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禽戊型肝炎病毒CaHEV-GDSZ01株ORF3蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备
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作者 张玉倩 李长乐 +2 位作者 吕志航 姚鑫炎 张雪莲 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第3期224-229,共6页
旨在对禽戊型肝炎病毒的ORF3蛋白进行原核表达,并制备其多克隆抗体,为进一步研究aHEV ORF3蛋白生物学功能新型疫苗提供生物材料。通过RT-PCR方法扩增CaHEV-GDSZ01株ORF3基因,连接pET-32a(+)表达载体以构建重组原核表达质粒,并转化BL21(D... 旨在对禽戊型肝炎病毒的ORF3蛋白进行原核表达,并制备其多克隆抗体,为进一步研究aHEV ORF3蛋白生物学功能新型疫苗提供生物材料。通过RT-PCR方法扩增CaHEV-GDSZ01株ORF3基因,连接pET-32a(+)表达载体以构建重组原核表达质粒,并转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达;利用SDS-PAGE凝胶电泳分析ORF3蛋白的表达形式后进行纯化,并免疫新西兰白兔以获得兔抗ORF3蛋白多克隆抗体,利用间接ELISA试验检测多克隆抗体的效价,利用Western Blot试验和间接免疫荧光试验(IFA)检测多克隆抗体特异性。结果显示,成功构建了pET-32a-ORF3重组原核表达质粒,并通过原核表达系统成功诱导表达了27 ku不可溶性的aHEV ORF3重组蛋白;Western Blot试验和IFA试验结果显示,制备的多克隆抗体可以特异性识别ORF3蛋白,ELISA结果显示,多克隆抗体效价为1∶51 200。成功表达CaHEV-GDSZ01株的ORF3蛋白,并制备了其多克隆抗体。 展开更多
关键词 肝炎病毒 多克隆抗体 原核表达 免疫 ORF3蛋白
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禽戊型肝炎病毒CaHEV-GDSZ01株ORF2蛋白的生物信息学分析、原核表达及多克隆抗体制备
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作者 张玉倩 吕志航 +2 位作者 刘春红 廉春杨 张雪莲 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第6期231-238,共8页
旨在分析禽戊型肝炎病毒(aHEV)CaHEV-GDSZ01株ORF2蛋白的结构和生物学功能等,并利用大肠杆菌原核表达系统表达ORF2重组蛋白及制备抗ORF2蛋白多克隆抗体,验证重组蛋白的免疫原性和反应原性等。利用生物信息学软件对CaHEV-GDSZ01株ORF2蛋... 旨在分析禽戊型肝炎病毒(aHEV)CaHEV-GDSZ01株ORF2蛋白的结构和生物学功能等,并利用大肠杆菌原核表达系统表达ORF2重组蛋白及制备抗ORF2蛋白多克隆抗体,验证重组蛋白的免疫原性和反应原性等。利用生物信息学软件对CaHEV-GDSZ01株ORF2蛋白的理化性质、结构和功能等方面进行分析;通过酶切、连接pET-32a(+)载体与CaHEV GDSZ01株的ORF2基因,构建pET-32a-ORF2-His和pET-32a-ORF2原核表达质粒,并转化至DE3感受态细胞中进行诱导表达,分析其表达形式;ORF2重组蛋白经切胶纯化,利用Western Blot试验验证其反应原性后,免疫新西兰大白兔以获得兔抗ORF2蛋白多克隆抗体,并通过Western Blot方法对多抗进行鉴定分析、利用间接ELISA方法进行抗体效价检测。生物信息学分析结果显示,CaHEV-GDSZ01株的ORF2蛋白为亲水性的、不稳定的蛋白,且其存在信号肽的概率高达93.59%,其二级结构主要以无规则卷曲为主,具备结合抗体的结构条件,其保护性抗原整体预测评分则表明ORF2蛋白具备良好的免疫原性。试验成功构建了ORF2重组原核表达质粒,并成功诱导表达了目的蛋白,经SDS-PAGE试验和Western Blot试验显示,诱导表达的蛋白主要为非可溶性蛋白,并具有良好的反应原性;而制备的兔源抗aHEV ORF2蛋白多克隆抗体的效价为1∶102400,且能特异性识别免疫原ORF2蛋白、非免疫原ORF2-His蛋白和截短的sORF2蛋白。以上结果初步分析了ORF2蛋白的理化性质和部分生物学功能,成功表达了aHEV ORF2蛋白,制备了抗ORF2蛋白的兔源多克隆抗体。 展开更多
关键词 肝炎病毒 ORF2蛋白 生物信息学 原核表达 多克隆抗体
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人、猪和鸡血清中抗禽戊型肝炎病毒抗体的检测与鉴定 被引量:1
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作者 荆胜涛 张红霞 +4 位作者 孙培明 董施伟 赵钦 张璐 周恩民 《山东农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2010年第1期89-92,共4页
通过对人、猪和鸡血清中的抗禽戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)ORF2抗体的检测以及对阳性血清抗体特异性的鉴定,本研究结果表明,人、猪和禽血清中抗禽HEVORF2抗体阳性率为0.91%~62.5%。因为禽与哺乳动物HEV ORF2抗原具有共有的... 通过对人、猪和鸡血清中的抗禽戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)ORF2抗体的检测以及对阳性血清抗体特异性的鉴定,本研究结果表明,人、猪和禽血清中抗禽HEVORF2抗体阳性率为0.91%~62.5%。因为禽与哺乳动物HEV ORF2抗原具有共有的抗原表位,而阳性血清中抗禽HEV ORF2特异性抗原表位抗体的阳性率为41.3%~92.1%,提示人、猪和鸡都有感染禽HEV的可能性,这为进一步验证禽HEV可能造成的人兽共感染提供新的科学依据。 展开更多
关键词 肝炎病毒 肝炎病毒 禽戊型肝炎病毒特异性抗体 血清学调查
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禽副粘病毒2型(PMV-2)群特异性单克隆抗体的研究 被引量:2
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作者 张国中 赖志 赵继勋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期188-190,共3页
禽副粘病毒 2型 (Yucaipa株 )鸡胚成纤维细胞适应毒经差速离心和蔗糖密度梯度离心法提纯 ,免疫Balb/c小鼠 ,取脾细胞与SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,经间接ELISA方法筛选 ,有限稀释 3次克隆 ,获得了两株分泌PMV 2单克隆抗体的杂交瘤细胞株 6E... 禽副粘病毒 2型 (Yucaipa株 )鸡胚成纤维细胞适应毒经差速离心和蔗糖密度梯度离心法提纯 ,免疫Balb/c小鼠 ,取脾细胞与SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,经间接ELISA方法筛选 ,有限稀释 3次克隆 ,获得了两株分泌PMV 2单克隆抗体的杂交瘤细胞株 6E9和 7E5。经鉴定两株单抗均为IgG1亚类 ,杂交瘤细胞的平均染色体分别为 96条和98条。细胞培养上清及腹水效价分别为 1∶2 5 6 0 0、1∶5 12 0 0和 1∶10 5、1∶10 7。 6E9和 7E5单抗能稳定分泌抗体且与NDV、AIV、EDSV无交叉反应。间接ELISA实验表明 4株PMV 2 (Yucaipa株、F4 株、F6株和F8株 )均含有单抗6E9和 7E5所针对的位点。 展开更多
关键词 副粘病毒2 单克隆抗体 异性
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我国家禽戊型肝炎病毒感染情况的调查
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作者 耿彦生 张硕 +3 位作者 赵晨燕 汪葆玥 田克恭 王佑春 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期429-432,共4页
目的了解我国家禽戊型肝炎病毒(HEV)感染情况。方法自我国15个省份采集鸡和鸭血清共计1647份,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测血清中HEV抗原和抗体;通过Nested PCR对陕西、西藏和海南的全部血清样本及其它抗原阳性样本分别进行HEV... 目的了解我国家禽戊型肝炎病毒(HEV)感染情况。方法自我国15个省份采集鸡和鸭血清共计1647份,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测血清中HEV抗原和抗体;通过Nested PCR对陕西、西藏和海南的全部血清样本及其它抗原阳性样本分别进行HEV及禽HEV核酸检测。结果 1507份鸡血清中有54份为HEV抗体阳性,26份为HEV抗原阳性,抗原和抗体的阳性率分别为3.58%和1.73%;140份鸭血清中10份为HEV抗体阳性,2份为HEV抗原阳性,阳性率分别为7.14%和1.43%;鸡和鸭HEV抗原、抗体阳性率无统计学差异。在鸡、鸭血清标本中没有检测到HEVRNA。结论我国家禽存在HEV感染,但还需要进一步研究以确定感染的病毒是否为禽HEV或1-4型HEV跨种感染。 展开更多
关键词 肝炎病毒 肝炎病毒 HEV-抗原 HEV-抗体 血清学调查
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