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禽多杀性巴氏杆菌检验用菌种的研究 被引量：1
1
作者 冯妍 张一帜 +4 位作者 王秀丽 王甲 刘燕 姚文生 任小侠 《中国兽药杂志》 2024年第1期13-17,共5页
为研究禽多杀性巴氏杆菌类兽用生物制品效力评价用菌株,制备了一批禽多杀性巴氏杆菌CVCC44801株,并对菌种的形态、生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分及毒力等进行检定,进一步评估了冻干菌菌数的稳定性,对冻干菌... 为研究禽多杀性巴氏杆菌类兽用生物制品效力评价用菌株,制备了一批禽多杀性巴氏杆菌CVCC44801株,并对菌种的形态、生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分及毒力等进行检定,进一步评估了冻干菌菌数的稳定性,对冻干菌与新鲜培养菌液的毒力进行了比较。试验结果表明,该冻干菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》二○○○版菌种标准的规定。冻干菌菌数保持稳定,并且与新鲜培养的攻毒菌液相比,毒力并无差异。本研究为禽多杀性巴氏杆菌类兽用生物制品效力评价用菌株的制备和检定提供参考依据。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌CVCC44801株 毒力 效力评价
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检测禽多杀性巴氏杆菌PCR方法的建立 被引量：21
2
作者 施少华 程龙飞 +5 位作者 傅光华 陈红梅 万春和 陈珍 彭春香 黄瑜 《福建农业学报》 CAS 2009年第3期201-204,共4页
为禽多杀性巴氏杆菌感染提供特异、敏感的诊断方法,本研究建立了检测禽多杀性巴氏杆菌PCR方法。该方法能从禽多杀性巴氏杆菌扩增出1条460 bp的特异片段,而无法从大肠杆菌、鸭疫里氏杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、禽1型副黏病毒、番... 为禽多杀性巴氏杆菌感染提供特异、敏感的诊断方法,本研究建立了检测禽多杀性巴氏杆菌PCR方法。该方法能从禽多杀性巴氏杆菌扩增出1条460 bp的特异片段,而无法从大肠杆菌、鸭疫里氏杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、禽1型副黏病毒、番鸭呼肠孤病毒和鸭基因组DNA扩增出目的片段。敏感性试验显示该PCR方法最低可检测出1 ng.L-1的细菌基因DNA。 展开更多
关键词 禽源 多杀性巴氏杆菌 pCR
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禽多杀性巴氏杆菌PtfA重组亚单位疫苗免疫效果的检测 被引量：4
3
作者 宫强 孔梁宇 +3 位作者 牛明福 秦翠丽 侯颖 孙晓菲 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期567-570,共4页
为评价禽多杀性巴氏杆菌(P.multocida)PtfA重组蛋白(rPtfA)的免疫效果,本研究通过PCR扩增禽P.multocida的ptfA基因,将其克隆于pET-32a载体中并在大肠杆菌中表达。表达的rPtfA纯化后制备油乳剂亚单位疫苗,经3次免疫20只4周龄雏鸡,并设弱... 为评价禽多杀性巴氏杆菌(P.multocida)PtfA重组蛋白(rPtfA)的免疫效果,本研究通过PCR扩增禽P.multocida的ptfA基因,将其克隆于pET-32a载体中并在大肠杆菌中表达。表达的rPtfA纯化后制备油乳剂亚单位疫苗,经3次免疫20只4周龄雏鸡,并设弱毒活疫苗组和PBS对照组。免疫后定期采血检测免疫鸡体液和细胞免疫水平,并进行攻毒试验评价rPtfA保护效率。结果显示动物免疫后,rPtfA免疫组和弱毒活疫苗免疫组血清抗体水平持续上升,与PBS对照组相比差异极显著(p<0.01),并且弱毒活疫苗组血清抗体水平高于rPtfA免疫组。淋巴细胞增殖和IFN-γ分泌试验的结果也表明,rPtfA组和弱毒活疫苗组的SI值及分泌的IFN-γ水平均极显著高于对照组(p<0.01),并且弱毒活疫苗组稍高于rPtfA组。攻毒后rPtfA组和弱毒活疫苗组的保护率分别为40%和70%,表明rPtfA亚单位疫苗虽然可为免疫鸡提供一定的保护,但效果不及弱毒活疫苗,仍需采取措施进一步增强其免疫保护效果。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 ptfA基因 重组亚单位疫苗 免疫效果
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检测禽多杀性巴氏杆菌环介导等温扩增(LAMP)方法的建立 被引量：11
4
作者 施少华 陈红梅 +3 位作者 程龙飞 傅光华 万春和 黄瑜 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2010年第4期388-391,共4页
以禽多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)C48-1为研究对象,利用LAMP方法对Pm进行快速检测.结果表明:LAMP方法在恒温65℃下,1 h内就可以检测到Pm;LAMP方法最低可检测100 pg.μL-1Pm基因组DNA.该方法不需要精密的温度循环装置,有恒... 以禽多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)C48-1为研究对象,利用LAMP方法对Pm进行快速检测.结果表明:LAMP方法在恒温65℃下,1 h内就可以检测到Pm;LAMP方法最低可检测100 pg.μL-1Pm基因组DNA.该方法不需要精密的温度循环装置,有恒温加热设备就可以满足检测条件,适合基层临床应用. 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 环介导等温扩增方法
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11株禽多杀性巴氏杆菌OmpA基因克隆测序及其序列分析 被引量：4
5
作者 高明燕 徐步 +3 位作者 龚建森 王鑫 范建华 刘学贤 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期951-956,共6页
为了解国内禽多杀性巴氏杆菌流行株（Pasteurellamultocida，Pm）OmpA基因的变异情况，参考Gen-Bank中已发表的多杀性巴氏杆菌序列设计一对特异性引物，采用PCR方法对11个禽Pm菌株和3个荚膜型参考株（A，B，D）的OmpA基因进行扩增，将... 为了解国内禽多杀性巴氏杆菌流行株（Pasteurellamultocida，Pm）OmpA基因的变异情况，参考Gen-Bank中已发表的多杀性巴氏杆菌序列设计一对特异性引物，采用PCR方法对11个禽Pm菌株和3个荚膜型参考株（A，B，D）的OmpA基因进行扩增，将各菌株纯化回收的扩增产物与pMDl8-T载体连接，筛选阳性克隆进行测序。结果表明：14个菌株的OmpA基因开放阅读框在1047～1077bp之间，其中长度为1062bp的有9个菌株；SignalIP4．0预测表明，信号肽均为N端21个氨基酸残基，成熟蛋白氨基酸残基数量在327～332之间，推测的分子量为35．19～36．35kD。与GenBank中12个菌株OmpA基因核苷酸序列比对及遗传进化分析发现，核苷酸同源性为85．3％～100％；氨基酸同源性为83．1％～100％；其中C48—1，1010，9003，890920，921012，xj等6个国内禽Pm分离株OmpA序列同源性为100％。由此可见国内禽Pm菌株OmpA基因非常保守。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 OmpA基因 序列分析 同源性
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禽多杀性巴氏杆菌OmpA DNA疫苗免疫效果的研究 被引量：2
6
作者 宫强 王帅涛 +5 位作者 秦翠丽 牛明福 程茗 侯玉泽 张勇法 孙晓菲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期454-458,共5页
目的：研究禽多杀性巴氏杆菌OmpA DNA疫苗在鸡体内诱导的免疫保护效果。方法：PCR扩增禽多杀性巴氏杆菌的ompa基因片段,克隆入pcDNA3.1（＋）上,构建重组质粒pOMPA,体外转染SP2/0细胞,RT-PCR和免疫荧光试验检测目的基因的转录及表达情... 目的：研究禽多杀性巴氏杆菌OmpA DNA疫苗在鸡体内诱导的免疫保护效果。方法：PCR扩增禽多杀性巴氏杆菌的ompa基因片段,克隆入pcDNA3.1（＋）上,构建重组质粒pOMPA,体外转染SP2/0细胞,RT-PCR和免疫荧光试验检测目的基因的转录及表达情况。动物免疫共分四组：pOMPA组、弱毒疫苗组、pCDNA3.1（＋）空载体组和PBS对照组,每组15只4周龄鸡,除弱毒疫苗组外其他三组均肌注免疫三次,每次间隔两周,弱毒疫苗组仅首免时肌注1羽份/每只鸡。间接ELISA检测免疫后血清特异性抗体水平,MTT法检测免疫鸡外周血淋巴细胞增殖情况,双抗夹心ELISA检测IFN~γ分泌情况,强毒攻击,计算免疫鸡存活数目及保护率。结果：体外转染检测结果表明pOMPA可在体外培养的细胞中表达目的蛋白。动物免疫后,DNA疫苗组和弱毒疫苗组血清抗体水平持续上升,与两对照组相比差异极显著（P〈0.01）,且弱毒疫苗组血清抗体水平明显高于DNA疫苗组（P〈0.05）。经提取的外膜蛋白（Omps）诱生后,两疫苗组的SI值极显著高于pCDNA3.1（＋）组和PBS免疫组（P〈0.01）,两疫苗组之间则无差别。两疫苗组免疫鸡外周血淋巴细胞产生的IFNγ-极显著高于两对照组（P〈0.01）。强毒攻击后DNA疫苗组和弱毒疫苗组的保护率分别为60%和73.3%。结论：成功构建了禽多杀性巴氏杆菌OmpA DNA疫苗,该疫苗为动物提供一定的免疫保护力,但不够理想。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 OmpADNA疫苗 免疫应答 保护效果
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禽多杀性巴氏杆菌ptfA基因壳聚糖纳米DNA疫苗的免疫效果 被引量：2
7
作者 宫强 孔梁宇 +7 位作者 马丽苹 牛明福 秦翠丽 杨莹 李翔 阮梦蝶 田野 李战丽 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期658-662,671,共6页
为评价禽多杀性巴氏杆菌ptfA基因壳聚糖纳米DNA疫苗的免疫效果,本实验以壳聚糖为佐剂制备ptfA基因的壳聚糖纳米DNA疫苗,检测其形态及抗DNA酶降解的能力,随后进行动物免疫实验,检测免疫后小鼠血清特异性抗体水平、免疫小鼠脾淋巴细胞增殖... 为评价禽多杀性巴氏杆菌ptfA基因壳聚糖纳米DNA疫苗的免疫效果,本实验以壳聚糖为佐剂制备ptfA基因的壳聚糖纳米DNA疫苗,检测其形态及抗DNA酶降解的能力,随后进行动物免疫实验,检测免疫后小鼠血清特异性抗体水平、免疫小鼠脾淋巴细胞增殖、IFN-γ分泌情况和抵抗强毒菌株攻击和免疫保护率。实验结果显示,ptfA基因壳聚糖纳米DNA在透射电镜下呈现较为规则的圆球型,粒径约为200 nm,可以有效抵抗DNAaseⅠ的降解。间接ELISA检测结果显示,壳聚糖纳米DNA疫苗组和裸DNA组的血清抗体水平均呈现上升趋势,明显高于空载体对照组和PBS对照组,且壳聚糖纳米DNA疫苗组的抗体水平稍高于裸DNA疫苗组。淋巴细胞增殖试验和IFN-γ分泌试验结果也显示,壳聚糖纳米DNA疫苗组和裸DNA疫苗组的SI值与IFN-γ分泌水平极显著高于两对照组(p<0.01),但两种DNA疫苗组之间差异并不显著(p>0.05)。强毒菌株攻击后壳聚糖纳米DNA疫苗组的保护率优于裸DNA疫苗组,在一定程度上增强了禽多杀性巴氏杆菌ptfA基因裸DNA疫苗的免疫效果。从而为禽多杀性巴氏杆菌新型DNA疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 ptfA基因 壳聚糖纳米DNA疫苗 免疫效果
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禽多杀性巴氏杆菌ptfa基因PCR检测方法的初步建立 被引量：2
8
作者 宫强 魏景利 +3 位作者 孔梁宇 牛明福 秦翠丽 侯颖 《中国家禽》 北大核心 2014年第12期47-48,52,共3页
为建立一种禽多杀性巴氏杆菌的PCR检测方法,本研究根据GenBank中已发表的禽多杀性巴氏杆菌ptfa基因序列,设计与合成了一对特异性引物,建立了一种基于禽多杀性巴氏杆菌ptfa基因的PCR检测方法,并优化了反应条件,检测了该方法的特异性和敏... 为建立一种禽多杀性巴氏杆菌的PCR检测方法,本研究根据GenBank中已发表的禽多杀性巴氏杆菌ptfa基因序列,设计与合成了一对特异性引物,建立了一种基于禽多杀性巴氏杆菌ptfa基因的PCR检测方法,并优化了反应条件,检测了该方法的特异性和敏感性。结果显示,该方法可成功扩增出禽多杀性巴氏杆菌ptfa基因片段,而鸡致病性大肠杆菌、鸡金黄色葡萄球菌和鸡白痢沙门菌均未扩增出相应片段。敏感性试验表明该方法可检测最低浓度为1pg/μL的禽多杀性巴氏杆菌基因组DNA。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 ptfa基因 pCR 检测方法
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禽多杀性巴氏杆菌C48-1株omp基因克隆及序列分析 被引量：1
9
作者 陈红梅 施少华 +3 位作者 程龙飞 傅光华 彭春香 黄瑜 《福建农业学报》 CAS 2008年第4期351-354,共4页
根据Genbank中禽多杀性巴氏杆菌的omp(outer membrane protein)基因核苷酸序列设计1对特异性引物,应用PCR方法扩增出禽多杀性巴氏杆菌(5∶A)C48-1株的omp基因全长片段,与克隆载体pmD18-T连接后,转化感受态细胞,对经PCR鉴定和酶切鉴定均... 根据Genbank中禽多杀性巴氏杆菌的omp(outer membrane protein)基因核苷酸序列设计1对特异性引物,应用PCR方法扩增出禽多杀性巴氏杆菌(5∶A)C48-1株的omp基因全长片段,与克隆载体pmD18-T连接后,转化感受态细胞,对经PCR鉴定和酶切鉴定均为阳性的克隆进行测序。结果表明omp基因全长2 376bp,编码791个氨基酸。序列分析表明该菌株与PBA100株、P52株、EU570212、PM70株核苷酸同源性为48.7%～98.6%,氨基酸同源性为34.8%～99.0%。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 外膜蛋白 序列分析 同源性
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禽多杀性巴氏杆菌C48-1株OmpA基因表达与抗原性鉴定 被引量：1
10
作者 高明燕 胡茂志 +2 位作者 沈欣悦 周生 徐步 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2015年第3期289-292,共4页
为了研究禽多杀性巴氏杆菌(Pm)外膜蛋白A(Omp A)的免疫原性,根据C48-1菌株Omp A基因序列设计一对特异性引物,采用PCR方法扩增去信号肽的成熟Omp A基因.将去信号肽的成熟Omp A基因扩增片段双酶切后,克隆到p GEX-6p-1表达载体中,构建重组... 为了研究禽多杀性巴氏杆菌(Pm)外膜蛋白A(Omp A)的免疫原性,根据C48-1菌株Omp A基因序列设计一对特异性引物,采用PCR方法扩增去信号肽的成熟Omp A基因.将去信号肽的成熟Omp A基因扩增片段双酶切后,克隆到p GEX-6p-1表达载体中,构建重组表达质粒p GEX-Omp A,转化宿主菌BL21并经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.SDS-PAGE的结果显示,融合蛋白GST-Omp A大小约为63 ku,与预期的分子质量相符.免疫印迹分析结果表明,该融合蛋白与鸡抗Pm血清具有明显的免疫反应,说明Omp A具有良好的抗原性,这为禽Pm Omp A在免疫防御研究中的应用奠定了基础. 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 外膜蛋白A 原核表达 免疫印迹
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禽多杀性巴氏杆菌ompW基因的克隆与序列分析
11
作者 施少华 程龙飞 +3 位作者 傅光华 陈红梅 彭春香 黄瑜 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期675-679,共5页
提取禽多杀性巴氏杆菌分离株Pm27基因组DNA,参考GenBank中Pm70株ompW基因序列设计引物,应用PCR技术扩增了细菌ompW基因,将扩增片段克隆到pMD18-T载体后测序。生物信息学分析表明,该基因编码区长度为615bp,编码204个氨基酸;氨基酸序列与... 提取禽多杀性巴氏杆菌分离株Pm27基因组DNA,参考GenBank中Pm70株ompW基因序列设计引物,应用PCR技术扩增了细菌ompW基因,将扩增片段克隆到pMD18-T载体后测序。生物信息学分析表明,该基因编码区长度为615bp,编码204个氨基酸;氨基酸序列与参考株Pm70 OmpW蛋白的同源性最高,达98%;与睡眠嗜血杆菌的同源性77%,与琥珀酸产生菌的同源性为69.3%,与霍乱弧菌、大肠杆菌、耶尔森菌的同源性为50%左右。OmpW蛋白前21个氨基酸残基为信号肽序列,潜在的糖基化位点位于第122位氨基酸残基。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 ompW基因 序列分析
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青藏高原禽源多杀性巴氏杆菌ompH基因的克隆及序列分析
12
作者 安娜 张红见 +2 位作者 刘光辉 赵静 陈刚 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第3期24-27,共4页
根据GenBank中发表的多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,P.multocida)外膜蛋白H(ompH)基因的核苷酸序列,设计合成了一对特异性引物ompH3,用PCR方法扩增了1株禽源多杀性巴氏杆菌野生菌株(P1004)的ompH基因。然后将获得的928bp的目的... 根据GenBank中发表的多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,P.multocida)外膜蛋白H(ompH)基因的核苷酸序列,设计合成了一对特异性引物ompH3,用PCR方法扩增了1株禽源多杀性巴氏杆菌野生菌株(P1004)的ompH基因。然后将获得的928bp的目的基因片段连接到pMD18-T载体上,进行多杀性巴氏杆菌ompH基因的克隆及序列分析。结果表明,P1004和标准菌株C47-8的ompH基因编码区核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性分别为62%和91.7%,与已知的9个国内外代表株进行比对分析,核苷酸序列的同源性在55.9%～65.2%之间,氨基酸序列的同源性在91.3%～91.7%之间,说明P1004的ompH基因序列与C47-8以及国内外代表株之间有明显差异,即变异明显,揭示了禽源多杀性巴氏杆菌的ompH基因与其他菌株的分子进化关系,为ompH基因应用于疫苗的可行性奠定了基础。 展开更多
关键词 禽源 多杀性巴氏杆菌 ompH基因 克隆 序列分析
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禽多杀性巴氏杆菌ompa基因在Vero细胞中的表达
13
作者 宫强 牛明福 +4 位作者 秦翠丽 张敏 孙晓菲 王帅涛 程铭 《中国家禽》 北大核心 2010年第8期24-27,共4页
利用PCR技术扩增出禽多杀性巴氏杆菌1 050 bp的ompa基因片段,克隆到pUCm-T载体上,再亚克隆到真核载体pcDNA3.1(+)上,构建重组质粒pCA(pcDNA3.1-OmpA),将该重组质粒体外转染Vero细胞,检测其转录和表达情况。结果表明重组质粒pCA构建成功... 利用PCR技术扩增出禽多杀性巴氏杆菌1 050 bp的ompa基因片段,克隆到pUCm-T载体上,再亚克隆到真核载体pcDNA3.1(+)上,构建重组质粒pCA(pcDNA3.1-OmpA),将该重组质粒体外转染Vero细胞,检测其转录和表达情况。结果表明重组质粒pCA构建成功,通过RT-PCR由转染了重组质粒的Vero细胞中扩增出了目的条带,间接免疫荧光试验分析表明在转染了pCA的Vero细胞中出现绿色荧光,Western blotting分析显示重组质粒pCA转染的Vero细胞泳道出现约37.5 ku的特异条带,说明ompa基因在Vero细胞中成功表达了活性蛋白,从而为进一步研究禽多杀性巴氏杆菌ompa DNA疫苗的免疫效果奠定了基础。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 ompa基因 RT—pCR 间接免疫荧光试验
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基于CiteSpace的2003-2023年国内多杀性巴氏杆菌研究文献计量分析
14
作者 王玉恒 王汉鼎 +5 位作者 吉哈利 索郎扎西 邓愧 彭燕娟 牛家强 包玉花 《中南农业科技》 2024年第9期253-258,共6页
为了解国内多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)领域的最新研究热点和发展趋势,基于中国知网数据库(CNKI),采用CiteSpace可视化软件对2003—2023年发表的关于多杀性巴氏杆菌研究文献的作者、机构、期刊来源及关键词等内容进行计量分... 为了解国内多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)领域的最新研究热点和发展趋势,基于中国知网数据库(CNKI),采用CiteSpace可视化软件对2003—2023年发表的关于多杀性巴氏杆菌研究文献的作者、机构、期刊来源及关键词等内容进行计量分析。结果表明,近20年国内多杀性巴氏杆菌研究领域的年度发文量呈阶段性变化,国内形成相对稳定的科研团体及研究机构;《中国预防兽医学报》发文量最多,被引用总频次和下载总量均位居首位,且前15名高被引文章中有6篇发表在《中国预防兽医学报》;近20年国内多杀性巴氏杆菌研究领域内分离鉴定、防治、诊断等关键词共现频次最高。表明近20年国内多杀性巴氏杆菌研究领域发展速度较快,研究热点较多,新型基因疫苗将会成为未来主要的研究热点。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌(pasteurella multocida) 研究 文献计量分析 CiteSpace可视化软件 数据可视化分析
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牡丹籽蛋白酶解产物对禽多杀性巴氏杆菌ptfA基因DNA疫苗免疫效果的影响 被引量：1
15
作者 杜珍奇 宫强 +5 位作者 牛明福 秦翠丽 任国艳 马丽苹 伍家发 张彬 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1053-1058,共6页
为研究牡丹籽蛋白酶解产物对禽多杀性巴氏杆菌(Pm) ptfA基因DNA疫苗免疫效果的影响,本研究以牡丹籽蛋白酶解产物为佐剂制备佐剂-DNA疫苗,分别以DNA疫苗和佐剂-DNA疫苗免疫鸡,同时设置牡丹籽蛋白酶解产物灌胃-DNA疫苗免疫组以及弱毒疫苗... 为研究牡丹籽蛋白酶解产物对禽多杀性巴氏杆菌(Pm) ptfA基因DNA疫苗免疫效果的影响,本研究以牡丹籽蛋白酶解产物为佐剂制备佐剂-DNA疫苗,分别以DNA疫苗和佐剂-DNA疫苗免疫鸡,同时设置牡丹籽蛋白酶解产物灌胃-DNA疫苗免疫组以及弱毒疫苗、pcDNA3.1(+)空载体和PBS对照组。每两周免疫一次,共免疫3次。间接ELISA检测免疫后鸡血清特异性抗体水平,MTT法检测免疫鸡外周血淋巴细胞增殖情况,双抗夹心ELISA检测鸡IL-2和IL-4的分泌情况。三免2周后以强毒菌株CVCC474 (5 LD50/只)攻毒,计算强毒攻击后各组鸡的存活数及保护率。结果显示,佐剂-DNA疫苗组和灌胃组鸡的血清特异性抗体水平与DNA疫苗组相比无显著差异(p>0.05)。三免后,佐剂-DNA疫苗组和灌胃组鸡的SI值和IL-4水平显著高于DNA疫苗组(p<0.05)。二免和三免后,佐剂-DNA疫苗组和灌胃组鸡的IL-2水平明显高于DNA疫苗组(p<0.05),且为免疫鸡提供的保护率高于DNA疫苗,其中以牡丹籽蛋白酶解产物为佐剂时效果较好,但均不及弱毒疫苗。表明预先灌胃牡丹籽蛋白酶解产物或以其为佐剂均可在一定程度上增强ptfA基因DNA疫苗的免疫效果。本研究为Pm DNA疫苗的研究及牡丹籽蛋白酶解产物在疫苗佐剂中的应用提供一定的参考。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 牡丹籽蛋白酶解产物 ptfA基因DNA疫苗 免疫效果
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禽多杀性巴氏杆菌PCR检测方法的初步建立 被引量：3
16
作者 闫瑞雪 罗青平 +3 位作者 汪辉 董俊 孔令严 刘国平 《湖北畜牧兽医》 2015年第2期5-7,共3页
禽多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,PM)是引起禽霍乱的一种病原菌,能快速引起家禽的败血症等一系列病症,给我国的家禽业造成了巨大的经济损失。试验通过在Gene Bank中查询禽多杀性巴氏杆菌的全基因组序列,从而找到PM的保守序列,运... 禽多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,PM)是引起禽霍乱的一种病原菌,能快速引起家禽的败血症等一系列病症,给我国的家禽业造成了巨大的经济损失。试验通过在Gene Bank中查询禽多杀性巴氏杆菌的全基因组序列,从而找到PM的保守序列,运用Primer5设计引物,常规PCR后得到目的核酸扩增产物。经过敏感性、特异性、干扰性等试验确定了该方法的特异性和稳定性。结果证明该方法特异性强,敏感性高,干扰性极低,并且与生化鉴定得出的结果有较高的符合率。该方法简单易操作,适合广泛应用于临床以检测禽多杀性巴氏杆菌病。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌(pasteurella multocida pM) pCR检测 敏感性 特异性 干扰性
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禽源多杀性巴氏杆菌毒力基因多重PCR检测方法的建立 被引量：1
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作者 何贤发 冯方东 +4 位作者 徐一凡 高博 施文文 薛梦琦 郭伟娜 《动物医学进展》 北大核心 2018年第4期13-18,共6页
为建立多重PCR方法用于禽源多杀性巴氏杆菌中毒力基因的检测,对禽源多杀性巴氏杆菌分离株MD-1的9个毒力基因进行PCR扩增及敏感性测定,然后通过多个基因的组合得到5种多重PCR体系,并从中筛选合适的多重PCR体系,测定其特异性、敏感性和重... 为建立多重PCR方法用于禽源多杀性巴氏杆菌中毒力基因的检测,对禽源多杀性巴氏杆菌分离株MD-1的9个毒力基因进行PCR扩增及敏感性测定,然后通过多个基因的组合得到5种多重PCR体系,并从中筛选合适的多重PCR体系,测定其特异性、敏感性和重复性。结果显示,分离株MD-1中的9个毒力基因均可扩增出目的片段,敏感性测定结果表明,有的基因可检测至1.81×10~4 copies/μL的核酸。筛选出的4种多重PCR体系1、3或4、5均可用于其中6个毒力基因(pfhA、nanB、ompH、oma87、sodA、sodC)的检测,并且特异性较强,均能够扩增禽源多杀性巴氏杆菌分离株HN-1和CZ-6,而大肠埃希菌和沙门菌分离株均无扩增条带。多重PCR体系1、3、4可检测多杀性巴氏杆菌核酸的敏感性为1.81×10~6 copies/μL,多重PCR体系5甚至可检测至1.81×10~5 copies/μL,同时这4种多重PCR体系与单个毒力基因PCR检测的敏感性均一致。说明建立的禽源多杀性巴氏杆菌毒力基因的多重PCR检测方法对多杀性巴氏杆菌毒力基因的快速检测有参考价值。 展开更多
关键词 禽源多杀性巴氏杆菌 毒力基因 多重pCR 检测
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氟苯尼考对禽多杀性巴氏杆菌的抗菌后效应 被引量：9
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作者 张旭 王大菊 伍金娥 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期408-410,共3页
采用菌落计数法测定氟苯尼考对禽多杀性巴氏杆菌的体外抗菌药后效应（PAE）、抗菌后亚抑菌浓度效应（PA-SME）及亚抑菌浓度效应（SME）。结果显示：氟苯尼考在2～8MIC（μg／mL）范围内对禽多杀性巴氏杆菌的PAE为1．31～5．01h，PA-SME... 采用菌落计数法测定氟苯尼考对禽多杀性巴氏杆菌的体外抗菌药后效应（PAE）、抗菌后亚抑菌浓度效应（PA-SME）及亚抑菌浓度效应（SME）。结果显示：氟苯尼考在2～8MIC（μg／mL）范围内对禽多杀性巴氏杆菌的PAE为1．31～5．01h，PA-SME为1．66-24．20h，SME为0．05～1．31h；其PAE受药物浓度、细菌接触时间及接种量的影响。结果提示：临床应用氟苯尼考治疗禽多杀性巴氏杆菌病时，应结合药代动力学参数和MIC及PAE，制订给药方案。 展开更多
关键词 氟苯尼考 禽多杀性巴氏杆菌(p.multocida) 抗菌药后效应(pAE) 抗菌后亚抑制浓度效应(pA-SME) 亚抑菌浓度效应(SME)
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菊粉作为佐剂可增强禽多杀性巴氏杆菌ptfA基因DNA疫苗的免疫效果 被引量：2
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《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期745-745,共1页
由禽多杀性巴氏杆菌引起的禽霍乱是影响禽类健康的重要疫病之一,给养禽业带来了较大的经济损失,因此需要采取积极有效的措施来预防和控制该病。目前临床上用于预防该病的疫苗仍然以传统的弱毒活疫苗和灭活疫苗为主,但禽多杀性巴氏杆菌... 由禽多杀性巴氏杆菌引起的禽霍乱是影响禽类健康的重要疫病之一,给养禽业带来了较大的经济损失,因此需要采取积极有效的措施来预防和控制该病。目前临床上用于预防该病的疫苗仍然以传统的弱毒活疫苗和灭活疫苗为主,但禽多杀性巴氏杆菌抗原结构较为复杂,且易发生变异,导致目前商品化弱毒疫苗的免疫效果并不是特别理想。弱毒活苗还存在免疫期较短、免疫保护力偏低、局部及全身的反应偏大。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 抗原结构 免疫效果 弱毒疫苗 DNA疫苗 免疫期 免疫保护力 禽霍乱
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艾叶等20种中药对禽多杀性巴氏杆菌的体外抗菌活性 被引量：22
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作者 曲径 殷中琼 +3 位作者 贾仁勇 彭练慈 康帅 李莉 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期91-94,共4页
通过乙醇回流、水煎煮和超声波等方法提取艾叶等20种中药的有效成分,采用二倍稀释法测定其对禽多杀性巴氏杆菌（C48-1,血清型A∶1）的体外抗菌活性;并研究抗菌活性较强的几味中药的体外联合抑菌效果.结果显示,艾叶、黄连、黄柏、秦皮、... 通过乙醇回流、水煎煮和超声波等方法提取艾叶等20种中药的有效成分,采用二倍稀释法测定其对禽多杀性巴氏杆菌（C48-1,血清型A∶1）的体外抗菌活性;并研究抗菌活性较强的几味中药的体外联合抑菌效果.结果显示,艾叶、黄连、黄柏、秦皮、地榆、虎杖6种中药提取物对巴氏杆菌的最低抑菌浓度值（MIC）范围在6.25-50mg/mL;赤芍、何首乌、茵陈、射干、甘草、蒲公英、白鲜皮7种中药提取物的MIC 值范围在50-100mg/mL;金银花、柴胡、板蓝根、夏枯草、穿心莲、知母、苦参7种中药提取物的MIC值大于100mg/mL.联合抑菌试验结果表明,黄连、黄柏、秦皮、虎杖和艾叶的联合抑菌指数（FICI）≤0.5,黄柏、秦皮、黄连和虎杖的联合抑菌指数（FICI）≥2;秦皮、地榆和黄柏的联合抑菌指数（FICI）≥2.通过以上数据可以看出,黄连、黄柏、地榆、艾叶对巴氏杆菌均具有较好的体外抗菌活性;黄连、黄柏、地榆和艾叶为相加、协同作用;地榆和黄柏为拮抗作用. 展开更多
关键词 中药提取物 禽多杀性巴氏杆菌 抗菌活性
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