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大鼠神经突起因子的克隆及表达载体的构建
被引量：
2
1
作者
于娜
黄瑾
+2 位作者
仙玲玲
潘泽民
何玲
《石河子大学学报（自然科学版）》
CAS
2004年第2期139-142,共4页
从成年SD大鼠脑组织分离提取总RNA,反转录PCR扩增出鼠神经突起因子(neuritin)cDNA的最大开放阅读框(openingreadingframe,ORF)后,重组于克隆载体pGEM3z上,经PCR、限制内切酶鉴定和DNA测序鉴定,扩增出的cDNA426bp全部核苷酸序列与国外文...
从成年SD大鼠脑组织分离提取总RNA,反转录PCR扩增出鼠神经突起因子(neuritin)cDNA的最大开放阅读框(openingreadingframe,ORF)后,重组于克隆载体pGEM3z上,经PCR、限制内切酶鉴定和DNA测序鉴定,扩增出的cDNA426bp全部核苷酸序列与国外文献报道的完全一致;在已构建好的重组克隆载体neuritin pGEM3z基础上,将该neuritinORF亚克隆到原核表达载体pQE30上,为获取具有天然活性的neuritin蛋白及其功能研究提供了基础。
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关键词
大鼠
神经突起因子
克隆
构建
非融合表达载体
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职称材料
β-Netrin抗原表位的分析及其抗体的制备与鉴定
被引量：
5
2
作者
余利红
高艳
+3 位作者
王利红
韩洪彦
孙志贤
张成岗
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期330-333,共4页
目的:制备抗神经细胞突起生长诱向因子(β-Netrin)的多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb),并对其特异性进行鉴定。方法:应用GoldKey软件分析人βNetrinC末端结构域氨基酸的序列(共114个氨基酸),确定抗原表位并人工合成多肽。然后采用碳化...
目的:制备抗神经细胞突起生长诱向因子(β-Netrin)的多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb),并对其特异性进行鉴定。方法:应用GoldKey软件分析人βNetrinC末端结构域氨基酸的序列(共114个氨基酸),确定抗原表位并人工合成多肽。然后采用碳化二亚胺法,将合成肽与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联作为抗原,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行HAT选择培养,间接ELISA法筛选阳性的杂交瘤细胞并克隆化。对分泌的mAb的效价、Ig亚类(型)及特异性,分别用间接ELISA和Westernblot进行鉴定。同时,通过免疫细胞化学染色鉴定抗体的特异性。另外,以偶联的分子免疫新西兰白兔,制备抗β-Netrin的pAb,用Westernblot鉴定其特异性。结果:以确定的此16个氨基酸的序列NH2-FRGKRT-LYPESWTDRG-COOH作为抗原表位,以人工合成多肽与BSA偶联作为免疫原,获得3株可稳定分泌特异性抗β-Netrin mAb的杂交瘤细胞。免疫细胞化学染色结果表明,这3株抗体均能特异性地识别细胞中的抗原。另外,制备了高效价的抗β-Netrin的pAb,并能特异性地识别原核表达的β-Netrin蛋白。结论:采用人工合成多肽作为半抗原成功地制备出抗β-Netrin的pAb和mAb。
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关键词
神经
细胞
突起
生长诱向
因子
合成肽
抗原表位
抗体制备
抗体鉴定
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职称材料
人类新基因netrin-G_2的初步分析
被引量：
1
3
作者
叶湘漓
李大力
+1 位作者
钟志宏
雷立芳
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期363-369,共7页
Netrins是与层粘连蛋白相关的、高度保守的小分子分泌蛋白家族成员,在细胞迁移和轴突导向活动中具有重要的作用,其同源物在多种模式动物中均已发现.Netrins分为2个亚家族:netrins和netrin-Gs;其中的netrin-G亚家族各成员之间具有高度的...
Netrins是与层粘连蛋白相关的、高度保守的小分子分泌蛋白家族成员,在细胞迁移和轴突导向活动中具有重要的作用,其同源物在多种模式动物中均已发现.Netrins分为2个亚家族:netrins和netrin-Gs;其中的netrin-G亚家族各成员之间具有高度的相似性.目前,在人类中得到确证的只有netrin-G1,推测在人类中应该还有其它的netrin-G亚家族成员以及编码它的基因.从20周龄人胚中提取脑组织的总RNA,用PCRcDNA文库试剂盒制备脑组织cDNA文库,再用特异性引物进行PCR扩增,得到1条人netrin-G的全长cDNA,命名为人netrin-G2,用Northern杂交研究其表达,用进化树分析其与netrin家族各成员间的关系;证实人netrin-G2确实为netrin-G亚家族的1个新成员,该基因位于染色体的9q34,大小为2428bp,含有1个1593bp的假定开放阅读框,起始密码子为86位的甲硫氨酸,终止密码子为1678位的TGA,可编码1个大小为530个氨基酸的蛋白质;Northern杂交显示,人netrin-G2在脑组织中特异性表达,而在其它组织中却很少发现,推测人netrin-G2可能在中枢神经系统的发育过程中具有重要的作用,可能与刺激性神经冲动的传递以及神经调节有关.
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关键词
神经
突起
生长导向
因子
糖基磷脂酰肌醇
轴突导向
进化树
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职称材料
题名
大鼠神经突起因子的克隆及表达载体的构建
被引量：
2
1
作者
于娜
黄瑾
仙玲玲
潘泽民
何玲
机构
石河子大学医学院
出处
《石河子大学学报（自然科学版）》
CAS
2004年第2期139-142,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30260029)
新疆生产建设兵团医学专项基金(NKBOISDXNK29YX)
文摘
从成年SD大鼠脑组织分离提取总RNA,反转录PCR扩增出鼠神经突起因子(neuritin)cDNA的最大开放阅读框(openingreadingframe,ORF)后,重组于克隆载体pGEM3z上,经PCR、限制内切酶鉴定和DNA测序鉴定,扩增出的cDNA426bp全部核苷酸序列与国外文献报道的完全一致;在已构建好的重组克隆载体neuritin pGEM3z基础上,将该neuritinORF亚克隆到原核表达载体pQE30上,为获取具有天然活性的neuritin蛋白及其功能研究提供了基础。
关键词
大鼠
神经突起因子
克隆
构建
非融合表达载体
Keywords
rat
neuritin
cloning
construction
nonfusion expression vector
分类号
Q523.8 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
β-Netrin抗原表位的分析及其抗体的制备与鉴定
被引量：
5
2
作者
余利红
高艳
王利红
韩洪彦
孙志贤
张成岗
机构
军事医学科学院放射医学研究所
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期330-333,共4页
基金
国家海外青年学者合作研究基金项目(No.30128010)
国家自然科学基金项目(No.39900041)
北京市自然科学基金资助项目(No.7002030)
文摘
目的:制备抗神经细胞突起生长诱向因子(β-Netrin)的多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb),并对其特异性进行鉴定。方法:应用GoldKey软件分析人βNetrinC末端结构域氨基酸的序列(共114个氨基酸),确定抗原表位并人工合成多肽。然后采用碳化二亚胺法,将合成肽与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联作为抗原,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行HAT选择培养,间接ELISA法筛选阳性的杂交瘤细胞并克隆化。对分泌的mAb的效价、Ig亚类(型)及特异性,分别用间接ELISA和Westernblot进行鉴定。同时,通过免疫细胞化学染色鉴定抗体的特异性。另外,以偶联的分子免疫新西兰白兔,制备抗β-Netrin的pAb,用Westernblot鉴定其特异性。结果:以确定的此16个氨基酸的序列NH2-FRGKRT-LYPESWTDRG-COOH作为抗原表位,以人工合成多肽与BSA偶联作为免疫原,获得3株可稳定分泌特异性抗β-Netrin mAb的杂交瘤细胞。免疫细胞化学染色结果表明,这3株抗体均能特异性地识别细胞中的抗原。另外,制备了高效价的抗β-Netrin的pAb,并能特异性地识别原核表达的β-Netrin蛋白。结论:采用人工合成多肽作为半抗原成功地制备出抗β-Netrin的pAb和mAb。
关键词
神经
细胞
突起
生长诱向
因子
合成肽
抗原表位
抗体制备
抗体鉴定
Keywords
Netrin
synthetic peptide
epitope
antibody
preparation
identification
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
人类新基因netrin-G_2的初步分析
被引量：
1
3
作者
叶湘漓
李大力
钟志宏
雷立芳
机构
湖南师范大学医学院
湖南师范大学生命科学学院
中南大学湘雅三医院神经内科
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期363-369,共7页
基金
湖南省自然科学基金项目(No.06JJ50062)~~
文摘
Netrins是与层粘连蛋白相关的、高度保守的小分子分泌蛋白家族成员,在细胞迁移和轴突导向活动中具有重要的作用,其同源物在多种模式动物中均已发现.Netrins分为2个亚家族:netrins和netrin-Gs;其中的netrin-G亚家族各成员之间具有高度的相似性.目前,在人类中得到确证的只有netrin-G1,推测在人类中应该还有其它的netrin-G亚家族成员以及编码它的基因.从20周龄人胚中提取脑组织的总RNA,用PCRcDNA文库试剂盒制备脑组织cDNA文库,再用特异性引物进行PCR扩增,得到1条人netrin-G的全长cDNA,命名为人netrin-G2,用Northern杂交研究其表达,用进化树分析其与netrin家族各成员间的关系;证实人netrin-G2确实为netrin-G亚家族的1个新成员,该基因位于染色体的9q34,大小为2428bp,含有1个1593bp的假定开放阅读框,起始密码子为86位的甲硫氨酸,终止密码子为1678位的TGA,可编码1个大小为530个氨基酸的蛋白质;Northern杂交显示,人netrin-G2在脑组织中特异性表达,而在其它组织中却很少发现,推测人netrin-G2可能在中枢神经系统的发育过程中具有重要的作用,可能与刺激性神经冲动的传递以及神经调节有关.
关键词
神经
突起
生长导向
因子
糖基磷脂酰肌醇
轴突导向
进化树
Keywords
netrin
GPI
axon guidance
phylogenetic tree
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大鼠神经突起因子的克隆及表达载体的构建
于娜
黄瑾
仙玲玲
潘泽民
何玲
《石河子大学学报（自然科学版）》
CAS
2004
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
β-Netrin抗原表位的分析及其抗体的制备与鉴定
余利红
高艳
王利红
韩洪彦
孙志贤
张成岗
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
人类新基因netrin-G_2的初步分析
叶湘漓
李大力
钟志宏
雷立芳
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
1
在线阅读
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职称材料
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