家禽》 北大核心 2025年第2期27-33,共7页
鸡Na^(+)/H^(+)离子交换蛋白-1(chNHE1)是J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的细胞受体,是ALV-J感染的细胞靶点。为了探索鸡抗禽白血病的育种目标,试验构建了定点编辑chNHE1基因的CRISPR/Cas9腺病毒系统,并对编辑后细胞抗ALV-J感染能力进行评价... 鸡Na^(+)/H^(+)离子交换蛋白-1(chNHE1)是J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的细胞受体,是ALV-J感染的细胞靶点。为了探索鸡抗禽白血病的育种目标,试验构建了定点编辑chNHE1基因的CRISPR/Cas9腺病毒系统,并对编辑后细胞抗ALV-J感染能力进行评价。结果显示:使用CRISPR/Cas9腺病毒载体介导的ssODNs同源重组方案可以在chNHE1中引入突变,其中36%单克隆细胞株存在W38缺失;T37缺失的细胞对ALV-J感染具备极显著的抗性;W38缺失的细胞对ALV-J感染具有完全抗性,同时具有E35A替换、P36缺失、T37缺失的细胞对ALV-J感染也具有完全抗性。研究表明,CRISPR/Cas9腺病毒载体可以有效地编辑鸡DF-1细胞,W38缺失或E35A替换P36、T37缺失都可以使DF-1对ALV-J感染具有抗性,该方案为培育抗ALV-J感染的基因编辑鸡提供技术储备。 展开更多
关键词 J亚群禽白血病病毒 鸡Na^(+)/H^(+)交换蛋白-1 腺病毒载体 CRISPR/Cas9
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海南省文昌鸡主要养殖地区A、B和J亚群禽白血病的血清学调查和分析
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作者 张艳 张庆玲 +3 位作者 刘海隆 薛琛璐 晁哲 魏立民 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2025年第1期33-37,共5页
为了解海南省文昌鸡A、B和J亚群禽白血病病毒(ALV)的感染情况,于2021年12月—2022年12月分别从海南省文昌鸡主要养殖地区(海口市、文昌市、儋州市、琼海市和澄迈县)的鸡场随机采集鸡血清样品1746份,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行ALV-... 为了解海南省文昌鸡A、B和J亚群禽白血病病毒(ALV)的感染情况,于2021年12月—2022年12月分别从海南省文昌鸡主要养殖地区(海口市、文昌市、儋州市、琼海市和澄迈县)的鸡场随机采集鸡血清样品1746份,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行ALV-J和ALV-A/B抗体检测,并统计分析不同地区、不同生长阶段、不同季节、不同规模鸡场、不同类型鸡血清ALV-J和ALV-A/B的抗体阳性率。结果显示,1746份血清样品中共检出ALV-J抗体阳性样品182份,总抗体阳性率为10.42%(95%CI:8.99%~11.86%);共检出ALV-A/B抗体阳性样品5份,总抗体阳性率为0.29%(95%CI:0.04%~0.54%);5个地区的鸡场均有不同程度的ALV-J感染,其中儋州市ALV-J抗体阳性率最高,达到50.00%(30/60)(95%CI:37.24%~62.76%);ALV-A/B抗体阳性样品仅在海口市检出,抗体阳性率为0.49%(5/1011)(95%CI:0.06%~0.93%);成年鸡ALV-J抗体阳性率显著高于育成鸡和雏鸡(P<0.05),达到14.60%(138/945)(95%CI:12.35%~16.86%);ALV-J在一年四季均有感染,以冬季感染率最高,抗体阳性率为23.12%(86/372)(95%CI:18.83%~27.41%);ALV-A/B抗体阳性样品仅在夏秋两季检出;小型和中型鸡场的ALV-J抗体阳性率明显高于大型鸡场(P<0.05),分别为20.42%(88/431)(95%CI:16.61%~24.23%)和21.48%(29/135)(95%CI:14.52%~28.44%);商品代肉鸡的ALV-J抗体阳性率最高,为20.13%(61/303)(95%CI:15.61%~24.65%)。结果表明,在海南省文昌鸡养殖地区存在ALV-J感染,ALV-A/B仅在海口市零星发生;ALV-J感染在冬季和成年文昌鸡群中较多,以商品代肉鸡感染最为严重,因此,应针对性地加强对海南省文昌鸡ALV-J的防控。 展开更多
关键词 禽白血病 A、b和J亚群 血清学调查 文昌鸡 海南省
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6种不同J亚群禽白血病病毒检测试剂盒的比较
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作者 赵方钰 崔慧珍 +4 位作者 王一新 常爽 任志浩 崔文平 赵鹏 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第4期62-69,共8页
为了比较6种不同J亚群禽白血病病毒(ALV-J)检测试剂盒的检测结果,以更好地实施禽白血病净化和鸡苗洁净度评估。本试验首先将ALV-J参考株以卵黄囊接种感染无特定病原体(SPF)鸡胚构建雏鸡携带ALV-J模型,对出壳雏鸡逐一采集胎粪和抗凝血,... 为了比较6种不同J亚群禽白血病病毒(ALV-J)检测试剂盒的检测结果,以更好地实施禽白血病净化和鸡苗洁净度评估。本试验首先将ALV-J参考株以卵黄囊接种感染无特定病原体(SPF)鸡胚构建雏鸡携带ALV-J模型,对出壳雏鸡逐一采集胎粪和抗凝血,随后分别将胎粪滤液和血浆接种鸡胚成纤维传代(DF-1)细胞进行病毒培养,维持7 d时收取细胞上清,以A、B、C三家公司的ALV p27抗原酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒以及商品化的磁微粒化学发光检测试剂盒、胶体金试纸条和实时荧光定量PCR检测试剂盒分别对胎粪、不同稀释度胎粪样品、胎粪病毒分离细胞上清和血浆病毒分离细胞上清进行检测。结果显示,6种不同试剂盒对胎粪、胎粪病毒分离细胞上清和血浆病毒分离细胞上清的检测结果判定总体一致,其中以磁微粒化学发光检测试剂盒读数判定最为直观,其阳性样品与阴性样品的读值区分明显、易于判断。对不同稀释度胎粪样品的检测结果显示,以A公司ALV p27抗原ELISA试剂盒、磁微粒化学发光检测试剂盒和实时荧光定量PCR检测试剂盒相对灵敏,可检出低滴度病原。结果表明,不同检测方法对ALV-J检测的整体判定差异不显著,但针对低滴度样品检测时不同方法的检出率有差异,需要根据情况选择方法。 展开更多
关键词 J亚群禽白血病病毒(ALV-J) P27抗原 酶联免疫吸附测定(ELISA) 磁微粒化学发光检测试剂盒 胶体金试纸条 实时荧光定量PCR
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K亚群禽白血病病毒的分离鉴定及RPA-LFD快速检测方法的建立与应用
7
作者 喻华英 曾婷婷 +8 位作者 杨宗维 王粲 牙侯勋 万丽君 罗思思 李孟 谢芝勋 于美玲 谢丽基 《中国家禽》 北大核心 2025年第7期47-55,共9页
为满足基层实验室对K亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup K,ALV-K)检测需求,研究建立了一种基于重组酶聚合酶等温扩增-侧流层析试纸条(Recombinase polymerase amplifcation-lateral flow dipstick,RPA-LFD)的ALV-K快速检... 为满足基层实验室对K亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup K,ALV-K)检测需求,研究建立了一种基于重组酶聚合酶等温扩增-侧流层析试纸条(Recombinase polymerase amplifcation-lateral flow dipstick,RPA-LFD)的ALV-K快速检测方法。试验首先通过细胞培养分离鉴定出一株ALV-K,并以此分离株的前病毒DNA作为建立检测方法的模板;其次,针对ALV-K gp85基因保守位置设计引物和探针,优化反应体系的引物浓度、探针浓度和反应温度,在此基础上进行敏感性预试验并以预试验检测限优化反应时间;最后,以优化反应时间进行敏感性试验、稳定性试验及特异性试验。结果显示:建立的ALV-K RPA-LFD反应体系在引物浓度为0.45 mmol/L,探针浓度为0.14 mmol/L,39℃条件下反应21 min,其检测限为4.86×10^(2) copies/反应的ALV-K DNA,并且不与其他常见禽类病原体核酸发生非特异扩增反应;30份临床病料中有14份ALV-K阳性,与单重PCR方法结果一致。研究表明,建立的ALV-K RPA-LFD检测方法具有快速、特异、操作简单,不需要复杂仪器,能够直观地观察结果的优点,适用于临床快速检测ALV-K,特别是实验室条件有限的检测场景。 展开更多
关键词 家禽 K亚群禽白血病病毒 重组酶聚合酶等温扩增-侧流层析试纸条 快速检测
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E3泛素连接酶FBXL8对A亚群禽白血病病毒复制的影响
8
作者 郑诗龄 陈雪阳 +3 位作者 刘晶 方春 梁雄燕 杨玉莹 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1696-1705,共10页
【目的】制备鸡E3泛素连接酶FBXL8多克隆抗体,探究鸡源FBXL8对A亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)在鸡胚成纤维细胞(DF-1)内复制的影响。【方法】以DF-1细胞cDNA为模板,通过PCR扩增FBXL 8基因,构建鸡源FBXL8原... 【目的】制备鸡E3泛素连接酶FBXL8多克隆抗体,探究鸡源FBXL8对A亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)在鸡胚成纤维细胞(DF-1)内复制的影响。【方法】以DF-1细胞cDNA为模板,通过PCR扩增FBXL 8基因,构建鸡源FBXL8原核表达重组质粒pET-28a-FBXL8,将其转化大肠杆菌表达菌株RIL进行诱导表达及纯化,将表达产物His-FBXL8免疫10月龄新西兰大白兔制备多克隆抗体,利用Western blotting和间接ELISA分别检测抗体特异性及效价;针对已公布的FBXL 8基因序列设计过表达引物及靶向FBXL 8基因的干扰序列,构建过表达质粒psi-flag-FBXL8及干扰质粒pLKO.1-FBXL8-shRNA,使用Western blotting检测其表达效果。将构建成功的过表达质粒和干扰质粒转染DF-1细胞,24 h后感染ALV-A,通过半定量PCR、Western blotting分别检测ALV-A的结构蛋白P27、GP85表达水平。【结果】PCR成功扩增出大小为1182 bp的FBXL 8基因片段,并成功构建FBXL8原核表达重组质粒pET-28a-FBXL8,诱导表达的融合蛋白His-FBXL8大小为43 ku。Western blotting和间接ELISA结果显示,制备的FBXL8兔多克隆抗体可特异性识别外源蛋白,且抗体效价为1∶64000。成功构建了FBXL8过表达质粒和干扰质粒,其在DF-1细胞中能够实现对FBXL8的过表达和敲低。半定量PCR和Western blotting检测结果显示,过表达FBXL8可抑制ALV-A复制,而敲低FBXL8则促进其复制。【结论】本研究制备的FBXL8多克隆抗体具有良好特异性及反应性;在DF-1细胞中,FBXL8负向调控ALV-A复制,研究结果为进一步深入探究FBXL8生物学特性提供了重要参考,并为揭示FBXL8抗ALV-A感染分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 FbXL8 A亚群禽白血病病毒(ALV-A) 多克隆抗体 病毒复制
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J、K亚群禽白血病病毒的分离和囊膜蛋白(gp85)基因序列分析 被引量：3
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作者 周钊灿 游广炬 +4 位作者 杨金易 苏晓娜 高丽 王永强 郑世军 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期1-10,共10页
为了解现阶段我国禽白血病病毒(ALV)的流行特征和演化趋势,本试验于2021—2022年从国内某鸡场采集蛋清ALV衣壳蛋白(p27)抗原阳性的鸡血浆,接种鸡胚成纤维细胞(DF-1)分离病毒并进行亚群鉴定;采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增分离株的囊... 为了解现阶段我国禽白血病病毒(ALV)的流行特征和演化趋势,本试验于2021—2022年从国内某鸡场采集蛋清ALV衣壳蛋白(p27)抗原阳性的鸡血浆,接种鸡胚成纤维细胞(DF-1)分离病毒并进行亚群鉴定;采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增分离株的囊膜蛋白(gp85)基因片段,并对其进行测序,将基因序列与ALV不同亚群毒株进行比对和遗传进化分析;选取氨基酸变化差异较大的分离毒株进行间接免疫荧光鉴定。结果显示,共分离到7株ALV毒株(3株J亚群,4株K亚群),ALV-J分离毒株CAU4932、CAU4860和CAU2259的gp 85基因片段长度为918 bp,编码306个氨基酸,分离毒株之间gp 85基因核苷酸同源性为90.5%~95.2%,gp85蛋白氨基酸同源性为95.1%~99.3%;ALV-K分离毒株CAU7049、CAU5006、CAU7176和CAU7168的gp 85基因片段长度为1008 bp,编码336个氨基酸,分离毒株之间gp 85基因核苷酸同源性为89.4%~92.3%,gp85蛋白氨基酸同源性为94.0%~99.7%。gp85蛋白氨基酸序列同源性比对发现,分离株gp85蛋白氨基酸序列均会发生突变,但高变区hr1和hr2所占比例较多,证实了gp85的高变性。在gp85蛋白B细胞抗原表位中存在部分位点的氨基酸突变,可能导致gp85蛋白抗原性发生变化。间接免疫荧光鉴定结果显示,5株分离毒株均可在DF-1细胞内复制并存在可被抗体识别的p27抗原表位。结果表明,本试验分离的7株ALV毒株是国内ALV-J和ALV-K流行毒株的突变株,不仅丰富了ALV基因组库资源,且为后续研究ALV的遗传变异特征和流行趋势等提供参考依据。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 J亚群 K亚群 gp 85基因 序列比较
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禽白血病病毒A亚群和J亚群混合感染引起雏鸡腺胃炎的病理学诊断
10
作者 关昕睿 谢泽鑫 +2 位作者 何慧 刘晓丽 谷长勤 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第12期93-98,共6页
为了明确湖北省某鸡场疑似腺胃炎病鸡发病原因,本试验对病鸡进行解剖,观察各组织病变情况;对腺胃、肝脏、法氏囊、胸腺等组织进行组织病理学检查;对腺胃石蜡切片进行禽白血病病毒(ALV)-p27抗原的免疫组织化学染色;对腺胃匀浆进行病原检... 为了明确湖北省某鸡场疑似腺胃炎病鸡发病原因,本试验对病鸡进行解剖,观察各组织病变情况;对腺胃、肝脏、法氏囊、胸腺等组织进行组织病理学检查;对腺胃石蜡切片进行禽白血病病毒(ALV)-p27抗原的免疫组织化学染色;对腺胃匀浆进行病原检测和ALV-p27抗原检测;将过滤除菌后的腺胃匀浆接种于鸡胚成纤维细胞(DF-1)分离病毒,并进行ALV亚群鉴定。结果显示,剖检可见病鸡的腺胃肿大,腺胃壁增厚,质软,腺胃乳头扁平消失;腺胃黏膜下层不同程度的淋巴细胞浸润,腺小管上皮增生,腺上皮细胞脱落坏死;其他器官不同程度的变性、坏死和炎性细胞浸润。腺管上皮胞质内出现p27抗原阳性信号。腺胃匀浆中扩增出ALV的特异性条带,同时酶联免疫吸附试验(ELISA)检测为p27抗原阳性。DF-1细胞培养物的ALV亚群鉴定为A亚群(ALV-A)和J亚群(ALV-J)共感染。结果表明,该鸡场鸡只是由ALV-A和ALV-J共同引起的腺胃炎。 展开更多
关键词 腺胃炎 病理变化 p27 禽白血病病毒a亚群 禽白血病病毒J亚群
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禽白血病病毒J亚群感染鸡组织中细胞受体chNHE 1的表达分析
11
作者 张莉 于蒙蒙 +7 位作者 王颖 王素艳 许壮壮 刘鹏 陈运通 祁小乐 李留安 高玉龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3631-3639,共9页
旨在研究鸡钠氢交换蛋白1(chicken sodium hydrogen exchanger isoform 1,chNHE1)在不同类型鸡组织内的表达情况,J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus, ALV-J)的组织嗜性及ALV-J感染后组织chNHE1的mRNA变化情况。本研究... 旨在研究鸡钠氢交换蛋白1(chicken sodium hydrogen exchanger isoform 1,chNHE1)在不同类型鸡组织内的表达情况,J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus, ALV-J)的组织嗜性及ALV-J感染后组织chNHE1的mRNA变化情况。本研究利用qPCR技术,检测了商品肉鸡、商品蛋鸡和SPF鸡脏器内的chNHE1转录量,ALV-J感染鸡后各组织的病毒载量及组织chNHE1的转录量的变化。结果显示,chNHE1在3种类型鸡的心、肝、脾、肺、肾、盲肠扁桃体、胸腺和法氏囊中均能检测到,但转录量高低存在较大差异,其中,免疫器官内的chNHE1转录量相对较高;SPF鸡接种ALV-J后,心、脾、肾和盲肠扁桃体中的病毒载量相对较高,而肝、肺、胸腺和法氏囊中的病毒载量相对较低;ALV-J感染后,脾、肾和盲肠扁桃体中的chNHE1转录量明显上调,但心中的转录量与空白对照相比无明显变化。本研究分析了3种类型鸡chNHE1的组织转录特点及ALV-J感染对组织内chNHE1转录的影响,该研究结果为探究受体chNHE1的转录与ALV-J的组织嗜性的关系提供重要的理论依据。 展开更多
关键词 J亚群禽白血病病毒 鸡钠氢交换蛋白1 组织表达 转录量变化
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J亚群禽白血病病毒血液核酸筛查技术的建立 被引量：2
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作者 董欣怡 李锦群 +2 位作者 陈钦玺 廖明 曹伟胜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1115-1126,共12页
为缩短J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)检测周期,进一步加快禽白血病净化进程,本研究结合SYBR GreenⅠqPCR和混样检测,建立了一种适用于低ALV-J流行率场景下的快速筛检ALV-J的血液核酸筛查技术(ALV-J blood q... 为缩短J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)检测周期,进一步加快禽白血病净化进程,本研究结合SYBR GreenⅠqPCR和混样检测,建立了一种适用于低ALV-J流行率场景下的快速筛检ALV-J的血液核酸筛查技术(ALV-J blood quantitative polymerase chain reaction,ALV-J-B-qPCR)。根据GenBank中ALV-J pol及env基因序列,设计ALV-J的特异性引物,并优化反应条件,建立了ALV-J SYBR GreenⅠqPCR检测方法。以ALV-J病毒分离为阳性的鸡抗凝血为实验材料,分别制备抗凝血DNA、血细胞DNA、外周血淋巴细胞DNA、外周血淋巴细胞cDNA和血浆cDNA 5类血液检测模板进行ALV-J的PCR检测,筛选最佳检测模板;进一步比较蒸馏水破裂红细胞法提取混合血液DNA的混样方法,血液混样总体积为200μL的混样方法,血液混样总体积为10μL的混样方法共3种混样方法的检测准确性,筛选最佳混样方法。综合上述qPCR方法、检测模板与混样方法,成功建立了ALV-J-B-qPCR。运用ALV-J-B-qPCR分别进行预期流行率为1%~2%、4%~5%场景下的模拟筛查试验,并与病毒分离法比较。qPCR方法的特异性、灵敏性和重复性试验显示,该方法仅特异性扩增ALV-J,对标准质粒的最低检测限度为1×10^(2)copies·μL^(-1),批内与批间变异系数均<1%。对90份临床送检血液样品的检测结果显示,该qPCR方法对ALV-J的检出率(15.6%)高于p27抗原ELISA和普通PCR的检出率(12.2%)。检测模板筛选试验中,抗凝血DNA最符合检测准确度高、操作复杂度和成本低的要求,为最佳检测模板。混样方法摸索试验中,混样总体积为10μL(混样规模<12份)的混样方法检测准确性最高,为最佳混样方法。在样本数为400份,预期流行率为4%~5%场景的模拟筛查中,ALV-J-B-qPCR检出率为6.25%,比病毒分离法高2.00%;在样本数为400份,预期流行率为1%~2%场景的模拟筛查中,ALV-J-B-qPCR检出率为2.25%,比病毒分离法高0.75%。本研究建立的ALV-J-B-qPCR技术具有灵敏性高、检测快速和节约成本的优势,为种禽场加快ALV净化进程提供了新的思路和方法。 展开更多
关键词 J亚群禽白血病病毒 实时荧光定量PCR 混样检测 筛查技术
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与鸡内皮血管瘤病例相关的禽白血病病毒K亚群分离及其gp85基因演化分析
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作者 梁灿新 郑小雪 +3 位作者 舒雪利 周婉怡 廖明 曹伟胜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1127-1136,共10页
本研究在华南地区某规模化种禽场调查中发现其部分花鸡品系头部鸡冠下缘及眼睑上缘部位出现白色、质地坚硬且形状不规则的肿块,为了解患病鸡的发病特征及致病因子而开展了实验室诊断及相关病原研究。结果表明该规模化养殖场主要发病鸡... 本研究在华南地区某规模化种禽场调查中发现其部分花鸡品系头部鸡冠下缘及眼睑上缘部位出现白色、质地坚硬且形状不规则的肿块,为了解患病鸡的发病特征及致病因子而开展了实验室诊断及相关病原研究。结果表明该规模化养殖场主要发病鸡群为父母代花鸡,发病率约为2%,剖检无其他肉眼表观病变,病理组织学诊断为内皮血管瘤。RT-PCR检测肿瘤组织表明为K亚群禽白血病病毒(ALV-K)感染,无其他禽肿瘤性病毒感染。对患病鸡的血浆样品(32份)、肿瘤组织匀浆(6份)及脑组织匀浆(6份)进行病毒的分离鉴定,成功从脑组织样品中分离到4个ALV-K毒株(GXJL01~GXJL04)。使用特异性引物扩增GXJL01~GXJL04的env基因并测序,在与华南地区其他5个规模化种禽场中分离获得的7个ALV-K流行株的gp85基因的遗传演化分析中表明,GXJL01~GXJL04与日本的Km5844、Sp53等神经胶质瘤毒株(fowl glioma-inducing virus,FGV)及具有神经组织嗜性的ALV-K毒株JS15SG01同一进化分支上,与本研究其他7个ALV-K分离株的遗传进化关系较远。同时在针对ALV-K的gp85蛋白氨基酸位点突变分析中发现,GXJL01~GXJL04存在多个与FGV和JS15SG01参考株相似的氨基酸位点突变。本研究首次把地方黄羽鸡品种花鸡头部的肿块诊断为内皮血管瘤,且ALV-K为内皮血管瘤的主要相关病原,分离株GXJL01~GXJL04区别于现行华南地区ALV-K流行株且与FGV、JS15SG01等神经组织嗜性的毒株高度同源。 展开更多
关键词 黄羽肉鸡 鸡内皮血管瘤 K亚群禽白血病病毒 遗传进化分析
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J亚群禽白血病Hrb-1分离株env基因克隆及gp85杆状病毒表达载体的构建 被引量：4
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作者 付朝阳 宋素泉 +6 位作者 高宏雷 王笑梅 郭艳 王英 张厚双 尹训南 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期81-85,共5页
自哈尔滨某送检患病鸡群中分离出一株病毒,经RT＿PCR检测、SPF鸡胚成纤维细胞增殖后,获取其前病毒DNA,采用依据原型毒株HPRS＿103cDNA序列设计并合成的一对引物,PCR扩增病毒的囊膜基因,连接pMD18＿T载体并转化大肠杆菌JM109,培养后提取... 自哈尔滨某送检患病鸡群中分离出一株病毒,经RT＿PCR检测、SPF鸡胚成纤维细胞增殖后,获取其前病毒DNA,采用依据原型毒株HPRS＿103cDNA序列设计并合成的一对引物,PCR扩增病毒的囊膜基因,连接pMD18＿T载体并转化大肠杆菌JM109,培养后提取质粒分别用HindIII,BamHI进行单酶切和双酶切鉴定,得到了阳性重组质粒pMD18＿T＿Hrb＿1/env,对其进行PstI酶切,回收包含J亚群禽白血病病毒株Hrb＿1gp85基因的997bp片段,应用BactoBac杆状病毒表达系统,将外源片段与线性化的杆状病毒载体pFastBacHTA进行连接,获得重组载体pFASTBacHTA/gp85,将该重组载体转化DH10Bac感受态细菌,在体内进行重组,经抗性和蓝白斑筛选,获得了杆状病毒重组载体Bacmid/gp85,为表达gp85并建立适于国内应用的ELISA诊断方法奠定了基础。 展开更多
关键词 J亚群禽白血病病毒gp85基因 克隆 载体构建 杆状病毒表达系统
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禽白血病病毒B、E和J亚群基因芯片检测方法的建立 被引量：6
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作者 张悦 徐福洲 +3 位作者 陈小玲 苏霞 王家鑫 杨兵 《中国动物检疫》 CAS 2012年第6期37-42,共6页
目的基于多重PCR技术,建立禽白血病病毒(ALV)的B、E、J亚群的基因芯片分型和检测方法。方法根据NCBI已收录的ALV三个亚群的参考毒株cDNA序列,在各亚群特异性基因突变区两端选取其保守区域,设计合成三个亚群的通用上游引物1条,以及B、E... 目的基于多重PCR技术,建立禽白血病病毒(ALV)的B、E、J亚群的基因芯片分型和检测方法。方法根据NCBI已收录的ALV三个亚群的参考毒株cDNA序列,在各亚群特异性基因突变区两端选取其保守区域,设计合成三个亚群的通用上游引物1条,以及B、E亚群的通用下游引物和J亚群下游引物各1条,将上述引物用Cy3标记,建立多重PCR体系;参考靶序列内部的三个亚群各自的保守区域,选择亚群之间基因突变位点多的区域,设计合成5条寡核苷酸探针,制作寡核苷酸探针基因检测芯片;以寄主细胞DF-1中提取传代ALV的cDNA,以及合成NCBI收录的各亚群参考毒株的cDNA序列作为检测模板;利用Cy3标记的PCR扩增产物,与基因芯片进行杂交反应,扫描结果。结果芯片准确检测并分型三个亚群的参考毒株,其检测灵敏度能够达到102个基因拷贝,且与禽类常见的四种病毒均无交叉反应。结论本研究结果证明,基因芯片技术是一种ALV的B、E和J亚群进行检测和分型的有效方法,且具有较高的特异性和灵敏度,为今后在临床应用中快速鉴别诊断ALV等免疫抑制病提供可行性。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 亚群 基因芯片 多重PCR
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一株A和B亚群禽白血病病毒特异性单克隆抗体的制备及其特性 被引量：1
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作者 邱玉玉 李晓霞 +3 位作者 武专昌 崔治中 孙淑红 张显忠 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期639-641,647,共4页
目的:制备A和B亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)特异性单克隆抗体。方法:用ALV-A-SDAU09C1株的env-gp85基因的PCR产物构建重组表达性质粒pET32a-SDAU09C1-gp85,经IPTG诱导后,表达分子量为53 kD的ALV-A囊膜gp85蛋白与GST的融... 目的:制备A和B亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)特异性单克隆抗体。方法:用ALV-A-SDAU09C1株的env-gp85基因的PCR产物构建重组表达性质粒pET32a-SDAU09C1-gp85,经IPTG诱导后,表达分子量为53 kD的ALV-A囊膜gp85蛋白与GST的融合蛋白,将表达产物免疫BALB/c小鼠,取其脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,筛选杂交瘤细胞株。结果:获得了1株(A6D1株)能与A和B亚群ALV发生反应但不与J亚群ALV反应的杂交瘤细胞株。Western blot试验结果表明,单克隆抗体识别的A和B亚群ALV囊膜糖蛋白的分子量为53 kD。在IFA中,这株单克隆抗体可以与所试验的3株ALV-A和1株ALV-B毒株反应,而与4株ALV-J亚群的毒株不反应。结论:A6D1株单克隆抗体可以用于A和B亚群ALV感染的诊断和流行病学调查,弥补了目前只有J亚群ALV特异性单克隆抗体可用的不足。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 Ab亚群 囊膜蛋白 单克隆抗体
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HB2015株A亚群禽白血病病毒的蛋鸡实验性感染研究 被引量：1
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作者 梁雄燕 王爽 +5 位作者 李长风 李晓娟 王莹 杨玉莹 方守国 顾玉芳 《中国家禽》 北大核心 2017年第8期24-27,共4页
通过鸡胚静脉接种,对分离于湖北某蛋鸡群的A亚群禽白血病病毒(ALV-A)HB2015株进行实验性感染研究。结果:试验组鸡胚孵出14只雏鸡,对照组孵出3只;ALV-A特异性PCR结果显示:试验组孵出的小鸡4周龄时有11只(11/14)的血液样本呈ALV-A核酸阳... 通过鸡胚静脉接种,对分离于湖北某蛋鸡群的A亚群禽白血病病毒(ALV-A)HB2015株进行实验性感染研究。结果:试验组鸡胚孵出14只雏鸡,对照组孵出3只;ALV-A特异性PCR结果显示:试验组孵出的小鸡4周龄时有11只(11/14)的血液样本呈ALV-A核酸阳性,3只(3/11)呈ALV-A核酸阴性,对照组则全部为ALV-A核酸阴性;16周龄试验组鸡血涂片中可见少量髓细胞性瘤细胞,剖检可见内脏器官有不同病变结节;病理组织学观察显示,内脏组织中可见原淋巴细胞、髓细胞性瘤细胞、成红细胞等多种瘤细胞增生;感染鸡的肝组织中可分离到病毒,表明ALV-A HB2015株通过鸡胚静脉接种可诱发蛋鸡多种类型瘤细胞增生。 展开更多
关键词 A亚群禽白血病病毒 实验性感染 蛋鸡 瘤细胞
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B亚群禽白血病病毒SDAU09C2株的TCID_(50)与p27抗原之间的相关性研究 被引量：1
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作者 李薛 董宣 +2 位作者 赵鹏 牛星 崔治中 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第2期14-17,共4页
为了研究B亚群禽白血病病毒(ALV-B)的半数细胞培养物感染量(TCID50)与p27抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)的S/P值之间的相关性,本试验将ALV-B SDAU09C2株接种鸡胚成纤维细胞(CEF细胞),换维持液后连续10d取样,检测10d的TCID50值与p27抗原... 为了研究B亚群禽白血病病毒(ALV-B)的半数细胞培养物感染量(TCID50)与p27抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)的S/P值之间的相关性,本试验将ALV-B SDAU09C2株接种鸡胚成纤维细胞(CEF细胞),换维持液后连续10d取样,检测10d的TCID50值与p27抗原的S/P值之间的相关性;同时,将该毒株在DF-1细胞系上传代至20代,取其中的第1、5、10、15和20代分别进行TCID50滴度的测定和p27抗原检测。结果表明,在CEF细胞上接种的ALV-B SDAU09C2株连续10d的TCID50值与p27抗原之间存在显著的正相关(r=0.94002;P<0.0001);在DF-1细胞系上传的不同代数之间也呈显著正相关(r=0.96449;P=0.0080)。由此可推测ALV-B的TCID50与p27抗原呈显著正相关,可以用ELISA法测得的p27抗原的S/P值来估测病毒的TCID50值。 展开更多
关键词 b亚群禽白血病病毒 TCID50 P27抗原 Pearson相关
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崇仁麻鸡源禽白血病病毒的分离鉴定及其gp85基因遗传进化分析
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作者 何琴 冉盛菊 +4 位作者 陈薄帆 江灵枫 冯海 苏芝乾 温贵兰 《贵州畜牧兽医》 2025年第5期78-80,共3页
为了解贵阳市某养殖场崇仁麻鸡禽白血病病毒(ALV)的感染情况,对疑似感染的100只雏鸡进行ELISA抗原检测、PCR检测及ALV gp85基因测序分析,并构建遗传进化树。结果:100只雏鸡中有3只存在ALV感染,阳性率为3%,分型鉴定属于ALV-J亚群;gp85基... 为了解贵阳市某养殖场崇仁麻鸡禽白血病病毒(ALV)的感染情况,对疑似感染的100只雏鸡进行ELISA抗原检测、PCR检测及ALV gp85基因测序分析,并构建遗传进化树。结果:100只雏鸡中有3只存在ALV感染,阳性率为3%,分型鉴定属于ALV-J亚群;gp85基因序列与ALV-J亚群参考株的同源性为91.6%~94.3%,与其他亚群参考株的同源性<40%;遗传进化分析显示,分离毒株(GZ2024J株)属于ALV-J分支,与国内外ALV-J毒株亲缘关系较近,但与其他亚群(A、B、C、D、E、K)亲缘关系较远。结论:该场存在禽白血病病毒J亚群(ALV-J)感染。 展开更多
关键词 崇仁麻鸡 禽白血病病毒 ALV-J亚群 GP85基因
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B亚群禽白血病病毒灭活疫苗的免疫效力分析
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作者 李薛 李卫华 +3 位作者 赵鹏 崔治中 王鑫 董宣 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1788-1794,共7页
本研究旨在制备B亚群禽白血病的灭活疫苗,探索能否通过种鸡群疫苗免疫减少带毒率,从而加快禽白血病净化。将B亚群禽白血病病毒SDAU09C2株在鸡胚成纤维细胞(CEF)上连续培养复制大量病毒,制备灭活疫苗,用该疫苗免疫9只产蛋祖代鸡,同时设... 本研究旨在制备B亚群禽白血病的灭活疫苗,探索能否通过种鸡群疫苗免疫减少带毒率,从而加快禽白血病净化。将B亚群禽白血病病毒SDAU09C2株在鸡胚成纤维细胞(CEF)上连续培养复制大量病毒,制备灭活疫苗,用该疫苗免疫9只产蛋祖代鸡,同时设未免疫种鸡对照。收取种蛋孵化,对孵出雏鸡接种SDAU09C2,检测和比较有和无母源抗体鸡的病毒血症、泄殖腔p27、抗体动态。该疫苗在所有经免疫的成年鸡(9/9)诱发抗体反应,在三免后第3周产生的抗体水平最高,ELISA检测S/P值在1.69～1.89(阳性临界值为0.4),且维持4周以上后仍未下降。经过疫苗免疫过的母鸡在其抗体水平最高的前后1周内收集种蛋进行孵化,其雏鸡含母源抗体阳性率的在70%(12/17)左右。雏鸡1日龄攻毒,含母源抗体的12只雏鸡中只有4只检出病毒血症,且持续时间都很短。所有9只不含母源抗体的雏鸡在攻毒后4～8周内全部出现病毒血症,而且在观察期内呈现持续性病毒血症。该疫苗能使全部产蛋祖代鸡产生较高水平的特异性抗体,为雏鸡提供母源抗体,有效预防或减缓ALV-B的早期感染。 展开更多
关键词 b亚群禽白血病病毒 细胞灭活疫苗 免疫保护
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