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GST-p43/AIMP1融合蛋白表达和纯化以及与NF-L的相互作用
1
作者
张珍珍
尹延青
+1 位作者
周嘉伟
乐卫东
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期580-584,共5页
目的构建人p43/AIMP1蛋白与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达纯化,通过GST-pulldown方法验证其与神经中间丝轻链(NF-L)的体外直接相互作用。方法以重组质粒pcDNA3.1-p43为模板,扩增p43/AIMP1基因,产物经纯化回...
目的构建人p43/AIMP1蛋白与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达纯化,通过GST-pulldown方法验证其与神经中间丝轻链(NF-L)的体外直接相互作用。方法以重组质粒pcDNA3.1-p43为模板,扩增p43/AIMP1基因,产物经纯化回收后与原核表达载体pGEX4T-1连接构建成新载体GST-p43/AIMP1,经鉴定完全正确后转化大肠埃希菌BL21(DE3),通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,并纯化获得目的蛋白;将myc-NF-L体外转染HEK293T细胞,利用GST pull-down原理和方法验证人p43蛋白与神经中间丝轻链蛋白NF-L之间的相互作用。结果酶切鉴定和测序结果显示,成功构建了GST-p43/AIMP1融合蛋白原核表达载体;考马斯亮蓝染色和Western blotting结果显示,成功获得有生物活性的GST-p43/AIMP1融合蛋白;GST pull-down实验结果证实,p43/AIMP1与NF-L存在直接相互作用。结论获得有生物活性的GST-p43/AIMP1蛋白,并成功应用GST pull-down方法证实p43/AIMP1与NF-L在体外存在直接的相互作用。
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关键词
p43/AIMP1
蛋白
表达纯化
GST
pull-down
神经中间丝轻链蛋白
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题名
GST-p43/AIMP1融合蛋白表达和纯化以及与NF-L的相互作用
1
作者
张珍珍
尹延青
周嘉伟
乐卫东
机构
上海交通大学医学院附属瑞金医院神经科
中国科学院上海生命科学研究院神经科学研究所
出处
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期580-584,共5页
文摘
目的构建人p43/AIMP1蛋白与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达纯化,通过GST-pulldown方法验证其与神经中间丝轻链(NF-L)的体外直接相互作用。方法以重组质粒pcDNA3.1-p43为模板,扩增p43/AIMP1基因,产物经纯化回收后与原核表达载体pGEX4T-1连接构建成新载体GST-p43/AIMP1,经鉴定完全正确后转化大肠埃希菌BL21(DE3),通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,并纯化获得目的蛋白;将myc-NF-L体外转染HEK293T细胞,利用GST pull-down原理和方法验证人p43蛋白与神经中间丝轻链蛋白NF-L之间的相互作用。结果酶切鉴定和测序结果显示,成功构建了GST-p43/AIMP1融合蛋白原核表达载体;考马斯亮蓝染色和Western blotting结果显示,成功获得有生物活性的GST-p43/AIMP1融合蛋白;GST pull-down实验结果证实,p43/AIMP1与NF-L存在直接相互作用。结论获得有生物活性的GST-p43/AIMP1蛋白,并成功应用GST pull-down方法证实p43/AIMP1与NF-L在体外存在直接的相互作用。
关键词
p43/AIMP1
蛋白
表达纯化
GST
pull-down
神经中间丝轻链蛋白
Keywords
p43/AIMP1
protein expression and purification
GST pull-down
neurofilament light subunit
分类号
R363 [医药卫生—病理学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
GST-p43/AIMP1融合蛋白表达和纯化以及与NF-L的相互作用
张珍珍
尹延青
周嘉伟
乐卫东
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012
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