甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因遗传进化分析 被引量：10

1

作者 田疆 周经姣 +9 位作者 陈艺韵 梁瑜 晏辉钧 周俊梅 刘岩 付春云 高洪丽 方丹云 狄飚 江丽芳 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期207-212,共6页

【目的】了解季节性H1N1流感病毒与2009年新型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的遗传进化关系,探讨甲型H1N1流感病毒的遗传变异规律。【方法】分别从2006年和2009年流感病人标本中分离并鉴定出季节性HIN1流感病毒和新型H1N1流感病毒,用R... 【目的】了解季节性H1N1流感病毒与2009年新型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的遗传进化关系,探讨甲型H1N1流感病毒的遗传变异规律。【方法】分别从2006年和2009年流感病人标本中分离并鉴定出季节性HIN1流感病毒和新型H1N1流感病毒,用RT-PCR技术扩增了病毒NA基因全序列,并对其分子进化和重要功能位点的遗传变异进行了分析。【结果】2009年新型H1N1流感病毒与2006年季节性HIN1流感病毒比较,NA基因的同源性较低(77.9%～78.8%),与世界各地不同年代代表株及WHO推荐的1979～2010年季节性流感疫苗株比较,NA基因的同源性也较低(78.1%～79.3%),但与WHO推荐的2009年新型H1N1流感疫苗株比较同源性则高达99%以上;系统进化分析结果表明,2009年新型H1N1流感病毒NA基因与欧亚猪流感病毒株A/swine/Belgium/1/1983的亲缘关系最近;并发现自2005年以来季节性H1N1流感病毒NA基因的某些抗原位点和神经氨酸酶活性位点已发生了变异。【结论】2009年新型H1N1流感病毒NA基因可能来源于欧亚猪流感病毒;接种季节性流感疫苗不能对本次流行的新型流感产生有效的免疫保护作用;季节性H1N1流感病毒在流行过程中NA基因已发生了一定的变异,有必要持续跟踪和监测病毒的变异情况。 展开更多

关键词 甲型H1N1流感病毒 神经氨酸酶基因 遗传进化

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华东地区家鸭中N2亚型低致病性禽流感病毒神经氨酸酶基因的重排 被引量：4

2

作者 仇保丰 刘武杰 +3 位作者 唐应华 胡顺林 彭大新 刘秀梵 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第1期3-6,共4页

为研究华东地区家鸭中低致病性禽流感病毒NA基因的遗传进化规律,对2000年-2006年分离的包括H3N2,H5N2,H6N2,H9N2和H11N2的44株禽流感病毒的NA基因进行了遗传进化分析。44株病毒NA基因之间的同源性为82.9%-99.9%,4株H9N2病毒的NA基因同... 为研究华东地区家鸭中低致病性禽流感病毒NA基因的遗传进化规律,对2000年-2006年分离的包括H3N2,H5N2,H6N2,H9N2和H11N2的44株禽流感病毒的NA基因进行了遗传进化分析。44株病毒NA基因之间的同源性为82.9%-99.9%,4株H9N2病毒的NA基因同源性为96.9%-99.9%,所有H3N2病毒的NA基因同源性为92.3%-99.9%,H5N2、H6N2和H11N2病毒的同种亚型毒株间的NA基因同源性变化幅度较大,相反,有些不同HA亚型毒株间的NA基因同源性反而很高。进一步分析NA基因推导的氨基酸序列也表现出相似的规律。华东地区家鸭中N2亚型的禽流感病毒正处于不断地进化状态中,不同N2亚型的禽流感病毒之间已存在NA基因的重排。 展开更多

关键词 家鸭 禽流感病毒 神经氨酸酶基因 基因重排

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马流感病毒(A/Equine/Qinghai/1/94)神经氨酸酶基因的克隆与同源性分析 被引量：2

3

作者 杨建德 王文军 +7 位作者 薛飞 王晓钧 朱远茂 赵立平 吕晓玲 沈荣显 许景军 相文华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期334-337,共4页

本试验根据已发表的马流感病毒神经氨酸酶 (NA)基因序列 ,设计并合成一对特异性引物 ,经反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)成功扩增出了我国马流感病毒青海株 (A/Equine/Qinghai/1/94 )NA基因 ,将片段连接到PGEM_T_easy载体并转化DH5α ,提... 本试验根据已发表的马流感病毒神经氨酸酶 (NA)基因序列 ,设计并合成一对特异性引物 ,经反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)成功扩增出了我国马流感病毒青海株 (A/Equine/Qinghai/1/94 )NA基因 ,将片段连接到PGEM_T_easy载体并转化DH5α ,提取阳性菌落的质粒经EcRo1酶切和PCR鉴定其大小均为 1.4Kb左右 ,对其测序并构建NA基因进化树。经过比较分析发现 ,我国马流感病毒青海株与A/Equine/Alaska/1/91、A/Equine/Tennessee/5 /86和A/Equine/Algiers/72等关系较近 ,核苷酸同源率为 98.2 %～ 97.4 % ;与我国马流感吉林株 (A/Equine/Jilin/1/89)关系较远 ,核苷酸同源率仅为72 .0 % ;而与H7N7亚型马流感病毒A/Equine/Prague/1/5 6核苷酸同源率仅为 38.0 %。 展开更多

关键词 马流感病毒 神经氨酸酶基因 克隆 同源性分析

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11株H9N2亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因遗传分析 被引量：2

4

作者 黄欣梅 李银 +3 位作者 赵冬敏 刘宇卓 杨婧 韩凯凯 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期150-155,共6页

[目的]本文旨在了解H9N2亚型禽流感病毒神经氨酸酶（NA）基因的遗传特点和变异情况。[方法]选择2008—2013年从江苏、安徽和浙江省家禽中分离的11株H9N2亚型禽流感病毒,用RT-PCR方法对NA基因片段进行扩增、克隆和序列测定,并对其核苷酸... [目的]本文旨在了解H9N2亚型禽流感病毒神经氨酸酶（NA）基因的遗传特点和变异情况。[方法]选择2008—2013年从江苏、安徽和浙江省家禽中分离的11株H9N2亚型禽流感病毒,用RT-PCR方法对NA基因片段进行扩增、克隆和序列测定,并对其核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行同源性及遗传进化分析。[结果]11株毒株的NA基因核苷酸和推导的氨基酸同源性分别为86.2%~99.5%和86.9%~99.1%,均属于欧亚分支。其中9株鸡源毒株属于Y280-like亚系,在NA蛋白颈部63~65位点缺失了3个氨基酸;2株鸭源毒株属于G1-like亚系,在颈部39~40位点缺失了2个氨基酸。11株分离株除了69、146、200、234位点处潜在的N-糖基化位点比较保守以外,其余的糖基化位点都出现了变异情况。红细胞结合位点（HB）在431~433位点区域比较保守,但在366~373和399~404位点区域的氨基酸发生了明显的变异。抗原决定簇中部分氨基酸序列变异也较为活跃,推测与使用疫苗后的抗体选择有关。NA蛋白酶活性位点处的氨基酸非常保守,没有发生与抗神经氨酸酶抑制剂相关的氨基酸突变。[结论]江苏、安徽、浙江等省养殖鸡群中的H9N2亚型禽流感病毒仍以Y280-like分支较为常见,鸭群中出现G1-like分支应引起人们的注意。NA基因存在一定的变异,应加强对该类病毒的分子流行病学监测。 展开更多

关键词 H9N2亚型禽流感病毒 神经氨酸酶基因 遗传分析

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表达H5亚型禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶双基因重组禽痘病毒的构建 被引量：7

5

作者 乔传玲 乔传玲 +8 位作者 于康震 于康震 贾永清 刘明 刘明 孟庆文 孟庆文 田国彬 唐秀英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期178-,共1页

血凝素（ＨＡ）和神经氨酸酶（ＮＡ）是禽流感病毒（ＡＩＶ）的两种表面糖蛋白，主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／３／９６（Ｈ５Ｎ１）的ＳＰＦ... 血凝素（ＨＡ）和神经氨酸酶（ＮＡ）是禽流感病毒（ＡＩＶ）的两种表面糖蛋白，主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／３／９６（Ｈ５Ｎ１）的ＳＰＦ鸡胚尿囊毒ＲＮＡ，ＲＴ－ＰＣＲ扩增完整的ＮＡ ｃＤＮＡ基因，将其克隆到载体ｐＳＹ５３８中的禽痘病毒早晚期启动子 ＬＰ２ＥＰ２的下游，然后再将含有启动子的 ＮＡ基因片段亚克隆到已有的ＡＩＶＨＡ基因重组禽痘病毒转移载体ｐＳＹ（ＨＡ＋ＬａｃＺ）中，构建了ＨＡ、ＮＡ双重组禽痘病毒转移载体ｐＳＹ（ＨＡ＋ＮＡ＋ＬａｃＺ），将它与禽痘病毒疫苗株Ｓ－ＦＰＶ－０１７共转染鸡胚成纤维细胞，在Ｘ－ｇａｌ存在的条件下，经蓝斑筛选、六选蚀斑纯化、ＰＣＲ鉴定等，结果表明已获得一株能同时稳定表达ＨＡ和ＮＡ蛋白的重组禽痘病毒，为禽流感基因工程病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒 血凝素基因 神经氨酸酶基因 重组禽痘病毒

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2014—2016年广东省肇庆市人感染H7N9禽流感病毒基因组特征分析 被引量：5

6

作者 谭翰清 程洁萍 +5 位作者 谭海芳 朱颖梅 林凤 梁晓晴 陈捷 麦炜 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期202-207,240,共7页

目的了解广东省肇庆市2014-2016年人感染H7N9禽流感病毒基因进化特征。方法对肇庆市17例H7N9患者咽拭核酸直接进行8节段基因序列扩增与测定,用BioEdit5.0、MEGA6.0进行同源性和重要氨基酸位点分析,采用Neighbor-Joining法构建进化树,参... 目的了解广东省肇庆市2014-2016年人感染H7N9禽流感病毒基因进化特征。方法对肇庆市17例H7N9患者咽拭核酸直接进行8节段基因序列扩增与测定,用BioEdit5.0、MEGA6.0进行同源性和重要氨基酸位点分析,采用Neighbor-Joining法构建进化树,参比序列从GenBank下载。结果 7份H7N9病例标本获得8节段全基因序列,HA与A/chicken/Dongguan/695/2014(H7N9)相似度最高,NA与A/chicken/Dongguan/1075/2014(H7N9)相似度最高;内部基因与2013—2014年广东东莞、深圳禽源H7N9及H9N2相似度较高。HA和NA基因与广东省东莞、广州、深圳等地市的H7N9序列同处于珠三角进化分支,与安徽、浙江、江苏等长三角分支的序列相似性低。HA蛋白受体结合位点发生G186V、Q226L变异,裂解位点序列均为PEIPKGR↓GLF,含有2个碱性氨基酸;M2蛋白上发现耐药位点S31N,PB2蛋白上发现E627K突变,NA蛋白上未发现耐神经氨酸酶的位点变异。结论肇庆市人感染H7N9病毒株可能来源于2013—2014年广东省珠三角地区禽源H7N9和H9N2,G186V、Q226L和E627K位点变异增强了对人的易感性。 展开更多

关键词 人感染H7N9禽流感病毒 血凝素基因 神经氨酸酶基因 序列分析

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禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)NA基因克隆及序列分析 被引量：5

7

作者 乔传玲 于康震 +3 位作者 孟庆文 邓国华 田国斌 唐秀英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期100-103,共4页

采用RT_PCR技术扩增了禽流感病毒A/Goose/Guangdong/ 3/ 96 (H5N1) (GD3/ 96 )NA基因 ,并对其进行了克隆与测序 ,该苷酸序列测定结果表明 :NA基因全长为 1410bp ,共编码 46 9个氨基酸。其序列与A/Hongkong/ 15 6 / 97(H5N1)、A/Chicken/... 采用RT_PCR技术扩增了禽流感病毒A/Goose/Guangdong/ 3/ 96 (H5N1) (GD3/ 96 )NA基因 ,并对其进行了克隆与测序 ,该苷酸序列测定结果表明 :NA基因全长为 1410bp ,共编码 46 9个氨基酸。其序列与A/Hongkong/ 15 6 / 97(H5N1)、A/Chicken/HongKong/ 2 2 0 / 97(H5N1)、A/Goose/Guangdong/ 1/ 96 (H5N1)及A/teal/Hongkong/W312 / 97(H6N1)分离株核苷酸序列的同源性在88.4%～ 99.0 %之间 ,其相应氨基酸序列的同源性在 89.8%～ 99.2 %之间。氨基酸序列与香港流感分离株氨基酸序列相比 ,在茎部没有出现 19个氨基酸残基的缺失 。 展开更多

关键词 禽流感病毒 A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1) NA 序列分析 神经氨酸酶基因

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H9N2亚型禽流感病毒纤突蛋白基因的分析 被引量：8

8

作者 郭霄峰 廖明 辛朝安 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期17-19,共3页

目的　克隆禽流感病毒A/Chicken/Guangxi/KMⅢ / 99(H9N2 )纤突蛋白血凝素基因和神经氨酸酶基因 ,并与同一亚型不同毒株的病毒进行比较。方法　本研究以自行设计的引物 ,一次性成功地扩增出KMⅢ毒株HA和NA全长基因cD NA ,并将它们克隆... 目的　克隆禽流感病毒A/Chicken/Guangxi/KMⅢ / 99(H9N2 )纤突蛋白血凝素基因和神经氨酸酶基因 ,并与同一亚型不同毒株的病毒进行比较。方法　本研究以自行设计的引物 ,一次性成功地扩增出KMⅢ毒株HA和NA全长基因cD NA ,并将它们克隆和测序。以获得的核苷酸序列和氨基酸序列与其它毒株的HA蛋白和NA蛋白比较。结果　HA基因由16 83bp组成 ,编码 5 6 0个氨基酸 ;NA全基因为 14 0 7bp、编码 4 6 9个氨基酸残基 ;HA1羧基端的氨基酸组成是 :R -S -S -R ,符合低致病力毒株的分子特征。它们的氨基酸组成虽有差异 ,但与血凝素和神经氨酸酶功能关系密切的氨基酸残基却高度保守。联机检索表明 ,KMⅢ的HA基因cDNA与其它H9N2亚型HA基因最大同源性在 82 %～ 96 %之间。NA基因cDNA与其它H9N2亚型NA基因的最大同源性在 88%～ 97%之间。结论　我们首次克隆和测序了KMⅢ毒株的HA基因和NA基因 。 展开更多

关键词 H9N2亚型 禽流感病毒 血凝素基因 神经氨酸酶基因

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六株H4N6亚型水禽禽流感病毒分离株NA基因的进化分析 被引量：5

9

作者 仇保丰 胡顺林 +3 位作者 刘武杰 唐应华 彭大新 刘秀梵 《中国家禽》 北大核心 2009年第15期13-15,20,共4页

为了丰富禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)的分子流行病学资料,通过对2002～2007年分离自华东地区家鸭的6株稀有H4N6亚型低致病性AIV的NA基因序列进行的分析,发现病毒NA基因全长约1464～1465bp,开放阅读框(ORF)都位于NA基因的19～1431位,... 为了丰富禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)的分子流行病学资料,通过对2002～2007年分离自华东地区家鸭的6株稀有H4N6亚型低致病性AIV的NA基因序列进行的分析,发现病毒NA基因全长约1464～1465bp,开放阅读框(ORF)都位于NA基因的19～1431位,长度均为1413bp。6株病毒NA基因之间的同源性为90.8%～99.8%,其中5株病毒NA基因的同源性非常高,达到96.0%～99.8%,但另外1株与其他病毒NA基因的同源性相对较低,介于90.8%～92.2%,进一步分析表明该病毒可能来源于其他地区禽类。对NA基因的推导氨基酸分析表明,ORF编码470个氨基酸,NA没有发生茎部缺失。研究结果表明,水禽内的H4N6亚型禽流感病毒进化相对比较缓慢。 展开更多

关键词 禽流感病毒 神经氨酸酶基因 序列分析

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鸭源H5N1亚型高致病性禽流感病毒的分离鉴定及其HA和NA基因的生物信息分析 被引量：2

10

作者 孙恩成 刘春国 +2 位作者 侯喜林 刘明 朴范泽 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第2期62-67,共6页

分离到1株H5N1亚型高致病性禽流感病毒,经序列测定发现HA蛋白裂解位点上插入多个连续的碱性氨基酸(-PQREIRRKKR*G-),从分子上证实是一株高致病性禽流感病毒。核酸序列比较分析结果表明,分离的流感病毒HA基因与A/duck/VietNam/Ncvd1/2002... 分离到1株H5N1亚型高致病性禽流感病毒,经序列测定发现HA蛋白裂解位点上插入多个连续的碱性氨基酸(-PQREIRRKKR*G-),从分子上证实是一株高致病性禽流感病毒。核酸序列比较分析结果表明,分离的流感病毒HA基因与A/duck/VietNam/Ncvd1/2002(H5N1)同源率最高,达到98.8%;NA基因与A/duck/VietNam/Ncvd1/2002(H5N1)和A/chicken/Jiangsu/cz1/2002(H5N1)同源率最高,达到98.7%。氨基酸水平上,HA与A/duck/Viet Nam/Ncvd1/2002(H5N1)同源率最高,可达99.3%;NA与A/chicken/Jiangsu/cz1/2002(H5N1)同源率最高,达98.7%。HA与NA基因的潜在糖基化位点与作者所选参比毒株一致。通过遗传进化树分析结果表明,A/duck/VietNam/Ncvd1/2002(H5N1)可能是该毒株的来源株。 展开更多

关键词 禽流感病毒 血凝素基因 神经氨酸酶基因 生物信息分析

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2006～2008年华东地区新城疫病毒HN基因序列分析 被引量：2

11

作者 吴双 胡增磊 +3 位作者 王伟伟 王晓泉 胡顺林 刘秀梵 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第2期61-66,共6页

为研究新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）的HN（血凝素-神经氨酸酶，hemagglutinin—neuraminidase）基因分子流行病学规律，利用RT—PCR扩增了2006～2008年间分离自我国华东地区的43株NDV的HN基因片段。基因序列分析显示，... 为研究新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）的HN（血凝素-神经氨酸酶，hemagglutinin—neuraminidase）基因分子流行病学规律，利用RT—PCR扩增了2006～2008年间分离自我国华东地区的43株NDV的HN基因片段。基因序列分析显示，分离株中基因Ⅰ型2株，基因Ⅱ型3株，基因Ⅵ型1株，其它37株都属于基因Ⅶd亚型。根据遗传发生进化树可将基因Ⅶd亚型进一步分为Ⅶd1和Ⅶd2两个亚型，基因Ⅶd1亚型HN蛋白的第102、118、443位氨基酸分别为T，A和T，而基因Ⅶd2亚型则分别为I，E和M。另外，研究表明HN蛋白线性表位发生E347K突变的变异株的分离率在我国呈上升趋势。 展开更多

关键词 新城疫病毒 血凝素-神经氨酸酶基因 变异株

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1株H6N6亚型禽流感病毒贵州分离株HA和NA基因克隆与序列分析 被引量：1

12

作者 陈佳琪 嵇辛勤 +4 位作者 段志强 文明 阮涌 雷云 侯萍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第2期296-303,共8页

为了解H6亚型禽流感病毒(AIV)在贵州地区的流行情况,本研究对2014年从贵州省三穗鸭体内分离鉴定出的1株H6N6亚型AIV(A/duck/Guizhou/013/2014)HA和NA基因进行了克隆和序列分析。结果显示,A/duck/Guizhou/013/2014的HA基因与华东地区200... 为了解H6亚型禽流感病毒(AIV)在贵州地区的流行情况,本研究对2014年从贵州省三穗鸭体内分离鉴定出的1株H6N6亚型AIV(A/duck/Guizhou/013/2014)HA和NA基因进行了克隆和序列分析。结果显示,A/duck/Guizhou/013/2014的HA基因与华东地区2009年鸭源H6N6亚型AIV同源性最高,达97.5%,HA蛋白裂解位点的氨基酸序列为P-Q-I-E-T-R-G,符合低致病性AIV的分子特征;而NA基因则与福建2007年鸭源H6N6亚型AIV同源性最高,达98.2%;由遗传进化树分析结果可知,HA和NA基因在遗传进化关系上,与湖南毒株位于同一分支,而与2007年贵州分离的3株H6N6亚型AIV不处于同一分支,说明A/duck/Guizhou/013/2014与本地区的H6N6亚型AIV亲缘关系较远。本研究结果表明当前贵州地区H6N6亚型AIV存在明显的遗传多样性。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H6N6亚型 血凝素基因 神经氨酸酶基因 序列分析

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一株鸭源新城疫病毒毒力基因分析及其对鸭的致病性研究 被引量：2

13

作者 黎先伟 孙敏华 +4 位作者 何静 汪招雄 刘大伟 杨凤 任涛 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期27-32,共6页

为了解中国鸭源新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）的毒力特点,从2009年广东地区发病鸭群中分离和鉴定出1株新城疫病毒（简称NDV-104）,对其生物学特性、致病性和融合蛋白（fusion,F）、血凝素神经氨酸酶（hemagglutinin-neuram... 为了解中国鸭源新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）的毒力特点,从2009年广东地区发病鸭群中分离和鉴定出1株新城疫病毒（简称NDV-104）,对其生物学特性、致病性和融合蛋白（fusion,F）、血凝素神经氨酸酶（hemagglutinin-neuraminidase,HN）基因进行了研究。结果显示,分离株的MDT、ICPI和IVPI分别为56.4 h、1.95和1.64,结合F蛋白裂解位点（112~117位）的氨基酸序列分析,确定了分离株为新城疫强毒。致病性结果表明,分离病毒对雏鸭具有感染性和致病性。F基因遗传进化结果显示,分离株属于基因Ⅶd亚型。F、HN蛋白的氨基酸同源性结果表明,分离株与2000年以来国内外分离到的基因Ⅶ型NDV同源性较高,分别为96.6%~99.3%和97.0%~99.7%,而其与常用疫苗株B1、V4、Clone30、Mukteswar和LaSota的F、HN蛋白氨基酸序列的同源性较低,且与LaSota株和V4株的同源性最低,分别仅为88.1%和87.6%,说明分离株与经典新城疫病毒毒株存在一定的差异。 展开更多

关键词 鸭 新城疫病毒 融合蛋白基因 血凝素神经氨酸酶基因 致病性

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上饶市乙型流感病毒耐药基因分析 被引量：4

14

作者 张艳燕 赖宇 +3 位作者 朱琳 熊英 李健雄 程畅河 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期538-540,共3页

目的分析上饶市乙型流感病毒耐药基因,为临床用药和疾病控制提供依据。方法从哨点医院采集疑似流感患者咽拭子样本,接种犬肾传代细胞(Madin-Darby Canine Kidney,MDCK)及进行分离培养。选择分离到的乙型(即B型)流感病毒株进行核酸提取... 目的分析上饶市乙型流感病毒耐药基因,为临床用药和疾病控制提供依据。方法从哨点医院采集疑似流感患者咽拭子样本,接种犬肾传代细胞(Madin-Darby Canine Kidney,MDCK)及进行分离培养。选择分离到的乙型(即B型)流感病毒株进行核酸提取后进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),扩增神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因并进行核苷酸测序,采用DNA Star6.0、Mage5.0生物软件对测序结果进行分析处理,推导出氨基酸序列,进行基因特性分析。结果7株乙型流感病毒NA基因同源性高达99.5%以上,NA蛋白催化活性位点和辅助位点均无氨基酸替换。结论 7株毒株均对流感病毒NA抑制剂药物敏感,但仍应加强对流感病毒的耐药性监测。 展开更多

关键词 乙型流感病毒 耐药 神经氨酸酶基因

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天然溶瘤新城疫病毒Italien株HN基因真核表达载体的构建和表达 被引量：1

15

作者 张华 边惠洁 +3 位作者 尉丁 李亚琳 杨滨 陈志南 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期100-103,共4页

目的构建天然溶瘤型新城疫病毒(NDV)Italien株血凝素-神经氨酸酶(HN)基因的真核表达载体并进行产物表达。方法采用RT-PCR法从病毒RNA中克隆HNcDNA,并构建HN的真核表达载体pcDNA3.1-HN,脂质体法转染CHO-K1,G418筛选稳定表达克隆。用Weste... 目的构建天然溶瘤型新城疫病毒(NDV)Italien株血凝素-神经氨酸酶(HN)基因的真核表达载体并进行产物表达。方法采用RT-PCR法从病毒RNA中克隆HNcDNA,并构建HN的真核表达载体pcDNA3.1-HN,脂质体法转染CHO-K1,G418筛选稳定表达克隆。用Westernblot、免疫荧光法检测HN蛋白的表达。结果经限制性酶切鉴定及DNA测序分析,证实真核表达载体pcDNA3.1-HN构建正确。Westernblot和免疫荧光分析表明HN基因在CHO-K1中成功表达。结论天然溶瘤型NDVItalien株的HNcDNA被成功克隆,所构建的真核表达载体pcDNA3.1-HN可以在CHO-K1细胞中稳定表达。 展开更多

关键词 新城疫病毒 血凝素-神经氨酸酶基因 转染 基因表达

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2019—2020年河北省部分地区鸡H9N2亚型AIV HA基因和NA基因遗传进化分析 被引量：2

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作者 丁芳 许利军 +6 位作者 张诚 段淇凡 陈立保 戴美丽 刘聚祥 陈立功 王学静 《中国家禽》 北大核心 2022年第6期42-49,共8页

为了解河北省鸡H9亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)感染及其重要基因的变异情况,采用RT-PCR方法对2019—2020年自患呼吸道疾病鸡群收集的131份病料进行H9亚型AIV检测,并对4株H9N2亚型AIV分离毒株的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶... 为了解河北省鸡H9亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)感染及其重要基因的变异情况,采用RT-PCR方法对2019—2020年自患呼吸道疾病鸡群收集的131份病料进行H9亚型AIV检测,并对4株H9N2亚型AIV分离毒株的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因进行遗传变异分析。结果显示:H9亚型AIV阳性率为6.1%,肉鸡病料H9亚型AIV检出(6/38)高于蛋鸡病料(2/93);4株分离毒株HA基因属于近年流行的h9.4.2.5分支,NA基因属于Y280-like分支;HA基因和NA基因均与疫苗株的遗传距离较远;HA蛋白裂解位点的氨基酸序列均为PSRSSR↓GLF,符合低致病性AIV特征;HA蛋白受体结合位点均存在Q234L突变,具有结合人流感受体的分子特征。研究结果丰富了河北省H9亚型AIV流行病学资料,可为低致病性禽流感的防控提供参考。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 血凝素基因 神经氨酸酶基因 遗传变异

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2株云南H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因序列分析 被引量：7

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作者 李佳佳 李素华 +4 位作者 宋建领 黄景军 缪渊 陈曦 季佳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第3期873-883,共11页

在2019年1月-2019年6月对云南出现呼吸道疫病的57个鸡场进行H9亚型禽流感检测的基础上,选取石林和楚雄2个H9亚型禽流感阳性样品进行病毒分离。从分离的H9N2亚型禽流感病毒感染鸡胚尿囊液中提取总RNA,采用特异性引物经反转录PCR分别扩增H... 在2019年1月-2019年6月对云南出现呼吸道疫病的57个鸡场进行H9亚型禽流感检测的基础上,选取石林和楚雄2个H9亚型禽流感阳性样品进行病毒分离。从分离的H9N2亚型禽流感病毒感染鸡胚尿囊液中提取总RNA,采用特异性引物经反转录PCR分别扩增HA和NA基因,PCR产物纯化后进行测序。序列比对及系统发育分析结果表明,云南2株H9N2毒株HA基因核苷酸序列同源性为94.2%,NA基因核苷酸序列同源性为93.6%,系统进化分析表明云南H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因均属于欧亚谱系中的类ADKHKY28097分支(Y280-like),ACKYN12019和ACKYN72019 HA基因之间的同源性为94.3%,与参考毒株ACKJX2448的同源性最高,为95.6%~98.5%,与中国流行的H9N2代表株和疫苗株同源性较低。HA蛋白333-340位裂解位点为PSRSSR↓GLF,具有低致病性禽流感病毒分子特征,受体结合位点均发生E198T和Q234L的突变,具有人样受体结合特征,在29、141、298、305、313、492位氨基酸有6个糖基化位点。ACKYN12019和ACKYN72019 NA基因同源性为93.6%,与Y280-like代表毒株的同源性分别为97.1%~97.5%和93.7%~94.6%,NA蛋白缺失63、64、65位氨基酸,在44、69、86、146、200、234位氨基酸处存在6个潜在的糖基化位点,NA蛋白红细胞结合(HB)位点分析发现,368-369、399-403、432位氨基酸处存在变异。研究结果显示,H9N2亚型禽流感病毒一直处于不断的变异之中,故应加强其监测与防控。 展开更多

关键词 H9N2禽流感病毒 血凝素(HA)基因 神经氨酸酶(NA)基因 分子特征

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SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR法检测猪流感H3N2亚型病毒方法的建立 被引量：5

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作者 孙忠晟 尹燕博 +1 位作者 王平 韩丽敏 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2012年第4期7-9,I0001,共4页

本试验针对H3N2亚型流感病毒神经氨酸酶基因建立SYBR GreenⅠ荧光RT-PCR检测方法。根据GenBank上的SIV N2基因序列设计一对引物,扩增片段406bp。纯化扩增目的片段后连接pMD18-T载体中,命名为pMD18-TN2,转化入E.coli DH5α,测序正确作为... 本试验针对H3N2亚型流感病毒神经氨酸酶基因建立SYBR GreenⅠ荧光RT-PCR检测方法。根据GenBank上的SIV N2基因序列设计一对引物,扩增片段406bp。纯化扩增目的片段后连接pMD18-T载体中,命名为pMD18-TN2,转化入E.coli DH5α,测序正确作为阳性模板,优化反应条件建立方法。此荧光PCR方法所能检测最低病毒含量为75copies/μL,拥有良好的特异性和重复性。此方法的建立将为流感病毒N2亚型神经氨酸酶基因定型检测提供一种有效方法。 展开更多

关键词 猪流感H3N2亚型 神经氨酸酶基因 SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR

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pIRApoptinHNIL18对结肠癌细胞HCT-116的抑制效应

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作者 郑洪玲 金宁一 +6 位作者 李霄 米志强 连海 李昌 田明尧 李雪梅 孙丽丽 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第1期42-46,共5页

目的:探讨联合应用凋亡素(apoptin)基因、新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)血凝素-神经氨酸酶(he-magglutinin-neuramidinase,HN)基因及人白介素18(hIL-18)基因体外对人结肠癌细胞HCT-116的抑制效应。方法:重组质粒pIRApoptinHN... 目的:探讨联合应用凋亡素(apoptin)基因、新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)血凝素-神经氨酸酶(he-magglutinin-neuramidinase,HN)基因及人白介素18(hIL-18)基因体外对人结肠癌细胞HCT-116的抑制效应。方法:重组质粒pIRApoptinHNIL18通过脂质体介导法体外转染人结肠癌细胞HCT-116,通过Western blotting和RT-PCR检测外源基因表达;采用AO/EB染色法检测pIRApoptinHNIL18对人结肠癌细胞HCT-116抑制作用;利用流式细胞术分析pIRApoptinHNIL18对人结肠癌细胞HCT-116线粒体膜电位(mitochondrial transmembrane potential,△Ψ)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;采用3,5-二羟基甲苯法测定唾液酸含量。结果:pIRApoptinHNIL18转染人结肠癌细胞HCT-116后,外源基因能够有效表达;肿瘤细胞生长受到抑制;线粒体△Ψ由(94.41±8.17)%下降到(30.70±8.01)%(P<0.05);唾液酸含量由(0.33±0.06)mmol/L下降到(0.09±0.03)mmol/L(P<0.01);ROS水平由(52.48±6.09)%升高到(68.98±7.26)%(P<0.05)。结论:pIRApoptinHNIL18可通过线粒体途径诱导细胞凋亡,从而抑制人结肠癌细胞HCT-116的生长。 展开更多

关键词 凋亡素基因 血凝素-神经氨酸酶基因 人白介素18基因 结肠癌细胞 线粒体 凋亡

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西班牙养猪密集地区同时流行A型流感病毒H1N2、H1N1和H3N2亚型的证据

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作者 罗天海 Jaime Maldonado +5 位作者 Kristien Van Reeth Pere Riera Marta Sitja Narcis Saubi Enric Espuna Carlos Artigas 《国外畜牧学（猪与禽）》 2006年第6期35-38,共4页

本文报道了对西班牙养猪密集地区进行的猪流感病毒(SIV)血清学和病毒学调查结果,其目的是检测H1N2亚型猪流感病毒是否和在欧洲其它地区一样也流行于这些地区。在西班牙北部和东部地区100个未接种猪流感疫苗的繁育群采集了600份母猪血清... 本文报道了对西班牙养猪密集地区进行的猪流感病毒(SIV)血清学和病毒学调查结果,其目的是检测H1N2亚型猪流感病毒是否和在欧洲其它地区一样也流行于这些地区。在西班牙北部和东部地区100个未接种猪流感疫苗的繁育群采集了600份母猪血清,以进行抗H1N1、H3N2和H1N2亚型病毒的血凝抑制试验(HI);再借助鸡胚病毒分离法和商品薄膜免疫分析法,对采自有呼吸道疾患的225份病猪肺样本进行检测以确定是否存在猪流感病毒。通过HI和逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,再辅以cDNA部分序列的测定,对分离毒株进行鉴定。对血清所作的HI试验表明,在83%受测猪群和76·3%受测猪中至少存在抗一种猪流感病毒亚型的抗体。在受检的600份母猪血清中,仅含抗H1N2、H3N2或H1N1亚型病毒抗体的样本数分别为109份(占总样本比例的18·2%)、60份(10%)和41(6·8%)。从有呼吸道疾患的猪肺样本中分离到12株H3N2亚型病毒、9株H1N1亚型病毒和1株H1N2病毒。对H1N2亚型分离株的神经氨酸酶基因436个核苷酸序列进行的分析,进一步证实了其身份。显然,猪流感依然流行于所研究猪群中,同时一种新的亚型病毒(即H1N2亚型病毒)可能正在开始流行,并且也在西班牙引起了临床发病。 展开更多

关键词 A型流感病毒 病毒亚型 密集地区 西班牙 养猪 猪流感病毒 聚合酶链式反应 神经氨酸酶基因

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