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针对小胶质细胞上BDNF表达的siRNA筛选及其抑制效应检测
被引量：
2
1
作者
王丽娜
王秀云
+4 位作者
左剑玲
许期年
朱卫东
贾晓明
杨建平
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期1021-1026,共6页
目的筛选有效抑制小胶质细胞上脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)序列,并观察其对小胶质细胞活性标记物OX-42表达的调节作用。方法设计并合成针对BDNF的siRNA3...
目的筛选有效抑制小胶质细胞上脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)序列,并观察其对小胶质细胞活性标记物OX-42表达的调节作用。方法设计并合成针对BDNF的siRNA3对(siRNA1588,siRNA283,siR-NA232)及一条带绿色荧光标记的通用阴性对照FAM-siRNA。在LipofectamineTM 2000介导下转染小胶质细胞。分别采用Real-TimePCR及Western blot方法测定并比较其抑制率;采用磺基罗丹明B法(sulforhodamine B,SRB)分析转染复合物的细胞毒性。同时采用免疫荧光组织化学结合共聚焦显微镜观察BDNF和OX-42的表达情况。结果①与阴性对照组及siRNA283、siRNA232相比,BDNFsiRNA1588(50μmol·L-1,脂质体与siRNA比例1∶3)干扰小胶质细胞后,其mR-NA和蛋白的相对表达量最低(P<0.01)。②Lipofectami-neTM 20008μl复合50μmol·L-1siRNA(脂质体与siRNA比例为1∶3),不仅细胞毒性低而且转染效率高(P<0.01),为最佳转染条件。③BNDF和OX-42存在共表达;且siR-NA1588作用后OX-42的平均光密度值(IOD/area)明显降低(P<0.01)。结论①siRNA1588对小胶质细胞上BDNF表达的抑制效果最大。②BDNF在小胶质细胞的活性调节中具有重要作用。
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关键词
小胶质细胞
脑源性神经生长因子
小干扰RNA
筛选
磺基罗丹明B法
细胞毒性
大鼠
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职称材料
题名
针对小胶质细胞上BDNF表达的siRNA筛选及其抑制效应检测
被引量：
2
1
作者
王丽娜
王秀云
左剑玲
许期年
朱卫东
贾晓明
杨建平
机构
苏州大学附属第一医院麻醉科
苏州大学附属第一医院脑神经研究室
苏州大学附属第一医院病理科
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期1021-1026,共6页
基金
国家自然科学基金资助课题(No30872442)
江苏省卫生厅基金资助课题(NoH200855
H200917)
文摘
目的筛选有效抑制小胶质细胞上脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)序列,并观察其对小胶质细胞活性标记物OX-42表达的调节作用。方法设计并合成针对BDNF的siRNA3对(siRNA1588,siRNA283,siR-NA232)及一条带绿色荧光标记的通用阴性对照FAM-siRNA。在LipofectamineTM 2000介导下转染小胶质细胞。分别采用Real-TimePCR及Western blot方法测定并比较其抑制率;采用磺基罗丹明B法(sulforhodamine B,SRB)分析转染复合物的细胞毒性。同时采用免疫荧光组织化学结合共聚焦显微镜观察BDNF和OX-42的表达情况。结果①与阴性对照组及siRNA283、siRNA232相比,BDNFsiRNA1588(50μmol·L-1,脂质体与siRNA比例1∶3)干扰小胶质细胞后,其mR-NA和蛋白的相对表达量最低(P<0.01)。②Lipofectami-neTM 20008μl复合50μmol·L-1siRNA(脂质体与siRNA比例为1∶3),不仅细胞毒性低而且转染效率高(P<0.01),为最佳转染条件。③BNDF和OX-42存在共表达;且siR-NA1588作用后OX-42的平均光密度值(IOD/area)明显降低(P<0.01)。结论①siRNA1588对小胶质细胞上BDNF表达的抑制效果最大。②BDNF在小胶质细胞的活性调节中具有重要作用。
关键词
小胶质细胞
脑源性神经生长因子
小干扰RNA
筛选
磺基罗丹明B法
细胞毒性
大鼠
Keywords
microglial
brain-derived neurotrophic factor（ BDNF）
small interfering RNA
selection
sulforho-damine B（ SRB）
cytotoxicity
rats
分类号
R342.2 [医药卫生—基础医学]
R394.2 [医药卫生—医学遗传学]
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作者
出处
发文年
被引量
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1
针对小胶质细胞上BDNF表达的siRNA筛选及其抑制效应检测
王丽娜
王秀云
左剑玲
许期年
朱卫东
贾晓明
杨建平
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
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