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题名产磷酸甘油氧化酶菌株的鉴定及其酶学性质研究
被引量：2
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作者
包凌晟
杜林方
李海林
聂宇
孟延发
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机构
四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室
成都理工大学材料与化学化工学院
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出处
《中国酿造》
CAS
北大核心
2008年第6期15-18,共4页
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基金
国家科技部支撑计划项目(2006BAF07B01)
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文摘
对筛选到的1株产磷酸甘油氧化酶的菌株进行了生理生化测定和16SrDNA序列分析,初步鉴定该菌株为粪肠球菌(Entero-coccus faecalis)。菌株经发酵培养,超声波破碎后,依次经过双水相萃取、阴离子交换层析和金属离子亲和层析,得到的磷酸甘油氧化酶活力达到54.3U/mg。还原和非还原SDS-PAGE显示该酶为单一条带并测得其表观分子质量为6.7×104Da,HPLC显示其天然酶的相对分子质量为1.2×105Da,据此推测该酶由2个分子质量相同的亚基组成。酶促反应动力学研究结果表明,该酶的最适pH值和酸碱稳定范围分别为8.0和5.0～7.5,最适温度为35℃,以磷酸甘油二钠为底物时,其Km值为3.2×10-2mol/L。将酶在-20℃保存12个月后仍具有60%的酶活力;4℃保存1个月,酶活力仍保持21%。
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关键词
粪肠球菌
磷酸甘油氧化酶
酶学性质
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Keywords
Enterococcus faecalis
L-α-glycerophosphate
oxidase enzymatic property
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分类号
Q554
[生物学—生物化学]
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题名酿酒酵母孢子表面展示系统的构建及应用
被引量：1
- 2
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作者
乔颍鑫
李子杰
中西秀树
高晓冬
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机构
江南大学生物工程学院糖化学与生物技术教育部重点实验室
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出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第6期8-14,共7页
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基金
国家自然科学基金(21302069)
中央高校基本科研业务费专项基金资助(JUSRP1003)
教育部科学技术研究重大项目(313027)
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文摘
旨在建立1种酿酒酵母孢子表面展示系统,并将其应用于稀有糖合成。表面展示系统是运用微生物自身功能把外源蛋白或多肽展示在细胞表面,文中用磷酸甘油氧化酶(GPO)来验证酿酒酵母孢子表面展示系统的可行性。将编码肺炎链球菌来源的GPO的基因glpo与信号肽序列(ss)融合后连接到载体p RS424-TEFpr上,将重组质粒p RS424-TEFpr-ss-glpo转化至酿酒酵母野生型及缺陷型菌株中并进行产孢,通过荧光观察、western blot分析以及酶活测定,表明酿酒酵母缺陷型孢子可以实现蛋白的表面展示。通过对GPO孢子表征,表明GPO孢子在pH为7.0、温度为30℃时活性最高,该孢子作为催化剂可以重复使用,当使用第3次时,活性可达最大活性的40%。最后将GPO孢子应用于"一锅四酶法"进行稀有糖L-果糖的合成,转化率为12%。
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关键词
孢子表面展示
磷酸甘油氧化酶
酿酒酵母
稀有糖
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Keywords
spore surface display
glycerophosphate oxidase
Saccharomyces cerevisiae
rare sugar
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分类号
TS261.11
[轻工技术与工程—发酵工程]
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