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利用Gateway技术构建神经元特异性人apoE4(1-272)真核表达质粒及鉴定
1
作者
李子希
卢颖洁
+2 位作者
刘晓峰
冯曾义
陈娟
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第4期369-373,共5页
目的构建神经元特异性人apoE4(1-272)片段的真核表达质粒,并转染小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a细胞)验证其表达,为后续利用该质粒构建转基因小鼠,并探讨其作用奠定实验基础。方法以同济医学院生物化学与分子生物学系实验室已有的人apoE4质...
目的构建神经元特异性人apoE4(1-272)片段的真核表达质粒,并转染小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a细胞)验证其表达,为后续利用该质粒构建转基因小鼠,并探讨其作用奠定实验基础。方法以同济医学院生物化学与分子生物学系实验室已有的人apoE4质粒为基础,利用Gateway技术设计引物,将人apoE4(1-272)片段克隆至pRP.EX3d载体上,并将神经元特异性启动子SYN1插入至人apoE4(1-272)片段之前,再借助IRES元件连接EGFP报告基因,构建pRP.EX3d-SYN1-apoE4(1-272)-IRES/EGFP重组表达质粒;经脂质体转染法将上述质粒转染至N2a细胞,转染24h后,荧光显微镜观察转染效率,并采用Western blot检测apoE4(1-272)蛋白的表达水平。结果成功构建神经元特异性表达人apoE4(1-272)的真核表达质粒,经测序鉴定各核心元件序列均正确无误,与预期结果相一致,且经转染N2a细胞观察到新构建质粒可顺利表达,Western blot检测结果显示apoE表达及分子量均与预期一致。结论成功构建了神经元特异性人apoE4(1-272)片段的表达质粒,并初步鉴定了其表达功能,为后续开展相关研究奠定了实验基础。
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关键词
apoE4(1-272)
神经元特异性表达
GATEWAY技术
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题名
利用Gateway技术构建神经元特异性人apoE4(1-272)真核表达质粒及鉴定
1
作者
李子希
卢颖洁
刘晓峰
冯曾义
陈娟
机构
华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系
华中科技大学同济医学院附属中西医结合医院检验科
福建医科大学附属第一医院检验科
出处
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第4期369-373,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.31171027
No.31670778
+1 种基金
No.81371416)
华中科技大学自主创新基金资助项目(No.2016YXMS191)
文摘
目的构建神经元特异性人apoE4(1-272)片段的真核表达质粒,并转染小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a细胞)验证其表达,为后续利用该质粒构建转基因小鼠,并探讨其作用奠定实验基础。方法以同济医学院生物化学与分子生物学系实验室已有的人apoE4质粒为基础,利用Gateway技术设计引物,将人apoE4(1-272)片段克隆至pRP.EX3d载体上,并将神经元特异性启动子SYN1插入至人apoE4(1-272)片段之前,再借助IRES元件连接EGFP报告基因,构建pRP.EX3d-SYN1-apoE4(1-272)-IRES/EGFP重组表达质粒;经脂质体转染法将上述质粒转染至N2a细胞,转染24h后,荧光显微镜观察转染效率,并采用Western blot检测apoE4(1-272)蛋白的表达水平。结果成功构建神经元特异性表达人apoE4(1-272)的真核表达质粒,经测序鉴定各核心元件序列均正确无误,与预期结果相一致,且经转染N2a细胞观察到新构建质粒可顺利表达,Western blot检测结果显示apoE表达及分子量均与预期一致。结论成功构建了神经元特异性人apoE4(1-272)片段的表达质粒,并初步鉴定了其表达功能,为后续开展相关研究奠定了实验基础。
关键词
apoE4(1-272)
神经元特异性表达
GATEWAY技术
Keywords
apoE4（1-272）
neuron-specific expression
Gateway technique
分类号
R542.2 [医药卫生—心血管疾病]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
利用Gateway技术构建神经元特异性人apoE4(1-272)真核表达质粒及鉴定
李子希
卢颖洁
刘晓峰
冯曾义
陈娟
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2017
0
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