f3b基因表达下调斑马鱼胚胎中枢神经系统olig-2、Huc的表达观察

1

作者 周瑞芳 陈宜刚 +2 位作者 李晓洁 刁爱芹 于敏 《山东医药》 CAS 北大核心 2016年第35期42-44,共3页

目的观察f3b基因表达下调斑马鱼胚胎中枢神经系统少突胶质细胞转录因子2(olig-2)、神经系统特异表达RNA结合蛋白(Huc)的表达情况。方法将单细胞阶段的斑马鱼胚胎随机分为两组(胚胎数量分别为90枚和85枚),分别注射针对f3b起始密码区域序... 目的观察f3b基因表达下调斑马鱼胚胎中枢神经系统少突胶质细胞转录因子2(olig-2)、神经系统特异表达RNA结合蛋白(Huc)的表达情况。方法将单细胞阶段的斑马鱼胚胎随机分为两组(胚胎数量分别为90枚和85枚),分别注射针对f3b起始密码区域序列的吗啡啉反义核苷酸(ATG-MO)和作为标准对照的随机序列吗啡啉反义核苷酸(CON-MO)。在CON-MO注射后的斑马鱼胚胎中随机挑选20枚受精后24 h的胚胎作为对照组,在ATG-MO注射后出现特异表型的斑马鱼胚胎中随机挑选20枚受精后24 h的胚胎作为实验组,通过原位杂交的方法检测两组斑马鱼胚胎中枢神经系统olig-2、Huc。结果实验组、对照组斑马鱼胚胎中枢神经系统olig-2表达评分分别为(1.9±0.4)、(5.6±0.5)分,两组比较,P<0.01。实验组、对照组斑马鱼胚胎中枢神经系统Huc表达评分分别为(6.3±0.6)、(6.5±0.3)分,两组比较差异无统计学意义。结论 f3b基因表达下调斑马鱼胚胎中枢神经系统olig-2表达减弱、Huc表达无明显变化。 展开更多

关键词 f3b基因 斑马鱼胚胎 少突胶质细胞转录因子2 神经系统特异表达rna结合蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸟传染性支气管炎病毒RNA结合蛋白基因的克隆和表达

2

作者 袁宁 王汉屏 王艳 《陕西农业科学》 2008年第4期78-80,共3页

以鸟传染性支气管炎病毒(Avian Infectious Bronchitis Virus,IBV)的cDNA为模板,用PCR技术克隆出编码该病毒非结构蛋白NSP9中的RNA结合蛋白基因,连接到pGEX-6p-1载体中并转入大肠杆菌DH5α中进行测序。随后将该重组载体转入大肠杆菌BL2... 以鸟传染性支气管炎病毒(Avian Infectious Bronchitis Virus,IBV)的cDNA为模板,用PCR技术克隆出编码该病毒非结构蛋白NSP9中的RNA结合蛋白基因,连接到pGEX-6p-1载体中并转入大肠杆菌DH5α中进行测序。随后将该重组载体转入大肠杆菌BL21中进行表达,通过GST亲和层析纯化得到目标蛋白。DNA测序分析表明所得克隆片段的长度为333bp,将其序列与GenBank的报道比对,可知所得结果与鸟传染性支气管炎病毒M41毒株的RNA结合蛋白基因一致。同时,所得蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳分析证实其分子量为12kD,与ExPASy ProtParam所得到的预期大小一致。 展开更多

关键词 鸟传染性支气管炎 非结构蛋白 rna结合蛋白 克隆 表达 SDS-PAGE

在线阅读 下载PDF 职称材料

水牛脂多糖结合蛋白基因表达载体构建及其shRNA片段的筛选 被引量：1

3

作者 路新梅 李美青 +4 位作者 乔树叶 罗婷 张会娜 石德顺 李湘萍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第7期29-35,共7页

试验旨在构建水牛脂多糖结合蛋白(LBP)基因融合蛋白表达载体,探讨其在293细胞中的表达情况;筛选获得可抑制水牛LBP基因表达的shRNA干扰片段。采用RT-PCR方法,以水牛肝脏cDNA为模板,扩增水牛LBP开放阅读框(ORF),将其连接到pMD18-T载体中... 试验旨在构建水牛脂多糖结合蛋白(LBP)基因融合蛋白表达载体,探讨其在293细胞中的表达情况;筛选获得可抑制水牛LBP基因表达的shRNA干扰片段。采用RT-PCR方法,以水牛肝脏cDNA为模板,扩增水牛LBP开放阅读框(ORF),将其连接到pMD18-T载体中。序列测定并分析正确后,采用SalⅠ和BamHⅠ进行双酶切,将水牛LBP基因编码区定向克隆至pDsRed-N1载体中,构建其融合蛋白表达载体pDsRed-N1-LBP。设计2个针对LBP靶基因序列的shR-NA(774-792、1212-1231),同时设计无关序列1864作为阴性对照。合成好的shRNA序列先退火连接到pUC 57载体上,再亚克隆到慢病毒表达载体pSicoR-GFP中,将重组质粒命名为pSicoR-GFP-shLBP774/1212/1864(N.C),采用PCR和测序方法鉴定阳性克隆。将LBP融合蛋白表达载体和其shRNA慢病毒表达载体经脂质体共转染293细胞,48h后观测荧光蛋白表达情况。收集共转染细胞样品,采用实时定量PCR(QRT-PCR)检测LBP基因的表达,筛选有效抑制LBP基因表达的shRNA干扰序列。结果表明,成功构建水牛LBP融合蛋白表达载体pDsRed-N1-LBP,并在293细胞中瞬时表达。PCR和测序结果均证实所构建的shRNA慢病毒表达载体pSicoR-GFP-shLBP774/1212/1864(N.C)为阳性克隆。共转染48h后观测,红色和绿色荧光蛋白均有表达。QRT-PCR检测结果显示,shRNA-774和shRNA-1212对293细胞中LBP基因mRNA的表达均有抑制效果,抑制效率分别为49.53%、29.27%。因此,设计合成的2条shRNA序列能有效抑制水牛LBP基因的表达,这为进一步探讨LBP基因在LPS诱导的革兰氏阴性菌跨膜机制和信号转导中的作用机理研究奠定了基础。 展开更多

关键词 水牛脂多糖结合蛋白 发夹rna 慢病毒表达载体 共转染

在线阅读 下载PDF 职称材料

多房棘球蚴RNA结合蛋白EWS的原核表达及其细胞定位与功能的初步鉴定

4

作者 严玉婷 郭小腊 +3 位作者 孙玥 何学东 丁军涛 郑亚东 《动物医学进展》 北大核心 2023年第12期29-35,共7页

通过对多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis)RNA结合蛋白EWS(EmEWS)基因的原核表达、抗体制备、细胞定位等研究,初步探究EmEWS基因特征以及与RNA的结合能力。根据Wormbase数据库中EmEWS基因序列设计引物,利用RT-PCR扩增EmEWS基因... 通过对多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis)RNA结合蛋白EWS(EmEWS)基因的原核表达、抗体制备、细胞定位等研究,初步探究EmEWS基因特征以及与RNA的结合能力。根据Wormbase数据库中EmEWS基因序列设计引物,利用RT-PCR扩增EmEWS基因并构建重组表达质粒,诱导表达、纯化重组蛋白,制备EmEWS多克隆抗体后进行Western blot、实时荧光定量PCR、免疫荧光定位、双荧光测定。结果表明,EmEWS基因长度为1485 bp,编码495个氨基酸,在多房棘球蚴原代细胞中表达量较高,在原头蚴中最低。生物信息学分析表明,细粒棘球蚴EWS与EmEWS相似性高达98.3%,且EmEWS的RBD结构域在绦虫中高度保守。EmEWS重组蛋白大小约为54 ku,制备的多克隆抗体可识别多房棘球绦虫中天然EmEWS蛋白。细胞定位显示EmEWS主要分布在细胞膜上。双荧光试验证明EmEWS可以与结合富含UG的RNA序列结合。综合上述结果,推测EmEWS可能作为转录调控因子参与小RNA的形成,同时有助于核蛋白的运输。 展开更多

关键词 多房棘球蚴 rna结合蛋白EWS基因 原核表达 多克隆抗体 免疫荧光

在线阅读 下载PDF 职称材料

张进研究员团队揭示核仁定位的RNA结合蛋白LIN28调控小鼠胚胎干细胞多能性状态与二细胞样状态转变机制

5

《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期419-419,共1页

2021年7月31日,《蛋白和细胞》(Protein&Cell)在线发表了张进研究员团队有关RNA结合蛋白LIN28调控小鼠胚胎干(ES)细胞多能性状态与二细胞(2C)样状态转变的最新研究成果“LIN28 coordinately promotes nucleolar/ribosomal functions... 2021年7月31日,《蛋白和细胞》(Protein&Cell)在线发表了张进研究员团队有关RNA结合蛋白LIN28调控小鼠胚胎干(ES)细胞多能性状态与二细胞(2C)样状态转变的最新研究成果“LIN28 coordinately promotes nucleolar/ribosomal functions and represses the 2C-like transcriptional program in pluripotent stem cells”(https://link.springer.com/article/10.1007/s13238-021-00864-5)。研究结果揭示了定位于核仁中RNA结合蛋白LIN28在小鼠早期胚胎发育过程中的新功能,以及LIN28介导的核仁完整性在ES-2C状态转变和基因表达调控中的作用,为早期胚胎发育过程中2C程序的调控提供一个新的机制。 展开更多

关键词 rna结合蛋白 多能性 小鼠胚胎干细胞 早期胚胎发育 基因表达调控 核仁

在线阅读 下载PDF 职称材料

沉默脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因对脂肪细胞合成甘油三酯及脂联素分泌的影响

6

作者 吴洁 钟敏 邹瑾 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2012年第5期464-467,共4页

目的应用RNA干扰(RNAi)技术,构建针对3T3-L1脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)的microRNA表达载体,研究沉默A-FABP基因的表达对脂肪细胞合成甘油三酯及脂联素分泌的影响。方法构建靶向A-FABP基因的microRNA表达载体转染3T3-L1脂肪细胞后... 目的应用RNA干扰(RNAi)技术,构建针对3T3-L1脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)的microRNA表达载体,研究沉默A-FABP基因的表达对脂肪细胞合成甘油三酯及脂联素分泌的影响。方法构建靶向A-FABP基因的microRNA表达载体转染3T3-L1脂肪细胞后,RT-PCR及Western blot法检测A FABP mRNA及蛋白表达。建立A-FABP基因沉默细胞模型,0.5 mmol/L游离脂肪酸和成熟脂肪细胞共孵育24 h,分为对照组、脂肪酸组、RNAi组、RNAi+脂肪酸组。ELISA法分别检测甘油三酯及脂联素水平,RT PCR法检测脂肪细胞A-FABP及脂联素mRNA的表达。结果 microRNA表达载体转染脂肪细胞后,能显著抑制A-FABP mRNA和蛋白表达。随着脂肪酸浓度的升高,脂肪细胞甘油三酯合成明显增加,脂联素分泌明显减少(P<0.05)。与对照组和脂肪酸组比较,RNAi组和RNAi+脂肪酸组甘油三酯水平明显降低,脂联素水平明显升高,脂联素mRNA表达明显上调(P<0.05)。结论阻断A-FABP基因有可能成为防治动脉粥样硬化及糖尿病的新靶点。 展开更多

关键词 rna干扰 脂细胞 脂肪酸结合蛋白质类 甘油三酯类 脂联素 基因表达 微rnaS

在线阅读 下载PDF 职称材料

卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2表达及临床价值

7

作者 黄平 钟细妹 +3 位作者 陈光元 张梅芳 刘文毅 刘霄 《中国实用医药》 2022年第13期69-71,共3页

目的 探讨卵巢癌组织长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录体1(NEAT1)、羧基末端结合蛋白2(CtBP2)表达及临床价值。方法 选取68例卵巢癌患者和20例良性囊肿患者,手术切除并剥离卵巢癌组织、卵巢囊肿组织,用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法... 目的 探讨卵巢癌组织长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录体1(NEAT1)、羧基末端结合蛋白2(CtBP2)表达及临床价值。方法 选取68例卵巢癌患者和20例良性囊肿患者,手术切除并剥离卵巢癌组织、卵巢囊肿组织,用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法对lncRNA NEAT1、CtBP2相对表达量进行测定。比较卵巢癌组织与卵巢囊肿组织中lncRNA NEAT1、CtBP2相对表达量,分析卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2相对表达量与患者临床病理特征的关系。结果 卵巢癌组织中lncRNA NEAT1、Ct BP2相对表达量分别为(0.619±0.115)、(0.330±0.066),均明显高于卵巢囊肿组织的(0.079±0.021)、(0.112±0.014),差异具有统计学意义(P<0.05)。肿瘤FIGO分期1期患者卵巢癌组织lncRNA NEAT1、Ct BP2相对表达量分别为(0.425±0.077)、(0.207±0.057), 2期患者卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2相对表达量分别为(0.618±0.071)、(0.336±0.066), 3~4期患者卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2相对表达量分别为(0.983±0.076)、(0.546±0.070);有淋巴结转移患者卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2相对表达量分别为(0.521±0.098)、(0.219±0.069),无淋巴结转移患者卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2相对表达量分别为(0.845±0.064)、(0.586±0.054)。卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2相对表达量与患者肿瘤FIGO分期、淋巴结转移情况有关,差异具有统计学意义(P<0.05);卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2相对表达量与患者年龄、肿瘤直径、病理类型无关,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2表达水平均高,两者表达变化可能协同促使肿瘤恶性进展,致使患者预后不良。lncRNA NEAT1、CtBP2有可能成为卵巢癌早期诊断和预后监测的生物标志物。 展开更多

关键词 卵巢癌 长链非编码rna 核富集转录体1 羧基末端结合蛋白2 相对表达量

在线阅读 下载PDF 职称材料

天花粉蛋白基因的克隆、表达和活性鉴定 被引量：1

8

作者 蔡煊 胡拥军 +2 位作者 徐洪 俞吉安 孙兵 《上海交通大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1503-1505,共3页

用 PCR( Polymerase Chain Reaction)扩增出天花粉蛋白 ( Trichosanthin,TCS)基因全长序列 ,插入表达载体 .经双酶切鉴定及测序分析 ,表明阅读框正确 .表达 His- TCS活性融合蛋白并纯化天花粉蛋白 ,鉴定出其具有 RNA

关键词 天花粉蛋白 基因克隆 分离纯化 生物活性 基因表达 rna N-糖苷酶活性 抗原抗体结合活性

在线阅读 下载PDF 职称材料

胆红素脑病鼠模型中脑红蛋白的表达变化

9

作者 胡嘉恒 樊萍 +4 位作者 张丽荣 隆令 文凤 胡智涵 甘胜伟 《解剖学杂志》 CAS 2021年第S01期107-108,共2页

胆红素脑病(bilirubin encephalopathy,BE)是一种好发于新生儿的神经系统综合征,目前尚缺乏特异的治疗方法。研究表明,BE中未结合胆红素(unconjugated bilirubin,UCB)所产生的过量氧化应激产物是导致神经元损伤的主要因素;在脑缺血等多... 胆红素脑病(bilirubin encephalopathy,BE)是一种好发于新生儿的神经系统综合征,目前尚缺乏特异的治疗方法。研究表明,BE中未结合胆红素(unconjugated bilirubin,UCB)所产生的过量氧化应激产物是导致神经元损伤的主要因素;在脑缺血等多种神经系统疾病中,脑红蛋白(neuroglobin,NGB)可通过清除氧化应激产物以抑制线粒体介导的神经元死亡而发挥神经保护作用,但NGB在BE中的表达变化及其意义尚不清楚。 展开更多

关键词 胆红素脑病 未结合胆红素 神经元死亡 氧化应激产物 神经系统疾病 脑红蛋白 表达变化 鼠模型

在线阅读 下载PDF 职称材料

苹果中新抗旱相关基因GR-RBPs的克隆与表达分析 被引量：4

10

作者 王顺才 梁东 +2 位作者 师守国 马锋旺 束怀瑞 《干旱地区农业研究》 CSCD 北大核心 2011年第5期75-81,86,共7页

在构建楸子叶片SSH cDNA文库及EST分析的基础上,通过电子克隆(in silico cloning)和RT-PCR方法分别从楸子和平邑甜茶叶片中各克隆得到了1个富含甘氨酸RNA结合蛋白(GR-RBP)基因,分别命名为MpGR-RBP1(HM042682)和MhGR-RBP1(HQ380209)。它... 在构建楸子叶片SSH cDNA文库及EST分析的基础上,通过电子克隆(in silico cloning)和RT-PCR方法分别从楸子和平邑甜茶叶片中各克隆得到了1个富含甘氨酸RNA结合蛋白(GR-RBP)基因,分别命名为MpGR-RBP1(HM042682)和MhGR-RBP1(HQ380209)。它们的cDNA全长分别为781和558 bp,ORF分别编码171和164个氨基酸的多肽。MpGR-RBP1和MhGR-RBP1基因编码蛋白均含有一个RNA识别结构域(RRM)和一个富含甘氨酸区(glycine-rich region)。生物信息学分析表明,MpGR-RBP1和MhGR-RBP1蛋白属于植物GR-RBPs蛋白家族。定量PCR分析表明,MpGR-RBP1和MhGR-RBP1基因在根、茎和叶中均有表达;在干旱胁迫下,它们的表达量增加,而楸子MpGR-RBP1表达水平明显高于平邑甜茶MhGR-RBP1。结果表明,MpGR-RBP1和MhGR-RBP1可能参与植物对干旱胁迫的响应反应,并推测抗旱蛋白结构的差异可能对植物的抗旱性有影响。 展开更多

关键词 苹果 富含甘氨酸rna结合蛋白 干旱 基因表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

SATB1在消化系统癌症中的研究进展 被引量：1

11

作者 龚丹 陈涛 +2 位作者 刘繁荣 曹金玉 徐向群 《中国实用医药》 2019年第15期188-190,共3页

克隆特异AT序列结合蛋白(SATB1)是一种组织特异性核基质结合蛋白,主要在胸腺细胞中高表达,在胸腺的生长发育及T细胞的生长和分化进程中发挥重要作用,是调节免疫系统的一个关键因素,能调控T细胞分化过程中多种基因的表达进而影响T细胞的... 克隆特异AT序列结合蛋白(SATB1)是一种组织特异性核基质结合蛋白,主要在胸腺细胞中高表达,在胸腺的生长发育及T细胞的生长和分化进程中发挥重要作用,是调节免疫系统的一个关键因素,能调控T细胞分化过程中多种基因的表达进而影响T细胞的活化,参与染色质重塑机制,调节多种基因的表达。且SATB1在多种恶性肿瘤中异常表达,在消化系统癌症如食管癌、胃癌、肝癌、胰腺癌及结直肠癌中高表达,并影响着这些肿瘤的发生、发展及预后。 展开更多

关键词 克隆特异AT序列结合蛋白1 癌症 高表达 预后

在线阅读 下载PDF 职称材料

PTB与胰岛素基因表达和分泌的研究发展

12

作者 王文平 王佑民 《安徽医学》 2007年第4期378-380,共3页

关键词 基因表达 rna结合蛋白 胰岛素 PTB PROTEIN 分泌 选择性剪接 代谢过程

在线阅读 下载PDF 职称材料

微量元素锌与基因表达

13

作者 Cousins RJ +1 位作者 陈洪亮 张家祥 《国外畜牧科技》 2001年第1期10-11,共2页

关键词 微量元素 锌 基因表达 rna聚合酶活性 锌指蛋白 锌结合转录因子 金属硫蛋白 细胞核锌

在线阅读 下载PDF 职称材料