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神经介素B和受体对H9N2亚型流感病毒感染诱导的ITCH表达的影响
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作者 田世茂 田珂 +5 位作者 刘玉钤 辜晴新 沈昀知 张骋怀 包银莉 杨桂红 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1834-1842,共9页
甲型流感病毒(IAV)编码的基质蛋白1(M1)通过调控E3泛素连接酶ITCH介导的泛素化修饰反应拮抗宿主的抗病毒免疫反应。本课题前期研究表明,神经介素B(NMB)和其受体NMBR具有抑制IAV的先天性免疫应答反应的作用,但二者对IAV感染诱导的E3泛素... 甲型流感病毒(IAV)编码的基质蛋白1(M1)通过调控E3泛素连接酶ITCH介导的泛素化修饰反应拮抗宿主的抗病毒免疫反应。本课题前期研究表明,神经介素B(NMB)和其受体NMBR具有抑制IAV的先天性免疫应答反应的作用,但二者对IAV感染诱导的E3泛素连接酶ITCH和M1表达的影响如何,尚未见报道。因此,本文采用外源性NMB及H9N2亚型禽流感病毒刺激模型,适时干扰和过表达NMBR,分别从体内外水平分析NMB和NMBR对ITCH和M1蛋白的表达水平的影响。结果显示:添加外源性NMB和过表达NMBR均可显著抑制H9N2亚型禽流感病毒感染的A549细胞和小鼠肺组织中ITCH表达;与之相对,干扰NMBR表达则可显著促进A549细胞和小鼠肺组织中ITCH表达;此外,NMB和NMBR对H9N2亚型禽流感病毒感染诱导的ITCH的表达趋势与M1蛋白的表达呈现正相关。以上结果表明,NMB和NMBR可通过调节ITCH的表达而影响H9N2编码的M1蛋白的表达,从而发挥抗H9N2亚型禽流感病毒感染的先天性免疫反应。 展开更多
关键词 神经介素b 神经介素b受体NMbR H9N2流感病毒 E3泛素连接酶ITCH
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神经介素B及其受体NMBR参与抗A型流感病毒H1N1亚型感染的信号通路 被引量:5
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作者 唐梦瑶 马逸杰 +2 位作者 田世茂 万乾晖 杨桂红 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期3215-3223,共9页
NMB/NMBR通过调节A型流感病毒(IAV/H1N1/PR8)感染诱导的细胞因子表达而参与抗IAV的先天性免疫反应。为探究其发挥抗IAV/H1N1感染的信号通路,本文用PR8和WSN毒株分别感染MLE-12细胞和小鼠,用NF-κB抑制剂BAY11-7028单独或联合NMB处理MLE... NMB/NMBR通过调节A型流感病毒(IAV/H1N1/PR8)感染诱导的细胞因子表达而参与抗IAV的先天性免疫反应。为探究其发挥抗IAV/H1N1感染的信号通路,本文用PR8和WSN毒株分别感染MLE-12细胞和小鼠,用NF-κB抑制剂BAY11-7028单独或联合NMB处理MLE-12细胞,小鼠后腿肌内注射NMB和NMBRA,采用RT-PCR和qRT-PCR分析NMB、NMBR、IL-6、IFN-α和NP基因表达变化,采用Western blot分析NMB、NMBR、P65/p-P65、IκBα和NP蛋白表达的变化。结果显示,BAY11-7028可促使PR8和WSN感染的MLE-12细胞中NMB、NMBR、IL-6和IFN-α基因表达水平均下降和NP基因表达水平上升,并降低NMB、NMBR和p-P65蛋白表达水平和提升IκBα和NP蛋白表达水平。然而,NMB联合BAY 11-7028诱导PR8或WSN感染后的细胞中IL-6和NP表达出现极显著下降和IFN-α显著上升。此外,NMB抑制PR8和WSN感染的小鼠肺组织内p-P65和NP蛋白表达水平和促进IκBα蛋白表达水平;NMBRA联合NMB抵消NMB对PR8或WSN感染后的这些蛋白表达水平的调节作用。综上表明,NMB/NMBR通过调节PR8和WSN感染的MLE-12细胞和小鼠体内的NF-κB信号通路上P65蛋白磷酸化和IκBα的表达,进而影响下游细胞因子IL-6和IFN-α基因的表达,从而发挥抗IAV/H1N1感染的先天性免疫应答反应。 展开更多
关键词 神经介素b 神经介素b受体 A型流感病毒H1N1 NF-Κb
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H9N2亚型流感病毒感染过程中神经介素B及受体对NF-κB信号通路泛素酶的调控 被引量:1
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作者 田世茂 万乾晖 +5 位作者 许晓东 孔迎迎 田珂 唐钰冰 陈吉龙 杨桂红 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期3118-3126,共9页
神经介素B(neuromedin B,NMB)及受体(NMB receptor,NMBR)通过NF-κB信号通路参与抑制甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)H1N1亚型(IAV/H1N1)的感染。但关于NMB和NMBR对NF-κB信号通路相关泛素蛋白酶的调控如何,尚未见报道。为探究NMB... 神经介素B(neuromedin B,NMB)及受体(NMB receptor,NMBR)通过NF-κB信号通路参与抑制甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)H1N1亚型(IAV/H1N1)的感染。但关于NMB和NMBR对NF-κB信号通路相关泛素蛋白酶的调控如何,尚未见报道。为探究NMB和NMBR调控IAV诱导的NF-κB信号通路相关的泛素蛋白酶表达的影响,本研究基于IAV/H9N2感染sh-NMBR细胞与NMB刺激的A549细胞,采用RT-PCR、qRT-PCR及Western blot(WB)分析NMB和NMBR对H9N2感染引起的NF-κB信号通路相关的E3泛素连接酶Mind bomb-2(MIB2)和Ring Finger Protein 8(RNF8)及去泛素蛋白酶Cylindromatosis(CYLD)的表达变化。结果显示:H9N2感染sh-NMBR细胞中,RNF8和CYLD表达增加,MIB2表达和P65磷酸化水平降低;NMB激活A549细胞中NMBR的表达后,诱导细胞中RNF8和CYLD的表达水平下降,MIB2表达和P65磷酸化水平增加。结果表明:NMB和NMBR通过调控IAV/H9N2感染诱导的泛素蛋白酶的表达和P65活性,从而影响IAV/H9N2感染激活的NF-κB信号通路的功能,该结果为深入研究NMB和NMBR抑制甲型流感病毒感染的作用机制提供了理论基础。 展开更多
关键词 神经介素b 神经介素b受体 IAV/H9N2亚型 E3泛素连接酶 P65磷酸化
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神经介素B对大鼠心室肌细胞L型钙离子通道调节及机制研究 被引量:1
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作者 应娇茜 张园 +2 位作者 孙玉芳 张国强 常志刚 《中国心血管杂志》 2016年第3期241-245,共5页
目的研究神经介素B(Neuro B)对成年大鼠心室肌细胞L型钙离子通道的调节及信号转导机制。方法应用RT-PCR及Western blot方法研究Neuro B受体mRNA及蛋白在成年大鼠心室肌细胞中的表达。应用ELISA方法检测Neuro B对心室肌细胞中c AMP含量... 目的研究神经介素B(Neuro B)对成年大鼠心室肌细胞L型钙离子通道的调节及信号转导机制。方法应用RT-PCR及Western blot方法研究Neuro B受体mRNA及蛋白在成年大鼠心室肌细胞中的表达。应用ELISA方法检测Neuro B对心室肌细胞中c AMP含量的影响。应用全细胞膜片钳技术研究Neuro B对成年大鼠心室肌细胞L型钙离子通道电流(I_L)的作用,并应用药理学方法阐明其信号转导机制。结果 Neuro B受体在成年大鼠心室肌细胞中呈高表达。Neuro B对大鼠心室肌细胞IL具有量效依赖性的增加作用。蛋白激酶A(PKA)阻断剂KT-5720能够抑制Neuro B对该IL的增强作用,但蛋白激酶C(PKC)阻断剂GF109203X却无任何效应。Neuro B可浓度依赖性增加心室肌细胞中c AMP含量水平。结论 Neuro B对成年大鼠心室肌细胞IL具有剂量依赖性的增强作用,该作用是通过Neuro B受体激活及下游PKA激酶途径起效。 展开更多
关键词 神经介素b L型钙通道电流 心室肌细胞 蛋白激酶A
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猪神经介素B受体基因慢病毒过表达载体的构建与鉴定 被引量:1
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作者 邵淑玉 李佳 +4 位作者 马卓 于畅 张莹 张金龙 马志禹 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第10期3756-3763,共8页
【目的】构建猪神经介素B受体(NMBR)基因慢病毒过表达载体,并检测其在猪Leydig细胞中的表达,为研究NMBR基因过表达在猪睾丸间质(Leydig)细胞中的功能提供参考。【方法】根据猪NMBR基因(GenBank登录号:KM058699)CDS序列设计并合成特异性... 【目的】构建猪神经介素B受体(NMBR)基因慢病毒过表达载体,并检测其在猪Leydig细胞中的表达,为研究NMBR基因过表达在猪睾丸间质(Leydig)细胞中的功能提供参考。【方法】根据猪NMBR基因(GenBank登录号:KM058699)CDS序列设计并合成特异性酶切引物,通过RT-PCR扩增获得猪NMBR CDS全长序列,构建pMD19-T-NMBR质粒;通过XbaⅠ和EcoRⅠ对pCD513B-1和pMD19-T-NMBR质粒双酶切,构建pCD513B-1-NMBR重组质粒;将pCD513B-1-NMBR重组质粒与辅助质粒共转染人胚肾细胞(HEK-293T),转染48 h后通过荧光倒置显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白(GFP)情况,收集细胞培养液上清获得猪NMBR基因过表达慢病毒,并通过倍比稀释法测病毒效价;然后将猪NMBR基因过表达慢病毒转染猪Leydig细胞,转染48 h后观察细胞中GFP表达,收集细胞并通过实时荧光定量PCR检测NMBR mRNA的表达情况。【结果】通过RT-PCR成功扩增获得猪NMBR CDS全长序列,大小为1 173 bp;pMD19-T-NMBR重组质粒双酶切为2条特异性条带,条带大小分别与pMD19-T质粒和猪NMBR CDS序列片段大小一致,表明成功构建pMD19-T-NMBR质粒;通过双酶切获得线性化的pCD513B-1和NMBR序列;RT-PCR和测序结果表明,成功构建慢病毒过表达载体pCD513B-1-NMBR;pCD513B-1-NMBR转染48 h后,HEK-293T细胞中呈现大量绿色荧光,表明病毒包装成功,病毒效价约为4×10~6 TU/mL;NMBR基因慢病毒转染猪Leydig细胞48 h后,80%以上细胞有GFP表达,表明大部分细胞成功转染慢病毒;实时荧光定量PCR检测结果表明,转染慢病毒后能够极显著增加NMBR mRNA的表达(P<0.01)。【结论】本试验成功构建了猪NMBR基因慢病毒过表达载体,并证实猪NMBR基因过表达慢病毒能够增加猪Leydig细胞NMBR基因的表达,为研究NMBR基因过表达在猪Leydig细胞中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 神经介素b受体(NMbR) 慢病毒 过表达 LEYDIG细胞
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神经介素B及其受体在不同发育阶段山羊睾丸组织中的差异表达 被引量:2
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作者 曾诚 夏荣欣 +5 位作者 李悦 刘婷婷 孙宣 钟黄欣 郭文晴 张国敏 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期538-544,共7页
[目的]本试验旨在探究神经介素B(NMB)及其受体NMBR[还包括胃泌素释放肽受体(GRPR)和蛙皮素受体(BRS3)]在山羊不同发育阶段睾丸组织中的差异表达,为解析哺乳动物睾丸发育及功能调节机制提供参考。[方法]选取系谱清晰和体况良好的雄性山... [目的]本试验旨在探究神经介素B(NMB)及其受体NMBR[还包括胃泌素释放肽受体(GRPR)和蛙皮素受体(BRS3)]在山羊不同发育阶段睾丸组织中的差异表达,为解析哺乳动物睾丸发育及功能调节机制提供参考。[方法]选取系谱清晰和体况良好的雄性山羊12只(3月龄和9月龄,各6只)进行阉割并采集睾丸组织,在克隆NMB及其受体基因与分析序列的基础上,采用免疫组化技术检测NMB及其受体在睾丸组织中的表达定位,利用RT-qPCR和Western blot检测NMB及其受体在不同发育阶段山羊睾丸组织中的表达变化。[结果]NMB及其受体基因与绵羊和牛的进化关系最近,NMB及其受体基因编码区的核苷酸序列与牛和绵羊的同源性达96%以上,结构分析发现NMBR、GRPR和BRS3均属于7次跨膜受体。NMB及其受体在3月龄和9月龄山羊睾丸组织中广泛表达,其中在间质细胞、肌样细胞和精子细胞中呈高表达。与3月龄山羊相比,9月龄山羊睾丸组织中NMB与GRPR的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05),而NMBR与BRS3的mRNA和蛋白表达量显著增加(P<0.05)。[结论]NMB及其受体可能参与山羊睾丸发育的调节。 展开更多
关键词 神经介素b(NMb) NMb受体 基因克隆 差异表达 睾丸 山羊
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热应激对兔下丘脑-垂体-睾丸轴NMB及其受体基因表达和睾酮分泌的影响 被引量:12
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作者 马志禹 张莹 +5 位作者 陈风雷 杨盛 乔文娜 胡佳慧 张金龙 雷治海 《湖北农业科学》 2019年第12期141-146,共6页
研究热应激对公兔下丘脑-垂体-睾丸(HPT)轴神经介素B(NMB)及其受体(NMBR)基因表达水平及血清皮质醇和睾酮分泌的影响,探讨热应激对神经肽和相关激素分泌的影响。建立热应激模型,采用荧光定量PCR(RT-PCR)检测兔NMB和NMBRmRNA在HPT轴的表... 研究热应激对公兔下丘脑-垂体-睾丸(HPT)轴神经介素B(NMB)及其受体(NMBR)基因表达水平及血清皮质醇和睾酮分泌的影响,探讨热应激对神经肽和相关激素分泌的影响。建立热应激模型,采用荧光定量PCR(RT-PCR)检测兔NMB和NMBRmRNA在HPT轴的表达情况,采用放射免疫分析法(RIA)检测兔血清中皮质醇和睾酮浓度的变化规律。结果表明,兔NMB和NMBR基因在HPT轴中表达;NMB和NMBRmRNA在HPT轴的表达模式相似,且热应激后在一定程度上可以促进NMB和NMBR基因的表达,并按时序在下丘脑(热应激0.5h)、垂体(热应激1.0h)和睾丸(热应激2.0h)促进作用最为明显;热应激可以促进皮质醇的分泌,并抑制睾酮的分泌,但这种抑制作用随着热应激时间的增加(热应激2.0h)逐渐恢复正常。表明热应激可能通过NMB/NMBR系统调节HPT轴的功能,进而影响动物繁殖。 展开更多
关键词 热应激 神经介素b NMbR 下丘脑-垂体-睾丸轴 睾酮
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铃蟾肽致小鼠瘙痒下丘脑响应及PKA/creb信号参与机制
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作者 张晶鑫 周琥 +2 位作者 石京山 王永安 王丽韫 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2021年第9期688-689,共2页
目的研究铃蟾肽(BN)致瘙痒药理学作用特点,确定下丘脑参与其中枢调控瘙痒关键分子机制。方法观察KM小鼠经侧脑室注射不同剂量BN(0.04,0.40和4.00μg)诱发的瘙痒效应;构建耦联荧光标签NBD(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazole)的BN(NBD-BN),... 目的研究铃蟾肽(BN)致瘙痒药理学作用特点,确定下丘脑参与其中枢调控瘙痒关键分子机制。方法观察KM小鼠经侧脑室注射不同剂量BN(0.04,0.40和4.00μg)诱发的瘙痒效应;构建耦联荧光标签NBD(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazole)的BN(NBD-BN),并通过检测荧光信号示踪NBDBN在脑内的分布;利用免疫组化和Western印迹法检测下丘脑BN受体神经介素B受体(NMBR)、胃泌素释放肽受体(GRPR)及受体信号PKA/CREB相关蛋白的表达,鉴定下丘脑内特异神经元c-FOS蛋白响应。结果KM小鼠经侧脑室注射BN(0.04,0.40和4.00μg)后,30 min观察期内产生显著瘙痒抓挠行为,抓挠次数呈剂量依赖性增加。与对照组相比,BN 3个剂量组抓挠次数均显著增加(P<0.05,P<0.01);荧光示踪结果显示,侧脑室给予BN后NBD-BN在30 min内在下丘脑特异性分布,且10 min时荧光强度达到峰值。免疫组化和Western印迹结果显示,BN 2种受体亚型GRPR和NMBR在下丘脑特异性分布;侧脑室给予BN 4.00μg后,与对照组相比,下丘脑PKA,p-CREB和c-FOS蛋白均显著增加(P<0.01),且c-FOS蛋白在下丘脑背内侧核密集分布。结论BN具有强的中枢致瘙痒作用,侧脑室注射BN可致小鼠瘙痒并激活下丘脑BN受体依赖的PKA/CREB信号通路,诱导下丘脑神经元响应,表明下丘脑参与调控BN中枢致瘙痒作用。 展开更多
关键词 铃蟾肽 下丘脑背内侧核 胃泌素释放肽受体 NMbR神经介素b受体
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蛙皮素样肽家族及其受体氨基酸序列信息学比较分析 被引量:1
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作者 赵树林 李璐璐 +2 位作者 孙小燕 阿迪莱·艾力 赵红琼 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期925-931,共7页
【目的】研究反刍动物蛙皮素样肽家族多肽及其受体的保守性。为不同动物,特别是反刍动物这2种蛙皮素样多肽及其受体蛋白抗原设计和活性多肽筛选等研究提供参考。【方法】采用生物信息分析学的方法,通过UniProt数据库比较牛的蛙皮素样肽... 【目的】研究反刍动物蛙皮素样肽家族多肽及其受体的保守性。为不同动物,特别是反刍动物这2种蛙皮素样多肽及其受体蛋白抗原设计和活性多肽筛选等研究提供参考。【方法】采用生物信息分析学的方法,通过UniProt数据库比较牛的蛙皮素样肽家族胃泌素释放肽(Gastrin-releasing peptide, GRP)和神经介素B(Neuromedin B, NMB)2种多肽及其特异性受体GRP-R和NMB-R与其他动物氨基酸序列的差异性。【结果】13种动物成熟GRP多肽C-端的8个氨基酸序列完全相同,牛GRP氨基酸序列与绵羊、猪和豚鼠最高,分别为88.7%、77.8%和77.8%,与其他动物相似性低于74.1%。10种动物成熟NMB多肽C-端10个氨基酸序列完全相同。牛GRP-R与狗、马和猪等相似性最高,分别为96.1%、94.3%和94.0%,牛NMB-R与猪、人和马相似性最高,分别为92.3%、91.5%和91.0%;牛GRP-R与NMB-R相似性仅为62.2%。【结论】GRP和NMB的C-端氨基酸序列在不同动物之间均具有高度的保守性,而N-端为变化区域,且GRP-R和NMB-R氨基酸序列在动物之间保守性较高。 展开更多
关键词 胃泌素释放肽 神经介素b 胃泌素释放肽受体 神经介素b受体 氨基酸序列
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