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禽流感病毒H5N6亚型快速荧光免疫层析检测方法的建立 被引量：1
1
作者 李辉 刘莉 +8 位作者 周义生 张志红 司倩倩 王汝霞 邓志強 范义兵 靳亮 孙洁 杨春华 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第3期243-248,283,共7页
目的H5N6亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)兼具高致病性与跨物种传播风险的特征,对家禽养殖业和公共卫生安全构成严重威胁,本研究建立快速、敏感、特异的H5N6禽流感检测技术,为有效防控H5N6禽流感的传播提供依据。方法应用杂... 目的H5N6亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)兼具高致病性与跨物种传播风险的特征,对家禽养殖业和公共卫生安全构成严重威胁,本研究建立快速、敏感、特异的H5N6禽流感检测技术,为有效防控H5N6禽流感的传播提供依据。方法应用杂交瘤细胞筛选技术制备针对禽流感病毒H5N6亚型神经氨酸酶N6蛋白的特异性单克隆抗体,用经过羧基功能化的荧光量子点将该抗体与此前已制备好的针对血凝素H5蛋白的特异性抗体进行偶联并标记,基于双抗夹心免疫层析的原理建立禽流感病毒H5N6亚型快速荧光免疫层析检测方法。结果试验显示所建立的禽流感病毒H5N6亚型快速荧光免疫层析检测方法对血凝素H5亚型重组蛋白的检测灵敏度达到1 ng/mL,对神经氨酸酶N6亚型重组蛋白的检测灵敏度达到0.1 ng/mL;与流感其他亚型和新城疫(ND)、传染性支气管炎(IB)、传染性喉气管炎(ILT)等病原体没有交叉反应,具有良好的特异性;能够有效识别高致病禽流感病毒H5亚型,并能直接区分H5N6亚型,准确性良好。结论本研究建立的针对禽流感病毒H5N6亚型荧光量子点免疫层析分型检测方法满足禽流感病毒H5N6亚型检测灵敏、特异、准确的要求,可进一步用于对禽流感病毒H5亚型和H5N6的快速检测。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H5N6 荧光量子点 快速检测
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福建湿地野鸟源H9N2亚型禽流感病毒HA的分子特征
2
作者 陈珍 朱春华 +5 位作者 陈翠腾 刘斌琼 蔡国漳 万春和 黄瑜 施少华 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第3期227-234,共8页
目的了解福建主要湿地野鸟源H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)HA的分子特征。方法对福建闽江口、九龙江、三都澳、兴化湾和泉州湾湿地野鸟粪便样品中分离的5株H9N2亚型AIV进行序列测定与分析。结果5株分离株之间的HA基因... 目的了解福建主要湿地野鸟源H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)HA的分子特征。方法对福建闽江口、九龙江、三都澳、兴化湾和泉州湾湿地野鸟粪便样品中分离的5株H9N2亚型AIV进行序列测定与分析。结果5株分离株之间的HA基因核苷酸同源率为89.8%~99.4%,均属于h9.4.2.5c进化分支;HA蛋白裂解位点基序均为PSRSSR↓GLF,符合低致病性AIV的分子特征;HA蛋白存在8个相同的潜在糖基化位点,其中第313位的糖基化位点位于HA蛋白裂解位点附近;位于HA受体结合位点第226位氨基酸均为亮氨酸,具有结合哺乳动物唾液酸α-2,6受体的特征。结论5株野鸟源H9N2亚型AIV均为低致病性AIV,具有感染人的特征。 展开更多
关键词 福建湿地 野鸟源 H9N2亚型 禽流感病毒 HA基因
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2020—2024年广西H3N2亚型禽流感病毒HA和NA基因分子特征分析
3
作者 尹彦文 熊陈勇 +14 位作者 韦伟 施开创 郑敏 崔鹏飞 韦显凯 李致远 刘惠心 冯淑萍 卢春花 屈素洁 陆文俊 李雪珍 王睿敏 邓国华 欧长波 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第9期4358-4367,共10页
【目的】探究H3N2亚型禽流感病毒(AIV)广西毒株分子遗传进化特征。【方法】采集2020—2024年广西各地的家禽咽拭子和肛拭子病料,采用实时荧光定量RT-PCR方法鉴别检测H3N2亚型AIV,选取部分阳性样本经尿囊腔接种SPF鸡胚,收集鸡胚尿囊液,... 【目的】探究H3N2亚型禽流感病毒(AIV)广西毒株分子遗传进化特征。【方法】采集2020—2024年广西各地的家禽咽拭子和肛拭子病料,采用实时荧光定量RT-PCR方法鉴别检测H3N2亚型AIV,选取部分阳性样本经尿囊腔接种SPF鸡胚,收集鸡胚尿囊液,提取核酸后通过PCR扩增血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因并测序,进行序列相似性、系统发育、氨基酸变异位点及遗传进化速率分析。【结果】共获得43株HA和NA基因序列,编码区大小为1 701和1 410 bp。相似性比对分析显示,本研究获得的HA和NA基因之间核苷酸序列相似性分别为86.0%~99.9%和89.7%~99.9%,与GenBank中禽源、人源、猪源和犬源核苷酸序列相似性分别为78.4%~99.7%和78.1%~99.1%。广西H3N2亚型AIV毒株HA和NA基因属于欧亚谱系,与禽源亲缘关系最近,与人源/猪源最远。HA蛋白在第18—20、22—24、38—40、54—56、61—63、181—183、301—303和499—501位氨基酸处出现糖基化,NA蛋白在第61—63、69—71、86—88、143—145、146—148、200—202、234—236、313—315和402—404位氨基酸处出现糖基化,部分氨基酸位点发生变异;HA蛋白裂解位点为340PEKQTR↓GLF348和340PERQTR↓GLF348。遗传进化速率估算结果显示,HA和NA基因遗传进化速率分别为3.26×10^(-3)和3.67×10^(-3)替换/(位点·年),HA基因种群规模在不同时间段表现出不同的动态进化特征。【结论】H3N2亚型AIV广西流行毒株与同种流行毒株亲缘性较近,部分HA和NA蛋白发生特有氨基酸突变,不同种属毒株进化趋势不一致,具有遗传多样性特征。试验结果为防控H3N2亚型AIV提供基础数据。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H3N2亚型 遗传进化 相似性
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H9N2亚型禽流感病毒双重TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用
4
作者 刘莉 张贺楠 +4 位作者 莫一群 徐亚亚 金丁丁 齐岩 胡增垒 《中国家禽》 北大核心 2025年第11期154-160,共7页
为建立一种快速、灵敏且特异的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的双重荧光定量RT-PCR检测方法,试验根据H9N2 AIV的HA基因和NA基因保守区域设计特异性引物及TaqMan探针,通过优化反应体系及条件,建立H9N2亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR检测方法,进... 为建立一种快速、灵敏且特异的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的双重荧光定量RT-PCR检测方法,试验根据H9N2 AIV的HA基因和NA基因保守区域设计特异性引物及TaqMan探针,通过优化反应体系及条件,建立H9N2亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR检测方法,进一步对该方法的灵敏度、特异性、重复性进行评估,并将建立的方法用于临床样品的检测,与H9亚型AIV荧光RT-PCR检测试剂盒进行比较。结果显示:该方法与其他亚型AIV、新城疫病毒、传染性喉气管炎病毒、禽白血病病毒、传染性法氏囊病病毒和传染性支气管炎病毒无交叉反应,检测限为0.1 copies/μL,批内和批间变异系数均小于5%,临床样本检测阳性率(24.3%)高于H9亚型AIV荧光RT-PCR检测试剂盒(18.9%)。研究表明,建立的H9N2 AIV双重TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法特异性强,敏感性较高,能够应用于H9N2 AIV的快速检测。 展开更多
关键词 H9N2亚型禽流感病毒 TAQMAN探针 荧光定量RT-PCR HA基因 NA基因
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对10株鸭源H3N6亚型禽流感病毒的遗传分析
5
作者 黄建龙 张朝阳 +4 位作者 刘华雷 蒋文明 彭志 邓国强 雷勇 《中国动物检疫》 2025年第11期7-11,共5页
为了解湖南省H3N6亚型禽流感病毒的分子特征,对2023年从活禽市场鸭只中分离到的10株H3N6亚型禽流感毒的HA和NA基因进行序列测定和遗传分析。结果显示:分离的10株鸭源H3N6亚型禽流感病毒HA裂解位点均为PEKQTR/GLF,具有低致病性禽流感病... 为了解湖南省H3N6亚型禽流感病毒的分子特征,对2023年从活禽市场鸭只中分离到的10株H3N6亚型禽流感毒的HA和NA基因进行序列测定和遗传分析。结果显示:分离的10株鸭源H3N6亚型禽流感病毒HA裂解位点均为PEKQTR/GLF,具有低致病性禽流感病毒的典型分子特征,均有6个潜在的糖基化位点;从HA和NA基因遗传进化关系来看,10株鸭源H3N6亚型禽流感病毒分别处在3个和4个不同的分支,提示H3N6亚型禽流感病毒的HA和NA基因具有多个来源,并且部分毒株可能发生了基因重组。建议持续强化H3亚型禽流感病毒监测,关注其在病毒重组等生态多样性中的作用。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H3N6 基因重组 遗传分析
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禽流感病毒通过活禽调运传入浙江省某活禽批发市场的定量风险评估
6
作者 吴雪军 常晓静 +2 位作者 郑思思 周彩琴 张传亮 《中国动物检疫》 2025年第3期34-38,76,共6页
为评估禽流感病毒(AIV)通过活禽调运传入浙江省某活禽批发市场的风险,根据该活禽批发市场的调运数据和AIV监测数据,采用情景树分析法绘制了传入风险评估路径图,通过@Risk软件进行模拟计算,对AIV的传入风险进行了定量分析。结果显示:通... 为评估禽流感病毒(AIV)通过活禽调运传入浙江省某活禽批发市场的风险,根据该活禽批发市场的调运数据和AIV监测数据,采用情景树分析法绘制了传入风险评估路径图,通过@Risk软件进行模拟计算,对AIV的传入风险进行了定量分析。结果显示:通过省外调运1只活禽传入AIV的概率为5.33×10^(-4)(95%CI:2.60×10^(-4)~9.90×10^(-4)),平均调入1批次活禽传入AIV的概率为0.448(95%CI:0.247~0.649);敏感性分析结果显示,引进1只来自感染场的活鸭对传入风险影响最大。建议从源头做好活禽调运监管,创建规范化动物检查站,加强交易市场管理,对消费者加强宣传教育等降低AIV传入风险。 展开更多
关键词 禽流感病毒 活禽 调运 定量风险评估 浙江省
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惠阳区涉禽场所外环境禽流感病毒监测结果分析
7
作者 徐伟兵 李雪艳 冉媛 《中国动物保健》 2025年第7期171-173,共3页
本文研究惠阳区涉禽外环境中禽流感病毒的污染情形,为降低人感染动物源性流感的风险水平提供指导与参考。本研究借助实时荧光RT-PCR手段对不同的采样部位开展甲型流感病毒核酸检测工作,总共采集样本240份,其中阳性样本64份,阳性率为26.... 本文研究惠阳区涉禽外环境中禽流感病毒的污染情形,为降低人感染动物源性流感的风险水平提供指导与参考。本研究借助实时荧光RT-PCR手段对不同的采样部位开展甲型流感病毒核酸检测工作,总共采集样本240份,其中阳性样本64份,阳性率为26.67%。惠阳区涉禽场所外环境存在禽流感病毒现象,需加大监测与风险评估力度,合理降低外环境里的病毒水平,实现人感染动物源性流感风险的有效控制的目标。 展开更多
关键词 涉禽场所 外环境 禽流感病毒 监测
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H9亚型禽流感病毒mRNA疫苗的构建与效力评价 被引量：2
8
作者 黄程 杨志远 +7 位作者 林健 程慧敏 王米 毛惠琳 王国良 刘贵明 赵际成 刘月焕 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1843-1853,共11页
H9亚型禽流感(avian influenza, AI)对养鸡业尤其肉鸡产业危害巨大,灭活疫苗不能有效阻止病毒在鸡上呼吸道感染复制,有必要研究H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)血凝素(hemagglutinin, HA)基因的mRNA疫苗。参考GenBank 202... H9亚型禽流感(avian influenza, AI)对养鸡业尤其肉鸡产业危害巨大,灭活疫苗不能有效阻止病毒在鸡上呼吸道感染复制,有必要研究H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)血凝素(hemagglutinin, HA)基因的mRNA疫苗。参考GenBank 2022年公开的HA基因序列,优化HA全长(HA)和HA胞外区(HAe)序列,连接至pUC57载体构建体外转录模板,经体外转录、加帽、纯化,采用脂质纳米颗粒(Lipid nanoparticles, LNP)包封mRNA,并转染人胚肾细胞(293T)、仓鼠肾细胞(BHK-21)和鸡胚成纤维细胞(DF-1),Western blot检测HA表达。20只3周龄SPF鸡,随机分成4组,每组5只,分别经腿部肌肉接种0.3 mL PBS、25μg HA mRNA LNP、25μg HAe mRNA LNP和0.3 mL H9亚型AI灭活疫苗。免疫后4周采集血清,检测血凝抑制(hemagglutination inhibition, HI)抗体,每只鸡滴鼻点眼H9N2亚型AIV 0.2 mL(含10^(6.0)EID_(50)),攻毒后5日采集咽喉拭子和外周血单个核细胞,分别检测病毒分离情况及IFN-γ、IL-4的表达水平,观察气管组织病理学变化。Western blot结果显示两种mRNA HA蛋白均成功表达,经LNP包封后可有效在细胞内完成翻译。HA mRNA LNP和HAe mRNA LNP免疫SPF鸡后HI抗体效价(log2)平均值分别为5.6和3。H9亚型AI灭活疫苗免疫后HI抗体效价(log2)平均值为9.8,极显著高于2个mRNA LNP组(P<0.01)。非免疫对照、HA mRNA LNP、HAe mRNA LNP和H9亚型AI灭活疫苗组病毒分离结果分别为5/5、1/5、4/5和2/5。HA mRNA LNP组IFN-γ表达水平显著高于其他组(P<0.05),HAe mRNA LNP组IL-4表达水平显著低于其他组(P<0.05)。气管组织病理学变化结果表明HA mRNA LNP和H9亚型AI灭活疫苗免疫可有效减轻H9亚型AIV对SPF鸡气管上皮细胞的损伤。构建的H9亚型AIV HA全长mRNA疫苗免疫鸡能提供有效保护,而HA胞外区mRNA疫苗不能提供有效的免疫保护。 展开更多
关键词 H9亚型 禽流感病毒 mRNA疫苗 LNP 免疫保护
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H3、H4、H6和H9亚型禽流感病毒多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：1
9
作者 龙凤 熊陈勇 +11 位作者 施开创 郑敏 林昌华 林宝江 杜忠 韦显凯 冯淑萍 屈素洁 陆文俊 李剑锋 周明旭 尹彦文 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第1期31-38,共8页
为同时鉴别检测H3、H4、H6和H9亚型禽流感病毒(AIV),本研究根据上述4种亚型AIV HA基因的保守区,采用primer6.0设计4对特异性引物和TaqMan探针,经PCR扩增上述4种亚型AIVHA基因后,分别克隆至pMD18-T载体中构建重组质粒p-H3、p-H4、p-H6和p... 为同时鉴别检测H3、H4、H6和H9亚型禽流感病毒(AIV),本研究根据上述4种亚型AIV HA基因的保守区,采用primer6.0设计4对特异性引物和TaqMan探针,经PCR扩增上述4种亚型AIVHA基因后,分别克隆至pMD18-T载体中构建重组质粒p-H3、p-H4、p-H6和p-H9,并均经PCR与测序鉴定正确后作为标准品。通过优化各反应条件,初步建立了检测H3、H4、H6和H9亚型AIV的多重TaqMan荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)方法。分别以H1、H3、H4、H5、H6、H7、H9亚型AIV、传染性喉气管炎病毒(ILTV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鸭圆环病毒(DuCV)、番鸭细小病毒(MDPV)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)和新城疫病毒(NDV)的RNA或者DNA作为模板,采用本研究建立的多重RT-qPCR检测,评估该方法的特异性;将4个重组质粒标准品等体积混合物10倍倍比稀释后作为模板,采用本研究建立的多重RT-qPCR检测,评估该方法的敏感性;选择3个浓度的重组质粒标准品等体积混合物作为模板,采用本研究建立的多重RT-qPCR分别进行批内和批间重复性试验,评估该方法的重复性。结果显示,该方法仅H3、H4、H6和H9亚型AIV出现扩增曲线,其他相关禽病病原均为阴性,特异性较强;该方法对H3、H4、H6和H9亚型AIV的检测限均为1.0×101拷贝/µL,敏感性较高;批内和批间重复性试验的变异系数为0.06%~1.09%,重复性较好。利用该方法检测来自广西不同地区的3360份临床家禽咽喉、泄殖腔拭子样品,结果显示H3、H4、H6和H9亚型AIV的检出率分别为4.08%(137/3360)、0.21%(7/3360)、1.13%(38/3360)和3.51%(118/3360),与各亚型AIV单一RT-qPCR商品化试剂盒的检测结果均一致,符合率达100%。表明本研究建立的多重RT-qPCR准确性较好,可以用于临床各类样品的检测。本研究建立了一种同时鉴别检测H3、H4、H6和H9亚型AIV的多重RT-qPCR方法,为AIV基因分型和流行病学调查提供便捷的技术手段。 展开更多
关键词 禽流感病毒 荧光定量RT-PCR TAQMAN
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4株无血凝抑制活性的抗H6禽流感病毒HA单克隆抗体生物学特性研究
10
作者 曹旭东 桑建君 +9 位作者 孟宪臣 姜文杰 赵喆泓 谢泉 李拓凡 邵红霞 钱琨 秦爱建 叶建强 万志敏 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第5期136-142,共7页
为研制抗H6禽流感病毒HA蛋白单克隆抗体,本研究利用小鼠适应毒株E-Teal/417(MA E-Teal/417)H6禽流感病毒免疫BALB/c小鼠,利用小鼠杂交瘤细胞技术,经间接免疫荧光试验(IFA)和血凝抑制(HI)试验等方法筛选和亚克隆,获得4株没有HI效价的单... 为研制抗H6禽流感病毒HA蛋白单克隆抗体,本研究利用小鼠适应毒株E-Teal/417(MA E-Teal/417)H6禽流感病毒免疫BALB/c小鼠,利用小鼠杂交瘤细胞技术,经间接免疫荧光试验(IFA)和血凝抑制(HI)试验等方法筛选和亚克隆,获得4株没有HI效价的单克隆抗体,分别命名为1D4、4A7、4G2和5E9。IFA结果表明,4株单克隆抗体均能识别转染pDP2002-HA(MA E-Teal/417)质粒的293T细胞中表达的HA蛋白。Western blot试验表明,单克隆抗体4G2和5E9能识别感染MAE-Teal/417病毒的MDCK细胞中表达的HA蛋白。中和试验结果发现,单克隆抗体1D4、4A7和4G2具有一定的体外中和活性,抑制MAE-Teal/417在MDCK细胞中感染和复制。小鼠保护性试验进一步表明,单克隆抗体4A7能提供良好的被动免疫抵抗致死性MAE-Teal/417感染。以上获得的无血凝抑制活性、但具有一定中和活性的抗HA单克隆抗体为H6禽流感病毒HA蛋白新型中和表位解析、疫苗设计及诊断技术开发等提供生物材料。 展开更多
关键词 H6亚型禽流感病毒 HA蛋白 单克隆抗体 无HI 中和活性 保护性
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表达H9N2亚型禽流感病毒血凝素HA1重组乳酸乳球菌的构建及免疫效果评价
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作者 王志悦 李欣蕊 +8 位作者 崔子扬 贺志新 孙嘉咛 王许刚 王瑞 李春红 徐明举 张瑞华 徐彤 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第4期48-54,共7页
本研究以H9N2亚型禽流感病毒RNA为模板,利用RT-PCR获得960 bp的血凝素HA1基因,将其克隆至乳酸菌表达载体pMG36e,构建pMG36e-HA1重组质粒;pMG36e-HA1电转乳酸乳球菌MG1363感受态细胞获得重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1,应用SDS-PAGE、W... 本研究以H9N2亚型禽流感病毒RNA为模板,利用RT-PCR获得960 bp的血凝素HA1基因,将其克隆至乳酸菌表达载体pMG36e,构建pMG36e-HA1重组质粒;pMG36e-HA1电转乳酸乳球菌MG1363感受态细胞获得重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1,应用SDS-PAGE、Western blot鉴定HA1在重组乳酸菌的表达情况;将重组乳酸乳球菌口服免疫10日龄雏鸡,每只鸡口服2×10~9 CFU菌液,共免疫2次;分别在免疫后第7、14天采集血清与气管灌洗液,并检测其抗体与细胞因子水平。结果显示:成功构建出重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1,且重组乳酸乳球菌成功表达血凝素HA1蛋白,该蛋白能够与H9亚型禽流感阳性血清发生特异性免疫结合反应;雏鸡口服免疫后,其血清与气管灌洗液中抗体与细胞因子水平与对照组相比明显上升。本研究表明,构建的重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1能够有效刺激免疫应答,口服免疫雏鸡后能够获得良好的免疫效果。 展开更多
关键词 H9N2禽流感病毒 血凝素 乳酸乳球菌
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双黄连调控跨内皮淋巴细胞抗禽流感病毒的研究
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作者 张朝晖 孙志刚 +4 位作者 穆祥 冯波 梁宏伟 刘晓晔 张倩 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第7期3440-3448,共9页
【目的】探究双黄连(Shuanghuanglian,SHL)通过调控跨内皮淋巴细胞抗H9N2亚型抗禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)感染的作用机制,为抗流感病毒中药的研发提供新思路和理论依据。【方法】采用MTT法检测不同浓度和不同作用时间含SH... 【目的】探究双黄连(Shuanghuanglian,SHL)通过调控跨内皮淋巴细胞抗H9N2亚型抗禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)感染的作用机制,为抗流感病毒中药的研发提供新思路和理论依据。【方法】采用MTT法检测不同浓度和不同作用时间含SHL培养基对大鼠肺微血管内皮细胞(rat pulmonary microvascular endothelial cells,rPMVECs)的药物毒性,筛选合适的药物作用浓度和时间。探究SHL对H9N2亚型AIV在rPMVECs上复制动力学的影响。对影响大鼠外周淋巴细胞增殖能力的各项指标(淋巴细胞浓度、FBS浓度和培养时间)进行优化。在此基础上建立rPMVECs与淋巴细胞的Transwell共培养体系,将rPMVECs接种上室,分为6组:活病毒组、灭活病毒组、活病毒加中药组、灭活病毒加中药组、内皮组及空白组,接种淋巴细胞。H9N2亚型AIV与跨内皮淋巴细胞孵育后接种MDCK细胞,通过MDCK细胞死亡数和上清液中的活病毒量评估SHL的抗病毒效果。【结果】浓度≤100μg/mL的SHL与rPMVECs共培养24 h后显微镜下未观察到明显的细胞病变。在rPMVECs完整的情况下,当SHL浓度为100μg/mL时,其与被H9N2亚型AIV感染的rPMVECs共作用24 h时对H9N2亚型AIV增殖的抑制作用最强。灭活病毒组的MDCK死亡细胞数和活病毒量显著低于活病毒组(P<0.05);活病毒加中药组的MDCK死亡细胞数和活病毒量显著低于内皮组和活病毒组(P<0.05)。【结论】SHL在保护宿主抗H9N2亚型AIV的过程中发挥着重要作用,其是通过保护内皮细胞的完整性,激活内皮细胞募集淋巴细胞从而发挥免疫作用,进而降低病毒载量,起到抗病毒的作用。 展开更多
关键词 双黄连 H9N2亚型禽流感病毒 大鼠肺微血管内皮细胞 淋巴细胞
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G57基因型H9N2亚型禽流感病毒反向遗传系统的建立与验证
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作者 史玉婷 韩心雨 +5 位作者 钟沐卉 林耀忠 柳腾飞 李焰 尹会方 贾伟新 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1825-1833,共9页
旨在构建当前流行毒株H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)的反向遗传操作平台。毒株A/Chicken/Guangdong/M/2021(H9N2)(简称为M)分离自广东某养鸡场病料。鉴定并分析其全基因组序列,通过RT-PCR以及无缝克隆技术完成质粒构... 旨在构建当前流行毒株H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)的反向遗传操作平台。毒株A/Chicken/Guangdong/M/2021(H9N2)(简称为M)分离自广东某养鸡场病料。鉴定并分析其全基因组序列,通过RT-PCR以及无缝克隆技术完成质粒构建,共转染293T细胞成功拯救毒株命名为rM。测定病毒的稳定性和生长曲线;进行动物试验,从传播效率、致病性角度验证克隆毒株与原毒的一致性。结果显示:M毒株为G57基因型,为近年的流行毒株。M毒株与rM毒株在酸稳定性、热稳定性、致病性以及传播性等方面保持一致的生物学特性。综上,成功建立了G57基因型H9N2亚型AIV的反向遗传系统,且从体内和体外试验两个方面全面验证M与rM的生物学特性保持一致。 展开更多
关键词 反向遗传 H9N2 禽流感病毒 G57基因型
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2023—2024年山东省H9N2亚型禽流感病毒的遗传进化分析和生物学特性研究
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作者 高振涛 高斌 +2 位作者 张瑞华 徐彤 李旭冬 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第7期23-34,共12页
为了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的遗传进化规律、分子变化特征和潜在的跨种传播可能性,本试验对2023—2024年采集自山东省境内养殖场的病鸡肺脏病料进行病毒的分离鉴定、全基因组测序、同源性分析、遗传进化分析、分子特征和进化分析,... 为了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的遗传进化规律、分子变化特征和潜在的跨种传播可能性,本试验对2023—2024年采集自山东省境内养殖场的病鸡肺脏病料进行病毒的分离鉴定、全基因组测序、同源性分析、遗传进化分析、分子特征和进化分析,利用反向遗传操作技术构建亲本毒株(SD11、SD341)和重组毒株(re_SD341),将重组毒株PA基因中携带的宿主适应性位点突变为禽源模式(PA-R356K/N409S),检测3株毒株在不同宿主细胞中的复制能力,并进一步检测SD341和re_SD341毒株对小鼠的致病能力。结果显示,从54份病料中分离获得2株H9N2亚型AIV,2株分离株与2000年之后国内疫苗株同源性较高,核苷酸相似性达90%以上;HA基因遗传进化分析结果显示,2株分离毒株均属于B分支中的B4.7.2分支,且8个基因片段均与一些人源分离毒株亲缘关系较近,其中HA、PB1、PB2和PA基因与一些人源分离毒株的核苷酸相似性超过90%;分子特征分析结果显示,2株分离毒株HA蛋白裂解位点均为PSRSSR↓GL,符合2020年左右B分支中流行毒株分子特征;与早期代表毒株相比,NA蛋白茎部均有缺失且在第368位均增加1个新的潜在糖基化位点;2株毒株的HA、PB1、PB2和PA蛋白均携带宿主适应性突变位点,其中PA蛋白发生K356R和S409N适应性突变;生物学特性验证结果显示,与re_SD341重组毒株相比,SD341亲本毒株在人非小细胞肺癌细胞系(A549)中的复制能力更强(P<0.0001),并且在一定时间内可导致小鼠的体重明显下降。结果表明,本试验分离的2株H9N2 AIV毒株均为低致病性毒株,病毒发生不同程度的变异进化,其中一些病毒蛋白包含哺乳动物适应性突变,增加了其跨种传播的风险,本试验结果为我国H9N2亚型AIV的进化提供了参考,为禽流感综合防控和公共卫生安全提供了数据支撑。 展开更多
关键词 H9N2 禽流感病毒 遗传进化 跨种传播
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CRISPR-Cas13a蛋白结合RT-RPA技术检测H5N6和H9N2亚型禽流感病毒
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作者 吴晶晶 翁育伟 +1 位作者 黄枝妙 陈宏彬 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第3期235-242,共8页
目的将逆转录-重组酶聚合酶扩增技术(RT-RPA)和成簇规则间隔短回文重复序列(CRISPR)-Cas13a蛋白结合,建立一种快速、高灵敏度和高特异性禽流感病毒(AIV)H5N6和H9N2亚型的核酸检测方法。方法选择AIV H5、H6、H9和N2基因的保守序列,分别... 目的将逆转录-重组酶聚合酶扩增技术(RT-RPA)和成簇规则间隔短回文重复序列(CRISPR)-Cas13a蛋白结合,建立一种快速、高灵敏度和高特异性禽流感病毒(AIV)H5N6和H9N2亚型的核酸检测方法。方法选择AIV H5、H6、H9和N2基因的保守序列,分别设计特异性RT-RPA引物及crRNA序列,建立RT-RPA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测反应体系,评价检测方法的灵敏度和特异性。使用AIV外环境核酸阳性和阴性样本进行检测,并与荧光定量RT-PCR法结果进行比较,评价RT-RPA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白的检测效果。结果H5、H9和N2亚型的检测灵敏度可达1拷贝/μL,N6亚型的检测灵敏度为10拷贝/μL,不同拷贝数浓度的质粒样本在蓝光切胶仪中能显示荧光,且4种亚型特异性良好,与其余AIV亚型无交叉反应。H5、N6和H9亚型外环境核酸阳性、阴性样本与荧光定量RT-PCR法结果一致,准确率均为100%;N2亚型的外环境核酸阳性样本全部检出,另检出1份阴性样本,准确率为97.9%。结论建立的CRISPR-Cas13a蛋白结合RT-RPA技术检测方法能灵敏、特异且可视化的检出H5N6和H9N2亚型AIV,可为AIV病原监测和AIV亚型分型提供新的核酸检测方法。 展开更多
关键词 CRISPR-Cas13a 重组酶聚合酶扩增技术 禽流感病毒 核酸检测
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一株H5N6亚型高致病性禽流感病毒的遗传演化及生物学特性研究
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作者 赵志国 田井满 +4 位作者 李明慧 白晓利 宋兴栋 李雁冰 陈化兰 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第2期117-123,共7页
2023年5月本实验室从家禽的监测样品中分离到一株H5N6亚型高致病性禽流感病毒(HPAIV),命名为A/chicken/Jiangsu/S1/2023(H5N6)株,简称CK/JS/S1/2023(H5N6)株。为进一步了解该病毒的生物学特性,本研究对其进行全基因组的分段PCR扩增与测... 2023年5月本实验室从家禽的监测样品中分离到一株H5N6亚型高致病性禽流感病毒(HPAIV),命名为A/chicken/Jiangsu/S1/2023(H5N6)株,简称CK/JS/S1/2023(H5N6)株。为进一步了解该病毒的生物学特性,本研究对其进行全基因组的分段PCR扩增与测序分析各基因节段编码的关键氨基酸位点及各基因节段的遗传演化分析,采用Simplot软件分析该病毒全基因组的重配事件,采用交叉血凝抑制试验分析该病毒的抗原性。结果显示,该病毒HA蛋白的裂解位点为PLRERRRKR↓GLF,符合HPAIV的分子特征。关键氨基酸位点分析显示HA蛋白受体结合区域出现S^(133)A和T^(156)A增强病毒与人型受体(α2,6)结合能力的突变;NA蛋白颈部出现了aa59~aa69的缺失;PB1蛋白的D622G、M1蛋白的^(I43)M和T^(215)A及NS1蛋白的I106M,这些位点的突变均可以增强病毒对哺乳动物的致病性。遗传演化分析结果显示,该病毒HA基因属于2.3.4.4b亚分支,NA基因及5个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M)均属于欧亚分支,NS基因属于等位基因A分支(Allele A)。基因重配分析结果显示该病毒是由野鸟源的H5N8和家鸭源的H5N6、H4N6和H3N2AIV形成的一株多元重配病毒。抗原性分析结果显示,该病毒与2.3.4.4b亚分支H5-Re14疫苗株抗原性相匹配。将该病毒以10~1EID_(50)/50μL~10~6EID_(50)/50μL剂量经鼻腔感染小鼠,通过小鼠的存活率和各脏器病毒滴度分析该病毒的致病性。结果显示,感染组小鼠均出现精神沉郁、被毛凌乱、体质量下降等症状,感染该病毒后第4 d开始出现死亡。经计算该病毒对小鼠的半数致死量(MLD_(50))为1.5 log_(10)EID_(50),呈高致病性(MLD_(50)<3 log_(10)EID_(50))。该病毒不经提前适应即可在小鼠的多脏器中有效复制,其在肺脏中的病毒滴度最高,达到7.25 log_(10)EID_(50)/m L。本研究通过对H5N6亚型HPAIV的部分生物学特性研究,为2.3.4.4b亚分支H5亚型HPAI的防控提供数据支持与借鉴。 展开更多
关键词 H5N6亚型 高致病性禽流感病毒 分子特征 遗传演化 抗原性 哺乳动物致病性
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H3N8亚型禽流感病毒研究概况 被引量：1
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作者 王进峰 陈甘晨曦 +1 位作者 贾燕青 仇薪鑫 《动物医学进展》 北大核心 2025年第8期108-110,共3页
禽流感(Avian influenza,AI)是由禽流感病毒(AIV)引起的一种高度接触性禽类传染病。近年来我国鸡群中出现H3N8亚型AIV的流行,2022年报道首例H3N8亚型AIV感染人类的病例,目前H3N8还没有在人际间传播,但H3N8亚型的跨物种传播,存在突破跨... 禽流感(Avian influenza,AI)是由禽流感病毒(AIV)引起的一种高度接触性禽类传染病。近年来我国鸡群中出现H3N8亚型AIV的流行,2022年报道首例H3N8亚型AIV感染人类的病例,目前H3N8还没有在人际间传播,但H3N8亚型的跨物种传播,存在突破跨物种屏障感染人的风险。论文从H3N8亚型AIV的流行特点、分子适应机制、宿主范围以及防控措施进行概述,以期为AIV的综合防控提供参考。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H3N8亚型 流行特点 演化
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一株重组H6N8亚型禽流感病毒的遗传进化分析
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作者 黄佳承 彭燕妮 +7 位作者 郑航煜 庄明智 张春萍 王洋 曾显成 石文军 赵聪慧 马树杰 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第5期443-451,共9页
为了解H6N8亚型禽流感病毒(AIV)的分布特征,本研究统计分析了NCBI和GISAID数据库中400株H6N8亚型AIV的宿主、分离年份和地理分布特征,结果显示,H6N8亚型AIV在全球范围内持续流行,主要在野鸟和家禽中分离到,中国南方分布较多。为进一步... 为了解H6N8亚型禽流感病毒(AIV)的分布特征,本研究统计分析了NCBI和GISAID数据库中400株H6N8亚型AIV的宿主、分离年份和地理分布特征,结果显示,H6N8亚型AIV在全球范围内持续流行,主要在野鸟和家禽中分离到,中国南方分布较多。为进一步探究福建省H6N8亚型AIV的遗传进化特征,本研究于2023年在活禽市场采集285份家禽泄殖腔拭子样品,经接种鸡胚,37℃培养48 h后分离到1株AIV,经RT-PCR和测序分析鉴定为H6N8亚型AIV,并对其进行了全基因组测序、遗传进化分析和关键位点氨基酸序列分析。序列分析结果显示,该病毒HA蛋白裂解位点氨基酸序列为PQIETR↓GLF,无连续碱基氨基酸,符合低致病性AIV(LPAIV)的分子特征。HA蛋白^(138)S为结合人源受体(SAα-2,6 Gal)特征,但其226Q和228G显示该病毒为结合禽源受体(SAα-2,3 Gal)的分子特征。该病毒PB2 A^(588)V、PB1 I^(368)V、PA K^(185)R和S^(409)N、NP V^(286)A和M^(437)T、M1 N^(30)D和T^(215)A、NS1 P^(42)S氨基酸突变可增强AIV对哺乳动物的致病性。遗传进化分析结果显示,该病毒8个基因节段均属于欧亚分支,其中HA、PB1和NP基因属于H6亚型AIV的ST2835-1ike分支,NS基因属于ST339-like分支。NA和M基因与鸡源H3N8亚型AIV亲缘关系近,PB2、PB1、PA、HA、NP和NS基因与家禽及环境中分离的H6N6 AIV亲缘关系近,提示该病毒可能是由H6N6和H3N8亚型AIV重组而来。本研究为了解H6N8亚型AIV的遗传进化提供了参考。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H6N8亚型AIV 三间分布 遗传进化 关键氨基酸
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2株H5N6亚型禽流感病毒的遗传进化分析
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作者 陈晓娜 杨文卓 +3 位作者 尹信 周江涛 张家豪 亓文宝 《中国家禽》 北大核心 2025年第1期97-111,共15页
为了解禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的遗传进化特点,试验对2022—2023年从我国湖南和福建活禽交易市场分离的2株鸭源H5N6亚型AIV进行全基因组测序、关键氨基酸位点分析和遗传进化树构建,这2株AIV分别为A/duck/Hunan/QG3/2022(... 为了解禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的遗传进化特点,试验对2022—2023年从我国湖南和福建活禽交易市场分离的2株鸭源H5N6亚型AIV进行全基因组测序、关键氨基酸位点分析和遗传进化树构建,这2株AIV分别为A/duck/Hunan/QG3/2022(H5N6)(简称HN/QG3)和A/duck/Fujian/QG4/2023(H5N6)(简称FJ/QG4)。结果显示:HN/QG3株属于2.3.4.4b分支,其基因组来源于H5N6和H5N8毒株,与鸭、野鸟、环境和人类来源的H5亚型AIV的同源性较高,而FJ/QG4株属于2.3.4.4h分支,HA基因与分离株A/Rattus norvegicus/China/FS21/2021(H5N6)的相似性为97%,而其他基因片段与2021年广东地区分离的人源H5N6亚型AIV的同源性较高;2株H5N6亚型AIV的HA蛋白裂解位点含有多个连续的碱性氨基酸,符合高致病性AIV的分子特征,HA蛋白第226和228位分别为Q和G,说明H5N6亚型AIV具有优先结合禽源α2,3-唾液酸受体的特征,并且NA蛋白第58~68位缺失11个氨基酸,对小鼠的致病性可能增强。研究表明,2株鸭源H5N6亚型AIV分别属于2.3.4.4b分支和2.3.4.4h分支,其对人源α2,6-唾液酸受体的识别能力增强,毒力和传播能力可能增强。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H5N6亚型 遗传进化 基因突变
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H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白150-Loop结构域多态性变异对抗原性的影响
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作者 董金泽 赵传阔 +1 位作者 王林林 蒲娟 《中国家禽》 北大核心 2025年第11期75-83,共9页
为了解我国流行的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)蛋白150-Loop结构域多态性变异对抗原性的影响,研究通过反向遗传系统拯救多种H9N2150-Loop组合突变株,利用血凝抑制(HI)试验对其抗原性变化进行检测。结果显示:我国H9N2AIV流行毒株... 为了解我国流行的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)蛋白150-Loop结构域多态性变异对抗原性的影响,研究通过反向遗传系统拯救多种H9N2150-Loop组合突变株,利用血凝抑制(HI)试验对其抗原性变化进行检测。结果显示:我国H9N2AIV流行毒株的多态性组合主要包括早期分支毒株特征的_(145)TQKNNA_(150),以及当前B4.7分支毒株特征的_(145)TRKDGN_(150)、_(145)TRKNGE_(150)、_(145)TRKNGD_(150)和_(145)TRKNGN_(150)类型,在早期分支毒株上分别替换了B4.7分支的4种突变组合的突变株均被成功拯救;组合突变株与野生株产生了明显抗原性差异,抗原距离大于2个抗原单位,但4种突变株之间抗原性差异有限,抗原距离均小于1个抗原单位。该抗原性变异也通过微量中和试验和同源建模预测得到了进一步的验证。研究表明,B4.7分支与早期分支间出现的150-Loop变异对抗原漂移的产生起到重要作用,但是B4.7分支内的多态性组合变化尚未构成抗原漂移,结果为H9N2亚型禽流感临床防控和抗原性评估提供了理论依据。 展开更多
关键词 H9N2亚型禽流感病毒 HA蛋白 150-Loop 抗原性
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