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稳定表达禽β防御素2的DF-1细胞系的建立及其抗大肠杆菌活性
1
作者
耿姝
熊修琦
+5 位作者
李芳果
邵颖
殷冬冬
涂健
宋祥军
祁克宗
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2021年第2期233-238,共6页
旨在建立一株稳定表达禽β防御素2(AvBD2)的细胞系,并检测细胞系分泌产物对耐药菌株的抑制效果。首先,根据同源重组设计方法设计一组含有同源臂的AvBD2基因扩增引物及载体反向扩增引物,将片段连接至pLOV-eGFP真核表达载体,构建真核重组...
旨在建立一株稳定表达禽β防御素2(AvBD2)的细胞系,并检测细胞系分泌产物对耐药菌株的抑制效果。首先,根据同源重组设计方法设计一组含有同源臂的AvBD2基因扩增引物及载体反向扩增引物,将片段连接至pLOV-eGFP真核表达载体,构建真核重组质粒pLOV-eGFP-AvBD2,利用三质粒表达系统将重组质粒与慢病毒包装质粒pSPAX2、外膜质粒pMD2.G共转染293T细胞,收集细胞分泌上清液感染DF-1细胞,嘌呤霉素最适浓度筛选获得阳性克隆细胞系,通过RT-PCR技术和Western Blot方法对该细胞系构建结果加以验证;将细胞系分泌产物与耐药大肠杆菌菌株混合培养后,检测该蛋白抗菌效果,并通过扫描电镜观察菌体的损伤现象。结果表明,已成功构建一种稳定表达AvBD2蛋白的DF-1细胞系,其最适筛选浓度为含有1μg/mL的嘌呤霉素的细胞培养液。该细胞系传递20代后,在mRNA转录水平及蛋白表达水平均验证正确,将细胞系的分泌产物培养耐药大肠杆菌,细菌存活率曲线显示随着培养时间的增加,细胞系上清可明显抑制耐药菌株的增殖,在培养第5小时使供试菌的存活率低于50%。扫描电镜显示供试菌体表面皱缩,存在明显损伤,而对照组菌体光滑饱满。建立了稳定表达AvBD2蛋白的DF-1细胞系,为抗生素替代品的生产制备提供探索方向,同时也为后续评价和研究AvBD2的抗菌作用奠定基础。
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关键词
禽β防御素
2
细胞系
稳定表达
慢病毒载体
抗菌活性
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职称材料
人工感染禽腺病毒血清1型对SPF鸡天然免疫反应的影响
被引量：
2
2
作者
马得莹
焦亚茹
+4 位作者
李雪峰
李慧昕
王芳芳
范佳慧
谢晶晶
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第12期35-45,共11页
试验旨在探究禽腺病毒血清1型(Fowl adenovirus serotype 1,FAdV-1)感染SPF鸡后产生的天然免疫反应及免疫调控机制。结果表明,感染FAdV-1后,观察组、感染组、对照组SPF鸡均无明显发病和死亡,剖检肌胃和腺胃可见轻微病变。感染初期小肠...
试验旨在探究禽腺病毒血清1型(Fowl adenovirus serotype 1,FAdV-1)感染SPF鸡后产生的天然免疫反应及免疫调控机制。结果表明,感染FAdV-1后,观察组、感染组、对照组SPF鸡均无明显发病和死亡,剖检肌胃和腺胃可见轻微病变。感染初期小肠组织中Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)、5、7、21;禽β-防御素5(Avian β-defensins 5,AvBD5)、8;白细胞介素8(Inter leukin-8,IL-8)、18;MyD88(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)、C-Rel及p65基因表达量显著升高(P<0.05)。TLR2、TLR5、AvBD8、IL-8、MyD88、C-Rel和p65在感染后36 h(hour post-infection,hpi)表达趋势一致。感染后期,部分组织中TLR15、AvBD10、AvBD12、IL-8基因表达量显著上调(P<0.05)。试验说明SPF鸡感染FAdV-1初期的先天免疫应答是小肠中通过TLR2、5-MyD88途径产生并调控AvBDs及细胞因子清除病毒。试验为今后可通过外源条件提高禽类天然免疫机能,预防控制FAdV-1及相似病原提供重要理论依据。
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关键词
禽
腺病毒血清1型
SPF鸡
TOLL样受体
禽β防御素
天然免疫反应
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职称材料
题名
稳定表达禽β防御素2的DF-1细胞系的建立及其抗大肠杆菌活性
1
作者
耿姝
熊修琦
李芳果
邵颖
殷冬冬
涂健
宋祥军
祁克宗
机构
安徽农业大学动物科技学院
出处
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2021年第2期233-238,共6页
基金
安徽高校协同创新项目(GXXT-2019-035)
国家自然科学基金项目(31772707)。
文摘
旨在建立一株稳定表达禽β防御素2(AvBD2)的细胞系,并检测细胞系分泌产物对耐药菌株的抑制效果。首先,根据同源重组设计方法设计一组含有同源臂的AvBD2基因扩增引物及载体反向扩增引物,将片段连接至pLOV-eGFP真核表达载体,构建真核重组质粒pLOV-eGFP-AvBD2,利用三质粒表达系统将重组质粒与慢病毒包装质粒pSPAX2、外膜质粒pMD2.G共转染293T细胞,收集细胞分泌上清液感染DF-1细胞,嘌呤霉素最适浓度筛选获得阳性克隆细胞系,通过RT-PCR技术和Western Blot方法对该细胞系构建结果加以验证;将细胞系分泌产物与耐药大肠杆菌菌株混合培养后,检测该蛋白抗菌效果,并通过扫描电镜观察菌体的损伤现象。结果表明,已成功构建一种稳定表达AvBD2蛋白的DF-1细胞系,其最适筛选浓度为含有1μg/mL的嘌呤霉素的细胞培养液。该细胞系传递20代后,在mRNA转录水平及蛋白表达水平均验证正确,将细胞系的分泌产物培养耐药大肠杆菌,细菌存活率曲线显示随着培养时间的增加,细胞系上清可明显抑制耐药菌株的增殖,在培养第5小时使供试菌的存活率低于50%。扫描电镜显示供试菌体表面皱缩,存在明显损伤,而对照组菌体光滑饱满。建立了稳定表达AvBD2蛋白的DF-1细胞系,为抗生素替代品的生产制备提供探索方向,同时也为后续评价和研究AvBD2的抗菌作用奠定基础。
关键词
禽β防御素
2
细胞系
稳定表达
慢病毒载体
抗菌活性
Keywords
AvBD2
Cell line
Stable expression
Lentiviral vector
Antibacterial activity
分类号
S852.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
人工感染禽腺病毒血清1型对SPF鸡天然免疫反应的影响
被引量：
2
2
作者
马得莹
焦亚茹
李雪峰
李慧昕
王芳芳
范佳慧
谢晶晶
机构
东北农业大学动物科学技术学院
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
出处
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第12期35-45,共11页
基金
黑龙江省自然科学基金项目(TD2021C001)
现代农业产业技术体系岗位科学家专项(CARS-40-K18)。
文摘
试验旨在探究禽腺病毒血清1型(Fowl adenovirus serotype 1,FAdV-1)感染SPF鸡后产生的天然免疫反应及免疫调控机制。结果表明,感染FAdV-1后,观察组、感染组、对照组SPF鸡均无明显发病和死亡,剖检肌胃和腺胃可见轻微病变。感染初期小肠组织中Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)、5、7、21;禽β-防御素5(Avian β-defensins 5,AvBD5)、8;白细胞介素8(Inter leukin-8,IL-8)、18;MyD88(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)、C-Rel及p65基因表达量显著升高(P<0.05)。TLR2、TLR5、AvBD8、IL-8、MyD88、C-Rel和p65在感染后36 h(hour post-infection,hpi)表达趋势一致。感染后期,部分组织中TLR15、AvBD10、AvBD12、IL-8基因表达量显著上调(P<0.05)。试验说明SPF鸡感染FAdV-1初期的先天免疫应答是小肠中通过TLR2、5-MyD88途径产生并调控AvBDs及细胞因子清除病毒。试验为今后可通过外源条件提高禽类天然免疫机能,预防控制FAdV-1及相似病原提供重要理论依据。
关键词
禽
腺病毒血清1型
SPF鸡
TOLL样受体
禽β防御素
天然免疫反应
Keywords
fowl adenovirus serotype 1
SPF chickens
Toll-like receptors
avianβ-defensin
natural immune response
分类号
S767.5 [农业科学—森林保护学]
X172 [环境科学与工程—环境科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
稳定表达禽β防御素2的DF-1细胞系的建立及其抗大肠杆菌活性
耿姝
熊修琦
李芳果
邵颖
殷冬冬
涂健
宋祥军
祁克宗
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2021
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人工感染禽腺病毒血清1型对SPF鸡天然免疫反应的影响
马得莹
焦亚茹
李雪峰
李慧昕
王芳芳
范佳慧
谢晶晶
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
2
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