大鼠脊髓损伤后神经生长因子BDNF／轴突导向因子slit-2的表达变化 被引量：8

1

作者 刘兴波 雷晓婷 +3 位作者 刘源 徐冬晨 王彤 丁新生 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期868-871,共4页

目的:研究脊髓损伤后神经生长因子BDNF和轴突导向因子slit-2的表达变化,同时观察大鼠行为学、脊髓形态学及体感诱发电位(SEP)的变化特点。方法:雄性SD大鼠45只,随机分成正常组,假手术组和手术后1、3、5、7、14、21、28天组,每组各5只。... 目的:研究脊髓损伤后神经生长因子BDNF和轴突导向因子slit-2的表达变化,同时观察大鼠行为学、脊髓形态学及体感诱发电位(SEP)的变化特点。方法:雄性SD大鼠45只,随机分成正常组,假手术组和手术后1、3、5、7、14、21、28天组,每组各5只。免疫组化法观察神经生长因子BDNF\slit-2的表达变化,计算阳性细胞灰度值,并进行统计学分析。BBB法进行功能评分。HE染色观察脊髓损伤后不同时期的形态学变化。结果:大鼠脊髓损伤后,肢体瘫痪从第7天开始明显恢复直至28天。免疫组化结果正常组和假手术组脊髓前角BDNF\slit-2的表达较低。脊髓损伤24h后,损伤位点前角神经元中,BDNF\slit-2表达活跃,3天表达达高峰。形态学显示了损伤后脊髓出血吸收、变性的过程。结论:成年大鼠脊髓损伤后,神经生长因子BDNF和轴突导向因子slit-2随之上调,呈一定规律性,提示两者与脊髓损伤后神经再生相关。且BDNF、slit-2主要表达于脊髓前角,提示与脊髓损伤后肢体运动功能恢复密切相关。 展开更多

关键词 脊髓损伤 神经生长因子BDNF 轴突导向因子slit-2 免疫组化

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神经生长导向因子Slit在鸡胚脊髓中的表达 被引量：3

2

作者 王枫 丁新生 +2 位作者 邓晓萱 姚娟 闵敏 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期191-192,共2页

目的:探讨神经生长导向因子Slit在鸡胚脊髓中的表达模式对发育和再生神经轴突的导向作用。方法:制备地高辛标记的RNA探针,应用原位杂交技术检测Slit基因mRNA在鸡胚不同发育期脊髓中的表达情况。结果:Slit基因mRNA的表达在中线结构区呈... 目的:探讨神经生长导向因子Slit在鸡胚脊髓中的表达模式对发育和再生神经轴突的导向作用。方法:制备地高辛标记的RNA探针,应用原位杂交技术检测Slit基因mRNA在鸡胚不同发育期脊髓中的表达情况。结果:Slit基因mRNA的表达在中线结构区呈现优势。结论:神经生长导向因子Slit在鸡胚脊髓发育期轴突投射和神经通路形成中起重要作用。 展开更多

关键词 神经生长导向因子 脊髓、鸡胚 Slit基因 基因表达

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原花青素对大鼠背根神经节神经元突起生长的影响 被引量：1

3

作者 陈颖秀 郭映琪 +4 位作者 张惠媚 张琪 文锦坤 罗利 李莉霞 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第10期1357-1363,共7页

目的探讨原花青素(proanthocyanidins,PC)对大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元突起生长的作用。方法在体外,培养原代大鼠DRG神经元细胞并检测不同浓度PC对其突起生长数量、长度及生长锥的影响;在体内,构建大鼠坐骨神经夹... 目的探讨原花青素(proanthocyanidins,PC)对大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元突起生长的作用。方法在体外,培养原代大鼠DRG神经元细胞并检测不同浓度PC对其突起生长数量、长度及生长锥的影响;在体内,构建大鼠坐骨神经夹伤模型,检测损伤早期生长相关蛋白43(growth-associated protein 43,GAP43)的表达情况。最后在体外采用细胞免疫荧光和ELISA检测PC对DRG神经元中神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的表达影响。结果PC可显著增加DRG神经元突起的数量、长度及生长锥伪足数量;促进大鼠坐骨神经损伤早期GAP43蛋白的表达;增强DRG神经元内NGF的表达。结论PC可能通过促进大鼠DRG神经元内NGF的表达,加快神经元突起生长。 展开更多

关键词 原花青素 神经元 突起生长 神经生长因子

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成年大鼠SCI后神经生长导向因子Netrin和Slit的表达及定位 被引量：1

4

作者 肖卫东 易成腊 +3 位作者 陈安民 陈娟 廖光军 周海宇 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 2006年第11期843-846,I0002,I0003,共6页

目的:观察成年大鼠急性脊髓损伤(SCI)后不同时点Netrin和Slit的表达及分布,探讨再生轴突的导向机制。方法:成年SD大鼠40只,随机分为SCI后2、4、7、14d组和对照组共5组,每组8只,SCI组采用Allen′s法制作SCI模型,按时间点顺序取材,免疫荧... 目的:观察成年大鼠急性脊髓损伤(SCI)后不同时点Netrin和Slit的表达及分布,探讨再生轴突的导向机制。方法:成年SD大鼠40只,随机分为SCI后2、4、7、14d组和对照组共5组,每组8只,SCI组采用Allen′s法制作SCI模型,按时间点顺序取材,免疫荧光激光共聚焦扫描检查Netrin-1和Slit2蛋白在损伤脊髓局部的表达及定位。结果:SCI后2d,大鼠脊髓损伤部位即出现Netrin-1和Slit2的同步表达上调,而后均迅速增强并于1周时达到峰值,且二者在轴突胞膜上均有表达,之后缓慢下调;SCI后同一时点Netrin-1在脊髓中均匀表达,而Slit2则在脊髓前、后角及中央管等不同部位存在表达差异。结论:成年大鼠SCI后脊髓中枢存在吸引因子Netrin-1和排斥因子Slit2的同步高表达及轴突胞膜上共同表达,这可能是SCI后星形胶质细胞反应性增生的一种表现,可能对轴突导向性再生起关键性作用。 展开更多

关键词 神经生长导向因子 脊髓损伤 表达 轴索 再生

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神经生长导向因子Slit及其受体Roundabout在人胚胎脊髓的表达 被引量：1

5

作者 丁新生 闵敏 +5 位作者 李文磊 朱敏生 王枫 田向阳 邓晓萱 姚娟 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期520-520,共1页

关键词 神经生长导向因子 胚胎脊髓 受体 Slit蛋白 中枢神经系统 原位杂交方法 CRNA探针 导向作用 轴突生长 mRNA 神经元胞体 感觉神经元 神经元轴突 表达的研究 地高辛标记 再生修复 生长发育 调节作用 跨膜蛋白 研究发现 神经纤维

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Dok 6促进神经营养因子3诱导的过表达原肌球蛋白相关激酶C的PC12细胞突起生长 被引量：1

6

作者 李玮琦 尤元刚 +1 位作者 阴彬 彭小忠 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期751-755,802,共6页

目的探讨胞浆接头蛋白Dok6对PC12细胞突起生长的影响。方法将Dok6的不同功能模体片段构建至TrkC/Y516F突变体中形成融合克隆。利用Western blot法验证各个融合克隆在细胞内是否稳定表达。利用瞬时转染的方法将融合克隆导入PC12细胞进行... 目的探讨胞浆接头蛋白Dok6对PC12细胞突起生长的影响。方法将Dok6的不同功能模体片段构建至TrkC/Y516F突变体中形成融合克隆。利用Western blot法验证各个融合克隆在细胞内是否稳定表达。利用瞬时转染的方法将融合克隆导入PC12细胞进行过表达,之后用NT-3刺激PC12细胞突起生长,检测不同Dok6片段的效应。结果各个融合克隆均能在细胞内稳定表达。融合了Dok6 PTB结构域+C末端以及单纯C末端的融合克隆均可以挽救由于TrkC受体516位酪氨酸突变导致的PC12细胞突起生长减少,而融合单纯的Dok6 PTB结构域则无此效应。结论Dok6可以促进NT-3诱导的过表达TrkC的PC12细胞突起生长,并且此效应与其C末端密切相关。 展开更多

关键词 Dok6 PC12细胞 神经营养因子3 突起生长 融合克隆

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表达肝细胞生长因子的人羊水干细胞培养上清对大鼠神经元突起生长的影响

7

作者 李雪芳 郭润发 +3 位作者 张立新 钱佳羽 宋豪林 张志军 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 2022年第6期611-617,共7页

目的:研究过表达肝细胞生长因子(HGF)的人羊水干细胞(hAFSCs)上清对大鼠背根节(DRG)神经突起生长的影响。方法:从人羊水中收集贴壁细胞,通过形态学、核型分析、细胞表面标记分子等手段鉴定hAFSCs。将hAFSCs通过慢病毒感染得到过表达HGF... 目的:研究过表达肝细胞生长因子(HGF)的人羊水干细胞(hAFSCs)上清对大鼠背根节(DRG)神经突起生长的影响。方法:从人羊水中收集贴壁细胞,通过形态学、核型分析、细胞表面标记分子等手段鉴定hAFSCs。将hAFSCs通过慢病毒感染得到过表达HGF的HGF-hAFSCs,收集hAFSCs、HGF-hAFSCs培养上清液离心过滤后,用于DRG组织块的体外培养,比较hAFSCs上清液组(hAFSCs)、HGF-hAFSCs上清液组(HGF-hAFSCs)和单纯培养液对照组(Control)对DRG神经突起生长的影响。结果:从人羊水中获得的细胞为hAFSCs,其核型正常,表达CD29、CD73、CD90和CD105,不表达CD34和CD45。慢病毒感染72 h后,感染效率约为80%;经嘌呤霉素筛选,获得过表达HGF的hAFSCs。实时荧光定量PCR结果显示,HGF-hAFSCs组与hAFSCs组的细胞相比,HGF mRNA表达有显著性增加(P<0.001);ELISA结果显示,HGF-hAFSCs上清液中HGF的浓度为3.44 ng/ml,而hAFSCs组上清液未检测到,两组有显著性差异(P<0.001)。DRG组织内神经突起长度测量显示,hAFSCs组突起为(251.60±7.94)μm,对照组突起为(52.74±6.77)μm,而HGF-hAFSCs组突起较前两组都显著增加(P<0.001),为(306.57±10.65)μm。结论:利用hAFSCs过表达HGF有助于DRG神经的突起生长,为神经损伤提供了一种新的治疗方案。 展开更多

关键词 肝细胞生长因子 人羊水干细胞 背根节 神经突起 大鼠

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激活素A与NGF协同刺激鸡胚背根神经节神经突起生长 被引量：1

8

作者 方琳 王轶楠 +4 位作者 葛敬岩 刘海岩 李晨光 李继茹 柳忠辉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1206-1209,共4页

目的:探讨激活素A(Activin A)与神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)共同刺激鸡胚背根神经节(DRG)神经突起生长作用。方法:采用8 d的鸡胚DRG原代培养法,通过Activin A与NGF联合刺激,观察DRG神经突起生长和DRG神经元存活情况。采用RT-... 目的:探讨激活素A(Activin A)与神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)共同刺激鸡胚背根神经节(DRG)神经突起生长作用。方法:采用8 d的鸡胚DRG原代培养法,通过Activin A与NGF联合刺激,观察DRG神经突起生长和DRG神经元存活情况。采用RT-PCR检测钙基因相关肽(CGRP)。结果:Activin A与NGF体外联合培养3 d时DRG神经突起生长比单纯NGF组更明显,DRG神经元存活数量也明显增加,Activin A与NGF联合作用可以明显促进CGRP mRNA表达。结论:Activin A对NGF诱导的鸡胚DRG神经突起生长和维持DRG神经元存活具有增强作用,提示二者的联合应用可能为治疗神经元损伤及变性疾病的应用提供了新的数据和实验依据。 展开更多

关键词 激活素A 神经生长因子 神经突起 钙基因相关肽

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轴突生长导向因子Sema 3A在鸡胚脊髓中的表达

9

作者 都爱莲 丁新生 +3 位作者 邓晓萱 姚娟 费丽 郭梅 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期393-396,共4页

为了探讨轴突生长导向因子 Sema 3 A在鸡胚脊髓中的表达 ,扩增含有 Sema 3 A编码序列的质粒并制备 RNA探针 ,应用原位杂交技术检测 Sema3 A m RNA在鸡胚不同发育期 ( E4、E6、E7、E8)脊髓中的表达。结果表明 ,在鸡胚发育的第 4d( E4) ,S... 为了探讨轴突生长导向因子 Sema 3 A在鸡胚脊髓中的表达 ,扩增含有 Sema 3 A编码序列的质粒并制备 RNA探针 ,应用原位杂交技术检测 Sema3 A m RNA在鸡胚不同发育期 ( E4、E6、E7、E8)脊髓中的表达。结果表明 ,在鸡胚发育的第 4d( E4) ,Sema 3 A m RNA表达在神经管周围和脊髓 ;在 E6期和 E7期 ,Sema 3 A表达在中央管周围和脊髓前角 ,以腹侧为著 ;在 E8期 ,表达主要集中在前角运动神经元 ,其它部位则信号明显较弱。结论 :Sema3 A在鸡胚不同发育期脊髓中的表达是动态的 ,呈现向腹侧集中的趋势 ; 展开更多

关键词 轴突生长导向因子Sema3A 鸡胚 脊髓 表达 神经

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SDF-1α对海马神经元突起延伸和增殖的影响(英文) 被引量：2

10

作者 刘素芳 邢孟韬 +3 位作者 韩雪飞 鄢文海 景莹 邢莹 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期611-616,共6页

目的:观察基质细胞衍生因子1α(stromal cell derived factor-1 alpha,SDF-1α)对体外培养的海马神经元突起延伸与凋亡的影响。方法:应用免疫细胞荧光方法观察SDF-1α和CXCR4在细胞的定位;以不同浓度的SDF-1α处理细胞,观察细胞形态的变... 目的:观察基质细胞衍生因子1α(stromal cell derived factor-1 alpha,SDF-1α)对体外培养的海马神经元突起延伸与凋亡的影响。方法:应用免疫细胞荧光方法观察SDF-1α和CXCR4在细胞的定位;以不同浓度的SDF-1α处理细胞,观察细胞形态的变化;并采用阻断剂AMD3100阻断CXCR4受体,观察其对细胞的影响;通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:免疫荧光细胞化学方法显示SDF-1α和CXCR4主要表达在体外培养的海马神经元的胞膜和胞浆;不同浓度的SDF-1α改变了细胞的形态,促进了突起延伸;AMD3100则抑制了细胞突起增长;流式细胞仪检测显示SDF-1α减少了细胞凋亡。结论:SDF-1α可影响海马神经元突起延伸和凋亡效应,该机制可能与受体CXCR4有关。 展开更多

关键词 形态学 神经突起生长 基质细胞衍生因子 细胞凋亡

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促成年脊髓再生研究的新方向:提高成年神经元内在生长能力 被引量：2

11

作者 杨萍 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期14-18,共5页

成年动物脊髓损伤后神经元不能再生,其主要原因是由于抑制性损伤微环境的存在和损伤神经元内在的再生能力低下。阻断和/或中和髓鞘及瘢痕组织中的抑制成分以及它们共同的信号通路是目前促进脊髓损伤后再生的主要策略之一,但仅阻断微环... 成年动物脊髓损伤后神经元不能再生,其主要原因是由于抑制性损伤微环境的存在和损伤神经元内在的再生能力低下。阻断和/或中和髓鞘及瘢痕组织中的抑制成分以及它们共同的信号通路是目前促进脊髓损伤后再生的主要策略之一,但仅阻断微环境中的抑制信号而不改变神经元内在生长状态,不足以诱导广泛的再生。因此,目前对如何提高成年神经元内在的再生能力,如提高成年神经元内cAMP/PKA水平、阻断神经元内Rho/ROCK信号通路、调节转录因子等,使其不再对抑制环境中抑制分子起反应,已成为研究成年脊髓再生的热点之一,本文综述了该研究领域的研究成果及研究进展。 展开更多

关键词 脊髓再生 突起生长抑制因子 内在生长状态 神经元

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静态性牵拉对DRG神经元生长的影响研究

12

作者 安子通 王安庆 +2 位作者 邓小萌 樊瑜波 刘美丽 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第S01期77-77,共1页

目的神经损伤后神经生长放缓、无方向性,轴突无法向靶细胞延伸,导致神经难以再生。有研究报道,牵张能定向牵引神经元向下端所支配神经元延伸,并且形成突触连接,但是其作用机制尚不明确。探究牵张诱导神经元轴突导向生长的分子作用机制,... 目的神经损伤后神经生长放缓、无方向性,轴突无法向靶细胞延伸,导致神经难以再生。有研究报道,牵张能定向牵引神经元向下端所支配神经元延伸,并且形成突触连接,但是其作用机制尚不明确。探究牵张诱导神经元轴突导向生长的分子作用机制,为神经再生提供新的治疗思路。方法采用递进式静态性牵拉加载方式,探究不同应变幅度对DRG神经元轴突生长的影响,免疫荧光染色检测细胞突起的偏转角度和延伸情况。 展开更多

关键词 神经再生 细胞突起 轴突导向 神经生长 DRG神经元 牵张 分子作用机制 突触连接

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纤维母细胞生长因子3对前丘脑γ-氨基丁酸能抑制性轴突的排斥作用

13

作者 黄红 余舒扬 +3 位作者 张蔚云 肖俐 徐贞刚 刘芳 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第10期1574-1578,共5页

目的研究纤维母细胞生长因子3(FGF3)对前丘脑γ-氨基丁酸能(GABA)抑制性神经元轴突的导向作用,探讨FGF3对丘脑神经网络形成的影响。方法采用免疫荧光法检测FGF3及前丘脑GABA标志基因在鸡胚间脑的表达及定位。采用DiI示踪法检测早期前丘... 目的研究纤维母细胞生长因子3(FGF3)对前丘脑γ-氨基丁酸能(GABA)抑制性神经元轴突的导向作用,探讨FGF3对丘脑神经网络形成的影响。方法采用免疫荧光法检测FGF3及前丘脑GABA标志基因在鸡胚间脑的表达及定位。采用DiI示踪法检测早期前丘脑GABA抑制性神经元轴突走向。三维凝胶共培养实验证明FGF3是否对早期前丘脑GABA抑制性神经纤维具有导向作用。结果前丘脑GABA细胞与FGF3+的下丘脑相邻,位于下丘脑上方。DiI示踪实验显示,在鸡胚发育的第6天(E6),前丘脑GABA抑制性神经纤维已伸展进入背侧丘脑。与空白对照组比较,FGF3不仅能显著促进前丘脑GABA抑制性神经纤维的生长(P<0.01),并且排斥新生前丘脑轴突向背侧丘脑方向延伸,前丘脑轴突的数量在FGF3一侧的数量明显少于对侧(P<0.01)。并且,FGF3对前丘脑轴突的导向功能可被FGF信号通路抑制剂SU5402所阻滞。结论表达在下丘脑的轴突化学导向分子FGF3对相邻前丘脑GABA抑制性神经纤维的路径选择具有导向作用。 展开更多

关键词 纤维母细胞生长因子3 GABA神经元 轴突导向

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远志皂苷元对新生大鼠皮质神经元的营养作用 被引量：13

14

作者 皮婷 薛小燕 +3 位作者 林炼峰 苏钜年 程欣 罗焕敏 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期40-44,共5页

目的研究远志皂苷元(senegenin)对新生大鼠皮质神经元的神经营养作用。方法原代培养新生24 h内SD大鼠皮质神经元,采用0.4%B27+DMEM/F12培养基制备营养缺乏模型。远志皂苷元0.5,1和2μmol.L-1及阳性对照组碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)10... 目的研究远志皂苷元(senegenin)对新生大鼠皮质神经元的神经营养作用。方法原代培养新生24 h内SD大鼠皮质神经元,采用0.4%B27+DMEM/F12培养基制备营养缺乏模型。远志皂苷元0.5,1和2μmol.L-1及阳性对照组碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)10μg.L-1。倒置显微镜下观察各组皮质神经元的形态及平均突起生长情况;免疫荧光染色法观察远志皂苷元的营养作用,检测神经元平均突起长度;另外在营养缺乏培养条件下,通过MTT法检测神经元的存活情况。结果分别加入药物作用3d后,远志皂苷元0.5,1及2μmol.L-1均可以促进神经元突起生长,从溶媒对照组(152±46)μm分别增加至186±51,188±34及(193±43)μm,其中远志皂苷元2μmol.L-1最为显著(P<0.01),稍弱于bFGF组(203±40)μm。营养缺乏培养条件下细胞存活率显著下降,从正常培养条件下(100.0±5.4)%降至(90.8±4.6)%(P<0.01)。远志皂苷元0.5,1及2μmol.L-1可明显改善营养缺乏引起的细胞死亡,细胞存活率分别为(109.7±3.2)%,(111.3±1.6)%及(112.9±4.8)%,且有一定的浓度依赖性(r=0.784,P<0.01)。结论远志皂苷元可以促进神经元的存活,并可促进皮质神经元突起生长,具有神经营养作用。 展开更多

关键词 远志皂苷元 皮质神经元 神经营养因子 突起生长

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与原代皮层细胞共培养促进PC12细胞在NGF诱导下向神经元分化 被引量：2

15

作者 周涛 许百男 +3 位作者 阙海萍 林秋霞 吕双红 刘少君 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期658-660,共3页

目的　建立体内细胞移植环境的体外共培养系统 ,研究原代皮层神经细胞对PC12细胞向神经元分化的影响。方法　将绿色荧光蛋白 (GFP)标记的PC12细胞植入原代神经细胞建立共培养系统 ,并以神经生长因子(NGF)诱导其中的PC12细胞向神经元分... 目的　建立体内细胞移植环境的体外共培养系统 ,研究原代皮层神经细胞对PC12细胞向神经元分化的影响。方法　将绿色荧光蛋白 (GFP)标记的PC12细胞植入原代神经细胞建立共培养系统 ,并以神经生长因子(NGF)诱导其中的PC12细胞向神经元分化 ,同时以单独培养的PC12细胞作为对照。激光共聚焦显微镜观察共培养体系及对照组中PC12细胞的分化和神经突起的形成情况。结果　与原代皮层细胞共培养的PC12细胞受NGF诱导后 ,分化的比例更高(由 5 7 13%提高到 6 7 77% ,P <0 0 1) ;数量多于对照组 (由 3 11提高到 4 0 7,P <0 0 0 1) ;神经突起的长度明显高于对照组 (由 14 6 34μm提高到 2 72 17μm ,P <0 0 0 1)。结论　与原代皮层细胞共培养有利于PC12细胞在NGF作用下分化为神经元样细胞及形成神经突起。 展开更多

关键词 PC12细胞 神经元 神经生长因子 共同培养 神经突起 绿色荧光蛋白

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人类新基因netrin-G_2的初步分析 被引量：1

16

作者 叶湘漓 李大力 +1 位作者 钟志宏 雷立芳 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期363-369,共7页

Netrins是与层粘连蛋白相关的、高度保守的小分子分泌蛋白家族成员,在细胞迁移和轴突导向活动中具有重要的作用,其同源物在多种模式动物中均已发现.Netrins分为2个亚家族:netrins和netrin-Gs;其中的netrin-G亚家族各成员之间具有高度的... Netrins是与层粘连蛋白相关的、高度保守的小分子分泌蛋白家族成员,在细胞迁移和轴突导向活动中具有重要的作用,其同源物在多种模式动物中均已发现.Netrins分为2个亚家族:netrins和netrin-Gs;其中的netrin-G亚家族各成员之间具有高度的相似性.目前,在人类中得到确证的只有netrin-G1,推测在人类中应该还有其它的netrin-G亚家族成员以及编码它的基因.从20周龄人胚中提取脑组织的总RNA,用PCRcDNA文库试剂盒制备脑组织cDNA文库,再用特异性引物进行PCR扩增,得到1条人netrin-G的全长cDNA,命名为人netrin-G2,用Northern杂交研究其表达,用进化树分析其与netrin家族各成员间的关系;证实人netrin-G2确实为netrin-G亚家族的1个新成员,该基因位于染色体的9q34,大小为2428bp,含有1个1593bp的假定开放阅读框,起始密码子为86位的甲硫氨酸,终止密码子为1678位的TGA,可编码1个大小为530个氨基酸的蛋白质;Northern杂交显示,人netrin-G2在脑组织中特异性表达,而在其它组织中却很少发现,推测人netrin-G2可能在中枢神经系统的发育过程中具有重要的作用,可能与刺激性神经冲动的传递以及神经调节有关. 展开更多

关键词 神经突起生长导向因子 糖基磷脂酰肌醇 轴突导向 进化树

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β-Netrin抗原表位的分析及其抗体的制备与鉴定 被引量：5

17

作者 余利红 高艳 +3 位作者 王利红 韩洪彦 孙志贤 张成岗 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期330-333,共4页

目的:制备抗神经细胞突起生长诱向因子(β-Netrin)的多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb),并对其特异性进行鉴定。方法:应用GoldKey软件分析人βNetrinC末端结构域氨基酸的序列(共114个氨基酸),确定抗原表位并人工合成多肽。然后采用碳化... 目的:制备抗神经细胞突起生长诱向因子(β-Netrin)的多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb),并对其特异性进行鉴定。方法:应用GoldKey软件分析人βNetrinC末端结构域氨基酸的序列(共114个氨基酸),确定抗原表位并人工合成多肽。然后采用碳化二亚胺法,将合成肽与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联作为抗原,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行HAT选择培养,间接ELISA法筛选阳性的杂交瘤细胞并克隆化。对分泌的mAb的效价、Ig亚类(型)及特异性,分别用间接ELISA和Westernblot进行鉴定。同时,通过免疫细胞化学染色鉴定抗体的特异性。另外,以偶联的分子免疫新西兰白兔,制备抗β-Netrin的pAb,用Westernblot鉴定其特异性。结果:以确定的此16个氨基酸的序列NH2-FRGKRT-LYPESWTDRG-COOH作为抗原表位,以人工合成多肽与BSA偶联作为免疫原,获得3株可稳定分泌特异性抗β-Netrin mAb的杂交瘤细胞。免疫细胞化学染色结果表明,这3株抗体均能特异性地识别细胞中的抗原。另外,制备了高效价的抗β-Netrin的pAb,并能特异性地识别原核表达的β-Netrin蛋白。结论:采用人工合成多肽作为半抗原成功地制备出抗β-Netrin的pAb和mAb。 展开更多

关键词 神经细胞突起生长诱向因子 合成肽 抗原表位 抗体制备 抗体鉴定

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