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川芎嗪体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究 被引量:13
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作者 刘云云 赵兴绪 +3 位作者 赵红斌 葛宝丰 刘兴炎 陈克明 《生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第6期21-24,36,共5页
为了探讨川芎嗪体外诱导小鼠骨髓间质干细胞(BMSCs)分化为神经元样细胞的作用,以小鼠骨髓间充质干细胞为研究对象,实验分为空白对照组、β-巯基乙醇(BME)阳性对照组和川芎嗪诱导组。采用荧光免疫化学和Western blot方法,分别检测神经干... 为了探讨川芎嗪体外诱导小鼠骨髓间质干细胞(BMSCs)分化为神经元样细胞的作用,以小鼠骨髓间充质干细胞为研究对象,实验分为空白对照组、β-巯基乙醇(BME)阳性对照组和川芎嗪诱导组。采用荧光免疫化学和Western blot方法,分别检测神经干细胞巢蛋白(nestin)和经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达;RT-PCR检测诱导不同时间对神经细胞相关基因Nestin、NSE、β-微管蛋白III(β-Tubulin III)和核受体相关因子-1(Nurr1)mRNA表达的影响。结果显示川芎嗪诱导间充质干细胞24 h后,细胞形态发生显著改变,细胞突起形成且数目不等,形成神经元样细胞。细胞死亡率低于β-巯基乙醇诱导组。免疫荧光化学法和western blot结果显示:川芎嗪诱导后的细胞nes-tin和NSE蛋白表达呈阳性,且表达丰度显著高于β-巯基乙醇诱导组。川芎嗪作用不同时间的BMSCs表达神经细胞相关基因Nestin、β-Tubulin III、NSE和Nurrl。结果表明川芎嗪能定向诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞,是较理想的诱导剂。 展开更多
关键词 川芎嗪 骨髓间充质干细胞 神经元样细胞 细胞分化
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人参总皂苷体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞 被引量:14
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作者 郑国庆 王小同 +2 位作者 邬伟 陈伟 宋秋英 《中华中医药学刊》 CAS 2008年第6期1257-1259,共3页
目的:探讨人参总皂苷体外诱导青年SD大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)分化为神经元样细胞的作用。方法:贴壁筛选法分离纯化MSCs。10μg·L^-1 bFGF预诱导第5代的MSCs24h,换200μg·mL^-1人参总皂苷的无血清培养液诱导诱导5~6h,... 目的:探讨人参总皂苷体外诱导青年SD大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)分化为神经元样细胞的作用。方法:贴壁筛选法分离纯化MSCs。10μg·L^-1 bFGF预诱导第5代的MSCs24h,换200μg·mL^-1人参总皂苷的无血清培养液诱导诱导5~6h,观察细胞形态变化,免疫组织化学法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、微管联合蛋白-2(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:第5代间质干细胞形态达到均一,呈梭形。用人参总皂苷诱导30min到3h后,MSCs胞体逐渐增大,并伸出细长突起形似神经元样细胞。诱导5~6h后,NSE、MAP-2和GFAP阳性细胞数分别为(76±4.7)%、(61±5.2)%、(10±2.4)%。对照组上述染色均呈阴性。结论:人参总皂苷在体外能定向诱导MSCs分化为神经元样细胞。 展开更多
关键词 人参总皂苷 骨髓间质干细胞 神经元样细胞 细胞分化
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不同培养条件对小鼠诱导性多能干细胞分化为神经元样细胞的影响 被引量:8
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作者 陈旭东 范文娟 +3 位作者 袁科理 袁磊 王晓兰 王福青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1216-1219,1223,共5页
目的研究小鼠诱导性多能干细胞(i PSC)在不同培养条件诱导下向神经元样细胞分化的能力。方法将小鼠i PSC悬浮培养形成拟胚体,然后随机分为全反式维甲酸(ATRA)组、脑片共培养组和脑组织匀浆上清组,将其诱导分化成神经元样细胞。倒置显微... 目的研究小鼠诱导性多能干细胞(i PSC)在不同培养条件诱导下向神经元样细胞分化的能力。方法将小鼠i PSC悬浮培养形成拟胚体,然后随机分为全反式维甲酸(ATRA)组、脑片共培养组和脑组织匀浆上清组,将其诱导分化成神经元样细胞。倒置显微镜下观察细胞形态变化;免疫荧光染色技术对其进行鉴定分析;Western blot法检测巢蛋白(nestin)、微管相关蛋白2(MAP2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果小鼠i PSC在不同培养条件下都能够向神经元样细胞分化,这些神经元样细胞可以被神经细胞标志物nestin、MAP2标记;ATRA组的nestin、MAP2、GFAP蛋白相对表达量明显高于脑片共培养组和脑匀浆上清诱导组,但脑片共培养组和脑匀浆上清诱导组间无显著性差异。结论脑片微环境和脑组织匀浆上清均可诱导小鼠i PS细胞向神经元样细胞分化,但效果不及ATRA组。 展开更多
关键词 诱导性多能干细胞 脑片培养 脑组织匀浆 神经元样细胞 分化
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人骨髓间充质干细胞体外分化为神经元样细胞 被引量:12
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作者 郭子宽 刘晓丹 +2 位作者 候春梅 李秀森 毛宁 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2001年第1期91-92,共2页
Recent reports have clearly demonstrated that bone marrow cells can be differentiated into neurons, suggesting the existence of cells with the differentiation capacity in the bone marrow cell population. It is well kn... Recent reports have clearly demonstrated that bone marrow cells can be differentiated into neurons, suggesting the existence of cells with the differentiation capacity in the bone marrow cell population. It is well known that hematopoietic stem cells as well as mesenchymal stem cells (MSCs) can be transplanted and therefore, alternative of them might contribute to the process. In the present study it was addressed whether marrow MSCs could be coaxed into neuron-specific antigen bearing cells and if so, whether the differentiated cells possess the cytochemical features seen in neurons. The report here showed that high concentration of 2-mercaptoethanol (2-ME) could induce some of the MSCs into neuron-like cells expressing neurofilament (NF) and neuron specific enolase (NSE). The neuron-like cells were alkaline phosphotase positive while the others MSCs were kept negative. Cells treated with 2-ME were positive for α-naphthylacetate esterase and glycogen and negative for acetylchonlinesterase, which were similar with the results seen in untreated cells. Furthermore, Nissel body was not observed in treated cells shown by toluidine blue staining. Therefore, it is likely that the cells described here seem not belong to the neuronal lineage. These findings, however, reveal that human MSCs could alter their committed fates under some circumstances. 展开更多
关键词 骨髓 间充质干细胞 细胞分化 神经元样细胞
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白藜芦醇诱导大鼠骨髓基质细胞的神经元样细胞分化伴Shh信号激活 被引量:7
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作者 黄家贵 沈长波 +2 位作者 刘舒 徐兰 杨琴 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期280-283,共4页
目的研究Sonic Hedgehog(Shh)信号在白藜芦醇诱导大鼠骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)分化为神经元样细胞中的作用。方法采用全骨髓贴壁法分离培养MSCs。MSCs分为3组,白藜芦醇诱导组:用含白藜芦醇的无血清DMEM/F12诱导MSCs分化... 目的研究Sonic Hedgehog(Shh)信号在白藜芦醇诱导大鼠骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)分化为神经元样细胞中的作用。方法采用全骨髓贴壁法分离培养MSCs。MSCs分为3组,白藜芦醇诱导组:用含白藜芦醇的无血清DMEM/F12诱导MSCs分化;对照组:用无血清DMEM/F12诱导MSCs分化;正常组:不做诱导处理。倒置显微镜下观察细胞形态,免疫荧光法、免疫印迹法检测NSE、MAP-2、GFAP、Smo和Gli1蛋白的表达和移位。结果白藜芦醇诱导后细胞胞体收缩,伸出长突起,类似神经元。免疫荧光显示正常组及对照组MSCs轻度表达神经元NSE蛋白,白藜芦醇诱导组MSCs NSE、MAP-2阳性,但诱导前后细胞始终未表达胶质细胞GFAP蛋白。免疫荧光显示,MSCs具有初级纤毛,并表达Smo和Gli1。白藜芦醇诱导组Smo从细胞质进入初级纤毛,Gli1从细胞质进入细胞核,同时,Smo、Gli1蛋白的表达增加(P<0.01)。对照组则无明显变化。结论白藜芦醇能诱导MSCs分化为神经元样细胞;此过程中Shh信号通路被激活,推测Shh信号在MSCs分化过程中可能发挥着重要作用。 展开更多
关键词 白藜芦醇 Shh信号 骨髓基质细胞 神经元样细胞 细胞分化
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胞内cAMP浓度的增加可诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞 被引量:8
6
作者 项鹏 夏文杰 +4 位作者 张丽蓉 陈振光 张秀明 李艳 李树浓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1324-1327,I001,共5页
目的 :探讨胞内cAMP浓度的增加与骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞的关系。方法 :采用Ficoll-Paque液 (1 0 77g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,采用含腺苷酸环化酶激动剂Forskolin及磷脂酶抑制剂 3-异丁基 - 1 -甲基黄嘌呤 (IBMX... 目的 :探讨胞内cAMP浓度的增加与骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞的关系。方法 :采用Ficoll-Paque液 (1 0 77g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,采用含腺苷酸环化酶激动剂Forskolin及磷脂酶抑制剂 3-异丁基 - 1 -甲基黄嘌呤 (IBMX)的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元。免疫组化鉴定神经元烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果 :成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得 5× 1 0 5,1 0代可获得 2× 1 0 1 0 个细胞。加入Forskolin、IBMX以及两者联用诱导后 ,MSC胞体收缩 ,突起伸出 ,呈典型神经元样形态 ;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF -M表达阳性 ,GFAP阴性。结论 展开更多
关键词 胞内cAMP浓度 骨髓间质干细胞 神经元样细胞 腺苷环-磷酸 福司柯林 诱导分化
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天然脑活素定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的实验研究 被引量:9
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作者 李映红 吴正治 +4 位作者 吴伟康 李明 王济国 杨敏 陈蔓茵 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1548-1553,共6页
目的:探讨天然脑活素(NC)诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化的作用。方法:取6-8周龄SD大鼠,无菌获取胫骨和股骨骨髓,全骨髓贴壁筛选法分离培养并纯化大鼠MSCs,应用天然脑活素诱导MSCs向神经元分化。倒置相差显微镜追踪比较... 目的:探讨天然脑活素(NC)诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化的作用。方法:取6-8周龄SD大鼠,无菌获取胫骨和股骨骨髓,全骨髓贴壁筛选法分离培养并纯化大鼠MSCs,应用天然脑活素诱导MSCs向神经元分化。倒置相差显微镜追踪比较观察分化过程中细胞形态的变化,免疫细胞化学和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测神经元特异性标志物:巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况。免疫细胞化学检测细胞微管相关蛋白-2(MAP-2)的表达。结果:经全骨髓贴壁筛选法获得了纯度较高(90%以上)的大鼠MSCs,天然脑活素含药血清诱导分化后的细胞呈现双极、多极和锥形的典型神经元细胞的形态,分别从mRNA和蛋白水平上证实诱导分化后的细胞表达神经元标记物NSE和nestin,不表达神经胶质细胞标记物GFAP。诱导分化后细胞MAP-2的表达明显。结论:天然脑活素可诱导MSCs向神经元样细胞的定向分化。 展开更多
关键词 天然脑活素 骨髓间充质干细胞 神经元样细胞
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NT-3基因修饰施万细胞促进神经干细胞体外分化为神经元样细胞 被引量:9
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作者 郭家松 曾园山 +2 位作者 李海标 黄文林 刘然义 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期26-30,共5页
目的观测神经营养素-3(NT-3)基因修饰施万细胞(SCs)对神经干细胞体外分化为神经元样细胞的影响。方法神经干细胞(NSCs)分别与NT-3基因修饰SCs(NT-3-SCs)、LacZ基因基因修饰SCs(LacZ-SCs)和SCs在体外共培养,7d后用免疫组化方法观测NSCs... 目的观测神经营养素-3(NT-3)基因修饰施万细胞(SCs)对神经干细胞体外分化为神经元样细胞的影响。方法神经干细胞(NSCs)分别与NT-3基因修饰SCs(NT-3-SCs)、LacZ基因基因修饰SCs(LacZ-SCs)和SCs在体外共培养,7d后用免疫组化方法观测NSCs的分化并计算其中神经元样细胞的分化率。结果NSCs在体外可分化为神经元样细胞(NF阳性)和神经胶质样细胞(GFAP阳性),与未基因修饰的SCs相比,NT-3-SCs能更有效地提高神经元样细胞的分化率,而LacZ-SCs与SCs没有明显区别。结论NT-3-SCs能促进NSCs向神经元样细胞分化。 展开更多
关键词 细胞 许旺细胞 神经营养素3 神经元样细胞
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不同培养代数大鼠骨髓基质细胞向神经元样细胞转分化能力的比较 被引量:5
9
作者 陈谦 陈静 +4 位作者 崔颜宏 庄琴 胡萍萍 龚爱华 张志坚 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期1-5,共5页
为确定诱导大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)向神经元样细胞转分化的适宜培养代数,本研究比较了不同培养代数的BMSCs的转分化潜能。首先体外培养大鼠BMSCs并传代,于不同的培养代数利用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、神经生长因子(NGF)、全反式... 为确定诱导大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)向神经元样细胞转分化的适宜培养代数,本研究比较了不同培养代数的BMSCs的转分化潜能。首先体外培养大鼠BMSCs并传代,于不同的培养代数利用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、神经生长因子(NGF)、全反式维甲酸(RA)、音猬因子(Shh)诱导分化,随后运用免疫荧光法和免疫印迹法检测诱导细胞中的神经元样细胞。结果显示骨髓基质细胞体外培养1至3代时能够被诱导分化为神经元样细胞,培养至第7代时丧失转分化为神经元样细胞的潜能。上述结果提示:传代次数增多将引起BMSCs自发分化,使其向神经元样细胞转分化的能力下降,因而BMSCs培养至第3代时适宜进行诱导分化。 展开更多
关键词 骨髓基质细胞 分化 神经元样细胞 传代 大鼠
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人骨髓基质干细胞克隆的培养及其向神经元样细胞的定向诱导分化 被引量:13
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作者 林竞韧 郭坤元 +1 位作者 李江琪 严定安 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第3期251-253,264,共4页
目的探讨人骨髓基质干细胞克隆的体外长期培养方法及其生物学特性。方法贴壁生长的基质干细胞以套环法消化分离,扩增培养,待细胞融合,传代培养。检测细胞的生长曲线、表面标记、克隆形成能力和向神经元定向诱导分化的潜能。结果克隆培... 目的探讨人骨髓基质干细胞克隆的体外长期培养方法及其生物学特性。方法贴壁生长的基质干细胞以套环法消化分离,扩增培养,待细胞融合,传代培养。检测细胞的生长曲线、表面标记、克隆形成能力和向神经元定向诱导分化的潜能。结果克隆培养的骨髓基质干细胞能传代20代以上,表达CD13、CD29、CD59,不表达CD11、CD14、CD31、CD34、CD45、CD80、CD86、CD117、HLA-DR;传代17代时能诱导分化为神经元样细胞。结论该培养条件能有效扩增骨髓基质干细胞,并保持分化潜能;克隆来源的骨髓基质细胞有相同的生物学特性。 展开更多
关键词 骨髓基质干细胞 细胞 培养的 神经元样细胞 诱导分化
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体外培养的嗅鞘细胞能够促进骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞 被引量:6
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作者 张燕青 曾园山 +3 位作者 张静 丁英 闫清 陈穗君 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期612-614,共3页
目的探讨体外培养的嗅鞘细胞(OECs)对骨髓间充质干细胞(MSCs)分化的影响。方法实验分为OECs+MSCs共培养组和MSCs单独培养组,在7d和14d两时间点观察MSCs的分化情况。用p75抗体免疫细胞化学染色鉴定OECs细胞的纯度;用巢蛋白(nestin)、神... 目的探讨体外培养的嗅鞘细胞(OECs)对骨髓间充质干细胞(MSCs)分化的影响。方法实验分为OECs+MSCs共培养组和MSCs单独培养组,在7d和14d两时间点观察MSCs的分化情况。用p75抗体免疫细胞化学染色鉴定OECs细胞的纯度;用巢蛋白(nestin)、神经丝蛋白(NF)、微管相关蛋白2(MAP2)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、突触后膜致密区蛋白(PSD)等抗体免疫细胞化学染色鉴定已分化的细胞表型。结果体外培养的MSCs经OECs诱导后分化为神经元样细胞,这些细胞能够表达NF、MAP2和PSD等神经元标记物,而不表达星形胶质细胞标记物GFAP。在培养7d,MSCs+OECs7d组的MSCs分化为神经元样细胞的百分率与MSCs7d组比较有明显增高。在培养14d,MSCs+OECs14d组的MSCs分化为神经元样细胞的百分率与MSCs14d组比较,也有明显增高。结论体外培养的嗅鞘细胞能够促进骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 嗅鞘细胞 细胞共培养 细胞分化 神经元样细胞
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成人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞及与凋亡的关系 被引量:4
12
作者 姚晓黎 张成 +5 位作者 刘卫彬 冯善伟 柳太云 卢锡林 张为西 黄文 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期516-520,共5页
【目的】探讨体外诱导成人骨髓间质干细胞(humanmesenchymalstemcells,hMSC)向神经元样细胞分化过程中分化与凋亡的关系,为进一步研究延长神经元样细胞的存活时间提供基础。【方法】从成人骨髓分离MSC,培养扩增。以β-巯基乙醇和参芪液... 【目的】探讨体外诱导成人骨髓间质干细胞(humanmesenchymalstemcells,hMSC)向神经元样细胞分化过程中分化与凋亡的关系,为进一步研究延长神经元样细胞的存活时间提供基础。【方法】从成人骨髓分离MSC,培养扩增。以β-巯基乙醇和参芪液诱导分化,于诱导后1、3、5h分别进行免疫组化鉴定神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,计数神经元样细胞,计算分化率。采用TUNEL方法分别检测诱导后1、3、5h的细胞凋亡率,并分析两者是否相关。【结果】hMSC经β-巯基乙醇和参芪液诱导后,可见神经元样细胞。免疫组化显示诱导出的神经元样细胞表达NSE、NF阳性、GFAP阴性。神经分化的定量分析显示诱导后1、3、5h,经β-巯基乙醇诱导NSE、NFH阳性细胞分别为43.5%±1.8%,59.3%±2.2%,76.5%±2.3%和42.6%±1.9%,55.1%±2.1%,73.5%±2.3%。参芪液诱导NSE、NFH阳性细胞分别为49.5%±1.9%,62.3%±2.1%,79.5%±2.5%和45.6%±1.9%,59.1%±2.1%,76.5%±2.3%。经两种诱导剂诱导后1、3、5h,TUNEL检测两者的凋亡率分别为1.5%,6.5%,19.5%和0.5%,2.3%,12.5%。【结论】β-巯基乙醇和参芪液均可在体外诱导hMSC分化为神经元样细胞。hMSC向神经元样细胞分化过程中也发生凋亡,分化率与凋亡率相关。 展开更多
关键词 神经元样细胞 诱导 NSE 凋亡率 间质干细胞 β-巯基乙醇 TUNEL 成人骨髓 分化过程 神经分化
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鼠胶质瘤细胞上清液诱导人骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化 被引量:5
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作者 牛云 何旭 +2 位作者 王心蕊 马英智 李玉林 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期634-637,F0002,共5页
目的:分离培养人骨髓间充质干细胞(MSCs),探讨鼠胶质瘤细胞上清液对其向神经元样细胞的诱导分化。方法:利用Percoll梯度分离法,培养人MSCs。采用鼠胶质瘤细胞上清液对MSCs进行诱导分化。观察人MSCs经诱导后细胞的形态变化,采用免疫细胞... 目的:分离培养人骨髓间充质干细胞(MSCs),探讨鼠胶质瘤细胞上清液对其向神经元样细胞的诱导分化。方法:利用Percoll梯度分离法,培养人MSCs。采用鼠胶质瘤细胞上清液对MSCs进行诱导分化。观察人MSCs经诱导后细胞的形态变化,采用免疫细胞化学方法检测神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:诱导24h后,细胞胞体收缩呈锥形或球形,有突起长出,细胞间突起相互连接,交错成网,为典型的神经元样形态。免疫细胞化学结果显示,经诱导培养后的神经元样细胞的胞体及部分突起NSE和NF染色呈强阳性表达,而GFAP染色呈阴性。诱导组出现NSE阳性的细胞率为(79.5±3.2)%,而对照组出现NSE阳性的细胞率为(12.1±2.0)%,两组之间比较差异有显著性(P<0.01)。诱导组出现NF阳性的细胞率为(41.2±2.4)%,而对照组为阴性。结论:鼠胶质瘤细胞上清液可以诱导MSCs向神经元样细胞分化。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 神经元样细胞 胶质瘤细胞
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大鼠骨髓基质干细胞向神经元样细胞的分化 被引量:4
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作者 李昌琪 刘丹 +2 位作者 伍校琼 卢大华 罗学港 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期18-20,共3页
目的 :体外定向诱导大鼠骨髓基质干细胞 (BMSCs)向神经元样细胞的分化。方法 :用DMEM培养液冲洗骨髓 ,收集骨髓细胞接种在培养瓶中体外扩增、纯化。用诱导剂诱导BMSCs分化为神经元样细胞。用免疫组化ABC法鉴定神经丝蛋白 (NF 2 0 0 )、... 目的 :体外定向诱导大鼠骨髓基质干细胞 (BMSCs)向神经元样细胞的分化。方法 :用DMEM培养液冲洗骨髓 ,收集骨髓细胞接种在培养瓶中体外扩增、纯化。用诱导剂诱导BMSCs分化为神经元样细胞。用免疫组化ABC法鉴定神经丝蛋白 (NF 2 0 0 )、微管相关蛋白 (MAP 2 )、神经元特异核蛋白 (NeuN)、巢蛋白 (Nestin)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、GAD和ChAT的表达。结果 :BMSCs经诱导后 ,胞体增大 ,并伸出细长突起 ,与神经元形态相似。免疫组化显示大部分细胞NF 2 0 0 ,MAP 2 ,NeuN和Nestin表达阳性 ,(3± 0 .8) %的细胞GAD表达阳性 ,(5± 0 .3) %的细胞ChAT表达阳性 ,而GFAP表达阴性。结论 :BMSCs可被诱导分化为神经元样细胞 ,部分细胞可表达GAD与ChAT。 展开更多
关键词 大鼠 骨髓基质干细胞 神经元样细胞 细胞分化 免疫组化ABC法 细胞培养
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兔骨髓基质细胞诱导分化成神经元样细胞的研究 被引量:7
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作者 陈剑荣 徐如祥 +4 位作者 姜晓丹 徐强 蔡颖谦 邹雨汐 丁涟沭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第4期367-370,共4页
目的检测由骨髓基质细胞诱导分化而成的神经元样细胞能否分泌氨基酸类神经生物活性物质成分,从而推断是否具有神经元的生化特征。方法无菌条件下抽取新西兰大白兔骨髓,梯度密度离心分离获取兔骨髓基质细胞(BMSCs),在神经干细胞培养基及... 目的检测由骨髓基质细胞诱导分化而成的神经元样细胞能否分泌氨基酸类神经生物活性物质成分,从而推断是否具有神经元的生化特征。方法无菌条件下抽取新西兰大白兔骨髓,梯度密度离心分离获取兔骨髓基质细胞(BMSCs),在神经干细胞培养基及细胞因子0.5 μg/ml维甲酸(RA)、20 ng/ml胶质源性神经营养因子(GDNF)于体外诱导分化为神经干细胞及神经元样细胞,采用免疫细胞化学方法进行鉴定,并应用高效液相色谱法(HPLC)检测其氨基酸类生物活性物质的含量。结果BMSCs培养10 d可见细胞大而圆,免疫细胞化学检测Nestin抗原阳性;培养20 d可见具有长突起的神经元样细胞形成,神经元特异烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学检查阳性,高效液相检测骨髓源性神经元样细胞含有高浓度的天冬氨基酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)。方差分析显示:随着BMSC培养天数的增加,其所含的Asp、Glu浓度也渐增加,RA+GDNF组所含Asp生物活性物质与其余各组比较有显著性差异(P<0.01)。结论兔BMSCs在体外条件下可以增殖分化,增殖细胞表达Nestin,分化的细胞则可表达NSE特异性抗原,并含有高浓度的兴奋性和抑制性氨基酸类神经递质成分;RA和GDNF作为BMSCs的诱导剂,在BMSCs向神经干细胞分化中起有重要的促进作用。 展开更多
关键词 骨髓基质细胞 诱导 分化 神经元样细胞 高效液相色谱法 神经细胞
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黄连素诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞 被引量:31
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作者 项平 李海标 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期51-53,共3页
目的 :黄连素体外定向诱导SD大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。方法 :用全骨髓细胞悬液体外扩增和纯化骨髓间质干细胞。选用第 5代以后骨髓间质干细胞进行诱导分化 ,用含 10 μg/L碱性细胞生长因子 (bFGF)的完全培养液预诱导 2 4... 目的 :黄连素体外定向诱导SD大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。方法 :用全骨髓细胞悬液体外扩增和纯化骨髓间质干细胞。选用第 5代以后骨髓间质干细胞进行诱导分化 ,用含 10 μg/L碱性细胞生长因子 (bFGF)的完全培养液预诱导 2 4h ,后更换含黄连素的无血清DMEM诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。免疫组化鉴定神经元烯醇酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果 :大鼠骨髓间质干细胞体外扩增第 5代后细胞形态达到均一 ,成梭形。加黄连素诱导 1h -8h ,间质干细胞胞体逐渐增大并伸出细长突起 ,形似神经细胞。免疫组化显示诱导的神经元样细胞NSE、NF表达阳性 ,GFAP阴性。结论 展开更多
关键词 黄连素 大鼠 骨髓间质干细胞 神经元样细胞 细胞分化
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BDNF基因转染促进骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化 被引量:4
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作者 刘伟东 吕国华 +2 位作者 王冰 马泽民 李亚伟 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期441-446,共6页
目的:将脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)基因转入骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC),使其作为种子细胞和基因治疗的载体将BDNF基因导入脊髓损伤组织,为探索一种更为有效的脊髓损伤治疗方法提... 目的:将脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)基因转入骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC),使其作为种子细胞和基因治疗的载体将BDNF基因导入脊髓损伤组织,为探索一种更为有效的脊髓损伤治疗方法提供实验基础。方法:分离、培养、鉴定大鼠骨髓间充质干细胞;实验组应用已构建的pEGFP-N1-BDNF进行基因转染,空质粒组用pEGFP-N1空质粒进行转染,阴性对照组只加入培养基,并进行Western印迹分析;将转染BDNF的实验组、转染空质粒组和未转染的阴性对照组细胞在体外向神经元样细胞诱导分化,比较3组细胞诱导后神经元样细胞分化率,并进行统计学分析。结果:流式细胞检测培养细胞CD90(+),CD44(+),CD34(-)、CD45(-);经Western印迹检测证实实验组MSC表达BDNF-EGFP;实验组细胞向神经元样细胞分化率高于空质粒组和未转染的阴性对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:BDNF基因转染MSC后,可以促进其向神经元样细胞分化,BDNF在MSC向神经元样细胞分化过程中具有重要作用。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 脑源性神经营养因子 分化 神经元样细胞
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初级纤毛介导的Shh信号对大鼠骨髓基质细胞神经元样细胞分化的影响 被引量:3
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作者 黄家贵 徐兰 +2 位作者 沈长波 刘舒 杨琴 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期934-939,共6页
目的探讨初级纤毛介导的Sonic hedgehog(Shh)信号对大鼠骨髓基质细胞(MSCs)神经元样细胞分化的影响。方法全骨髓贴壁法分离培养大鼠MSCs。实验分为白藜芦醇正常培养组、白藜芦醇诱导组、Smoothened(Smo)激动剂SAG组、Smo抑制剂环巴明组... 目的探讨初级纤毛介导的Sonic hedgehog(Shh)信号对大鼠骨髓基质细胞(MSCs)神经元样细胞分化的影响。方法全骨髓贴壁法分离培养大鼠MSCs。实验分为白藜芦醇正常培养组、白藜芦醇诱导组、Smoothened(Smo)激动剂SAG组、Smo抑制剂环巴明组,分别给予相应的药物处理。倒置显微镜下观察各组细胞形态;免疫荧光法检测各组细胞初级纤毛及Shh信号通路相关蛋白[Ac-Tu、Patched(Ptc)、Smo、Gli1]的表达;RT-PCR检测各组细胞Smo、Gli1mRNA的表达;蛋白质印迹法检测各组细胞Smo和Gli1蛋白的表达。结果正常培养的大鼠MSCs不表达初级纤毛。经过预诱导或饥饿处理24h后,MSCs表达初级纤毛及Ptc、Smo和Gli1蛋白,其中Smo和Gli1蛋白位于胞质,Ptc蛋白位于初级纤毛。正常培养时,白藜芦醇不能促使Smo移位及MSCs向神经元样细胞分化。当MSCs表达初级纤毛时,白藜芦醇及SAG可使Smo从胞质进入初级纤毛,同时伴随MSCs向神经元样细胞分化及Smo、Gli1mRNA和蛋白表达水平的增加(P<0.05);加入抑制剂环巴明后,Smo仍主要表达于胞质,Smo、Gli1mRNA和蛋白的表达水平降低(P<0.05),MSCs向神经元样细胞的分化受抑制。结论 MSCs表达初级纤毛并存在Shh信号,初级纤毛介导的Shh信号参与调控大鼠MSCs的神经元样细胞分化。 展开更多
关键词 Shh信号 初级纤毛 骨髓基质细胞 神经元样细胞 细胞分化
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全骨髓贴壁法分离骨髓间充质干细胞并诱导其定向神经元样细胞的分化 被引量:4
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作者 闫峰 张越林 +3 位作者 刘宁 胡守业 王刚 毛国超 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1162-1165,共4页
脑卒中和中枢神经系统损伤是神经科学领域的研究热点,如何改善神经元坏死、缺失和神经环路中断导致的神经系统活动及学习记忆障碍是研究的难点。已发现,海马齿状回(dentate gyrus,DG)和侧脑室下区(subventricular zone,SVZ)是成年... 脑卒中和中枢神经系统损伤是神经科学领域的研究热点,如何改善神经元坏死、缺失和神经环路中断导致的神经系统活动及学习记忆障碍是研究的难点。已发现,海马齿状回(dentate gyrus,DG)和侧脑室下区(subventricular zone,SVZ)是成年人脑内源性神经干细胞(neural stem cell,NSC)存在的2个主要脑区。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 神经元样细胞 诱导分化 流式细胞 免疫组织化学
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骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞的实验研究 被引量:5
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作者 褚倩 王亚平 +1 位作者 傅新巧 张苏明 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期21-23,T001,共4页
目的 探索骨髓间充质干细胞 (MSCs)能否在体外诱导分化成神经样细胞 ,并初步探讨其分化机制。方法 培养大鼠MSCs,用二甲亚砜 (DMSO)和丁羟茴醚 (BHA)诱导分化 ,鉴定诱导分化前后的细胞是否表达神经细胞及神经干细胞的特异性标记蛋白 ... 目的 探索骨髓间充质干细胞 (MSCs)能否在体外诱导分化成神经样细胞 ,并初步探讨其分化机制。方法 培养大鼠MSCs,用二甲亚砜 (DMSO)和丁羟茴醚 (BHA)诱导分化 ,鉴定诱导分化前后的细胞是否表达神经细胞及神经干细胞的特异性标记蛋白 ,并研究其超微结构的变化。结果 诱导分化后 ,大部分MSCs变成双极、多极和锥形 ,并相互交织成网络结构 ,出现神经元特异性核蛋白 (NeuN)和巢蛋白 (Nestin)表达 ,无胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和 2 3 环核苷酸磷酸二脂酶 (CNP)表达。部分MSCs转变为典型的神经元超微结构。结论 MSCs可以在体外诱导分化为神经元样细胞。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 神经元样细胞 细胞分化 体外诱导分化 二甲亚砜 丁羟茴醚
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