为研究伊犁马是否存在Ⅷ群神经致病型马疱疹病毒1型(EHV-1)的感染,并分析其遗传进化特征,本研究采集新疆伊犁昭苏县某马场93份伊犁马流产胎儿肺组织样品,经PCR鉴定为EHV-1阳性后,将部分EHV-1阳性的肺组织研磨上清液接种MDBK细胞,盲传3代...为研究伊犁马是否存在Ⅷ群神经致病型马疱疹病毒1型(EHV-1)的感染,并分析其遗传进化特征,本研究采集新疆伊犁昭苏县某马场93份伊犁马流产胎儿肺组织样品,经PCR鉴定为EHV-1阳性后,将部分EHV-1阳性的肺组织研磨上清液接种MDBK细胞,盲传3代,待出现细胞病变时收集细胞及培养上清,通过PCR及透射电镜对EHV-1进行鉴定,并对其进行不同基因的遗传进化分析。结果显示,93份临床样品中有43份样品呈EHV-1阳性。将其中11份阳性样品接种MDBK细胞盲传3代后,有4份出现细胞病变,电镜观察可见疱疹病毒典型的形态特征,且均经PCR检测到EHV-1 g B基因,表明分离到4株EHV-1,分别命名为XJ-YLZS-21、XJYLZS-22、XJ-YLZS-29和XJ-YLZS-31。同源性分析结果显示,4株EHV-1分离株gB基因序列与EHV-1参考株Ab4相应基因序列的同源性为100%。ORF30基因序列分析结果显示,4株分离株第2 254位均为鸟嘌呤(G),编码天冬氨酸(D),表明4株EHV-1分离株为神经致病型EHV。ORF68基因及其编码氨基酸序列的遗传进化分析结果显示,4株EHV-1分离株的核苷酸及氨基酸序列同源性均为100%,并处于独立的进化分支,将其划分为Ⅷ群神经致病型EHV-1。本研究首次在国内鉴定并分离到Ⅷ群神经致病型EHV-1,丰富了EHV-1的流行病学数据库,为EHV-1感染所致马流产的防控奠定了流行病学基础。展开更多
本试验旨在建立一种检测马疱疹病毒1型(EHV-1)的快速、灵敏、特异的环介导等温扩增技术(LAMP),同时评价该方法的可靠性。根据马鼻肺炎糖蛋白B(gB)基因特异保守序列设计多对LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测反应进...本试验旨在建立一种检测马疱疹病毒1型(EHV-1)的快速、灵敏、特异的环介导等温扩增技术(LAMP),同时评价该方法的可靠性。根据马鼻肺炎糖蛋白B(gB)基因特异保守序列设计多对LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测反应进程,进行引物筛选和反应条件的优化,建立能特异性扩增EHV-1DNA的LAMP检测方法,并加入SYBR GreenⅠ通过肉眼判断结果。该方法在65℃恒温下作用50min,使EHV-1DNA获得了高效率的特异性扩增,与其他马易感病毒如马疱疹病毒4型(EHV-4)等无交叉反应;且具有极高的灵敏性,可检测到10-4稀释的目标病毒,比普通PCR的灵敏度高10倍;反应结束后加入SYBR GreenⅠ肉眼观察的结果与LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测结果一致。通过将4份临床样品的LAMP检测结果与已得到验证的PCR结果进行比对,结果显示符合率为100%。本研究建立的LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏、简单易操作且设备要求低等特点,具有实地检测EHV-1的前景。展开更多
文摘为研究伊犁马是否存在Ⅷ群神经致病型马疱疹病毒1型(EHV-1)的感染,并分析其遗传进化特征,本研究采集新疆伊犁昭苏县某马场93份伊犁马流产胎儿肺组织样品,经PCR鉴定为EHV-1阳性后,将部分EHV-1阳性的肺组织研磨上清液接种MDBK细胞,盲传3代,待出现细胞病变时收集细胞及培养上清,通过PCR及透射电镜对EHV-1进行鉴定,并对其进行不同基因的遗传进化分析。结果显示,93份临床样品中有43份样品呈EHV-1阳性。将其中11份阳性样品接种MDBK细胞盲传3代后,有4份出现细胞病变,电镜观察可见疱疹病毒典型的形态特征,且均经PCR检测到EHV-1 g B基因,表明分离到4株EHV-1,分别命名为XJ-YLZS-21、XJYLZS-22、XJ-YLZS-29和XJ-YLZS-31。同源性分析结果显示,4株EHV-1分离株gB基因序列与EHV-1参考株Ab4相应基因序列的同源性为100%。ORF30基因序列分析结果显示,4株分离株第2 254位均为鸟嘌呤(G),编码天冬氨酸(D),表明4株EHV-1分离株为神经致病型EHV。ORF68基因及其编码氨基酸序列的遗传进化分析结果显示,4株EHV-1分离株的核苷酸及氨基酸序列同源性均为100%,并处于独立的进化分支,将其划分为Ⅷ群神经致病型EHV-1。本研究首次在国内鉴定并分离到Ⅷ群神经致病型EHV-1,丰富了EHV-1的流行病学数据库,为EHV-1感染所致马流产的防控奠定了流行病学基础。
文摘本试验旨在建立一种检测马疱疹病毒1型(EHV-1)的快速、灵敏、特异的环介导等温扩增技术(LAMP),同时评价该方法的可靠性。根据马鼻肺炎糖蛋白B(gB)基因特异保守序列设计多对LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测反应进程,进行引物筛选和反应条件的优化,建立能特异性扩增EHV-1DNA的LAMP检测方法,并加入SYBR GreenⅠ通过肉眼判断结果。该方法在65℃恒温下作用50min,使EHV-1DNA获得了高效率的特异性扩增,与其他马易感病毒如马疱疹病毒4型(EHV-4)等无交叉反应;且具有极高的灵敏性,可检测到10-4稀释的目标病毒,比普通PCR的灵敏度高10倍;反应结束后加入SYBR GreenⅠ肉眼观察的结果与LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测结果一致。通过将4份临床样品的LAMP检测结果与已得到验证的PCR结果进行比对,结果显示符合率为100%。本研究建立的LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏、简单易操作且设备要求低等特点,具有实地检测EHV-1的前景。
