MiR-650通过靶向结合磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1促进口腔鳞状细胞癌细胞增殖和糖酵解

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作者 郭谊 韩炎 +3 位作者 周丽芝 王俊华 马跃 鲁大鹏 《解剖学杂志》 CAS 2024年第3期217-224,248,共9页

目的:分析miR-650是否靶向磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1(PCK1)促进口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖和糖酵解。方法:生物信息学筛选出差异表达且与细胞增殖、糖酵解有关的基因。构建稳定过表达PCK1的CAL-27和Tca8113细胞系,分成Vector组和PCK1组... 目的:分析miR-650是否靶向磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1(PCK1)促进口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖和糖酵解。方法:生物信息学筛选出差异表达且与细胞增殖、糖酵解有关的基因。构建稳定过表达PCK1的CAL-27和Tca8113细胞系,分成Vector组和PCK1组。构建稳定过表达miR-650的OSCC细胞,分成miR-NC组、miR-650组和miR-650+PCK1组。CCK-8和克隆形成检测各组细胞增殖能力。裸鼠成瘤实验检测瘤体质量、体积。免疫组织化学检测肿瘤组织中PCK1表达水平。免疫印迹测定各组细胞PCK1蛋白表达水平。葡萄糖和乳酸试剂盒检测各组细胞内葡萄糖和乳酸变化。数据库预测PCK1靶标,双荧光酶素报告实验进行验证。RT-qPCR测定转染后OSCC细胞中miR-650的表达。结果:PCK1在OSCC中表达下调,且与细胞增殖和糖酵解相关。与Vector组相比,PCK1组中PCK1蛋白水平升高;过表达PCK1抑制细胞增殖;过表达PCK1抑制裸鼠移植瘤体积和质量增长;过表达PCK1促进细胞葡萄糖产生和抑制其消耗,同时抑制乳酸产生。与癌旁组织相比,miR-650在OSCC中表达上调。数据库预测及双荧光酶素报告实验证实miR-650与PCK1的靶向关系。与miR-NC组相比,miR-650组中PCK1 mRNA和蛋白表达水平明显降低。miR-650通过调节PCK1表达,促进OSCC细胞增殖,调控细胞糖酵解。结论:miR-650可以通过靶向结合PCK1促进OSCC细胞增殖和糖酵解。 展开更多

关键词 口腔鳞状细胞癌 磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1 增殖 糖酵解

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甘蓝型油菜磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的研究分析 被引量：3

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作者 汪小福 刘仁虎 +3 位作者 陈笑芸 王伏林 关晶晶 陈锦清 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期276-280,共5页

为了解甘蓝型油菜(Brassica napus)中磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因的表达和分布情况,文章首先分析了油菜和拟南芥中PEPC基因之间的关系,同时参照拟南芥中4条PEPC基因扩增了针对甘蓝型油菜的探针,Southern blot结果表明,甘蓝型油菜... 为了解甘蓝型油菜(Brassica napus)中磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因的表达和分布情况,文章首先分析了油菜和拟南芥中PEPC基因之间的关系,同时参照拟南芥中4条PEPC基因扩增了针对甘蓝型油菜的探针,Southern blot结果表明,甘蓝型油菜中PEPC基因肯定多于4条,而RT-PCR分析了不同时期种子中的PEPC基因的表达情况,表明PEPC基因在种子成熟过程中油脂、储藏蛋白质等贮存物质的积累有一定作用。 展开更多

关键词 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC) 甘蓝型油菜 拟南芥

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磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的生物信息学分析 被引量：6

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作者 蔡小宁 陈茜 +1 位作者 杨平 任源浩 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第3期914-916,共3页

[目的]为改造磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因、提高PEPC活性寻找线索。[方法]对GenBank上登录的PEPC的cDNA序列、氨基酸序列进行BLAST搜索,运用生物信息学方法进行信号肽分析、亚细胞定位、结构域分析以及PEPC蛋白质氨基酸序列的同... [目的]为改造磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因、提高PEPC活性寻找线索。[方法]对GenBank上登录的PEPC的cDNA序列、氨基酸序列进行BLAST搜索,运用生物信息学方法进行信号肽分析、亚细胞定位、结构域分析以及PEPC蛋白质氨基酸序列的同源性分析和系统进化树分析。[结果]共搜寻到62个PEPC蛋白质序列,绝大多数属于C3植物,9个属于C4植物。绝大多数PEPC没有存在信号肽的可能性。62个PEPC蛋白的亚细胞定位基本一致,均具有Phosphoenolpyruvate carboxylase结构域,未发现其他结构域。通过进化树分析可分别将C3植物和C4植物的PEPC酶分成4组和3组。62个PEPC蛋白质氨基酸序列的同源性为86.70%,而其在19个C3植物和9个C4植物中则分别为89.63%和89.61%。[结论]C4植物PEPC的423位上的丙氨酸和862位上的酪氨酸高度保守,而C3植物的428位和871位的氨基酸则缺少同源性,可能与C3和C4植物PEPC的活性差异有关。 展开更多

关键词 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC) 生物信息学

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小麦导入磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase)基因的初步研究 被引量：1

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作者 张彬 马建军 +3 位作者 贾栋 石云鹭 高志强 丁在松 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第11期4900-4901,共2页

[目的]将磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase)基因导入普通小麦临优145。[方法]利用根癌农杆菌遗传转化系统,以普通小麦临优145为材料,将磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase)基因,导入小麦胚性愈伤组织中,用含潮霉素(hyg)的筛选培养基连续筛选... [目的]将磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase)基因导入普通小麦临优145。[方法]利用根癌农杆菌遗传转化系统,以普通小麦临优145为材料,将磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase)基因,导入小麦胚性愈伤组织中,用含潮霉素(hyg)的筛选培养基连续筛选,并从分子水平上检测该基因。[结果]获得了hyg抗性植株,经GUS组织化学染色检测表明,抗性苗叶片被染成了深蓝色;PCR检测出目标条带。[结论]初步证明磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase)基因已经导入受体材料中。 展开更多

关键词 小麦 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase)基因 农杆菌介导法 抗性植株

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磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶基因启动子-232多态性与动脉硬化性脑梗死关系的研究 被引量：1

5

作者 刘秦 邵明 《中国医药导报》 CAS 2016年第36期36-40,共5页

目的 探讨磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶基因（PCK1）启动子-232位点基因多态性与动脉硬化性脑梗死的关系。方法 选择2012年5月-2013年2月在广州医科大学附属第一医院（以下简称“我院”）神经内科住院的动脉硬化性脑梗死患者128例为脑梗死组... 目的 探讨磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶基因（PCK1）启动子-232位点基因多态性与动脉硬化性脑梗死的关系。方法 选择2012年5月-2013年2月在广州医科大学附属第一医院（以下简称“我院”）神经内科住院的动脉硬化性脑梗死患者128例为脑梗死组,同时选择在我院体检中心体检的70名健康成人为对照组。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法,进行PCK1启动子-232基因多态性分析;测定血糖、血脂;颈动脉超声多普勒检查颈总动脉内膜中层厚度（IMT）及颈动脉斑块。结果 脑梗死组GC、GG基因型餐后2 h血糖及低密度脂蛋白胆固醇水平均高于CC基因型,差异有统计学意义（P〈0.05）。脑梗死组GC、GG基因型及G等位基因频率明显高于对照组（P〈0.05）。脑梗死组GG＋GC基因型及G等位基因在易损斑块和非易损斑块中的分布情况比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。两组不同基因型之间左、右侧颈总动脉IMT比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 PCK1启动子-232基因多态性与广东地区汉族人群动脉硬化性脑梗死的关系密切,G等位基因可能是脑梗死的易感因素。 展开更多

关键词 脑梗死 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 启动子 基因多态性

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大肠杆菌磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的克隆和表达 被引量：1

6

作者 何晓亮 李竹 +4 位作者 梁立强 孟万利 苗兰天 孙耀祖 蔡红光 《河北科技大学学报》 CAS 2019年第2期133-137,共5页

为了更好地研究磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的结构和功能,采用PCR(聚合酶链式反应)、双酶切和细胞转化等基因工程方法对磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因进行克隆并使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行表达分析,扩增出一个新的大肠杆菌磷酸烯醇式丙... 为了更好地研究磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的结构和功能,采用PCR(聚合酶链式反应)、双酶切和细胞转化等基因工程方法对磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因进行克隆并使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行表达分析,扩增出一个新的大肠杆菌磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因,将其基因克隆到原核表达载体pET-30a上,并导入到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中。通过IPTG诱导成功表达出大肠杆菌的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶。所提出的方法能够高效表达磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶,为进一步大规模表达纯化和应用提供参考。 展开更多

关键词 基因工程 大肠杆菌 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 基因表达 二氧化碳

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植物细菌型磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的生物信息学分析 被引量：2

7

作者 关晶晶 陈锦清 汪小福 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第2期203-208,共6页

采用生物信息学方法对GenBank中的拟南芥、油菜、大豆、花生和水稻等11种植物细菌型磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因的核苷酸和氨基酸序列进行了比对分析,进而对其基因结构、系统进化、理化性质、亚细胞定位、疏水性、功能结构域及蛋... 采用生物信息学方法对GenBank中的拟南芥、油菜、大豆、花生和水稻等11种植物细菌型磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因的核苷酸和氨基酸序列进行了比对分析,进而对其基因结构、系统进化、理化性质、亚细胞定位、疏水性、功能结构域及蛋白质三级结构等重要参数进行了预测和分析。 展开更多

关键词 植物 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC) 生物信息学

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茶树磷酸烯醇式丙酮酸转运子基因CsPPT的克隆与表达分析 被引量：2

8

作者 赵真 陈暄 +3 位作者 王明乐 王伟东 Najeeb Ahmed 黎星辉 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期491-500,共10页

以白叶1号为试验材料,通过RT-PCR和RACE技术克隆获得茶树磷酸烯醇式丙酮酸转运子基因Cs PPT(Gen Bank登录号:KJ652972)。Cs PPT完整ORF长度为1 227 bp,编码408个氨基酸,蛋白分子量为44.7k Da,理论等电点为10.16;无信号肽位点,属于非分... 以白叶1号为试验材料,通过RT-PCR和RACE技术克隆获得茶树磷酸烯醇式丙酮酸转运子基因Cs PPT(Gen Bank登录号:KJ652972)。Cs PPT完整ORF长度为1 227 bp,编码408个氨基酸,蛋白分子量为44.7k Da,理论等电点为10.16;无信号肽位点,属于非分泌型蛋白;建立了茶树Cs PPT蛋白的系统发育树;磷酸化修饰预测该蛋白质多肽链中共有26个磷酸化位点;TMHMM预测表明Cs PPT蛋白为跨膜蛋白;亚细胞定位发现,Cs PPT蛋白定位于叶绿体上,推测Cs PPT蛋白可能定位于叶绿体膜上。荧光定量PCR结果表明Cs PPT基因在茶树花中表达量最高,其次为芽、叶和嫩茎,根中最低。 展开更多

关键词 茶树 磷酸烯醇式丙酮酸转运子 基因克隆 亚细胞定位 表达分析

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刀鲚磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶基因的分子克隆和饥饿作用下的表达分析

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作者 王美垚 李全杰 《安徽农业科学》 CAS 2019年第23期107-114,共8页

采用同源克隆法获得了刀鲚PEPCK基因全长cDNA序列,其具有高度保守的结构序列及功能位点,进化分析表明其与同属鲱形目的大西洋鲱具有最近的进化距离。在饥饿作用下刀鲚肝组织表达研究表明,PEPCK在糖异生调节方面,在对于饥饿作用下协调糖... 采用同源克隆法获得了刀鲚PEPCK基因全长cDNA序列,其具有高度保守的结构序列及功能位点,进化分析表明其与同属鲱形目的大西洋鲱具有最近的进化距离。在饥饿作用下刀鲚肝组织表达研究表明,PEPCK在糖异生调节方面,在对于饥饿作用下协调糖类代谢平衡,进而维持能量代谢供给上发挥了积极作用。该研究为今后进一步开展刀鲚抗环境因子变化调控机制提供了理论参考。 展开更多

关键词 刀鲚 磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶 克隆 饥饿 表达

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茶树磷酸烯醇式丙酮酸转运子CsPPT2基因的克隆和分析 被引量：1

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作者 纪志芳 甘玉迪 +4 位作者 陈常颂 杨鼎俊 孙康 黎星辉 陈暄 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期149-159,共11页

以茶树(Camellia sinensis)白叶1号为材料,应用RT-PCR和RACE技术克隆获得茶树磷酸烯醇式丙酮酸转运子家族一个基因CsPPT2的c DNA序列,并与茶树体内另一个磷酸烯醇式丙酮酸转运子家族的基因CsPPT1在不同时期和不同部位的表达进行比较。Cs... 以茶树(Camellia sinensis)白叶1号为材料,应用RT-PCR和RACE技术克隆获得茶树磷酸烯醇式丙酮酸转运子家族一个基因CsPPT2的c DNA序列,并与茶树体内另一个磷酸烯醇式丙酮酸转运子家族的基因CsPPT1在不同时期和不同部位的表达进行比较。CsPPT2的c DNA全长1 469 bp,其中开放阅读框(ORF)为1 218 bp,编码406个氨基酸。通过生物学信息分析表明,CSPPT2蛋白分子量为44.6 k D,理论等电点为9.90,CsPPT2有6个跨膜区,属于疏水性叶绿体跨膜蛋白。聚类分析显示,茶树磷酸烯醇式丙酮酸转运子家族分为2个亚组,而CsPPT1与CsPPT2属于不同亚组。荧光定量结果分析表明,两个基因可能在茶树体内功能不同,CsPPT2在所考察的组织中均有表达,且在根和成熟叶片中表达量远大于CsPPT1;CsPPT1在茎和复绿前的幼嫩芽叶中表达量高于CsPPT2。在白化期起始时CsPPT2有短暂的升高,但伴随白化受到较大的抑制,表明CsPPT2的表达抑制可能是白叶1号低儿茶素高氨基酸品质形成的关键因素。 展开更多

关键词 茶树 白叶1号 磷酸烯醇式丙酮酸转运子 CsPPT2 表达分析

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老化对磷酸烯醇型丙酮酸激酶基因转录作用的影响

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作者 吴梧桐 Richa.,A 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第1期47-52,共6页

使用６～２６月龄Ｆｉｃｈｅｒ３４４禁食雄性大鼠肝脏研究了老化对磷酸烯醇型丙酮酸激酶（ＧＴＰ）（ＰＥＰＣＫ．ＥＣ．４．１．１．３２）基因表达的影响，结果表明６～２６月龄大鼠肝脏提取物中的ＰＥＰＣＫ活力约下降５０％，且与... 使用６～２６月龄Ｆｉｃｈｅｒ３４４禁食雄性大鼠肝脏研究了老化对磷酸烯醇型丙酮酸激酶（ＧＴＰ）（ＰＥＰＣＫ．ＥＣ．４．１．１．３２）基因表达的影响，结果表明６～２６月龄大鼠肝脏提取物中的ＰＥＰＣＫ活力约下降５０％，且与年龄相关的ＰＥＰＣＫ活性的下降与ＰＥＰＣＫｍＲＮＡ水平的下降相平行。因此，ＰＥＰＣＫ活性的下降可能是因用于进行转译作用的ｍＲＮＡ的转录作用下降，且６月龄到２６月龄大鼠肝脏的ＰＥＰＣＫｍＲＮＡ的稳定性与半衰期是近似的。进一步实验发现２６月龄大鼠肝脏ＰＥＰＣＫ的核转录作用比６月龄大鼠肝脏ＰＥＰＣＫ的核转录作用减少４０％。因此，禁食大鼠肝脏ＰＥＰＣＫｍＲＮＡ水平与年龄相关的下降，是由于ＰＥＰＣＫ基因转录作用的下降。 展开更多

关键词 老化 磷酸烯醇型 丙酮酸激酶 基因转录 PEPCK

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3种石斛PEPC羧化酶活力比较 被引量：6

12

作者 任建武 王雁 +1 位作者 彭镇华 张连成 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期815-820,共6页

石斛属植物具有兼性景天酸代谢植物特征,磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶是该类植物碳代谢的关键酶。本研究选用3种石斛为材料,测定了其磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性。结果表明,报春石斛晚间黑暗条件下酶活性较强,凌晨高达25μmolCO2/(m2.s),而... 石斛属植物具有兼性景天酸代谢植物特征,磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶是该类植物碳代谢的关键酶。本研究选用3种石斛为材料,测定了其磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性。结果表明,报春石斛晚间黑暗条件下酶活性较强,凌晨高达25μmolCO2/(m2.s),而在中午光照最充足时,酶的活性相对较弱;金钗石斛酶活性日变化特点与报春石斛相似,但是活性比较弱;鼓槌石斛的酶活性很弱,通常在8μmolCO2/(m2.s)以下,昼夜变化幅度很小,表现为黑暗状态下比光下更强。 展开更多

关键词 石斛 景天酸代谢 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶

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水稻质体磷酸盐转运体OsPPT家族成员的功能分析

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作者 王继纯 李瑞莉 +2 位作者 王姣玲 邵俊雯 赵红玉 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第11期2329-2339,共11页

磷酸烯醇式丙酮酸/磷酸盐转运体(PPT)是植物质体磷酸盐转运蛋白家族(pPTs)成员之一,介导细胞质中的磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)进入质体基质的同时,将磷交换到细胞质中。为对水稻OsPPT基因家族进行综合分析,探索其在水稻中的潜在功能。利用... 磷酸烯醇式丙酮酸/磷酸盐转运体(PPT)是植物质体磷酸盐转运蛋白家族(pPTs)成员之一,介导细胞质中的磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)进入质体基质的同时,将磷交换到细胞质中。为对水稻OsPPT基因家族进行综合分析,探索其在水稻中的潜在功能。利用水稻原生质体瞬时转化分析OsPPT的亚细胞定位,通过酵母异源表达实验分析OsPPT的磷酸盐转运能力。设置正常供磷和缺磷等非生物胁迫水培实验处理,阐明OsPPT家族成员的组织特异性表达模式,以及对非生物胁迫逆境的响应。结果表明,OsPPT基因家族4个成员均定位于叶绿体膜,而且OsPPT可以在酵母中介导磷酸盐的跨膜转运。此外,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)展示了OsPPT基因家族在应对环境胁迫时表达模式上的动态变化,比如磷饥饿,以及脱落酸(abscisic acid,ABA)、水杨酸(salicylic acid,SA)、氯化钠等非生物胁迫环境。OsPPT基因家族可能参与磷酸盐在细胞质和叶绿体之间的运输,同时也可能参与植物对逆境胁迫的响应。 展开更多

关键词 质体 磷酸盐 磷转运蛋白 磷酸烯醇式丙酮酸/磷酸盐转运体

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发酵秸秆糖产丁二酸放线杆菌的CO_2固定关键酶特性分析 被引量：5

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作者 薛培俭 姜绍通 +2 位作者 李兴江 杨为华 潘丽军 《合肥工业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1066-1069,共4页

产丁二酸放线杆菌以秸秆糖为碳源固定CO2过程中,磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶是其转化关键酶。文章在菌株酶基因克隆基础上,通过改变pH值、离子和底物,分析了该关键酶的酶特性。结果获得了登录号为EU253567的基因序列,发酵24 h时其酶活超过... 产丁二酸放线杆菌以秸秆糖为碳源固定CO2过程中,磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶是其转化关键酶。文章在菌株酶基因克隆基础上,通过改变pH值、离子和底物,分析了该关键酶的酶特性。结果获得了登录号为EU253567的基因序列,发酵24 h时其酶活超过700 U/mg。离子分析结果表明,Mn2+与Mg2+对该酶具有明显的激活作用,而Cu2+则对酶活具有显著的抑制作用。围绕底物的酶促动力学分析表明,该酶对HCO3-的Km为7.0×10-2mol/L,即该酶对HCO3-的亲和力较弱,这表明发酵体系应保持高浓度的HCO3-。分析可知,关键酶能够在一定程度上提高酶活力,从而能够间接指导发酵工艺,提高生产力。 展开更多

关键词 丁二酸 CO2固定 磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶

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NH_4^+-N部分代替NO_3^--N对番茄生育中后期氮代谢相关酶活性的影响 被引量：23

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作者 董园园 董彩霞 +2 位作者 卢颖林 缪辰 沈其荣 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期261-266,共6页

采用砂培实验研究NH4+-N部分代替NO3--N对番茄的影响,结果表明:与全硝处理(100%NO3-)相比较,增铵处理(NH4+∶NO3-=25%∶75%)下番茄鲜果重显著提高;同时叶片内NO3--N含量随增铵而显著降低,叶片与果实内NH4+-N含量及果实的可溶性蛋白含量... 采用砂培实验研究NH4+-N部分代替NO3--N对番茄的影响,结果表明:与全硝处理(100%NO3-)相比较,增铵处理(NH4+∶NO3-=25%∶75%)下番茄鲜果重显著提高;同时叶片内NO3--N含量随增铵而显著降低,叶片与果实内NH4+-N含量及果实的可溶性蛋白含量随增铵而升高;增铵条件抑制了叶片和果实的硝酸还原酶(NR)活性,提高了叶片和果实的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPcase)活性及叶片谷氨酰胺合成酶(GS)活性,但对果实的谷氨酰胺合成酶(GS)活性影响不大。上述结果表明,NH4+-N部分代替NO3--N可增加番茄产量,提高集约化基地的生产量。 展开更多

关键词 NH4^+-N NO3^-- N 番茄 硝酸还原酶 谷氨酰胺合成酶 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶

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油菜PEPase基因的克隆及其对应RNAi载体的构建 被引量：18

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作者 张银波 江木兰 胡小加 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期1-4,共4页

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPase)是控制油菜蛋白质/油脂含量比例的一个关键酶。采用RT-PCR方法从甘蓝型油菜中双4号中扩增出PEPase基因cDNA片段,与已发表的PEPase基因(登录号为D13987)序列同源性为98%。根据RNA干扰(RNAi)目标序列的选... 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPase)是控制油菜蛋白质/油脂含量比例的一个关键酶。采用RT-PCR方法从甘蓝型油菜中双4号中扩增出PEPase基因cDNA片段,与已发表的PEPase基因(登录号为D13987)序列同源性为98%。根据RNA干扰(RNAi)目标序列的选取原则选取两段长度约为400bp的DNA序列,分别克隆到RNAi载体pHBM1301中,构建了油菜中对应于PEPase基因的RNAi载体pHBM1301-PEP1和pHBM1301-PEP2。 展开更多

关键词 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 RT—PCR RNAI

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油用牡丹PEPC基因的克隆及表达分析 被引量：6

17

作者 袁秀云 田云芳 +2 位作者 张燕 马杰 崔波 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期878-886,共9页

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)是调控植物种子中蛋白质/油脂含量比例的关键酶。利用RT-PCR和RACE技术,从油用牡丹(Paeonia ostii)叶片中克隆得到1个PEPC基因PaPEPC2(GenBank登录号为MK606450)。其cDNA全长为3201 bp,包含2898 bp开放阅读... 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)是调控植物种子中蛋白质/油脂含量比例的关键酶。利用RT-PCR和RACE技术,从油用牡丹(Paeonia ostii)叶片中克隆得到1个PEPC基因PaPEPC2(GenBank登录号为MK606450)。其cDNA全长为3201 bp,包含2898 bp开放阅读框,编码965个氨基酸。PaPEPC2编码蛋白分子量为110.3 kD,理论等电点为5.65,属于酸性亲水性蛋白;二级结构预测表明,该蛋白的主要结构为α螺旋和不规则卷曲。氨基酸序列比对和进化树分析表明,PaPEPC2基因编码的蛋白属于C3型PEPC,与葡萄的C3型PEPC蛋白(XP002280569.1)亲缘关系最近。实时荧光定量分析表明,PaPEPC2基因在茎、叶、花芽和子房中均有表达,其中在茎和子房中的表达水平最高,在花芽中表达水平最低;在种子发育过程中,该基因表达水平呈现先升高,后降低的趋势,其中在发育42 d时表达水平最高;在种子收获后,常温存放7 d时,该基因表达水平最高,随后其表达水平逐渐下降。由此推测,PaPEPC2基因在油用牡丹种子发育和成熟过程中对油脂和蛋白的合成起阶段性调控作用。 展开更多

关键词 油用牡丹 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 种子 基因克隆 表达分析

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薤白EPSPs基因在不同组织表达的半定量分析 被引量：9

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作者 蒋向 戴雄泽 +3 位作者 李育强 黄丽华 戴倩 张学文 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期542-545,共4页

5-烯醇式丙酮酸-3-磷酸合成酶(EPSPs)是植物芳香族氨基酸合成途径的重要酶,是优良除草剂草甘膦作用的靶酶.根据已克隆的抗草甘膦植物薤白EPSPs基因cDNA序列的3′端非保守区域设计引物,采用RT-PCR半定量技术,研究了该基因在薤白不同组织... 5-烯醇式丙酮酸-3-磷酸合成酶(EPSPs)是植物芳香族氨基酸合成途径的重要酶,是优良除草剂草甘膦作用的靶酶.根据已克隆的抗草甘膦植物薤白EPSPs基因cDNA序列的3′端非保守区域设计引物,采用RT-PCR半定量技术,研究了该基因在薤白不同组织中的表达情况.利用18S rRNA为表达的内参基因,建立一个针对EPSPs特异、稳定的RT-PCR半定量检测体系.对EPSPs基因表达的检测表明,薤白幼叶中基因表达水平最高,总表达水平高低依次为:幼叶,根,茎,壮叶.相对18S rRNA表达量为:幼叶0.631,根0.246,茎0.218,壮叶0.120. 展开更多

关键词 薤白 5-烯醇式丙酮酸-3-磷酸合成酶基因表达 半定量RT-PCR

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微藻油脂生物合成与ACCase、PEPC相关性的研究进展 被引量：3

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作者 王琳 余旭亚 +1 位作者 赵鹏 徐军伟 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期56-60,共5页

乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)是脂肪酸合成中的两个主要的酶。介绍了ACCase、PEPC的类型、分布、反应机理及在微藻代谢中的作用;对酶代谢调控、基因工程的应用等因素进行了概括;就多酶基因调控微藻油脂合成... 乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)是脂肪酸合成中的两个主要的酶。介绍了ACCase、PEPC的类型、分布、反应机理及在微藻代谢中的作用;对酶代谢调控、基因工程的应用等因素进行了概括;就多酶基因调控微藻油脂合成的发展趋势进行了探讨。 展开更多

关键词 乙酰辅酶A羧化酶 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 微藻 油脂合成

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EPSP合成酶的特性及新抑制剂的研究进展 被引量：8

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作者 向文胜 张文吉 +1 位作者 王相晶 覃兆海 《农药学学报》 CAS CSCD 2000年第2期1-8,共8页

概述了 EPSP合成酶的生理作用。高等植物前体 EPSP合成酶进入叶绿体后 ,经剪切而成成熟 EPSP合成酶并定位于叶绿体内质膜上 ;EPSP合成酶的三维结构上存在三个活性区域 ,改变活性区域的氨基酸残基可对草甘膦产生抗性 ,同时表明了酶与草... 概述了 EPSP合成酶的生理作用。高等植物前体 EPSP合成酶进入叶绿体后 ,经剪切而成成熟 EPSP合成酶并定位于叶绿体内质膜上 ;EPSP合成酶的三维结构上存在三个活性区域 ,改变活性区域的氨基酸残基可对草甘膦产生抗性 ,同时表明了酶与草甘膦的结合位点 ;不同生物的 EPSP合成酶有高的同源性。 EPSP合成酶催化底物反应机理为 :PEP首先与酶形成过渡态 ,而后和 S3P形成缩酮四面体 ,最后生成 EPSP。草甘膦与 EPSP合成酶、EPSP形成三元复合物而阻断了 EPSP合成酶的催化作用 ;以 EPSP和 S3P· glyphosate为分子模型 ,设计合成的化合物对 EPSP合成酶的活性有抑制作用。 展开更多

关键词 EPSP合成酶 抑制剂 5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶 生理作用 草甘磷 催化机理 除草剂 特性

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