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基因导入的脂质体转染法和磷酸钙转染法之比较 被引量:14
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作者 李华 刘维全 +1 位作者 王太一 殷震 《中国实验动物学杂志》 2000年第2期65-68,共4页
将外源基因导入真核细胞的方法很多。我们通过对绿色荧光蛋白 (GFP)报告基因在真核细胞中表达的研究 ,比较了较常用的两种方法—脂质体转染法和磷酸钙转染法。研究结果表明 :脂质体转染法的转染效率较磷酸钙转染法高 ,且简单易行 ,是外... 将外源基因导入真核细胞的方法很多。我们通过对绿色荧光蛋白 (GFP)报告基因在真核细胞中表达的研究 ,比较了较常用的两种方法—脂质体转染法和磷酸钙转染法。研究结果表明 :脂质体转染法的转染效率较磷酸钙转染法高 ,且简单易行 ,是外源基因导入体外培养细胞内较理想的方法。 展开更多
关键词 磷酸钙转染法 脂质体 真核细胞 体外培养细胞 效率 研究结果 表达 绿色荧光蛋白(GFP) 报告基因 外源基因
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磷酸钙法转染瘤细胞效率的优化 被引量:2
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作者 魏丽丽 强荣兵 +2 位作者 张楠楠 刘月月 侯颖春 《陕西师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期73-77,共5页
为了探索磷酸钙法转染瘤细胞的最佳转染条件,以磷酸钙法将ANXA2特异性重组干扰质粒pU6H1-GFP-siANXA2导入人肝癌细胞SMMC-7721并优化了以下转染参数:转染前细胞汇合率、质粒剂量、质粒复合物形成时间、孵育时间、血清、抗生素有无及细... 为了探索磷酸钙法转染瘤细胞的最佳转染条件,以磷酸钙法将ANXA2特异性重组干扰质粒pU6H1-GFP-siANXA2导入人肝癌细胞SMMC-7721并优化了以下转染参数:转染前细胞汇合率、质粒剂量、质粒复合物形成时间、孵育时间、血清、抗生素有无及细胞传代次数等.以荧光显微镜观察GFP表达、半定量RT-PCR和western blotting评估转染效率.结果显示,转染前细胞50%~60%汇合率、8μg质粒用量(直径30 mm培养皿)、20~30 min沉淀形成时间及6 h孵育时间转染效率较高;细胞传代次数及抗生素有无对转染效率影响不显著,但血清在实验条件下是必不可少的.转染48 h后,GFP表达进入高峰期、ANXA2 mRNA和蛋白水平下调(P〈0.05). 展开更多
关键词 磷酸钙转染法 细胞 效率 肝癌细胞
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一种低成本的逆转录病毒感染白血病细胞的方法探析 被引量:1
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作者 张慧娟 张伶 +2 位作者 胡蓉 江丽霞 钟田雨 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第8期1304-1307,共4页
为了降低实验成本,解决悬浮细胞难转染问题,本研究进行逆转录病毒包装及感染悬浮细胞—白血病细胞的实验。采用磷酸钙转染方法将逆转录病毒质粒MSCV-PIG、Gag-pol与VSVG共转染入293T细胞,通过旋转法将病毒原液与KG-1a白血病细胞共孵育,... 为了降低实验成本,解决悬浮细胞难转染问题,本研究进行逆转录病毒包装及感染悬浮细胞—白血病细胞的实验。采用磷酸钙转染方法将逆转录病毒质粒MSCV-PIG、Gag-pol与VSVG共转染入293T细胞,通过旋转法将病毒原液与KG-1a白血病细胞共孵育,最后用嘌呤霉素筛选稳定细胞株。逆转录病毒原液感染KG-1a细胞48 h后KG-1a细胞的感染效率约为10%。但嘌呤霉素稳筛后,携带逆转录病毒载体的KG-1a细胞阳性率可达85%以上。通过低成本的磷酸钙转染方法获取病毒,采用病毒原液成功感染较难转染的白血病细胞,为做基础研究的科研人员提供借鉴。 展开更多
关键词 白血病细胞 录病毒载体 磷酸钙转染法
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癌基因BMI-1对中心体复制的调节作用 被引量:3
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作者 宋立兵 张玲 +4 位作者 曾木圣 廖雯婷 李满枝 郭宝红 汪慧民 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期377-379,共3页
【目的】探讨BMI-1在中心体扩增中的作用。【方法】通过磷酸钙转染法在细胞中高表达野生型、带有Myc-tag的Myc-BMI-1质粒及两个BMI-1的RNAi序列,Westernblot检测BMI-1蛋白的表达,免疫荧光观察中心体数目的变化。【结果】首先检测了抗BM... 【目的】探讨BMI-1在中心体扩增中的作用。【方法】通过磷酸钙转染法在细胞中高表达野生型、带有Myc-tag的Myc-BMI-1质粒及两个BMI-1的RNAi序列,Westernblot检测BMI-1蛋白的表达,免疫荧光观察中心体数目的变化。【结果】首先检测了抗BMI-1抗体特异识别重组和内源性BMI-1蛋白;高表达BMI-1于HeLa和MCF-7细胞中导致中心体的扩增;在Cos7和U2OS中因RNAi降低BMI-1翻译而抑制了中心体的扩增。【结论】癌基因BMI-1在中心体复制扩增的调节中起着重要的作用。 展开更多
关键词 癌基因 调节作用 复制 Western MCF-7细胞 磷酸钙转染法 BLOT检测 RNAi 中心体扩增 免疫荧光 HELA 特异识别 Cos7 高表达 BMI 野生型 内源性 蛋白
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