禽传染性支气管炎病毒通用型RT-qPCR检测方法的建立及应用

1

作者 王阳 李佩 +7 位作者 黄中林 封莹洁 孟鸽 王莹 蔡成杰 刘华雷 李阳 梁立滨 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第3期252-257,共6页

为建立一种快速、高效、准确检测禽传染性支气管炎病毒(IBV)的荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)方法,本研究以IBV分离株X1475基因组为模板,经RT-PCR扩增其3'端非编码区(3'UTR)部分基因,构建重组质粒pEASYT5-3'UTR作为质粒标准品。... 为建立一种快速、高效、准确检测禽传染性支气管炎病毒(IBV)的荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)方法,本研究以IBV分离株X1475基因组为模板,经RT-PCR扩增其3'端非编码区(3'UTR)部分基因,构建重组质粒pEASYT5-3'UTR作为质粒标准品。利用该重组质粒标准品建立了TaqMan RT-qPCR方法的标准曲线,并经反应条件优化建立检测IBV的RT-qPCR方法。结果显示,重组质粒标准品的拷贝数与Ct值均呈良好的线性关系,R^(2)为0.998,扩增效率为1.01。该方法各反应条件优化结果为10 pmol/μL上下游引物各0.6μL,探针0.8μL,退火温度56℃。利用该方法检测各基因型IBV、禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)、传染性喉气管炎病毒(ILTV)等常见禽源病毒,结果显示,该方法仅能特异性检测各基因型IBV,而与其他常见禽源病毒均无交叉反应,该方法特异性强;将重组质粒标准品10倍倍比稀释至1.0×10^(8)拷贝/μL~1.0×10^(1)拷贝/μL后分别作为模板,利用本研究建立的RT-qPCR检测,评估该RT-qPCR方法的敏感性试验,结果显示,该方法对质粒标准品的检测限为1.0×10^(3)拷贝/μL,敏感性是常规RT-PCR方法的100倍;以5个不同浓度重组质粒标准品作为模板,于同一时间和不同时间进行该RT-qPCR方法的重复性检测,结果显示批内和批间重复性试验的变异系数均小于2%。利用该方法与目前国标推荐的RT-qPCR方法分别对200份临床禽咽拭子样品进行检测,结果显示本研究建立的RT-qPCR方法的阳性检出率为15%(30/200),国标推荐的RT-qPCR方法的阳性检出率为12.5%(25/200),二者的总符合率为97.6%。综上,本研究建立的RT-qPCR方法操作简单、特异性强、灵敏性高,对国内流行的各种基因型的IBV均能检出,具有良好的应用前景,可应用于IBV的日常监测与检测。 展开更多

关键词 禽传染性支气管炎 荧光定量RT-PCR 非编码区

在线阅读 下载PDF 职称材料

黄芪多糖对鸡免疫禽传染性支气管炎弱毒疫苗免疫效果的影响 被引量：2

2

作者 乔海英 杨柳 +4 位作者 高湛翱 胡念之 王伟霞 李信涛 张鹏举 《饲料研究》 CAS 北大核心 2024年第3期36-40,共5页

试验探究黄芪多糖(APS)对禽传染性支气管炎弱毒疫苗的免疫调节作用,以期发掘黄芪多糖用作疫苗佐剂的应用潜力。将120只14日龄蛋鸡随机分为3组,每组4个重复,每个重复10只蛋鸡,分别设置为APS+H120联合免疫组、H120疫苗组以及PBS阴性对照... 试验探究黄芪多糖(APS)对禽传染性支气管炎弱毒疫苗的免疫调节作用,以期发掘黄芪多糖用作疫苗佐剂的应用潜力。将120只14日龄蛋鸡随机分为3组,每组4个重复,每个重复10只蛋鸡,分别设置为APS+H120联合免疫组、H120疫苗组以及PBS阴性对照组。各组蛋鸡共进行3次免疫,每次间隔2周,每次鼻腔接种100μL/只。最后一次免疫14 d后经鼻腔攻毒禽传染性支气管炎病毒M41株,观察鸡的临床症状,检测肺脏和肝脏载毒量。结果显示,与H120疫苗组相比,APS+H120疫苗联合免疫能够诱导14日龄蛋鸡产生传染性支气管炎病毒(IBV)特异性免疫球蛋白G(IgG)和分泌型免疫球蛋白A(sIgA),有效保护蛋鸡抵抗同种异源毒株的攻击,蛋鸡存活率为100%。攻毒后APS+H120组蛋鸡未出现禽传染性支气管炎典型临床症状,蛋鸡生产性能未受到影响。研究表明,APS对禽传染性支气管炎H120弱毒疫苗的免疫效果具有促进作用。 展开更多

关键词 禽传染性支气管炎 H120弱毒疫苗 黄芪多糖 蛋鸡 免疫 生长性能

在线阅读 下载PDF 职称材料

禽传染性支气管炎诊断方法研究进展 被引量：1

3

作者 封莹洁 孟鸽 +8 位作者 李沈童 王阳 尚佳静 罗娟 于晓慧 蒋文明 刘华雷 范春艳 李阳 《中国动物检疫》 CAS 2024年第12期83-88,共6页

禽传染性支气管炎(avian infectious bronchitis,IB)是一种急性、高度接触性呼吸道传染病,可侵害不同年龄和品种的鸡,给家禽业造成严重经济损失,因此建立快速有效的诊断方法非常重要。随着诊断技术的不断发展,IB诊断方法变得更加灵敏、... 禽传染性支气管炎(avian infectious bronchitis,IB)是一种急性、高度接触性呼吸道传染病,可侵害不同年龄和品种的鸡,给家禽业造成严重经济损失,因此建立快速有效的诊断方法非常重要。随着诊断技术的不断发展,IB诊断方法变得更加灵敏、特异、简单和适合大规模筛查。目前已开发出多种诊断方法,涉及病毒分离鉴定、酶联免疫吸附试验(ELISA)等常规方法,以及聚合酶链式反应(PCR)和环介导等温扩增(LAMP)等分子学方法。ELISA方法具有良好的敏感性和特异性,荧光定量PCR的优势在于检测微量病毒RNA,具有更高的灵敏度,LAMP、重组酶辅助扩增(RAA)等方法可在短时间内完成检测,蛋白质微阵列方法可同时检测多种蛋白质。目前的诊断方法还无法全部满足简便、准确、灵敏和经济实用等要求,因此在实际应用中应该结合试验条件、操作经验等,采取最适宜的诊断方法,或者多种诊断方法联合应用。本文通过综述IB的病原学、病理学、血清学、分子学等诊断方法研究进展,以期为该病防控提供技术支持。 展开更多

关键词 禽传染性支气管炎 病原学诊断 病理学诊断 血清学诊断 分子生物学诊断

在线阅读 下载PDF 职称材料

2株重组禽传染性支气管炎病毒的分离鉴定及基因组序列分析

4

作者 李峰 谢宾 张帅 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3958-3969,共12页

【目的】了解禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的遗传变异情况。【方法】采集山东地区部分养殖场中疑似IBV感染鸡病料组织,接种SPF鸡胚进行病毒分离鉴定,利用二代测序技术进行全基因组测序鉴定,并基于全基因组序... 【目的】了解禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的遗传变异情况。【方法】采集山东地区部分养殖场中疑似IBV感染鸡病料组织,接种SPF鸡胚进行病毒分离鉴定,利用二代测序技术进行全基因组测序鉴定,并基于全基因组序列进行遗传进化和关键氨基酸位点分析。【结果】感染鸡剖检可见气管环出血,管腔内有黄色或黑黄色栓塞物等。从病料中共分离获得2株IBV,分别命名为SDJN和SDLY。相似性分析结果显示,分离株SDJN和SDLY与GⅠ-19基因型参考毒株相似性较高,核苷酸序列相似性为96.0%~97.3%,氨基酸序列相似性为94.9%~100%。氨基酸序列分析结果显示,2株IBV分离株与其他毒株相比存在多个氨基酸变异位点。系统进化树结果显示,分离株SDJN和SDLY与IBV GⅠ-19基因型参考毒株位于同一分支。重组分析结果显示,分离株SDJN和SDLY为多种基因型毒株的重组毒株,均以ck/CH/LDL/091022株为主要亲本毒株。【结论】本研究从山东地区分离得到2株IBV,2株分离株与GⅠ-19基因型毒株密切相关,是一种新型重组IBV毒株。研究结果为进一步研究IBV流行与进化及禽传染性支气管炎的防控奠定基础。 展开更多

关键词 禽传染性支气管炎病毒 分离 鉴定 全基因组 遗传进化分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

Viperin通过胆固醇影响禽传染性支气管炎病毒复制

5

作者 任丽娜 张愉 +4 位作者 张桃妮 卢彦澎 张冰莎 黄鉴妮 磨美兰 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第7期9-19,共11页

Viperin是一种干扰素诱导因子,具有广泛的抗病毒作用。为探究Viperin是否通过胆固醇发挥抗禽传染性支气管炎病毒(IBV)的作用,本试验通过消耗或添加细胞膜胆固醇,分析胆固醇对IBV复制的影响;并分别在细胞中过表达和干扰表达Viperin,评估V... Viperin是一种干扰素诱导因子,具有广泛的抗病毒作用。为探究Viperin是否通过胆固醇发挥抗禽传染性支气管炎病毒(IBV)的作用,本试验通过消耗或添加细胞膜胆固醇,分析胆固醇对IBV复制的影响;并分别在细胞中过表达和干扰表达Viperin,评估Viperin对细胞胆固醇含量和IBV复制的影响,并分析Viperin、胆固醇含量和IBV复制三者之间的关系。结果显示,在IBV感染后48 h,与IBV感染组相比较,使用5.0和10.0 mmol/L甲基-β-环糊精(MβCD)消耗细胞膜胆固醇后IBV复制被极显著抑制(P<0.001),添加5.0 mg/mL外源性胆固醇后IBV复制被极显著促进(P<0.001),消耗细胞膜胆固醇后再添加外源性胆固醇,IBV复制被抑制后恢复至接近正常水平(P>0.05);在IBV感染后24和48 h,与IBV感染组相比较,过表达Viperin可极显著降低细胞中胆固醇含量(P<0.001),并极显著抑制IBV复制(P<0.001);在IBV感染后6和48 h,与IBV感染组相比较,干扰表达Viperin可显著提高细胞中胆固醇含量(P<0.05或P<0.001);在IBV感染后24 h,与IBV感染组相比较,干扰表达Viperin可极显著促进IBV复制(P<0.001);在IBV感染后48 h,与IBV感染组相比较,过表达Viperin后再添加外源性胆固醇可恢复IBV复制(P>0.05)。结果表明,细胞膜中胆固醇水平与IBV复制密切相关,且Viperin可通过调节细胞胆固醇抑制IBV复制。本试验为寻找IBV新的抗病毒靶点提供理论依据和新思路。 展开更多

关键词 禽传染性支气管炎病毒 Viperin 胆固醇

在线阅读 下载PDF 职称材料

新城疫病毒、禽传染性支气管炎病毒与禽流感病毒三重RT-qPCR鉴别检测方法的建立与应用 被引量：1

6

作者 连聪 向国庆 +9 位作者 潘浩华 罗胜军 吕殿红 宋帅 贾春玲 牛瑞辉 郭素茵 李汝洪 邹永基 温肖会 《广东畜牧兽医科技》 2024年第3期48-53,共6页

新城疫、禽传染性支气管炎与禽流感是可引起禽类呼吸道症状相似的三种急性传染病,且存在混合感染。为建立新城疫病毒、禽传染性支气管炎病毒与禽流感病毒三重RT-qPCR检测方法,该研究对比了GenBank登录的新城疫病毒(NDV)L基因、禽传染性... 新城疫、禽传染性支气管炎与禽流感是可引起禽类呼吸道症状相似的三种急性传染病,且存在混合感染。为建立新城疫病毒、禽传染性支气管炎病毒与禽流感病毒三重RT-qPCR检测方法,该研究对比了GenBank登录的新城疫病毒(NDV)L基因、禽传染性支气管炎病毒(IBV)1a基因和禽流感病毒(AIV)NP基因,经分析选取保守序列设计了三套引物与探针,通过优化检测方法的反应体系,成功建立了可同时检测NDV、IBV和AIV的三重RT-qPCR方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行了评估。结果表明,该方法能够特异性检测出NDV、IBV和AIV,有较好的特异性;方法对三种病毒的最低检测限均为3.02×10^(2)copies/μL,有较高的敏感性;重复性实验结果显示批内与批间变异系数均不大于1.28%,有良好的重复性。使用本研究建立的方法对102份临床咽拭子进行检测,并与常规RT-PCR进行比较,总符合率为96.6%。本研究建立的三重RT-qPCR检测方法,特异性强,灵敏度高,可用于NDV、IBV、AIV三种病毒的检测。 展开更多

关键词 新城疫病毒 禽传染性支气管炎病毒 禽流感病毒 荧光RT-PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

禽传染性支气管炎脂质体、壳聚糖/DNA疫苗免疫效果比较研究 被引量：4

7

作者 李晓英 王红宁 +3 位作者 黄勇 柳萍 胡慧琼 白天 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1319-1322,共4页

将制备的禽传染性支气管炎脂质体／DNA疫苗和壳聚糖／DNA疫苗，分别以肌肉注射（i．m）和滴鼻、点眼（i．n）两种途径免疫健康雏鸡，以裸DNA疫苗为对照，采用流式细胞仪（FACS）及间接ELISA分别对免疫鸡外周血中CD4^＋、CD8^＋T淋巴细... 将制备的禽传染性支气管炎脂质体／DNA疫苗和壳聚糖／DNA疫苗，分别以肌肉注射（i．m）和滴鼻、点眼（i．n）两种途径免疫健康雏鸡，以裸DNA疫苗为对照，采用流式细胞仪（FACS）及间接ELISA分别对免疫鸡外周血中CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞数及特异性IBV血清抗体IgG的动态变化进行检测，并于免疫后35d进行攻毒，结果显示：（1）CD4^＋T淋巴细胞数，所有试验组在免疫后1～3周左右均高于对照组（P〈0．01或P〈0．05），各试验组间，脂质体／DNA疫苗肌肉注射途径在免疫后10d后高于壳聚糖／DNA疫苗，但仅在第15天差异显著（P〈0．05），而滴鼻、点眼途径则相反；（2）所有试验组CD8^＋T淋巴细胞数仅在免疫后第15天与对照组差异显著（P〈0．05），各试验组间无显著差异；（3）所有组间特异性IBV血清抗体IgG动态变化差异不显著；攻毒后脂质体／DNA疫苗肌肉注射组无鸡只死亡，其他试验组有4％或8％死亡率，均显著低于对照组（12％）。由此可见，脂质体和壳聚糖均为DNA疫苗良好的佐剂或载体，且脂质体／DNA疫苗肌肉注射的免疫效果优于壳聚糖／DNA疫苗。 展开更多

关键词 禽传染性支气管炎 DNA疫苗 脂质体 壳聚糖 细胞免疫 体液免疫

在线阅读 下载PDF 职称材料

禽传染性支气管炎病毒SAIBk株全基因组的分段克隆、测序及分析 被引量：4

8

作者 周生 王红宁 +2 位作者 唐梦君 黄勇 柳萍 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期72-77,共6页

根据GenBank上公布的IBV基因组序列，经多重比较后设计19对引物，用RT-PCR方法对禽传染性支气管炎病毒致肾病变型分离株SAIBk株的全基因组进行了分段扩增、克隆和序列测定。测序结果表明：SAIBk株基因组序列全长27520 bp，A＋T的含量占6... 根据GenBank上公布的IBV基因组序列，经多重比较后设计19对引物，用RT-PCR方法对禽传染性支气管炎病毒致肾病变型分离株SAIBk株的全基因组进行了分段扩增、克隆和序列测定。测序结果表明：SAIBk株基因组序列全长27520 bp，A＋T的含量占61．74％，具有典型的冠状病毒基因组结构。基因组内碱基的插入和缺失主要分布在3 220-3470位、20560-20810位、25310-25600位和27150—27220位。与GenBank上公布的5株IBV基因组序列Beaudette、Mass41、Ca199、BJ、KQ6的同源率分别为87．2％、87．6％、87．2％、85．6％和87．5％。SAIBk株基因组不同区域的同源性分析结果表明，3＇UTR和5＇UTR是基因组中最为保守的区域，同源率在90．9％～97．7％，而S1基因是基因组中变异最大的区域，同源率在74．8％～83．2％。系统进化分析结果表明SAIBk株与国内分离株S14、LX4、BJ的亲缘关系较近。 展开更多

关键词 禽传染性支气管炎病毒 致肾病变型 基因组 序列分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

我国禽传染性支气管炎病毒分子流行病学研究进展 被引量：6

9

作者 高明燕 姜逸 +4 位作者 程旭 俞燕 范建华 贾雪波 孟闯 《中国家禽》 北大核心 2023年第12期87-94,共8页

禽传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是由禽传染性支气管炎病毒(Infec-tiousbronchitisvirus,IBV)引起的雏鸡和成年鸡呼吸系统以及泌尿生殖道组织损伤和病变的急性、高度接触性疾病。虽然临床上广泛使用疫苗免疫防控该病,但由于... 禽传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是由禽传染性支气管炎病毒(Infec-tiousbronchitisvirus,IBV)引起的雏鸡和成年鸡呼吸系统以及泌尿生殖道组织损伤和病变的急性、高度接触性疾病。虽然临床上广泛使用疫苗免疫防控该病,但由于IBV基因组存在频繁的变异和重组,导致新基因型和血清型不断出现,从而造成我国鸡IB未能得到有效控制。文章详细介绍了基于IBVS1基因系统发育学建立的分型方法以及我国流行的IBV4个基因型、18个分支的来源、传播和流行现状,为IB防控和疫苗研发提供参考。 展开更多

关键词 禽传染性支气管炎病毒 分子流行病学 S1基因序列系统发育学分析 基因重组

在线阅读 下载PDF 职称材料

禽传染性支气管炎病毒S1基因植物表达载体的构建 被引量：2

10

作者 吴建祥 周继勇 +2 位作者 程丽琴 沈行燕 丁红梅 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期293-296,共4页

:以含传染性支气管炎病毒 ( ZJ971毒株 ) S1基因的质粒 PBS为模板 ,根据其序列设计引物进行PCR扩增 ,得到 1.7kb左右的 S1基因产物 ;用 Xbal I和 Bam HI酶切纯化 ,并在 T4 DNA连接酶的作用下 ,定向克隆到植物表达载体 PBI12 1中 ,PCR及... :以含传染性支气管炎病毒 ( ZJ971毒株 ) S1基因的质粒 PBS为模板 ,根据其序列设计引物进行PCR扩增 ,得到 1.7kb左右的 S1基因产物 ;用 Xbal I和 Bam HI酶切纯化 ,并在 T4 DNA连接酶的作用下 ,定向克隆到植物表达载体 PBI12 1中 ,PCR及酶切鉴定表明 。 展开更多

关键词 禽传染性支气管炎病毒 S1基因 植物表达载体 质粒PBS 酚切鉴定 三亲交配 定向克隆

在线阅读 下载PDF 职称材料

禽传染性支气管炎流行动态与防控对策 被引量：22

11

作者 张小荣 吴艳涛 《中国家禽》 北大核心 2016年第16期1-5,共5页

禽传染性支气管炎(Avian infectious bronchitis,IB)是由禽传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus,IBV)引起的鸡的一种急性、高度传染性的病毒性疾病。该病主要引起感染鸡呼吸道损伤,部分毒株可以引起严重的肾脏病变。... 禽传染性支气管炎(Avian infectious bronchitis,IB)是由禽传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus,IBV)引起的鸡的一种急性、高度传染性的病毒性疾病。该病主要引起感染鸡呼吸道损伤,部分毒株可以引起严重的肾脏病变。IBV也能在输卵管复制,成年母鸡感染后会对产蛋量和蛋品质造成较大影响,雏鸡感染后还会导致输卵管和卵巢发育异常,形成"假母鸡"。虽然疫苗免疫作为当前控制该病的最有效手段已被广泛应用于家禽生产,但长期以来该病在国内的流行并未得到有效控制,而且随着近年来我国家禽养殖规模的日益扩大,由该病所造成的损失也日益凸显,目前该病已经成为对我国养鸡业危害最严重的传染病之一。文章结合IBV分型技术、病原生物学特性和当前国内的流行动态对该病的防控对策进行简要的分析。 展开更多

关键词 禽传染性支气管炎 分型技术 流行病学 防控对策

在线阅读 下载PDF 职称材料

复方中药制剂防治禽传染性支气管炎研究 被引量：6

12

作者 杨明凡 张锋 +1 位作者 唐湛伟 苗舜尧 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第23期7172-7172,7174,共2页

[目的]为了进行中药复方制剂防治禽传染性支气管炎的试验。[方法]选择没有免疫接种过IB疫苗的30日龄健康公鸡150只,设计4组试验:第1组为健康对照组;第2组于攻毒前5 d在饲料中添加中药复方制剂;第3组于攻击强毒后2 d开始在饲料中添加该... [目的]为了进行中药复方制剂防治禽传染性支气管炎的试验。[方法]选择没有免疫接种过IB疫苗的30日龄健康公鸡150只,设计4组试验:第1组为健康对照组;第2组于攻毒前5 d在饲料中添加中药复方制剂;第3组于攻击强毒后2 d开始在饲料中添加该中药复方制剂;第4组为攻毒后不给药作为对照组;另设1组鸡只用于安全试验,研究中药复方制剂的防治效果。[结果]中药复方制剂用于防治禽传染性支气管炎疗效确切,且无毒副作用。[结论]该研究为中药复方制剂的推广应用提供了理论依据。 展开更多

关键词 中药复方制剂 禽传染性支气管炎 防治

在线阅读 下载PDF 职称材料

禽传染性支气管炎病毒分离株理化特性的研究 被引量：3

13

作者 杨帆 孙翔 +1 位作者 邓保国 何群力 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第23期9976-9976,10018,共2页

[目的]探讨禽传染性支气管炎病毒河南分离株IBV-HN05对各种理化因素的敏感性。[方法]IBV-HN05经过热、酸碱、胰蛋白酶、乙醚、氯仿、甲醛等理化因素处理后接种10日龄非免疫鸡胚,以EID50或鸡胚矮化为判断指标,确定各种理化因素对IBV-HN0... [目的]探讨禽传染性支气管炎病毒河南分离株IBV-HN05对各种理化因素的敏感性。[方法]IBV-HN05经过热、酸碱、胰蛋白酶、乙醚、氯仿、甲醛等理化因素处理后接种10日龄非免疫鸡胚,以EID50或鸡胚矮化为判断指标,确定各种理化因素对IBV-HN05的敏感性。[结果]IBV-HN05在56℃温度条件下45 min可被灭活,耐酸碱,pH值2.5和10.5的环境能存活3 h,对浓度1%胰蛋白酶有一定的耐受性,浓度20%乙醚作用24 h能部分被灭活,浓度5%氯仿和浓度1%甲醛作用30 min即可灭活该病毒。[结论]IBV的理化特性因毒株的不同而异。 展开更多

关键词 禽传染性支气管炎病毒 理化特性 研究

在线阅读 下载PDF 职称材料

禽传染性支气管炎病毒地方株N基因的克隆及序列分析

14

作者 周生 王红宁 +2 位作者 唐梦君 黄勇 柳萍 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第4期15-17,共3页

关键词 禽传染性支气管炎病毒 N基因 序列分析 地方株 分子流行病学 重大传染病 克隆 继发感染

在线阅读 下载PDF 职称材料

禽传染性支气管炎病毒多表位嵌合基因的构建和原核表达

15

作者 田浪 王红宁 +5 位作者 高荣 张安云 鲁丹 张云飞 王霆 康润敏 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第10期22-24,共3页

关键词 禽传染性支气管炎病毒 鸡传染性支气管炎病毒 原核表达 嵌合基因 多表位 接触性传染病 冠状病毒感染 经济损失

在线阅读 下载PDF 职称材料

禽传染性支气管炎病毒S1基因毕赤酵母表达载体的构建

16

作者 余祖华 王红宁 +2 位作者 周生 黄勇 丁轲 《中国家禽》 北大核心 2006年第21期14-16,19,共4页

本试验根据已公布的IBV株S1基因序列及pPIC9K表达载体序列,去掉由18个氨基酸构成的信号肽后,设计一对IBV S1基因表达片段的PCR引物,利用RT-PCR扩增得到了IBV四川分离株的S1基因片段,将该片段克隆到PMD18-T载体上,通过对所得到的重组质... 本试验根据已公布的IBV株S1基因序列及pPIC9K表达载体序列,去掉由18个氨基酸构成的信号肽后,设计一对IBV S1基因表达片段的PCR引物,利用RT-PCR扩增得到了IBV四川分离株的S1基因片段,将该片段克隆到PMD18-T载体上,通过对所得到的重组质粒进行酶切分析、菌落PCR鉴定,证明得到了含有目的基因片段的阳性重组质粒,测序分析片段长为1566bp,已经成功切除了由18个氨基酸构成的信号肽序列。将该基因亚克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K的SnaBⅠ和NotⅠ酶切位点,并通过菌落PCR、双酶切鉴定了该重组质粒的正确性,IBV S1基因毕赤酵母表达载体的构建为进一步利用毕赤酵母表达IBVS1蛋白提供了基础材料,并对表达产物的免疫原性和禽传染性支气管炎基因亚单位疫苗及特异性诊断抗原的研究打下了基础。 展开更多

关键词 禽传染性支气管炎 S1基因 毕赤酵母 表达载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

羊驼禽传染性支气管炎样病毒的分子流行病学分析

17

作者 张俊珍 董常生 范瑞文 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第1期14-15,共2页

关键词 禽传染性支气管炎病毒 冠状病毒科 流行病学分析 分子 羊驼 接触性传染病 mRNA 结构蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

禽传染性支气管炎核酸疫苗脂质体的制备及其理化性质的研究

18

作者 李淑梅 杨帆 刘兴友 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第10期2134-2135,共2页

采用改良的逆向蒸发法制备了禽传染性支气管炎病毒膜蛋白基因重组质粒pcDNA-M脂质体。电镜观察表明:该脂质体多呈球形的单室结构,脂质体粒径分布均匀,粒径范围在30～400nm,平均粒径120nm,主要粒径分布于50～150nm。重组质粒DNA在脂质体... 采用改良的逆向蒸发法制备了禽传染性支气管炎病毒膜蛋白基因重组质粒pcDNA-M脂质体。电镜观察表明:该脂质体多呈球形的单室结构,脂质体粒径分布均匀,粒径范围在30～400nm,平均粒径120nm,主要粒径分布于50～150nm。重组质粒DNA在脂质体的制备过程中保持了稳定性,并能抵抗DNA酶的水解破坏作用。 展开更多

关键词 禽传染性支气管炎病毒 膜蛋白基因 脂质体 理化性质

在线阅读 下载PDF 职称材料

中国禽传染性支气管炎病毒的遗传演化及时空传播分析 被引量：3

19

作者 范文胜 刘思伽 +7 位作者 邱深本 黄爱芳 王艳 刘敏芳 梅敏敏 陈新亮 韦平 磨美兰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2543-2554,共12页

对从GenBank数据库下载的所有传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)中国分离株之N基因序列进行分析,旨在探索其遗传变异规律和时空传播情况。通过生物信息学软件MEGA 6.0、RDP 4.95、SimPlot 3.5.1、BEAST v1.10.4、jmo... 对从GenBank数据库下载的所有传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)中国分离株之N基因序列进行分析,旨在探索其遗传变异规律和时空传播情况。通过生物信息学软件MEGA 6.0、RDP 4.95、SimPlot 3.5.1、BEAST v1.10.4、jmodeltest 2.1.7、Tracer v1.7.1、TempEst v1.5.1、FigTree v1.4.3以及SpreaD3 v0.9.7等对分离株分别进行系统进化树、基因重组、毒株溯源、种群动态和时空传播分析。系统进化树分析显示,国内IBV毒株分为6种基因型,以LX4型为主;重组分析发现,1株四川分离株N基因存在重组现象;贝叶斯最大分支置信树分析显示,中国IBV最可能起源于20世纪30年代初的辽宁省。贝叶斯谱系地理学分析显示,IBV毒株在国内存在多条传播路径并形成了3个流行中心:东北地区(黑龙江、辽宁和吉林)、华北和华东地区(河北、山东和江苏)以及华南地区(广东、广西),其中,山东最可能成为IBV的毒株来源库。本研究揭示了中国IBV的起源及其传播途径,N基因存在基因重组现象,提示有必要加强分离株N基因的分析,持续开展系统的分子流行病学研究。 展开更多

关键词 禽传染性支气管炎病毒 遗传变异 基因重组 起源 时空传播

在线阅读 下载PDF 职称材料

禽传染性支气管炎病毒S2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定 被引量：4

20

作者 李忠斐 周建卫 +4 位作者 张焕东 彭莉 颜焰 周继勇 廖敏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期942-950,共9页

为制备禽传染性支气管炎病毒(IBV) S2蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达系统表达并纯化重组S2蛋白,将其免疫BALB/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到4株能够稳定分泌S2蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1A7、4F12、4A7、4D1。亚类... 为制备禽传染性支气管炎病毒(IBV) S2蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达系统表达并纯化重组S2蛋白,将其免疫BALB/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到4株能够稳定分泌S2蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1A7、4F12、4A7、4D1。亚类鉴定结果显示4株MAb的重链均为Ig G1,轻链均为κ。采用间接ELISA法检测上清及腹水效价,结果显示MAb细胞上清效价均不低于1∶12 800,腹水效价均不低于1∶51 200。采用western blot检测制备的S2蛋白MAb与IBV感染鸡胚尿囊液后天然表达的S2蛋白的反应原性;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测IBV感染非洲绿猴肾细胞(Vero)后天然表达的S2蛋白的反应原性。Western blot结果显示,感染IBV的鸡胚尿囊液中出现了90 ku左右的特异性条带;IFA结果显示,感染IBV的Vero细胞中出现绿色荧光。以上结果表明,制备的S2蛋白MAb能够与天然表达的S2蛋白反应,反应原性较强。利用间接ELISA检测MAb与S2蛋白的亲和力,结果显示4株MAb对S2蛋白均有良好的亲和力。利用一系列表达部分重叠的重组S2片段并经western blot鉴定4株MAb识别的抗原表位,结果显示,1A7、4F12、4A7 MAb识别的抗原表位是^(69)VQINCLQYVCGSSLECRKLFQQ^(90),4D1MAb识别的抗原表位是^(175)YKKCTAGPLGTLKDLI^(190)。采用IFA检测MAb的中和活性,结果显示,4株MAb均不具有中和活性。通过western blot检测MAb的反应谱,结果显示,MAb均能够与所选不同基因型(GI-1、GI-7、GI-13、GI-19、GI-22、GI-23) IBV发生特异性反应,表明制备的MAb反应谱较广。本研究为进一步探究IBV S2蛋白的功能及病毒致病机制奠定了基础。 展开更多

关键词 禽传染性支气管炎病毒 S2蛋白 单克隆抗体 抗原表位

在线阅读 下载PDF 职称材料