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神经生长因子低亲和力受体(p75NTR)的模拟配基的筛选 被引量：2
1
作者 高鹏 王欣 +1 位作者 陈虹 黄秉仁 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期769-774,共6页
人神经生长因子低亲和力受体 (p75NTR)转染R2细胞而建立的R2L1细胞 ,在去血清培养时发生凋亡 ,该作用可被神经生长因子 (NGF)所抑制 .用R2L1和R2两种细胞差式筛选噬菌体随机 7肽库和 1 2肽库 ,获得和p75NTR特异结合的噬菌体 .测定DNA序... 人神经生长因子低亲和力受体 (p75NTR)转染R2细胞而建立的R2L1细胞 ,在去血清培养时发生凋亡 ,该作用可被神经生长因子 (NGF)所抑制 .用R2L1和R2两种细胞差式筛选噬菌体随机 7肽库和 1 2肽库 ,获得和p75NTR特异结合的噬菌体 .测定DNA序列后得到有关多肽的氨基酸序列 .7肽库共有序列为C (H D)LP(K M)HPM C ;1 2肽库优势序列为TLPSPLALLTVH .化学合成相应的 2个短肽 .用细胞结合法和ELISA方法证实阳性噬菌体和合成短肽能与p75NTR结合 。 展开更多
关键词 神经生长因子低亲和力受体 神经生长因子 噬菌体展示肽库 氨基酸序列
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利用DDRT-PCR技术分析神经生长因子低亲和力受体诱导的细胞凋亡过程中基因表达的差异 被引量：1
2
作者 顾继杰 黄秉仁 蔡良琬 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第5期610-616,共7页
转染了Ｐ７５ＮＧＦＲ的Ｒ２神经细胞系Ｒ２Ｌ１在去血清的培养时可以诱导细胞凋亡的发生．此凋亡可以被ＲＮＡ合成抑制剂放线菌素Ｄ和蛋白质合成抑制剂环己酰胺所抑制．利用ＤＤＲＴ－ＰＣＲ技术比较了去血清培养的发生凋亡的Ｒ２Ｌ１... 转染了Ｐ７５ＮＧＦＲ的Ｒ２神经细胞系Ｒ２Ｌ１在去血清的培养时可以诱导细胞凋亡的发生．此凋亡可以被ＲＮＡ合成抑制剂放线菌素Ｄ和蛋白质合成抑制剂环己酰胺所抑制．利用ＤＤＲＴ－ＰＣＲ技术比较了去血清培养的发生凋亡的Ｒ２Ｌ１细胞与有血清培养的不发生凋亡的Ｒ２Ｌ１细胞以及去血清培养的不发生凋亡的Ｒ２Ｐ细胞基因表达的差异．克隆了数个特异或差异表达的短ｃＤＮＡ片段，经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交证实其中两个片段ＬＩＡＲＥＳＴ－１和ＬＩＡＲＥＳＴ－２表达量在凋亡细胞中显著高于不发生凋亡的细胞中，ＧｅｎＢａｎｋ检索表明此二片段为新的ｃＤＮＡ序列并给予登录号Ｕ４７３１５和Ｕ４７３１６．另有一个ｃＤＮＡ片段ＬＩＡＲＣＤ－３在凋亡细胞中受到了明显的抑制，经检索为一已知的与前强啡肽原上游调控区结合的ＤＮＡ结合蛋白ｃＤＮＡ编码区的一部分。 展开更多
关键词 神经生长因子 低亲和力受体 细胞凋亡 差示PCR
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人神经生长因子低亲和力受体（p^（75）NGFR）cDNA的克隆及其在神经细胞中表达活性的初步研究 被引量：1
3
作者 易明 顾继杰 +1 位作者 黄秉仁 蔡良琬 《生物化学杂志》 CSCD 1996年第1期17-21,共5页
利用酸性异硫氰酸胍－酚－氯仿一步法从人胎儿基底前脑中提取总ＲＮＡ，用逆转录与聚合酶链反应相结合的ＲＴ－ＰＣＲ法，扩增出人神经生长因子低亲和力受体ｐ^（７５）ＮＧＦＲ基因ｃＤＮＡ，在限制性内切酶ＳｍａⅠ存在下的连接体系... 利用酸性异硫氰酸胍－酚－氯仿一步法从人胎儿基底前脑中提取总ＲＮＡ，用逆转录与聚合酶链反应相结合的ＲＴ－ＰＣＲ法，扩增出人神经生长因子低亲和力受体ｐ^（７５）ＮＧＦＲ基因ｃＤＮＡ，在限制性内切酶ＳｍａⅠ存在下的连接体系中，将扩增出的ｃＤＮＡ片段克隆入ｐＵＣ１２的ＳｍａⅠ位或，经限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ和ＰｓｔⅠ酶切鉴定是否插入以及ＨｉｎｄⅢ酶切鉴定方向。将重组质粒中的ｐ^（７５）ＮＧＦＲ的ｃＤＮＡ再次亚克隆至ｐＵＣ１２载体中后，以其双链ＤＮＡ为模板，用末端终止法测出其全部核苷酸顺序，证实其核苷酸编码的ｐ^（７５）ＮＧＦＲ除两个碱基突变外，其余与文献完全一致。完整的ｐ^（７５）ＮＧＦＲ的ｃＤＮＡ分两步克隆到逆转录病毒表达载体ｐＸＴ－１，经ＰＡ３１７包装细胞株体外包装后、收集病毒上清转染条件不死性大鼠小脑神经细胞系Ｒ２．初步结果表明转染了ｐ^（７５）ＮＧＦＲ的Ｒ２细胞株去除ＮＧＦ培养时出现程序化死亡的典型特征梯型ＤＮＡ带。 展开更多
关键词 神经生长因子 低亲和力受体 神经细胞 基因克隆
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神经生长因子及其受体在人胚胎结肠神经系统中的表达与分布 被引量：6
4
作者 李龙 王忠荣 王亮 《实用医学杂志》 CAS 2006年第17期1961-1963,共3页
目的:研究人胚胎结肠神经系统的发育过程中神经生长因子(NGF)与其两个受体TrkA、P75NTR在结肠神经系统中的分布及与结肠神经系统发育的关系。方法:采用一抗为PGP9.5、NGF、TrkA、P75NTR的免疫组织化学技术,显示结肠神经系统中的神经元... 目的:研究人胚胎结肠神经系统的发育过程中神经生长因子(NGF)与其两个受体TrkA、P75NTR在结肠神经系统中的分布及与结肠神经系统发育的关系。方法:采用一抗为PGP9.5、NGF、TrkA、P75NTR的免疫组织化学技术,显示结肠神经系统中的神经元。结果:随着胚胎结肠神经系统的发育,P75NTR表达水平不断下降,而NGF、TrkA表达水平不断上升,P75NTR与NGF、TrkA的比例在不断变化。结论:NGF、TrkA、P75NTR参与了结肠神经系统的发育。 展开更多
关键词 肠神经系统 神经生长因子 低亲和力受体P75NTR 高亲和力受体TrkA 结肠 人胚胎
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急性B淋巴系白血病细胞CD271表达和血清神经生长因子水平的临床意义
5
作者 韩秀华 徐开林 +1 位作者 曾令宇 李振宇 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第5期1273-1276,共4页
本研究检测急性B淋巴系白血病(B-ALL)患者血清神经生长因子(NGF)水平及骨髓白血病细胞群表面NGF低亲和性受体CD271的表达,并探讨两者的临床意义。应用酶标记免疫吸附分析法测定B-ALL患者血清NGF水平,应用流式细胞术测定患者骨髓白血病... 本研究检测急性B淋巴系白血病(B-ALL)患者血清神经生长因子(NGF)水平及骨髓白血病细胞群表面NGF低亲和性受体CD271的表达,并探讨两者的临床意义。应用酶标记免疫吸附分析法测定B-ALL患者血清NGF水平,应用流式细胞术测定患者骨髓白血病细胞群表面CD271的表达水平。结果表明,病例组患者NGF水平与对照组比较明显升高(t=4.191,p<0.05),而白血病细胞表面CD271表达与对照组比较明显降低(t=4.898,p<0.05)。25例初治B-ALL患者经CVAD方案化疗1个周期后完全缓解(CR)率为64%(16/25)。未缓解(NR)组患者化疗后NGF水平和CD271表达与对照组比较差异均有统计学意义(t=3.976,p<0.05和t=5.052,p<0.05),而CR组化疗后NGF水平和CD271表达与对照组比较差异均无统计学意义(t=1.102,p>0.05和t=1.150,p>0.05)。CR组和NR组患者化疗前CD271表达比较差异有统计学意义(t=3.889,p<0.05),但NGF水平比较差异无统计学意义(t=0.476,p>0.05)。CR组和NR组患者化疗后NGF水平及CD271表达比较差异均有统计学意义(t=3.751,p<0.05和t=4.678,p<0.05)。50%(8/16)例患者在随访过程中复发,复发患者NGF水平和CD271表达分别为(168.00±61.66)pg/ml和(52.29±13.00)%,与对照组比较差异均有统计学意义(t=5.284,p<0.05和t=6.073,p<0.05),余8例患者在缓解期NGF水平和CD271表达分别为(81.13±25.32)pg/ml和(78.45±7.12)%,与对照组比较差异无统计学意义(t=1.228,p>0.05和t=1.144,p>0.05)。B-ALL患者NGF高水平组和低水平组生存时间比较差异无统计学意义(p=0.750),同时CD271高表达组和低表达组生存时间比较差异无统计学意义(p=0.170)。结论:B-ALL患者血清NGF水平升高和骨髓白血病细胞CD271表达降低与白血病发生发展有关,这两项指标可能对疗效和预后判断具有一定的参考价值。 展开更多
关键词 急性B淋巴细胞白血病 神经生长因子 低亲和性NGF受体 CD271 生存时间
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电鳐电器官膜上的高特异性、低亲和力TCP结合部位 被引量：2
6
作者 郭崇志 池木根 孙曼霁 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期286-292,共7页
本研究对电鳐电器官中的膜受体与神经性毒剂和重活化剂间的作用进行了探讨。发现在电鳐电器官中有一个高特异性、低亲和力的 2 -噻吩基 -哌啶基 -1,1-环己烷 ( TCP)结合位点 ,这个结合位点具有可饱和性。 TCP和苯环利啶 ( PCP)为同类物 ... 本研究对电鳐电器官中的膜受体与神经性毒剂和重活化剂间的作用进行了探讨。发现在电鳐电器官中有一个高特异性、低亲和力的 2 -噻吩基 -哌啶基 -1,1-环己烷 ( TCP)结合位点 ,这个结合位点具有可饱和性。 TCP和苯环利啶 ( PCP)为同类物 ,它们作用于 TCP/ PCP同一位点。 [3H] TCP结合的 Bmax=1.16pmol/ mg protein,KD=16.13nmol/ L。有机磷毒剂能竞争性地抑制标记化合物 [3H] TCP与 TCP结合位点的结合 ,终浓度 10 - 3mol/ L的 Vx,梭曼 ,沙林及塔崩分别可产生 81% ,48% ,41%及38%的抑制。而膦酰化乙酰胆碱脂酶的四种重活化剂 HI-6、LuH6 、2 -PAM及 TMB4也对 [3H] TCP与 TCP受体的结合产生5 3%、48%、30 %及 30 展开更多
关键词 电鳐 电器官 膜上 高特异性 低亲和力 TCP结合部位 受体 神经性毒剂
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NGF与TrkA受体在儿童膀胱过度活动症中的研究进展
7
作者 何萍 潮敏 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期331-336,共6页
神经生长因子(NGF)因其在神经细胞的存活、生长以及分化过程中发挥重要作用而得到广泛研究。它分布于机体的各处,根据所结合受体发挥不同的病理生理作用。原肌球蛋白相关激酶A(TrkA)是其高亲和力受体,诸多研究表明NGF在与其结合后,根据... 神经生长因子(NGF)因其在神经细胞的存活、生长以及分化过程中发挥重要作用而得到广泛研究。它分布于机体的各处,根据所结合受体发挥不同的病理生理作用。原肌球蛋白相关激酶A(TrkA)是其高亲和力受体,诸多研究表明NGF在与其结合后,根据其下游不同的信号转导通路而发挥不同作用。NGF与其结合后还对体内发生的其他信号转导通路有交叉影响作用。本文从不同的疾病症状对NGF与TrkA结合后的信号转导通路进行综述,从而探讨NGF/TrkA信号通路在儿童膀胱过度活动症的作用。 展开更多
关键词 神经生长因子 儿童膀胱过度活动症 原肌球蛋白相关激酶A受体 低亲和力神经营养因子p75受体 信号转导通路
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大鼠神经元凋亡相关碱性蛋白ARBP cDNA的克隆和功能
8
作者 白氡 明洪 +2 位作者 周新富 陈虹 黄秉仁 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期36-40,共5页
利用cDNA末端快速扩增 (RACE)方法 ,得到凋亡相关碱性蛋白 (ARBP)的全长序列 ,进而构建了其真核表达体系以了解其功能 .ARBP的全长cDNA序列为 90 1bp ,其开放读码框架编码 10 9个氨基酸残基 .免疫组化分析表明 ,ARBP蛋白在大鼠体内有广... 利用cDNA末端快速扩增 (RACE)方法 ,得到凋亡相关碱性蛋白 (ARBP)的全长序列 ,进而构建了其真核表达体系以了解其功能 .ARBP的全长cDNA序列为 90 1bp ,其开放读码框架编码 10 9个氨基酸残基 .免疫组化分析表明 ,ARBP蛋白在大鼠体内有广泛的分布 .在R2L1细胞中转染ARBP反义cDNA表达载体后 ,既可以促进细胞增殖 ,又可以抑制去血清诱导的细胞凋亡 .因而 ,ARBP蛋白对神经元细胞的凋亡具有重要的调节作用 . 展开更多
关键词 神经营养因子低亲和力受体 P75NTR CDNA末端快速扩增 凋亡相关碱性蛋白 大鼠 神经元
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p75NTR-Fc融合蛋白在毕赤酵母中的表达、鉴定和活性分析 被引量：2
9
作者 周素芳 王欣 +1 位作者 陈虹 黄秉仁 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期604-609,共6页
为在酵母细胞中表达出具有生物活性的p75NTR Fc融合蛋白 ,采用PCR方法分别扩增α因子 (α factor)和p75NTR Fc基因 ,经重叠PCR ,获得α factor p75NTR Fc基因 .DNA序列分析该融合基因后 ,插入pAO815载体并构建串联多拷贝表达载体pAO815... 为在酵母细胞中表达出具有生物活性的p75NTR Fc融合蛋白 ,采用PCR方法分别扩增α因子 (α factor)和p75NTR Fc基因 ,经重叠PCR ,获得α factor p75NTR Fc基因 .DNA序列分析该融合基因后 ,插入pAO815载体并构建串联多拷贝表达载体pAO815 3α factor p75NTR Fc .重组质粒电转化酵母GS115细胞后摇瓶培养 ,1%甲醇诱导表达的融合蛋白经ProteinA亲和层析和SephadexG 10 0纯化 ,Western印迹、N末端测序进行蛋白质鉴定 ,ELISA及细胞培养进行生物活性分析 .SDS PAGE分析显示 ,表达产物以可溶性分子形式存在于培养上清中 ,诱导第 4d的表达量最高 ,占上清总蛋白 6 0 %以上 ,ProteinA纯化后有 2条蛋白带 ,免疫印迹分析这 2条蛋白带均能和抗p75及抗IgG抗体结合 ,N末端序列测定证实 1条为完整p75NTR Fc ,1条为其蛋白酶降解带 .ELISA等分析表明 ,p75NTR Fc能与NGF结合 ,p75NTR Fc能抑制NGF对PC12细胞的分化作用 . 展开更多
关键词 神经生长因子低亲和力受体 FC融合蛋白 基因表达 毕赤酵母
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