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基因导入的脂质体转染法和磷酸钙转染法之比较
被引量:
14
1
作者
李华
刘维全
+1 位作者
王太一
殷震
《中国实验动物学杂志》
2000年第2期65-68,共4页
将外源基因导入真核细胞的方法很多。我们通过对绿色荧光蛋白 (GFP)报告基因在真核细胞中表达的研究 ,比较了较常用的两种方法—脂质体转染法和磷酸钙转染法。研究结果表明 :脂质体转染法的转染效率较磷酸钙转染法高 ,且简单易行 ,是外...
将外源基因导入真核细胞的方法很多。我们通过对绿色荧光蛋白 (GFP)报告基因在真核细胞中表达的研究 ,比较了较常用的两种方法—脂质体转染法和磷酸钙转染法。研究结果表明 :脂质体转染法的转染效率较磷酸钙转染法高 ,且简单易行 ,是外源基因导入体外培养细胞内较理想的方法。
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关键词
磷酸钙转染法
脂质体
转
染
法
真核细胞
体外培养细胞
转
染
效率
研究结果
表达
绿色荧光蛋白(GFP)
报告基因
外源基因
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职称材料
磷酸钙法转染瘤细胞效率的优化
被引量:
2
2
作者
魏丽丽
强荣兵
+2 位作者
张楠楠
刘月月
侯颖春
《陕西师范大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第3期73-77,共5页
为了探索磷酸钙法转染瘤细胞的最佳转染条件,以磷酸钙法将ANXA2特异性重组干扰质粒pU6H1-GFP-siANXA2导入人肝癌细胞SMMC-7721并优化了以下转染参数:转染前细胞汇合率、质粒剂量、质粒复合物形成时间、孵育时间、血清、抗生素有无及细...
为了探索磷酸钙法转染瘤细胞的最佳转染条件,以磷酸钙法将ANXA2特异性重组干扰质粒pU6H1-GFP-siANXA2导入人肝癌细胞SMMC-7721并优化了以下转染参数:转染前细胞汇合率、质粒剂量、质粒复合物形成时间、孵育时间、血清、抗生素有无及细胞传代次数等.以荧光显微镜观察GFP表达、半定量RT-PCR和western blotting评估转染效率.结果显示,转染前细胞50%~60%汇合率、8μg质粒用量(直径30 mm培养皿)、20~30 min沉淀形成时间及6 h孵育时间转染效率较高;细胞传代次数及抗生素有无对转染效率影响不显著,但血清在实验条件下是必不可少的.转染48 h后,GFP表达进入高峰期、ANXA2 mRNA和蛋白水平下调(P〈0.05).
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关键词
磷酸钙转染法
细胞
转
染
转
染
效率
肝癌细胞
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职称材料
一种低成本的逆转录病毒感染白血病细胞的方法探析
被引量:
1
3
作者
张慧娟
张伶
+2 位作者
胡蓉
江丽霞
钟田雨
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2018年第8期1304-1307,共4页
为了降低实验成本,解决悬浮细胞难转染问题,本研究进行逆转录病毒包装及感染悬浮细胞—白血病细胞的实验。采用磷酸钙转染方法将逆转录病毒质粒MSCV-PIG、Gag-pol与VSVG共转染入293T细胞,通过旋转法将病毒原液与KG-1a白血病细胞共孵育,...
为了降低实验成本,解决悬浮细胞难转染问题,本研究进行逆转录病毒包装及感染悬浮细胞—白血病细胞的实验。采用磷酸钙转染方法将逆转录病毒质粒MSCV-PIG、Gag-pol与VSVG共转染入293T细胞,通过旋转法将病毒原液与KG-1a白血病细胞共孵育,最后用嘌呤霉素筛选稳定细胞株。逆转录病毒原液感染KG-1a细胞48 h后KG-1a细胞的感染效率约为10%。但嘌呤霉素稳筛后,携带逆转录病毒载体的KG-1a细胞阳性率可达85%以上。通过低成本的磷酸钙转染方法获取病毒,采用病毒原液成功感染较难转染的白血病细胞,为做基础研究的科研人员提供借鉴。
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关键词
白血病细胞
逆
转
录病毒载体
磷酸钙转染法
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职称材料
癌基因BMI-1对中心体复制的调节作用
被引量:
3
4
作者
宋立兵
张玲
+4 位作者
曾木圣
廖雯婷
李满枝
郭宝红
汪慧民
《中山大学学报(医学科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第4期377-379,共3页
【目的】探讨BMI-1在中心体扩增中的作用。【方法】通过磷酸钙转染法在细胞中高表达野生型、带有Myc-tag的Myc-BMI-1质粒及两个BMI-1的RNAi序列,Westernblot检测BMI-1蛋白的表达,免疫荧光观察中心体数目的变化。【结果】首先检测了抗BM...
【目的】探讨BMI-1在中心体扩增中的作用。【方法】通过磷酸钙转染法在细胞中高表达野生型、带有Myc-tag的Myc-BMI-1质粒及两个BMI-1的RNAi序列,Westernblot检测BMI-1蛋白的表达,免疫荧光观察中心体数目的变化。【结果】首先检测了抗BMI-1抗体特异识别重组和内源性BMI-1蛋白;高表达BMI-1于HeLa和MCF-7细胞中导致中心体的扩增;在Cos7和U2OS中因RNAi降低BMI-1翻译而抑制了中心体的扩增。【结论】癌基因BMI-1在中心体复制扩增的调节中起着重要的作用。
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关键词
癌基因
调节作用
复制
Western
MCF-7细胞
磷酸钙转染法
BLOT检测
RNAi
中心体扩增
免疫荧光
HELA
特异识别
Cos7
高表达
BMI
野生型
内源性
蛋白
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职称材料
题名
基因导入的脂质体转染法和磷酸钙转染法之比较
被引量:
14
1
作者
李华
刘维全
王太一
殷震
机构
中国医科大学实验动物部
中国人民解放军军需大学基因工程实验室
出处
《中国实验动物学杂志》
2000年第2期65-68,共4页
文摘
将外源基因导入真核细胞的方法很多。我们通过对绿色荧光蛋白 (GFP)报告基因在真核细胞中表达的研究 ,比较了较常用的两种方法—脂质体转染法和磷酸钙转染法。研究结果表明 :脂质体转染法的转染效率较磷酸钙转染法高 ,且简单易行 ,是外源基因导入体外培养细胞内较理想的方法。
关键词
磷酸钙转染法
脂质体
转
染
法
真核细胞
体外培养细胞
转
染
效率
研究结果
表达
绿色荧光蛋白(GFP)
报告基因
外源基因
Keywords
liposomes
calcium phosphate
transfection
GFP gene
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
磷酸钙法转染瘤细胞效率的优化
被引量:
2
2
作者
魏丽丽
强荣兵
张楠楠
刘月月
侯颖春
机构
肿瘤分子细胞生物学实验室
出处
《陕西师范大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第3期73-77,共5页
基金
陕西省自然科学基础研究计划项目(SJ08-ZT09)
陕西师范大学大学生创新性实验计划国家级重点项目(101071822)
文摘
为了探索磷酸钙法转染瘤细胞的最佳转染条件,以磷酸钙法将ANXA2特异性重组干扰质粒pU6H1-GFP-siANXA2导入人肝癌细胞SMMC-7721并优化了以下转染参数:转染前细胞汇合率、质粒剂量、质粒复合物形成时间、孵育时间、血清、抗生素有无及细胞传代次数等.以荧光显微镜观察GFP表达、半定量RT-PCR和western blotting评估转染效率.结果显示,转染前细胞50%~60%汇合率、8μg质粒用量(直径30 mm培养皿)、20~30 min沉淀形成时间及6 h孵育时间转染效率较高;细胞传代次数及抗生素有无对转染效率影响不显著,但血清在实验条件下是必不可少的.转染48 h后,GFP表达进入高峰期、ANXA2 mRNA和蛋白水平下调(P〈0.05).
关键词
磷酸钙转染法
细胞
转
染
转
染
效率
肝癌细胞
Keywords
calcium phosphate transfection method
cell transfetion
transfection efficiency
hepatocarcinoma cell
分类号
R730 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
一种低成本的逆转录病毒感染白血病细胞的方法探析
被引量:
1
3
作者
张慧娟
张伶
胡蓉
江丽霞
钟田雨
机构
赣南医学院第一附属医院检验科
重庆医科大学检验医学院
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2018年第8期1304-1307,共4页
基金
江西省卫生计生委科技计划(编号:20165361)
文摘
为了降低实验成本,解决悬浮细胞难转染问题,本研究进行逆转录病毒包装及感染悬浮细胞—白血病细胞的实验。采用磷酸钙转染方法将逆转录病毒质粒MSCV-PIG、Gag-pol与VSVG共转染入293T细胞,通过旋转法将病毒原液与KG-1a白血病细胞共孵育,最后用嘌呤霉素筛选稳定细胞株。逆转录病毒原液感染KG-1a细胞48 h后KG-1a细胞的感染效率约为10%。但嘌呤霉素稳筛后,携带逆转录病毒载体的KG-1a细胞阳性率可达85%以上。通过低成本的磷酸钙转染方法获取病毒,采用病毒原液成功感染较难转染的白血病细胞,为做基础研究的科研人员提供借鉴。
关键词
白血病细胞
逆
转
录病毒载体
磷酸钙转染法
Keywords
leukemic cells
retroviral vector
calcium phosphate transfection method
分类号
R33 [医药卫生—人体生理学]
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职称材料
题名
癌基因BMI-1对中心体复制的调节作用
被引量:
3
4
作者
宋立兵
张玲
曾木圣
廖雯婷
李满枝
郭宝红
汪慧民
机构
中山大学肿瘤防治中心实验研究部
出处
《中山大学学报(医学科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第4期377-379,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(30440001
3047066)
+1 种基金
广东省重点实验室项目(998077035)
中山大学肿瘤防治中心回国人员启动基金资助项目(060326)
文摘
【目的】探讨BMI-1在中心体扩增中的作用。【方法】通过磷酸钙转染法在细胞中高表达野生型、带有Myc-tag的Myc-BMI-1质粒及两个BMI-1的RNAi序列,Westernblot检测BMI-1蛋白的表达,免疫荧光观察中心体数目的变化。【结果】首先检测了抗BMI-1抗体特异识别重组和内源性BMI-1蛋白;高表达BMI-1于HeLa和MCF-7细胞中导致中心体的扩增;在Cos7和U2OS中因RNAi降低BMI-1翻译而抑制了中心体的扩增。【结论】癌基因BMI-1在中心体复制扩增的调节中起着重要的作用。
关键词
癌基因
调节作用
复制
Western
MCF-7细胞
磷酸钙转染法
BLOT检测
RNAi
中心体扩增
免疫荧光
HELA
特异识别
Cos7
高表达
BMI
野生型
内源性
蛋白
Keywords
oncogene, BMI-1
gene expression
centrosomal duplication
分类号
R730.21 [医药卫生—肿瘤]
R373.21 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基因导入的脂质体转染法和磷酸钙转染法之比较
李华
刘维全
王太一
殷震
《中国实验动物学杂志》
2000
14
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
磷酸钙法转染瘤细胞效率的优化
魏丽丽
强荣兵
张楠楠
刘月月
侯颖春
《陕西师范大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2011
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
一种低成本的逆转录病毒感染白血病细胞的方法探析
张慧娟
张伶
胡蓉
江丽霞
钟田雨
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2018
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
癌基因BMI-1对中心体复制的调节作用
宋立兵
张玲
曾木圣
廖雯婷
李满枝
郭宝红
汪慧民
《中山大学学报(医学科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2005
3
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职称材料
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