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禽分枝杆菌副结核亚种重组蛋白r22-ag85B的表达及纯化被引量：2: 1; 作者杨金国王聃 +10 位作者刘慧芳杜艳芬司微赵海玲林靖凯王春来倪红波赫明雷彭玮赵福广刘思国《中国动物传染病学报》 CAS 2009年第2期59-62,共4页; 为表达并纯化禽分枝杆菌副结核亚种主要抗原基因的串联重组蛋白r22-ag85B,期望研制出一种新型副结核病疫苗,以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增了22KD基因和ag85B基因。采用重叠延伸剪接PCR技术(SOE-PCR)获得了融... 展开更多; 关键词禽分枝杆菌副结核亚种 22KD基因 ag85B基因重叠延伸剪接技术重组表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

多重PCR对禽分枝杆菌亚种鉴定的初步应用被引量：3: 2; 作者张阁彭永 +4 位作者刘国权蒋卉冯宇朱良全丁家波《中国兽药杂志》北大核心 2017年第10期11-17,共7页; 为建立禽分枝杆菌多重PCR鉴定方法,根据国外报道的诊断方法设计4对特异性引物,选用我国禽结核参考菌株(CVCC 68201)基因组DNA为模板,优化了退火温度,测定了DNA最小检测量,并进行了特异性检验。采用优化好的多重PCR体系,对国家兽医微生... 展开更多; 关键词禽分枝杆菌亚型鉴定多重PCR; 在线阅读下载PDF 职称材料

禽分枝杆菌副结核亚种hsp65与鹅副黏病毒HN融合基因真核表达载体的构建与表达: 3; 作者么乃全李淑君 +6 位作者姜秀云马红霞高云航王春芳胡静涛徐凤宇胡桂学《中国兽药杂志》 2014年第4期5-10,共6页; 为探索禽分枝杆菌副结核亚种(MAP)的热休克蛋白65(hsp65)对鹅副黏病毒(GPMV)血凝素神经氨酸酶(HN)的分子佐剂作用及构建GPMV DNA疫苗,针对GPMV的HN基因和MAP的hsp65基因设计引物,PCR克隆扩增两个基因,分别将二者先后与真核表达载体pVAX... 展开更多; 关键词鹅副黏病毒血凝素神经氨酸酶禽分枝杆菌副结核亚种热休克蛋白65 构建表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

结核分枝杆菌复合群、副结核分枝杆菌和禽分枝杆菌禽亚种多重TaqMan荧光定量PCR方法的建立及初步应用被引量：5: 4; 作者蔡珠明党光辉 +6 位作者臧鑫鑫邵明珠唐阳阳鹿萍崔莹莹崔子寅刘思国《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期51-59,共9页; 结核分枝杆菌复合群(MTBC)、包括结核分枝杆菌(MTB)、牛分枝杆菌(MB)、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌等;非结核分枝杆菌(NTM)中禽分枝杆菌(MA)是自然界常见的动物致病菌,包含4个亚种,分别为禽分枝杆菌禽亚种(MAA)、禽分枝杆菌人/猪亚种(M... 展开更多; 关键词结核分枝杆菌复合群副结核分枝杆菌禽分枝杆菌禽亚种多重Taq Man荧光定量PCR; 在线阅读下载PDF 职称材料

应用PPA—ELISA检测鸡血清中禽分枝杆菌抗体的研究: 5; 作者卫广森汪广荫朴范泽《黑龙江八一农垦大学学报》 1992年第1期99-104,共6页; 用禽型提纯结核菌素(PPD)作包被抗原,建立了PPA—ELISA检测鸡结核病血清抗体的程序。筛选最佳包被抗原浓度为25μg/ml,待检血清稀释度为1:40倍,兔抗鸡IgG血清稀释度为1:800倍。检测了30份结核病鸡血清和30份健康鸡血清。两者OD值分别为x... 展开更多; 关键词检测鸡禽分枝杆菌血清抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

四种重要致病性分枝杆菌DHPLC检测鉴别方法的建立被引量：8: 6; 作者陈茹毕英佐 +6 位作者刘志玲刘志辉马静云曾碧健吴晓薇周科林志雄《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期41-45,52,共6页; 目的运用多重核酸扩增（PCR）联合变性高效液相色谱（denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC）分析技术原理,针对结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、禽分枝杆菌以及副结核分枝杆菌建立多重PCR-DHPLC快速检测方法,实现同时... 展开更多; 关键词变性高效液相色谱结核分枝杆菌牛分枝杆菌禽分枝杆菌副结核分枝杆菌多重PCR; 在线阅读下载PDF 职称材料

雉鸡结核平板凝集试验方法的研究被引量：3: 7; 作者程世鹏钱国成 +3 位作者王克坚林伟严忠诚李国君《特产研究》 1989年第1期1-4,共4页; 本文首次报道应用平板凝集试验方法诊断雉鸡结核病。用禽型快速平板凝集反应抗原,检测雉鸡血清中的抗结核杆菌的抗体。并证明了本方法特异性强,敏感性高,检出率高、速度快、简便易行,适用于现场大批检疫。从而解决了雉鸡生前不能诊断的... 展开更多; 关键词平板凝集试验血清学诊断方法方法特异性禽型分枝杆菌人工感染凝集反应鸡白痢血清型大群标准阳性血清; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名禽分枝杆菌副结核亚种重组蛋白r22-ag85B的表达及纯化被引量：2: 1; 作者杨金国王聃刘慧芳杜艳芬司微赵海玲林靖凯王春来倪红波赫明雷彭玮赵福广刘思国; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室吉林农业大学生命科学学院延边大学; 出处《中国动物传染病学报》 CAS 2009年第2期59-62,共4页; 文摘为表达并纯化禽分枝杆菌副结核亚种主要抗原基因的串联重组蛋白r22-ag85B,期望研制出一种新型副结核病疫苗,以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增了22KD基因和ag85B基因。采用重叠延伸剪接PCR技术(SOE-PCR)获得了融合基因22-ag85B,将基因连接于表达载体pET32a(+),构建了重组质粒pET22-ag85B。将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG(终浓度1mmol/L)诱导后对表达产物进行Western blot检测。检测结果显示,成功表达并纯化了重组蛋白r22-ag85B,其分子质量约为65ku。Western blot检测表明此蛋白具有良好的免疫学活性。禽分枝杆菌副结核亚种22-ag85B重组蛋白的成功表达及纯化为副结核病疫苗的研究工作奠定了基础。; 关键词禽分枝杆菌副结核亚种 22KD基因 ag85B基因重叠延伸剪接技术重组表达; Keywords Mycobacterium avium subsp, paratuberculosis 22KD gene ag85B gene splicing by overlapping extension （SOE） recombinant expression; 分类号 S852.618 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名多重PCR对禽分枝杆菌亚种鉴定的初步应用被引量：3: 2; 作者张阁彭永刘国权蒋卉冯宇朱良全丁家波; 机构中国兽医药品监察所山东农业大学动物科技学院; 出处《中国兽药杂志》北大核心 2017年第10期11-17,共7页; 基金国家重点研发计划(2016YFD0500902); 文摘为建立禽分枝杆菌多重PCR鉴定方法,根据国外报道的诊断方法设计4对特异性引物,选用我国禽结核参考菌株(CVCC 68201)基因组DNA为模板,优化了退火温度,测定了DNA最小检测量,并进行了特异性检验。采用优化好的多重PCR体系,对国家兽医微生物菌种保藏中心保存的禽分枝杆菌标准菌株进行检测和分类。实验结果表明,禽结核参考菌株(CVCC 68201)能很好的扩增出577 bp(IS901基因片段)、385 bp(IS1245基因片段)和140 bp(dna J基因片段)三条目的条带,基因组DNA的最小检测量为0.38 ng/μL,目的条带在退火温度50℃~62℃之间均能得到有效扩增。对23株禽分枝杆菌菌株检测,并设立牛分枝杆菌作为阴性对照,最终将禽分枝杆菌菌株分为三大类:禽亚种/森林土壤亚种、副结核亚种、人猪亚种,与国家兽医微生物菌种保藏中心的分类结果相比不仅一致且更加详尽而有临床意义。因此,基于分子生物学方法建立的多重PCR方法可以对禽分枝杆菌亚型进行快速鉴定并对禽结核病的诊断提供参考。; 关键词禽分枝杆菌亚型鉴定多重PCR; Keywords Mycobacterium avium subtype identification muhiplex PCR; 分类号 S852.6 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名禽分枝杆菌副结核亚种hsp65与鹅副黏病毒HN融合基因真核表达载体的构建与表达: 3; 作者么乃全李淑君姜秀云马红霞高云航王春芳胡静涛徐凤宇胡桂学; 机构吉林农业大学动物科技学院吉林农业大学动物生产及产品质量安全教育部重点实验室吉林农业大学生命科学院; 出处《中国兽药杂志》 2014年第4期5-10,共6页; 基金吉林省教育厅"十二五"科学技术研究项目(201149 201139) +1 种基金国家星火计划课题(2012GA660003) 吉林省科技厅项目(20040206-2-2); 文摘为探索禽分枝杆菌副结核亚种(MAP)的热休克蛋白65(hsp65)对鹅副黏病毒(GPMV)血凝素神经氨酸酶(HN)的分子佐剂作用及构建GPMV DNA疫苗,针对GPMV的HN基因和MAP的hsp65基因设计引物,PCR克隆扩增两个基因,分别将二者先后与真核表达载体pVAX1连接,构建了pVAX1-HN、pVAX1-hsp65-HN,并通过PCR、酶切和序列鉴定所获重组质粒;应用脂质体法将其转染至Marc-145细胞,RT-PCR和间接免疫荧光试验证实hsp65和HN在Marc-145细胞中获得了表达。本研究为制备新型GPMV DNA疫苗及探索hsp65在DNA疫苗中的应用奠定了基础。; 关键词鹅副黏病毒血凝素神经氨酸酶禽分枝杆菌副结核亚种热休克蛋白65 构建表达; Keywords goose paramyxovirus HN Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis hsp65 construction expression; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名结核分枝杆菌复合群、副结核分枝杆菌和禽分枝杆菌禽亚种多重TaqMan荧光定量PCR方法的建立及初步应用被引量：5: 4; 作者蔡珠明党光辉臧鑫鑫邵明珠唐阳阳鹿萍崔莹莹崔子寅刘思国; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队吉林农业大学动物科技学院; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期51-59,共9页; 基金新疆生产建设兵团重点领域科技攻关计划“兵团牛羊集约化养殖场幼畜高发疫病病原库建立”项目(2019AB029) 国家自然科学基金(32002256、31772767)。; 文摘结核分枝杆菌复合群(MTBC)、包括结核分枝杆菌(MTB)、牛分枝杆菌(MB)、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌等;非结核分枝杆菌(NTM)中禽分枝杆菌(MA)是自然界常见的动物致病菌,包含4个亚种,分别为禽分枝杆菌禽亚种(MAA)、禽分枝杆菌人/猪亚种(MAH)、禽分枝杆菌副结核亚种/副结核分枝杆菌(MAP)和禽分枝杆菌森林土壤亚种(MAS)。为建立MTBC、MAP和MAA的多重荧光定量PCR检测方法,本研究基于MTBC、MAP和MAA的特异性基因devR、F57和IS901分别设计引物及探针,通过优化各反应条件,建立了一种可同时检测3种分枝杆菌的多重Taq Man荧光定量PCR方法。特异性试验结果显示,该方法对MTB、MB、MAP、MAA和MAS检测为阳性,对其他畜禽病原菌,包括MAH、13种NTM和7种非分枝杆菌检测结果均为阴性,特异性较强。敏感性试验结果显示,该方法对MB、MAP和MAA重组质粒标准品的检测限均为1.0拷贝/μL,敏感性较高;重复性试验结果显示,批内与批间重复性试验变异系数均小于2.5%,重复性较好。利用该方法检测体外模拟污染(MB、MAP和MAA菌液浓度分别为1.0×10^(3)cfu/mL~1.0×10^(0)cfu/mL)的27份牛抗凝血和12份牛淋巴结组织样品,确定该方法对3种菌的检测限,结果显示该方法对3种菌的检测限均为1.0 cfu/mL~10.0 cfu/mL。将浓度为1.0×10^(6)cfu/mL的MB、MAP和MAA菌液分别单一、两两混合、三种菌混合感染BALB/c小鼠,5 d后,剖杀各组小鼠并取各组织及血液样品,同时采用该方法、常规单一PCR及细菌分离培养方法检测,比较三者的检测结果。结果显示,多重荧光定量PCR方法对不同感染组小鼠的各组织样品检出率为98.1%(212/216),常规单一PCR方法的检出率为81.5%(176/216),细菌分离培养的检出率为52.8%(114/216),多重荧光定量PCR与常规单一PCR的阳性符合率均为100.0%(176/176),与细菌分离培养鉴定结果的阳性符合率均为100.0%(114/114)。本研究首次建立了能够同时检测MTBC、MAP和MAA的Taq Man多重荧光定量PCR方法,其特异性强、敏感性高、重复性及稳定性好,检测性能强,可以用于临床各种样品的检测,为这3种病原的快速检测和流行病学调查提供了技术手段。; 关键词结核分枝杆菌复合群副结核分枝杆菌禽分枝杆菌禽亚种多重Taq Man荧光定量PCR; Keywords Mycobacterium tuberculosis complex Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis Mycobacterium avium subsp.avium multiplex IhgMan fluorescent quantitative PCR; 分类号 S852.61 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名应用PPA—ELISA检测鸡血清中禽分枝杆菌抗体的研究: 5; 作者卫广森汪广荫朴范泽; 出处《黑龙江八一农垦大学学报》 1992年第1期99-104,共6页; 文摘用禽型提纯结核菌素(PPD)作包被抗原,建立了PPA—ELISA检测鸡结核病血清抗体的程序。筛选最佳包被抗原浓度为25μg/ml,待检血清稀释度为1:40倍,兔抗鸡IgG血清稀释度为1:800倍。检测了30份结核病鸡血清和30份健康鸡血清。两者OD值分别为x0.345和x0.086,P/N值为4.0(P<0.01)。; 关键词检测鸡禽分枝杆菌血清抗体; Keywords Avian tuberculosis mycobacterium Serum Antibody; 分类号 S858.314.4 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名四种重要致病性分枝杆菌DHPLC检测鉴别方法的建立被引量：8: 6; 作者陈茹毕英佐刘志玲刘志辉马静云曾碧健吴晓薇周科林志雄; 机构广东出入境检验检疫局华南农业大学广州市胸科医院; 出处《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期41-45,52,共6页; 基金国家质检总局科技项目(2006IK019); 文摘目的运用多重核酸扩增（PCR）联合变性高效液相色谱（denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC）分析技术原理,针对结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、禽分枝杆菌以及副结核分枝杆菌建立多重PCR-DHPLC快速检测方法,实现同时检测鉴别四种重要致病性分枝杆菌。方法根据四种分枝杆菌特异基因序列分别设计菌种特异核酸扩增引物,通过筛选优化试验建立四重核酸扩增体系,对核酸扩增产物采用DHPLC设备进行检测分析,每一菌种的核酸扩增产物分别形成DHPLC特征峰图。对结核分枝杆菌等51株分枝杆菌标准株和分离株样品以及沙门氏菌等22株常见微生物样品进行特异性检测试验对四种分枝杆菌特异的核酸扩增产物分别制备克隆质粒,通过对梯度稀释的阳性质粒的检测试验,进行多重PCR-DHPLC灵敏度测试对疑似病人痰液样品和疑似发病牛的组织样品进行检测,并与细菌分离培养法进行比较以验证临床检测效果。结果该方法能快速检测鉴别上述四种分枝杆菌,检测灵敏度达到102~103基因拷贝,从131份疑似病人临床样品中检出91份结核分枝杆菌阳性,从40份来自疑似发病牛群的临床样品中检出31份牛分枝杆菌阳性,检出率均高于细菌分离培养法。结论研究表明所建立的多重PCR-DHPLC方法能快速检测鉴别四种重要致病性分枝杆菌,为人畜结核、副结核病诊断提供一种新型分子生物学技术手段。; 关键词变性高效液相色谱结核分枝杆菌牛分枝杆菌禽分枝杆菌副结核分枝杆菌多重PCR; Keywords denaturing high-performance liquid chromatography Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium bovis Mycobacterium avium Mycobacterium paratuberculosis multiplex PCR; 分类号 R535 [医药卫生—内科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名雉鸡结核平板凝集试验方法的研究被引量：3: 7; 作者程世鹏钱国成王克坚林伟严忠诚李国君; 机构中国农业科学院特产研究所; 出处《特产研究》 1989年第1期1-4,共4页; 文摘本文首次报道应用平板凝集试验方法诊断雉鸡结核病。用禽型快速平板凝集反应抗原,检测雉鸡血清中的抗结核杆菌的抗体。并证明了本方法特异性强,敏感性高,检出率高、速度快、简便易行,适用于现场大批检疫。从而解决了雉鸡生前不能诊断的难题,为防治雉鸡结核提供了可靠的血清学诊断方法。; 关键词平板凝集试验血清学诊断方法方法特异性禽型分枝杆菌人工感染凝集反应鸡白痢血清型大群标准阳性血清; 分类号 S [农业科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	禽分枝杆菌副结核亚种重组蛋白r22-ag85B的表达及纯化	杨金国王聃刘慧芳杜艳芬司微赵海玲林靖凯王春来倪红波赫明雷彭玮赵福广刘思国	《中国动物传染病学报》 CAS	2009	2	在线阅读下载PDF 职称材料
2	多重PCR对禽分枝杆菌亚种鉴定的初步应用	张阁彭永刘国权蒋卉冯宇朱良全丁家波	《中国兽药杂志》北大核心	2017	3	在线阅读下载PDF 职称材料
3	禽分枝杆菌副结核亚种hsp65与鹅副黏病毒HN融合基因真核表达载体的构建与表达	么乃全李淑君姜秀云马红霞高云航王春芳胡静涛徐凤宇胡桂学	《中国兽药杂志》	2014	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	结核分枝杆菌复合群、副结核分枝杆菌和禽分枝杆菌禽亚种多重TaqMan荧光定量PCR方法的建立及初步应用	蔡珠明党光辉臧鑫鑫邵明珠唐阳阳鹿萍崔莹莹崔子寅刘思国	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2023	5	在线阅读下载PDF 职称材料
5	应用PPA—ELISA检测鸡血清中禽分枝杆菌抗体的研究	卫广森汪广荫朴范泽	《黑龙江八一农垦大学学报》	1992	0	在线阅读下载PDF 职称材料
6	四种重要致病性分枝杆菌DHPLC检测鉴别方法的建立	陈茹毕英佐刘志玲刘志辉马静云曾碧健吴晓薇周科林志雄	《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心	2010	8	在线阅读下载PDF 职称材料
7	雉鸡结核平板凝集试验方法的研究	程世鹏钱国成王克坚林伟严忠诚李国君	《特产研究》	1989	3	在线阅读下载PDF 职称材料