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神经元表达发育下调基因siRNA表达载体的构建及鉴定
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作者 楚荷莹 常静侠 +1 位作者 赵国强 张国俊 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期499-504,共6页
目的:构建针对神经元表达发育下调基因9(Neural precursor cell expressed,developmentally downregulated 9,NEDD9)的小干扰RNA(siRNA)表达载体,研究载体介导的RNAi技术对A549肺腺癌细胞株中NEDD9表达的抑制作用。方法:根据GenBank提供... 目的:构建针对神经元表达发育下调基因9(Neural precursor cell expressed,developmentally downregulated 9,NEDD9)的小干扰RNA(siRNA)表达载体,研究载体介导的RNAi技术对A549肺腺癌细胞株中NEDD9表达的抑制作用。方法:根据GenBank提供的NEDD9基因(NM_182966)核苷酸序列及siRNA的设计原则,筛选得到159-177 nt、193-211 nt和648-666 nt 3个19 bp片段靶序列,同时随机组合出一条无关序列;分别合成4对带有BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的发夹结构寡核苷酸序列,经退火合成互补DNA双链,克隆入载体pRNAT-CMV3.2中构建重组表达载体,转化DH5α,提取质粒,应用PCR技术和测序方法鉴定重组克隆。用脂质体介导转染入A549肺腺癌细胞株,采用QRT-PCR和Western blot方法检测细胞NEDD9基因mRNA和蛋白表达。结果:PCR筛选得到4个目的片段的阳性克隆,测序证实重组表达载体中插入序列与设计一致。RTPCR和Western blot检测显示构建的siRNA表达载体可显著降低A549细胞中NEDD9 mRNA和蛋白水平的表达。结论:成功构建载体介导的NEDD9靶向RNA干扰重组体,并能有效抑制A549细胞中NEDD9基因的表达。 展开更多
关键词 肺腺癌 神经元表达发育下调基因9 RNA干扰 A549 NEDD9
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NOV蛋白免疫反应阳性神经元在鲢、鸡和几种哺乳动物脑的比较发育 被引量:7
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作者 苏炳银 蔡文琴 张成岗 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期500-503,共4页
目的:研究鲢、鸡、牛、犬和大鼠脑肾母细胞瘤过度表达基因(nov)蛋白免疫反应阳性神经元的比较发育。方法:免疫组织化学技术。结果:低等脊椎动物鲢脑仅有少量NOV蛋白免疫反应阳性神经元,分布于延髓的一些核团、丘脑前核、丘... 目的:研究鲢、鸡、牛、犬和大鼠脑肾母细胞瘤过度表达基因(nov)蛋白免疫反应阳性神经元的比较发育。方法:免疫组织化学技术。结果:低等脊椎动物鲢脑仅有少量NOV蛋白免疫反应阳性神经元,分布于延髓的一些核团、丘脑前核、丘脑后核、下丘脑背侧核、下丘脑外侧核。鸡脑NOV蛋白免疫反应阳性神经元除广泛分布于脑干外,小脑、间脑和大脑纹状体的多数脑区阳性神经元亦较多。哺乳动物牛、犬和大鼠脑NOV蛋白免疫反应阳性神经元广泛分布,脑干、小脑、间脑和大脑都检测到强烈阳性信号。结论:nov基因在从低等脊椎动物到高等脊椎动物的进化过程中非常保守,提示它在脑神经元生长。 展开更多
关键词 肾母细胞 基因过度表达 NOV 发育 神经元
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NEDD9、FAK在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义 被引量:3
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作者 王海霞 唐良萏 周琦 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期234-238,共5页
目的:探讨神经元细胞表达的发育下调基因9(neural precursor cell-expressed developmentally down-regulated 9,NEDD9)及黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义。方法:采用免疫组化法检测NEDD9及FAK... 目的:探讨神经元细胞表达的发育下调基因9(neural precursor cell-expressed developmentally down-regulated 9,NEDD9)及黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义。方法:采用免疫组化法检测NEDD9及FAK在52例上皮性卵巢癌、13例卵巢交界性肿瘤、28例卵巢良性肿瘤及17例正常卵巢组织中的表达,并对二者在卵巢癌组织中的表达做相关性分析。结果:NEDD9在上皮性卵巢癌组织中的表达明显高于卵巢交界性肿瘤(P=0.000)、卵巢良性肿瘤(P=0.000)及正常卵巢组织(P=0.000),差异有统计学意义。FAK在上皮性卵巢癌组织中的表达明显高于卵巢交界性肿瘤(P=0.002)、卵巢良性肿瘤(P=0.000)及正常卵巢组织(P=0.000),差异有统计学意义。NEDD9的表达在卵巢癌的FIGO分期(P=0.000)、组织分化程度各亚组间有统计学差异(P=0.010),而在确诊时年龄(P=0.756)、血清CA-125水平(P=0.300)、病理类型(P=0.526)及腹水(P=0.506)各亚组间无统计学差异;FAK的表达在FIGO分期(P=0.008)及腹水(P=0.027)亚组间有统计学差异,而在确诊时年龄(P=0.299),血清CA-125水平(P=0.116)、组织分化程度(P=0.100)及病理类型(P=1.000)各亚组间无统计学差异。NEDD9和FAK在卵巢癌中的表达成正相关(r=0.535,P<0.05)。结论:NEDD9及FAK在上皮性卵巢癌中高表达,早期联合检测NEDD9和FAK可能对判断上皮性卵巢癌恶性程度有重要的临床意义。 展开更多
关键词 神经元细胞表达的发育下调基因9 黏着斑激酶 上皮性卵巢癌
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大鼠耳蜗组织中Nedd4及SGK1的表达 被引量:1
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作者 钟时勋 刘兆华 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期369-372,共4页
目的研究大鼠耳蜗组织中神经前体细胞表达-发育性下调基因亚型(neural precursor cell-ex-pressed,developmentally downregulated isoforms,Nedd4)及血清糖皮质激素诱导激酶1(serum glucocorticoid-in-ducible kinase1,SGK1)蛋白分子... 目的研究大鼠耳蜗组织中神经前体细胞表达-发育性下调基因亚型(neural precursor cell-ex-pressed,developmentally downregulated isoforms,Nedd4)及血清糖皮质激素诱导激酶1(serum glucocorticoid-in-ducible kinase1,SGK1)蛋白分子的表达。方法选取健康Wistar大鼠8只,用特异性多克隆兔抗鼠Nedd4-1/2、Nedd4-2及SGK1抗体,采用免疫组化法研究大鼠耳蜗组织中Nedd4-1/2、Nedd4-2及SGK1蛋白的表达模式。结果Nedd4-1/2、Nedd4-2及SGK1蛋白广泛表达于大鼠耳蜗组织的各个区域中,包括血管纹、螺旋韧带、Corti器、螺旋缘、螺旋神经节、前庭膜等处。结论在耳蜗组织中,存在一个由SGK1、Nedd4和上皮钠通道(ENaC)组成的Na+转运系统,它们协同作用转运Na+,从而保持内耳内环境的稳定。 展开更多
关键词 内淋巴 耳蜗 血清糖皮质激素诱导激酶1 神经前体细胞表达-发育下调基因亚型
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胃癌组织中NEDD4L的表达及其临床意义 被引量:2
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作者 蒋兴旺 闫强 +5 位作者 张尚鑫 孙若川 李德关 鲁明典 张震 李永翔 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第1期107-111,共5页
目的研究胃癌中神经前体细胞表达发育下调样基因4(NEDD4L)的表达及其临床意义。方法分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法检测25对胃癌组织及其对应癌旁正常胃组织中NEDD4L的mRNA和蛋白表达水平,采用免疫组化方法(IHC)检测NEDD4L... 目的研究胃癌中神经前体细胞表达发育下调样基因4(NEDD4L)的表达及其临床意义。方法分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法检测25对胃癌组织及其对应癌旁正常胃组织中NEDD4L的mRNA和蛋白表达水平,采用免疫组化方法(IHC)检测NEDD4L在124例胃癌组织和25例癌旁正常胃组织中的表达情况,并统计分析其表达与胃癌患者临床病理参数及预后之间的关系。结果NEDD4L在胃癌组织中的mRNA和蛋白表达水平均显著低于对应癌旁正常组织(P <0. 05)。免疫组化结果显示NEDD4L在胃癌组织中的阳性表达率明显低于癌旁正常组织(P <0. 05)。NEDD4L的表达与肿瘤组织分化程度(P <0. 05)、浸润深度(P <0. 05)和临床TNM分期(P <0. 05)显著相关,且NEDD4L高表达的胃癌患者其预后较好(P <0. 001)。结论 NEDD4L在胃癌组织中低表达,可能与胃癌的发生发展密切相关,且可能作为判断胃癌预后的潜在指标。 展开更多
关键词 胃癌 神经前体细胞表达发育下调基因4 预后
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