通过重组 DNA 技术生产后,从大肠杆菌提取液中纯比出人胰岛素 B 链。IPTG 化学诱导产生大量的β-半乳糖苷酶 B 链的杂交多肽。用 CNBr 裂解此融合蛋白、然后用 Se-phadex G-50进行分子过滤、DEAE-Se-phadex A-25离子交换柱层析和用 RP-...通过重组 DNA 技术生产后,从大肠杆菌提取液中纯比出人胰岛素 B 链。IPTG 化学诱导产生大量的β-半乳糖苷酶 B 链的杂交多肽。用 CNBr 裂解此融合蛋白、然后用 Se-phadex G-50进行分子过滤、DEAE-Se-phadex A-25离子交换柱层析和用 RP-C18的 HPLC 层析而纯化之。对此高度纯化的肽类进行氨基酸序列分析,测定特性。它表明与标准的人 B 链完全相同。展开更多
文摘以蝾螺内脏为材料,通过硫酸铵沉淀分级分离、SephadexG 200分子筛柱层析和两次DEAE SephadexA 50离子交换柱层析纯化,获得聚丙烯酰胺凝胶电泳单一纯的N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶酶制剂.纯酶的比活力为1448U·mg-1.酶的紫外特征吸收峰在275nm处,内源荧光发射峰在340nm处.以对 硝基苯 N 乙酰 β D 氨基葡萄糖为底物,研究酶催化底物水解的反应动力学,结果表明:酶的最适pH为4.5,最适温度为45℃.该酶在pH3.5～6.0区域较稳定,而在pH>7能很快失活;在40℃以下处理30min,酶活力保持稳定,高于40℃,酶稳定性较差,很快失活.酶促反应动力学符合米氏双曲线方程,测得米氏常数Km为3.13mmol·L-1,最大反应速度Vm为17.68μmol·L-1·min-1.
文摘通过重组 DNA 技术生产后,从大肠杆菌提取液中纯比出人胰岛素 B 链。IPTG 化学诱导产生大量的β-半乳糖苷酶 B 链的杂交多肽。用 CNBr 裂解此融合蛋白、然后用 Se-phadex G-50进行分子过滤、DEAE-Se-phadex A-25离子交换柱层析和用 RP-C18的 HPLC 层析而纯化之。对此高度纯化的肽类进行氨基酸序列分析,测定特性。它表明与标准的人 B 链完全相同。
